معتمدة في جزء من منحة المعاهد الوطنية للصحة (R43/44CA122444) ومنحة وزارة الدفاع BRCP (W81XWH-06-1-0682) لYL.

1. العينة، معدات، وإعداد الكاشف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع عينة الأنسجة إلى كتل من 3-4 مم في السمك، وإصلاح في 10٪ من الفورمالين محايدة مخزنة جديدة ل16-32 ساعة في درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية) وتغرس في البارافين. قطع FFPE إلى أقسام من 5 ± 1 ميكرومتر سمك من كتل FFPE، جبل أقسام على الشرائح والهواء الجاف. ملاحظة: يمكن تخزين الشرائح في درجة حرارة الغرفة تحت جفاف لمدة تصل إلى 3 أشهر. وينبغي خبز الشرائح الأنسجة التي شنت في منطقة جافة في أكثر من 60 درجة مئوية لمدة 1 ساعة قبل الفحص RNAscope. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جلب فرن التهجين إلى 40 درجة مئوية. وضع ورقة الترطيب في علبة التحكم في الرطوبة. إضافة 50 مل درهم 2 O إلى ورقة الترطيب لتبلل تماما. إدراج صينية مغطاة في فرن لprewarm لا يقل عن 30 دقيقة قبل الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل 700 مل 1X يمهد للمعالجة 2 الحل (10 نيكولا لانغ، ودرجة الحموضة 6 سيترات عازلة) عن طريق تمييع الحل 10X المعالجة في DH 2 O. تسخين 1X يمهد للمعالجة 2 الحل لتغلي ومايntain درجة الحرارة بين 100-104 درجة مئوية في حين منع الإفراط في الغليان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقديم 3 L 1X الاحتياطي اغسل (0.1X SSC) عن طريق تمييع prewarmed 50X الاحتياطي اغسل في DH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 2 × 200 مل من الزيلين و2 × 200 مل من 100٪ ETOH لdeparaffinization تحت غطاء الدخان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 50٪ الهيماتوكسيلين حل تلطيخ وكاشف الصبغة الزرقاء (0.01٪ ماء النشادر) لتلطيخ آخر تحت غطاء الدخان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 200 مل من الزيلين، 200 مل من 70٪، و 2 × 200 مل من 100٪ ETOH للجفاف تحت غطاء الدخان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقيقات Prewarm الهدف عند 40 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة، وتقديم كشف RTU كيت كاشف لدرجة حرارة الغرفة، بما في ذلك RTU Amp1، Amp2، AMP3، Amp4، الأمبير 5 براون، وAmp6 براون، باستثناء DAB مولد اللون براون-A-B وبراون . </li></ol> 2. RNAscope الفحص Deparaffinization والجفاف بعد الخبز، deparaffinize أقسام الأنسجة في الزيلين ل2 × 5 دقائق مع الانفعالات المتكررة، ويذوىفي 100٪ ETOH ل2 × 3 دقيقة مع التحريض المتكرر. الهواء الجاف لمدة 5 دقائق ورسم حاجز مسعور حول القسم الأنسجة مع مسعور الحاجز القلم. المعالجة المسبقة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان أقسام الأنسجة مع يمهد للمعالجة 1 لمدة 10 دقيقة في RT لتبريد النشاط البيروكسيديز الذاتية، وشطف في DH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان أقسام الأنسجة مع يمهد للمعالجة 2 الحفاظ على درجة حرارة الغليان لمدة 15 دقيقة لاسترجاع الحمض النووي الريبي، وشطف مرتين في DH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان أقسام الأنسجة مع يمهد للمعالجة 3 لمدة 30 دقيقة عند 40 درجة مئوية لمدة الهضم من البروتين في الفرن HybEZ، وشطف مرتين في DH 2 O. </li></ol> هدف التحقيق التهجين وتشمل تحقيقات الهدف HPV-HR 7 بركة: HPV16، 18، 31، 33، 35، 52، و 58. إضافة تحقيقات فيروس الورم الحليمي البشري، اليوبيكويتين C (UBC) والبكتيرية تحقيقات dapB الجين بشكل منفصل على ثلاثة أقسام الأنسجة مجاور. هجن عند 40 درجة مئوية في الفرن لمدة 2ساعة، ثم يشطف في 1X العازلة للغسل 2 × 2 دقيقة في RT. إشارة التضخيم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان أقسام الأنسجة مع Amp1 (المضخم) لمدة 30 دقيقة عند 40 درجة مئوية، Amp2 (المخفض الخلفية) لمدة 15 دقيقة عند 40 درجة مئوية، AMP3 (مكبر للصوت) لمدة 30 دقيقة عند 40 درجة مئوية، وAmp4 (التحقيق التسمية) لمدة 15 دقيقة عند 40 درجة مئوية في فرن HybEZ. بعد كل خطوة التهجين، وشطف في 1X العازلة للغسل 2 × 2 دقيقة في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان أقسام الأنسجة مع Amp5 لمدة 30 دقيقة وAmp6 لمدة 15 دقيقة في RT. بعد كل خطوة الحضانة، شطف في 1X العازلة للغسل 2 × 2 دقيقة في RT. </li></ol> الكشف عن إشارة احتضان أقسام الأنسجة مع خليط 1:01 DAB عن طريق خلط حجم مساو من براون-A-B وبراون لمدة 10 دقيقة في RT، وشطف مرتين في DH 2 O. Counterstaining <pالطبقة = &quot;jove_content&quot;&gt; أقسام الأنسجة وصمة عار مع 50٪ الهيماتوكسيلين الحل لمدة 2 دقيقة في RT، وشطف مع DH 2 O حتى الشرائح واضحة في حين تبقى الأنسجة الأرجواني. تراجع الشرائح في 0.01٪ الأمونيا في DH 2 O ل5X وتبع مع ​​5 الانخفاضات في DH 2 O. تركيب شريحة يذوى أقسام الأنسجة في 70٪، 100٪، 100٪ وETOH لمدة 2 دقيقة لكل منهما، الزيلين لمدة 5 دقائق، مع وسائل الاعلام جبل تصاعد القائم على الزيلين.

<ol>
	<li>Parkin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+health+burden+of+infection-associated+cancers+in+the+year+2002.">The global health burden of infection-associated cancers in the year 2002.</a> Int. J. Cancer. 118 (12), 3030-3044 (2006).</li><li>Chaturvedi, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+and+rising+oropharyngeal+cancer+incidence+in+the+United+States.">Human papillomavirus and rising oropharyngeal cancer incidence in the United States.</a> J. Clin. Oncol. 29 (32), 4294-4301 (2011).</li><li>Ang, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+and+survival+of+patients+with+oropharyngeal+cancer.">Human papillomavirus and survival of patients with oropharyngeal cancer.</a> N. Engl. J. Med. 363 (1), 24-35 (2010).</li><li>Smeets, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+algorithm+for+reliable+detection+of+human+papillomavirus+in+paraffin+embedded+head+and+neck+cancer+specimen.">A novel algorithm for reliable detection of human papillomavirus in paraffin embedded head and neck cancer specimen.</a> Int. J. Cancer. 121 (11), 2465-2472 (2007).</li><li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAscope:+a+novel+in+situ+RNA+analysis+platform+for+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues.">RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> J. Mol. Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+regulation+of+NRG1+isoform+expression+by+neuronal+activity.">Specific regulation of NRG1 isoform expression by neuronal activity.</a> J. Neurosci. 31 (23), 8491-8501 (2011).</li><li>Yan, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+stem+cell+markers+Bmi1+and+Lgr5+identify+two+functionally+distinct+populations.">The intestinal stem cell markers Bmi1 and Lgr5 identify two functionally distinct populations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (2), 466-471 (2012).</li><li>Payne, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viable+circulating+tumour+cell+detection+using+multiplex+RNA+in+situ+hybridisation+predicts+progression-free+survival+in+metastatic+breast+cancer+patients.">Viable circulating tumour cell detection using multiplex RNA in situ hybridisation predicts progression-free survival in metastatic breast cancer patients.</a> Br. J. Cancer. 106 (11), 1790-1797 (2012).</li><li>Bordeaux, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+in+situ+measurement+of+estrogen+receptor+mRNA+predicts+response+to+tamoxifen.">Quantitative in situ measurement of estrogen receptor mRNA predicts response to tamoxifen.</a> PLoS One. 7 (5), (2012).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+quantitative+RNA+in+situ+hybridization+for+resolution+of+equivocal+and+heterogeneous+ERBB2+(HER2)+status+in+invasive+breast+carcinoma.">Automated quantitative RNA in situ hybridization for resolution of equivocal and heterogeneous ERBB2 (HER2) status in invasive breast carcinoma.</a> J. Mol. Diagn. 15 (2), 210-219 (2013).</li><li>Tubbs, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+RNA+in+situ+Hybridization+for+Detection+of+Restricted+Clonal+Expression+of+Low+Abundance+Immunoglobulin+Light+Chain+mRNA+in+B-Cell+Lymphoproliferative+Disorders.">Ultrasensitive RNA in situ Hybridization for Detection of Restricted Clonal Expression of Low Abundance Immunoglobulin Light Chain mRNA in B-Cell Lymphoproliferative Disorders.</a> Am. J. Surg. Pathol. In press, (2013).</li><li>Ukpo, O. C., Flanagan, J. J., Ma, X. J., Luo, Y., Thorstad, W. L., Lewis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-risk+human+papillomavirus+E6/E7+mRNA+detection+by+a+novel+in+situ+hybridization+assay+strongly+correlates+with+p16+expression+and+patient+outcomes+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma.">High-risk human papillomavirus E6/E7 mRNA detection by a novel in situ hybridization assay strongly correlates with p16 expression and patient outcomes in oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Am. J. Surg. Pathol. 35 (9), 1343-1350 (2011).</li><li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptionally-active+high-risk+human+papillomavirus+is+rare+in+oral+cavity+and+laryngeal/hypopharyngeal+squamous+cell+carcinomas--a+tissue+microarray+study+utilizing+E6/E7+mRNA+in+situ+hybridization.">Transcriptionally-active high-risk human papillomavirus is rare in oral cavity and laryngeal/hypopharyngeal squamous cell carcinomas--a tissue microarray study utilizing E6/E7 mRNA in situ hybridization.</a> Histopathology. 60 (6), 982-991 (2012).</li><li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+p16+staining+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma:+extent+and+pattern+correlate+with+human+papillomavirus+RNA+status.">Partial p16 staining in oropharyngeal squamous cell carcinoma: extent and pattern correlate with human papillomavirus RNA status.</a> Mod. Pathol. 25 (9), 1212-1220 (2012).</li><li>Bishop, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+transcriptionally+active+high-risk+HPV+in+patients+with+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+as+visualized+by+a+novel+E6/E7+mRNA+in+situ+hybridization+method.">Detection of transcriptionally active high-risk HPV in patients with head and neck squamous cell carcinoma as visualized by a novel E6/E7 mRNA in situ hybridization method.</a> Am. J. Surg. Pathol. 36 (12), 1874-1882 (2012).</li><li>Schache AG, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+novel+diagnostic+standard+in+HPV-positive+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma.">Validation of a novel diagnostic standard in HPV-positive oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Br. J. Cancer. 108 (6), 1332-1339 (2013).</li><li>Mehrad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Papillary+Squamous+Cell+Carcinoma+of+the+Head+and+Neck:+Clinicopathologic+and+Molecular+Features+With+Special+Reference+to+Human+Papillomavirus.">Papillary Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck: Clinicopathologic and Molecular Features With Special Reference to Human Papillomavirus.</a> Am. J. Surg. Pathol. Jun. , (2013).</li><li>Jordan, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+methods+for+oropharyngeal+cancer+HPV+status+determination+in+US+cooperative+group+trials.">Validation of methods for oropharyngeal cancer HPV status determination in US cooperative group trials.</a> Am. J. Surg. Pathol. 36, 945-954 (2012).</li><li>Hammond, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Society+of+Clinical+Oncology/College+of+American+Pathologists+guideline+recommendations+for+immunohistochemical+testing+of+estrogen+and+progesterone+receptors+in+breast+cancer+(unabridged+version).">American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast cancer (unabridged version).</a> Arch. Pathol. Lab. Med. 134 (7), 48-72 (2010).</li></ol>

ويعمل كل من الكتاب من قبل والأسهم في تشخيص ادفانسد سيل، وشركة الخاصة

وفيروس الورم الحليمي البشري RNAscope مقايسة يسمح التصور المباشر من E6/E7 مرنا في الموقع في فيروس الورم الحليمي البشري المرتبطة الرأس والرقبة وسرطان الخلايا الحرشفية. مقايسة RNAscope متوافقة تماما مع أنسجة الورم بشكل روتيني ثابت ويحافظ على مورفولوجيا الأنسجة لالارتباطات التشريحية المرضية (الشكل 2). والميزة الرئيسية للمقايسة RNAscope على الطرق التقليدية CISH هو أنه يزيد على وجه التحديد إشارات التهجين (أرقام 2B و2E) دون تضخيم الضوضاء في الخلفية (أرقام 2C و2F). في الممارسة العملية، ويمكن الانتهاء من إجراءات الفحص RNAscope فيروس الورم الحليمي البشري في غضون 8 ساعة أو مريح تنقسم على مدى يومين. وقد استخدم RNAscope فيروس الورم الحليمي البشري فحص لتحديد حالة فيروس الورم الحليمي البشري في الرأس والرقبة وسرطان الخلايا الحرشفية 12-16، مما يدل على حساسية 97٪ و 93٪ خصوصية باستخدام QRT-PCR كطريقة مرجع 16. مركز حقوق الإنسان التقليديةISH omogenic لHR-فيروس الورم الحليمي البشري الحمض النووي هو محددة للغاية ولكن لديه حساسية ~ 80٪ 12. المناعى (IHC) لتلطيخ الخلوية بديلة علامة P16 يوضح حساسية ممتازة ولكن قد يولد نتائج إيجابية كاذبة 15،18، وخاصة في nonoropharyngeal سرطانات الرأس والعنق 15. &quot;المعيار الذهبي&quot; الطريقة الحالية لQRT-PCR لفيروس الورم الحليمي البشري E6/E7 مرنا يتطلب الكشف الأنسجة الطازجة المجمدة لأفضل النتائج ومعقد من الناحية التقنية، الأمر الذي يحد من استخدامه لمختبر أبحاث فقط. بالإضافة إلى ذلك، فإنه يتطلب استخراج الحمض النووي الريبي الذي يجعل من المستحيل لربط HR-HPV E6/E7 مرنا التعبير مع التشريح المرضي. هناك العديد من العوامل الحاسمة لنجاح الفحص RNAscope. الأولى، للحصول على أفضل النتائج، ينبغي أن تكون ثابتة الأنسجة في 10٪ من الفورمالين محايدة مخزنة الطازجة في درجة حرارة الغرفة ل16-32 ساعة وفقا لمبادئ توجيهية ASCO / CAP 19. الثاني، ينصح بشدة الفرن HybEZ منذ ذلك تمكينق التحكم الأمثل لدرجة الحرارة والرطوبة لتهجين التحقيق وإشارة الخطوات التضخيم. ثالثا، من المهم أن إزالة مخازن المتبقية الزائدة قبل كل خطوة ولكن لا تزال تبقي على قسم الأنسجة من خلال تجفيف أي من هذه الخطوات. الإجراء RNAscope دليل الموصوفة هنا تم مؤتمتة بالكامل على شريحة نظام لصناعة السيارات في تلطيخ التجارية 10. وهذا ينبغي أن يسهل إلى حد كبير توحيد شروط الفحص وتوفير العمالة اليدوية الثمينة في مختبرات علم الأمراض السريرية. بالإضافة إلى ذلك، تم تطوير برنامج تحليل الصور مكرسة 10 لتحديد الخلايا وإشارات تلطيخ على شريحة رقمية، والتي ينبغي أن تساعد على التخلص من الذاتية وتحسين استنساخ في التهديف تلقائيا. باختصار، بالكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري RNAscope فحص وجود محاضر HR-HPV E6/E7 مرنا في الموقع في الأنسجة FFPE. أنه يحتوي على سير العمل التي هي مألوفة لعلم الأمراض السريرية مختبرالمحافظين من خلال السماح التصور مباشرة من هذه الفروع في الأنسجة. أنه يوفر منصة مثالية لدراسة (FFPE) عينات الأنسجة، ويمكن اعتمادها بسهولة من قبل مختبرات علم الأمراض التشخيص.

حسابات فيروس الورم الحليمي البشري المعرضة للخطر (HR-HPV) إصابة ما يقرب من 5٪ من جميع حالات السرطان في جميع أنحاء العالم 1. وزادت حالات الإصابة بسرطان الفم والبلعوم المرتبط فيروس الورم الحليمي البشري خلال العقود الماضية، وخاصة بين الرجال. والفم والبلعوم وسرطان الخلايا الحرشفية، فيروس الورم الحليمي البشري الإيجابية (OPSCC) تشكل أغلبية الأرجح من جميع سرطانات الرأس والعنق في الولايات المتحدة في 20 سنوات القادمة 2. وترتبط الفم والبلعوم سرطان الخلايا الحرشفية الناجمة عن فيروس الورم الحليمي البشري مع بقاء مواتية، وحالة الورم فيروس الورم الحليمي البشري هو عامل النذير قوية ومستقلة من أجل البقاء 3. ويعتبر الدليل على تفعيل النسخي من الجينات المسرطنة الفيروسي E6 E7 وكمعيار الذهب لوجود فيروس الورم الحليمي البشري ذات الصلة سريريا 4. ومع ذلك، والكشف عن E6/E7 مرنا من أنسجة الورم الطازجة بواسطة تقنية RT-PCR ليس من العملي في الممارسة السريرية الروتينية، وقد تقتصر على مختبرات الأبحاث. في الآونة الأخيرة، ونحن هفوضعت ه رواية تكنولوجيا الحمض النووي الريبي ISH دعا RNAscope، والتي تمكن الكشف متعددة في الخلايا الفردية مع واحدة RNA حساسية جزيء في الفورمالين الثابتة عينات الأنسجة البارافين جزءا لا يتجزأ من (FFPE) 5-10. قدمنا ​​ثلاثة خطوط من الأدلة لكشف جزيء واحد 5. الأول، وتصميم وإشارة RNAscope التحقيق نظام التضخيم يسمح الكشف عن نسخة واحدة HER2 أهداف الحمض النووي الجيني في هيلا وSK-BR-3 خطوط الخلايا. الثاني، بالمقارنة مع HER2 إشارات الحمض النووي الجيني، وكان توزيع شدة الفلورسنت من النقاط إشارة HER2 مرنا في خلايا هيلا يتفق مع جزيء واحد لكل نقطة. ثالثا، عدد HER2 مرنا النقاط إشارة لكل خلية المتطابقة عن كثب في عدد النسخ HER2 مرنا قدر من قبل مقايسة الكمي القائم على الحل، مما يدعم الكشف عن جزيء واحد. علاوة على ذلك، counterstaining من نوى مع دابي في المجهر الفلورسنت أو مع الهيماتوكسيلين في المجهر مشرق الميدان يسمح التصور من النوى الفردية، ذوي الخوذات البيضاءمعنوى بدوره يسمح الكشف النوعي والكمي لأهداف RNA على أساس وحيدة الخلية 10. القدرة على تحليل التعبير الجيني في الموقع في العينات السريرية الروتينية يجعل RNAscope منصة واعدة لأمراض التشخيص، وخاصة تلك المستندة إلى قسم المقايسات الأنسجة FFPE 10،11. قمنا بتطوير فيروس الورم الحليمي البشري مقايسة على أساس RNAscope للكشف عن E6/E7 مرنا من سبعة أنماط جينية عالية الخطورة فيروس الورم الحليمي البشري (HPV16، 18، 31، 33، 35، 52، و 58) باستخدام مجموعة من تحقيقات النمط الجيني محددة. وقد أظهرت الدراسات الحديثة لدينا في OPSCC أن RNAscope فيروس الورم الحليمي البشري فحص حساس للغاية ومحددة في تحديد حالة فيروس الورم الحليمي البشري على أنسجة FFPE 12-17، وأيضا بإعلام التكهن في OPSCC 12،16. مبدأ التكنولوجيا RNAscope وقد وصفت سابقا 5. هنا، نحن تصف كاملة بروتوكول RNAscope فحص وتثبت استخدامه في الكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري في HR-FFPE الورم أقسام الأنسجة.

&#160;
<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="580">
	<colgroup>
		<col span="4" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="60" rowspan="2" style="height:60px;width:145px;">SuperFrost Plus slides</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">12-550-15</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:145px;">HybEZ Oven, Tray, and Rack</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">310011, 310012, 310014</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:145px;">RNAscope 2.0 FFPE Reagent Kit - Brown</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">310035</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:145px;">RNAscope HPV-HR7 Probe for HPV 16,18,31,33,35,52 and 58, E6/E7 mRNA</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">312351</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:145px;">ImmEdge Hydrophobic Barrier Pen</td>
			<td style="width:145px;">Vector Laboratory</td>
			<td style="width:145px;">H-4000</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">100% EtOH</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">American Master Tech Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">ALREAGAL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:145px;">Xylene&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">X3P-1GAL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Gill&#8217;s Hematoxylin I</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">American Master Tech Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">HXGHE1LT</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Ammonia hydroxide</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">320145-500mL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Cover Glass 24x50 mm</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">12-545-F</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:145px;">Hot Plate</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">11-300-49SHP</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="99">
			<td height="120" rowspan="2" style="height:120px;width:145px;">Drying Oven</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Capable of holding temperature at 60 &#177; 1&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="99">
			<td height="120" rowspan="2" style="height:120px;width:145px;">Water Bath</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Capable of holding temperature at 40 &#177; 1&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
	</tbody>
</table>

rnascope for in situ detection of transcriptionally active human papillomavirus in head and neck squamous cell carcinoma

&quot;المعيار الذهبي&quot; للكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري أنكجنيك هو مظاهرة النشطة transcriptionally فيروس الورم الحليمي البشري المعرضة للخطر في أنسجة الورم. ومع ذلك، والكشف عن E6/E7 مرنا بواسطة الكمي عكس النسخ بوليميريز سلسلة من ردود الفعل (QRT-PCR) يتطلب استخراج الحمض النووي الريبي الذي يدمر سياق نسيج الورم حاسم لعلاقة شكلية وكان من الصعب أن تعتمد في الممارسة السريرية الروتينية. لدينا الحمض النووي الريبي وضعت مؤخرا التكنولوجيا الموقع التهجين، RNAscope في، يسمح التصور المباشر من الحمض النووي الريبي في الفورمالين الثابتة، جزءا لا يتجزأ من البارافين (FFPE) مع حساسية الأنسجة جزيء واحد وقرار وحيد الخلية، والتي تمكن حساسة للغاية ومحددة تحليل الوضع الطبيعي في أي الحمض النووي الريبي في العلامات البيولوجية في العينات السريرية الروتينية. تم تصميم RNAscope فيروس الورم الحليمي البشري فحص للكشف عن E6/E7 مرنا من سبعة عالية المخاطر فيروس الورم الحليمي البشري المورثات (HPV16، 18، 31، 33، 35، 52، و 58) باستخدام مجموعة من تحقيقات النمط الجيني محددة. وقد أثبتت أنها حساسية ممتازةوالتحديد ضد الطريقة الحالية &quot;المعيار الذهبي&quot; للكشف عن E6/E7 مرنا بواسطة QRT-PCR. حالة فيروس الورم الحليمي البشري التي تحددها RNAscope هو النذير بشدة من النتائج السريرية لدى مرضى سرطان الفم والبلعوم.

RNAscope فيروس الورم الحليمي البشري فحص سير العمل مقايسة RNAscope ديه تبسيط العمل للغاية مشابه لIHC (الشكل 1). وتتكون من أربع خطوات رئيسية: المعالجة المسبقة، التهجين، التكبير إشارة، والكشف. أنها توظف استراتيجية فريدة من نوعها تصميم المسبار الذي يضمن الدقة العالية إشارة التضخيم 5. في RNAscope فيروس الورم الحليمي البشري الفحص، يتم تجميع سبعة مجموعات التحقيق HR-فيروس الورم الحليمي البشري، وكلها معترف بها من قبل نفس النظام تضخيم الإشارات المرتبطة البيروكسيداز الفجل (HRP). تم الكشف عن إشارات التهجين محددة رواسب البني شكلتها HRP حفز رد فعل مولد اللون باستخدام DAB كما الركيزة، التي يمكن تصور بسهولة عن طريق معيار المجهر حقل مشرق. تلطيخ ممثل للكشف فيروس الورم الحليمي البشري ويبين الشكل 2 المثال الصور من أقسام FFPE الملون الرأس والرقبة وسرطان الخلايا الحرشفية. في حالة فيروس الورم الحليمي البشري الإيجابية (الشكللدى عودتهم 2A)، الكشف عن تحقيقات HR-HPV إشارات قوية منقط تحديدا في الخلايا السرطانية. التحقيق UBC الكشف عن العديد من الإشارات حشوية منقط في كل من الخلايا السرطانية والخلايا اللحمية (الشكل 2B). أظهرت البكتيرية التحقيق dapB الجين خلفية نظيفة (الشكل 2C). في حالة فيروس الورم الحليمي البشري السلبية، سواء التحقيق HR-فيروس الورم الحليمي البشري والتحقيق dapB الكشف عن أي إشارات (أرقام 2D و 2F)، في حين تم الكشف عن إشارات قوية باستخدام مسبار UBC (الشكل 2E). في هذا الاختبار، ويعمل UBC السيطرة الإيجابية لتقييم نوعية الأنسجة والحمض النووي الريبي dapB عن السيطرة السلبية للإشارات الخلفية. وفيروس الورم الحليمي البشري لتحديد وضع التهديف ينطوي على دراسة جميع الشرائح الثلاث لكل حالة. ويستخدم مستوى تلطيخ على التحكم الشريحة السلبية (dapB) الشريحة كما قطع: يعرف الإيجابية فيروس الورم الحليمي البشري من خلال وجود هيولي منقط و / أو تلطيخ النووية التي كانت فوق إشارة على الشريحة dabpB. <pالطبقة = &quot;jove_content&quot; FO: المحافظة على together.within صفحة = &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51426/51426fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51426/51426fig1.jpg" /> الشكل 1. انسيابي من RNAscope الفحص. توضيحات من RNAscope فحص سير العمل. يحتوي على فحص RNAscope 4 خطوات رئيسية، المعالجة المسبقة، التحقيق الهدف التهجين، تضخيم إشارة الكشف والإشارة. ويمكن الانتهاء من إجراءات الفحص كامل في 8 ساعة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51426/51426fig1highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة صورة أكبر.</a> <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51426/51426fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51426/51426fig2.jpg" /> الشكل 2. مثل الصور من الشرائح RNAscope الملون. أقسام FFPE ملطخة تحقيقات لHR-فيروس الورم الحليمي البشري، UBC (مراقبة إيجابية) وdapB (مراقبة سلبية)من حالتين HNSCC. AC. فيروس الورم الحليمي البشري الإيجابية القضية. A، HR-HPV E6/E7 مرنا التعبير في الخلايا السرطانية. أقحم، 40X التكبير لإظهار إشارات منقط. B و C) أقسام الأنسجة المجاورة تظهر تلطيخ إيجابية UBC (B) والسلبية لdapB (C)، على التوالي. DF) HPV السلبية القضية. D) لا تلطيخ لفيروس الورم الحليمي البشري E6/E7 مرنا ، على غرار سيطرة سلبية dapB (F). E) UBC تلطيخ إيجابية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51426/51426fig2highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة صورة أكبر.</a>

Watch this Scientific Journal Video about RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma at JoVE.com

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

ويرتبط وجود فيروس الورم الحليمي البشري المعرضة للخطر في الرأس والرقبة نسيج الورم مع تحقيق نتائج طيبة. الحمض النووي الريبي وضعت مؤخرا تقنية التهجين في الموقع يسمى RNAscope يسمح التصور المباشر لفيروس الورم الحليمي البشري E6/E7 مرنا في أقسام الأنسجة FFPE.

RNAscope ل<em&gt; في الوضع الطبيعي</em&gt; الكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري بالموقع Transcriptionally في الرأس والرقبة سرطان الخلايا الحرشفية

The &#39;gold standard&#39; for oncogenic HPV detection is the demonstration of transcriptionally active high-risk HPV in tumor tissue. However, detection ...

rnascope-for-situ-detection-transcriptionally-active-human

Research

JoVE Journal

Medicine

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

27.0K Views.  Advanced Cell Diagnostics, Inc..  ويرتبط وجود فيروس الورم الحليمي البشري المعرضة للخطر في الرأس والرقبة نسيج الورم مع تحقيق نتائج طيبة. الحمض النووي الريبي وضعت مؤخرا تقنية التهجين في الموقع يسمى RNAscope يسمح التصور المباشر لفيروس الورم الحليمي البشري E6/E7 مرنا في أقسام ?...

Video: RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

متعدد الفوتون التصوير من غزو خلايا الورم في الفأر نموذج مثلي الفم سرطان الخلايا الحرشفية

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in either sporadic or familial (neurofibromatosis type 2, NF2) forms, both associated with inactivating defects in the NF2 tumor suppressor gene. Treatment for VSs is generally surgical resection or radiosurgery, however the morbidity of such procedures has driven investigations into less invasive treatments. Historically, lack of access to fresh tissue specimens and the fact that schwannoma cells are not immortalized have significantly hampered the use of primary cultures for investigation of schwannoma tumorigenesis. To overcome the limited supply of primary cultures, the immortalized HEI193 VS cell line was generated by transduction with HPV E6 and E7 oncogenes. This oncogenic transduction introduced significant molecular and phenotypic alterations to the cells, which limit their use as a model for human schwannoma tumors. We therefore illustrate a simplified, reproducible protocol for culture of primary human VS cells. This easily mastered technique allows for molecular and cellular investigations that more accurately recapitulate the complexity of VS disease.

Vestibular Schwannomas (VSs) are non-malignant tumors of Schwann cell (SC) origin, associated with mutations in the NF2 tumor suppressor gene. We report a reproducible, efficient protocol for primary human VS cell culture that allows for molecular and cellular experimental manipulation and analysis and recapitulates the heterogeneous nature of human disease.

الثقافة الأولية من الإنسان الدهليزي Schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

ال<em&gt; في البيضة</em&gt; الفرخ مشيمائي غشاء (CAM) الفحص بمثابة طعم أجنبي نموذج فعال لسرطان الكبد

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

Isolation and Characterization of a Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Subpopulation Having Stem Cell Characteristics

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local recurrence and distant metastasis. One hypothesis to explain this recurrence is the presence of cancer stem-like cells (CSCs) that present inherent chemo- and radio-resistance. In order to develop new therapeutic strategies, it is necessary to have experimental models that validate the effectiveness of targeted treatments and therefore to have reliable methods for the identification and isolation of CSCs. To this end, we present a protocol for the isolation of CSCs from human HNSCC cell lines that relies on the combination of two successive cell sortings performed by fluorescence activated cell sorting (FACS). The first one is based on the property of CSCs to overexpress ATP-Binding Cassette (ABC) transporter proteins and thus exclude, among others, vital DNA dyes such as Hoechst 33342. The cells sorted with this method are identified as a &#34;side population&#34; (SP). As the SP cells represent a low percentage (&#60;5%) of parental cells, a growing phase is necessary in order to increase their number before the second cell sorting. The next step allows for the selection of cells that possess two other HNSCC stem cell characteristics i.e. high expression level of the cell surface marker CD44 (CD44high) and the over-expression of aldehyde dehydrogenase (ALDHhigh). Since the use of a single marker has numerous limitations and pitfalls for the isolation of CSCs, the combination of SP, CD44 and ALDH markers will provide a useful tool to isolate CSCs for further analytical and functional assays requiring viable cells. The stem-like characteristics of CSCs was finally validated in vitro by the formation of tumorispheres and the expression of &#946;-catenin.

Understanding the role of cancer stem-like cells in tumor recurrence and resistance to therapies has become a topic of great interest in the last decade. This article describes the isolation and characterization of the sub-population of cancer stem-like cells from head and neck squamous carcinoma cell lines (HNSCC).

عزل وتوصيف من الرأس والرقبة قشري سرطان الخلايا حيوانية وجود الجذعية خصائص الخلية

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local ...

Posterior Semicircular Canal Approach for Inner Ear Gene Delivery in Neonatal Mouse

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of inner ear gene therapy is to find a delivery method which results in consistent transduction efficiency of targeted cell types while minimizing hearing loss. In this study, we describe the posterior semicircular canal approach as a viable method for inner ear gene delivery in neonatal mice. We show that gene delivery through the posterior semicircular canal is able to perfuse the entire inner ear. The easy anatomic identification of the posterior semicircular canal, as well as minimal manipulation of the temporal bone required, make this surgical approach an attractive option for inner ear gene delivery.

In this study, we describe the posterior semicircular canal approach as a reliable method for inner ear gene delivery in neonatal mice. We show that gene delivery through the posterior semicircular canal is able to perfuse the entire inner ear.

النهج الخلفي نصف دائري قناة لإيصال الجينات الإذن الداخلية في الماوس الأطفال حديثي الولادة

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of ...

In Vivo Morphometric Analysis of Human Cranial Nerves Using Magnetic Resonance Imaging in Meni&#232;re's Disease Ears and Normal Hearing Ears

Analysis of neural structures in Meni&#232;re's Disease (MD) is of importance, since a loss of such structures has previously been proposed for this patient group but has yet to be confirmed. This protocol describes a method of in vivo evaluation of neural changes especially well suitable for cranial nerve analysis using magnetic resonance imaging (MRI). MD-patients and normal hearing persons were examined in a 3-T MR-scanner using a scan protocol including strongly T2-weighted 3D gradient-echo-sequence (3D-CISS). In the patient group, MD was additionally confirmed using MRI-based assessment of endolymphatic hydrops. Morphometric analysis was performed using a freeware DICOM viewer. Evaluation of cranial nerves included measurements of cross-sectional areas (CSAs) of the nerves at different levels as well as orthogonal diametric measurements.

&lt;em&gt;In Vivo&lt;/em&gt; Morphometric Analysis of Human Cranial Nerves Using Magnetic Resonance Imaging in Meni&amp;#232;re&#039;s Disease Ears and Normal Hearing Ears

To evaluate morphological changes of cranial nerves such as loss of neural structures or swelling of cranial nerves in Meni&#232;re&#39;s Disease (MD) or in healthy persons in vivo, a protocol of evaluation has been developed using magnetic resonance imaging (MRI). Additional MRI-based confirmation of MD was performed.

في فيفو تحليل شكلي لاعصاب البشرية باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي في سويندل للمرض آذان وآذان السمع العادي

Analysis of neural structures in Meni&#232;re's Disease (MD) is of importance, since a loss of such structures has previously been proposed for this ...

Porcine As a Training Module for Head and Neck Microvascular Reconstruction

Live models that resemble surgical conditions of humans are needed for training free-flap harvesting and anastomosis. Animal models for training purposes have been available for years in many surgical fields. We used the female (because they are easy to handle for the procedure) Yorkshire pigs for the head and neck reconstruction by harvesting the deep inferior epigastric artery perforator or the superior epigastric artery perforator flap. The anastomosis site (neck skin defect or tracheal wall defect) was prepared via the dissection of the common carotid artery and the internal jugular vein, in which 3.5&#215; loupe magnification was used for anastomosis as we use on human cases in real life. This procedure demonstrates a new training method using a reliable learning model and provides a detailed anatomy in a live scenario. We focused on the ischemia time, harvesting, vessel anastomosis, and designing the flap to fit the defect site. This model improves tissue handling and with the use of proper instruments can be repeated many times so that the surgeon is fully confident before starting the surgery on humans.

Here we present a protocol for the use of the pig superior epigastric artery perforator flap as a learning module for head and neck microvascular reconstruction.

الخنزير كنموذج تدريبي للتعمير ميكروفاسكولار الرأس والعنق

Live models that resemble surgical conditions of humans are needed for training free-flap harvesting and anastomosis. Animal models for training purposes ...

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous cell carcinoma and other cancers. Mechanistic studies have shown that the molecular crosstalk between nerves and tumor cells occurs prior to physical interaction. There are only a few in vivo models to study perineural invasion, especially to investigate early progression, before physical nerve-tumor interactions occur. The chick chorioallantoic membrane model has been used to study cancer invasion, because the basement membrane of the chorionic epithelium mimics that of human epithelial tissue. Here we repurposed the chick chorioallantoic membrane model to investigate perineural invasion, grafting rat dorsal root ganglia and human head and neck squamous cell carcinoma cells onto the chorionic epithelium. We have demonstrated how this model can be useful to evaluate the ability of cancer cells to invade neural tissue in vivo.&#160;

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is an aggressive phenotype for head and neck squamous cell carcinomas and other tumors. The chick chorioallantoic membrane model has been used for studying angiogenesis, cancer invasion, and metastasis. Here we demonstrate how this model can be utilized to assess perineural invasion in vivo.

الفرخ الغشاء تشوريوالانTOك في نموذج فيفو لتقييم الغزو في ما قبل البعد العصبي في سرطان الرأس والرقبة

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is almost completely reserved to a few referral centers that deal with a large proportion of this pathology. Practice on human specimens is not always possible for ethical, economic, or availability reasons. The aim of this study is to provide a reproducible method for the organization of a laryngeal laboratory on ex vivo animal models where it is possible to approach, learn, and refine laryngeal techniques. Porcine and ovine larynges are ideal, affordable, models to simulate laryngeal surgery given their similarity to the human larynx in their anatomical layout and tissue composition. Herein, the surgical steps of transoral laser surgery, open partial horizontal laryngectomy, and total laryngectomy are reported. The merging of endoscopic and exoscopic views guarantees an inside-out perspective, which is vital for the comprehension of the complex laryngeal anatomy. The method was successfully adopted during three sessions of a dissection course &#34;Lary-Gym&#34;. Further perspectives on robotic surgical training are described.

The purpose of this paper is to illustrate how to organize a reproducible laboratory for laryngeal surgery on affordable and closely similar animal laryngeal models in order to improve anatomical and surgical knowledge and skills.

تعلم جراحة الحنجرة الحديثة في مختبر تشريح

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Preparation of Decellularized Kidney Scaffolds in Rats

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs to replace diseased or damaged organs. Scaffolds are needed to facilitate the generation of three-dimensional organs or tissues using differentiated stem cells in vivo. In this report, we describe a novel method for developing vascularized scaffolds using decellularized rat kidneys. Eight-week-old Sprague-Dawley rats were used in this study, and heparin was injected into the heart to facilitate flow into the renal vessels, allowing heparin to perfuse into the renal vessels. The abdominal cavity was opened, and the left kidney was collected. The collected kidneys were perfused for 9 h using detergents, such as Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate, to decellularize the tissue. Decellularized kidney scaffolds were then gently washed with 1% penicillin/streptomycin and heparin to remove cellular debris and chemical residues. Transplantation of stem cells with the decellularized vascular scaffolds is expected to facilitate the generation of new organs. Thus, the vascularized scaffolds may provide a foundation for tissue engineering of organ grafts in the future.

This protocol introduces a method to develop a scaffold using decellularized rat kidneys. The protocol includes decellularization and recellularization processes to confirm bioavailability. Decellularization is performed using Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate.

إعداد سقالات الكلى المزيلة في الفئران

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs ...