نحن نعترف ايمي توماسون للحصول على المساعدة لها مع إعداد هذه المخطوطة، وفريدريك Skarstedt وريان كريستي لما بذلوه من جهود في إعداد الأرقام.

مع موافقة مجلس المراجعة المؤسساتي، تم إجراء بحث من قاعدة بيانات مختبر الإلكترونية لتحديد الفورمالين الثابتة، جزءا لا يتجزأ من البارافين (FFPE) كتل تمثل حالات الفيروس المضخم للخلايا (CMV) العدوى في الجهاز الهضمي (GI) الخزعات تشخيصها عن طريق التشريح المرضي (الهيماتوكسيلين و يوزين (H &amp; E) و / أو المناعية (IHC)). 1. معالجة الأنسجة من FFPE GI خزعة الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع FFPE GI كتل الأنسجة خزعة للالفيروس المضخم للخلايا (CMV) البلمرة سلسلة من ردود الفعل الكمية (QPCR). يتم تخزين هذه الكتل في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنابيب قبل التسمية 1.7 مل microfuge مع رقم هوية فريدة من نوعها في كتلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قفل عقارب مشراح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقعد كتلة الأنسجة في المشبك كاسيت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام، شفرة جديدة غير المستخدمة، والمواءمة بين كتلة إلى زاوية السكين على مشراح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط مشراح لخفض 10 ميكرون أبواب سميكة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الالبريد عقارب والتقدم نحو كتلة النصل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع 5 أقسام للكتلة في 10 ميكرومتر فترات سميكة، مما يتيح لكل قطع لتتوغل في التمرير من الأنسجة. تأكد من أن كل التمرير يحتوي على التمثيل الكافي للأنسجة الخزعة المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قفل عقارب مشراح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع ملقط، ضع كل 5 لفائف من الأنسجة في أنبوب الطرد المركزي وصفت مسبقا، والحرص على التعامل مع التمرير فقط من البارافين من أجل تقليل احتمالات التلوث المتبادل. المفاجئة الغطاء على أنبوب ووضعه مرة أخرى على الرف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كتلة الأنسجة من مشراح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة والتخلص من النصل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير الأسطح أو أي الصكوك التي قد تأتي في اتصال مع الأنسجة السابقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع، شفرة غير مستخدمة جديدة في حامل السكين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات 1،4-1،14 لكل كتلة إضافية لتتم معالجتها. قد يتم تخزين أنابيب microfuge التي تحتوي على مخطوطات الأنسجة في درجة حرارة الغرفة حتى تيم(ه) من استخراج الحمض النووي. </li></ol> 2. استخراج الحمض النووي من مخطوطات من FFPE GI خزعة الأنسجة ملاحظة: يتم تكييف هذا البروتوكول من إدراج حزمة من الأنسجة FFPE الحمض النووي عدة استخراج (تنبيه: الرجوع إلى سلامة المواد ورقة البيانات (MSDS)). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل الزيلين (تنبيه: ارجع إلى MSDS) لكل عينة microfuge أنبوب. إغلاق الغطاء ودوامة بقوة لمدة 10 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المضي قدما في استخراج الحمض النووي المحددة وعلى وجه التحديد في الناتج إدراج الشركة المصنعة مع التعديلات التالية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أولا إضافة 6 ميكرولتر من الرقابة الداخلية (IC) إلى كل microfuge أنبوب. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ATL / K بروتين تحلل الحضانة عند 56 درجة مئوية لمدة 1 ساعة، احتضان عند 99 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، بدلا من 90 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال الخطوة شطف الحمض النووي النهائي، فتح بعناية غطاء العمود تنقية الحمض النووي وتطبيق 50 ميكرولتر الدناز المقطر / خالية من ريبونوكلياز المياه في وسط الغشاء، بدلا من العازلهأكل ص. ملاحظة: يرجى الرجوع إلى إدراج حزمة لتخزين وإعداد الكواشف المناسبة. يجب أن يكون استخراج الحمض النووي من جميع مخطوطات FFPE 5. تنفيذ كافة الخطوات الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية). </li></ol></li></ol> 3. QPCR لCMV <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البلمرة المتسلسل (PCR) الداخلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء ورقة عمل Excel PCR لفحص المدى CMV. هذه ورقة عمل Excel بحساب المبلغ الإجمالي لكل كاشف اللازمة لتعويض مزيج الرئيسي مع المغنيسيوم. تتكاثر قيمة كل حاجة كاشف لكل عينة (المذكورة أدناه) أضعاف عدد العينات والضوابط زائد واحد (للتعويض عن الخسارة الناجمة عن pipetting ل). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتشمل الكواشف التالية في كل تفاعل PCR في المبلغ المشار إليه: كاشف0؛ المبلغ لكل عينة CMV LC مزيج الرئيسي قارورة 12.5 ميكرولتر الحل ملغ الأصفر قارورة 2.5 ميكرولتر اجمالى حجم 15.0 ميكرولتر </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدرج في كل فحص، تشغيل المياه أو أي سيطرة الهدف (NTC)، سيطرة سلبية، تحكم إيجابية منخفضة، تحكم إيجابية عالية، وإما QS3 أو QS4، وجميع عينات المرضى. يجب تعيين الشعيرات الدموية حتى في هذا النظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على التبريد محددة كتلة للصك PCR الوقت الحقيقي التي تم تخزينها في 4 درجات مئوية. وضع الأنابيب الشعرية المناسبة في كتلة التبريد. لا تلمس سطح الأنابيب الشعرية. دائما استخدام قفازات عند التعامل مع الشعيرات الدموية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد كافة تفاعلات البلمرة في غطاء نظيفة غير ملوثة مع التضخيم المنتجنهاية الخبر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة العدد الصحيح من قارورة الرئيسية من عدة PCR لاختبار جميع العينات المريض، بالإضافة إلى 5 الضوابط. السماح للقارورة الرئيسي، الحل المغنيسيوم، وPCR الصف ذوبان المياه في كتلة التبريد. كل قارورة تحتوي على ما يكفي من الكواشف الماجستير لمدة 12 الاختبارات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة بلطف قوارير رئيسية وسريعة تدور لهم في أجهزة الطرد المركزي في أقصى سرعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجمع بين محتويات كل قنينة الماجستير في قارورة واحدة، ودوامة بلطف مرة أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجمع بين مزيج الرئيسي والحل المغنيسيوم في المبالغ المبينة في ورقة العمل PCR في واحد عقيم microfuge أنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المزيج بلطف وقسامة 15 ميكرولتر من مزيج الرئيسي مع المغنيسيوم في كل أنبوب شعري، ما عدا الشعرية في موقف 5 والذي يعتبر معيار لتحديد الكميات (QS). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل كتلة التبريد التي تحتوي على الأنابيب الشعرية ومزيج الرئيسي مع المغنيسيوم من غطاء محرك السيارة نظيفة لغطاء المعالجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2 ميكرولتر من الرقابة الداخلية (IC) إلى 30 ميكرولتر المتبقية من الماجستيرتخلط مع المغنيسيوم. المزيج بلطف وقسامة 15 ميكرولتر في الشعيرات الدموية في موقف 5 (موقف لQS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 10 ميكرولتر من المياه، والسيطرة على الحمض النووي، أو الحمض النووي العينة في أنبوب شعري المناسبة. تتويج الأنابيب الشعرية باستخدام أداة متوجا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ التبريد كتلة / عينات لفي الوقت الحقيقي PCR الصك. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> برمجة الوقت الحقيقي PCR الصك (انظر الجدول 1) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التضخيم والكشف التي تجرى على الوقت الحقيقي PCR الصك <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل الدخول إلى الكمبيوتر </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر نقرا مزدوجا فوق على أيقونة الصك وتسجيل الدخول إلى البرنامج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على الوقت الحقيقي PCR الصك </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على &quot;CMV / EBV&quot; من الشاشة الأمامية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع المطالبات من المعالج الماكرو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد خانة لتشغيل الاختبار الذاتي عند المطالبة من قبل البرنامج. يجب إجراء اختبار ذاتي مرة واحدة كل يوم الصك قيد الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اسم التشغيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط عدد العينة تقع في LEF العليار ركن من أركان الصفحة لمجموع الضوابط وشملت مرضى في المدى وإدخال رقم التعريف من كل عينة مريض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على &quot;عبس كوانت&quot; علامة التبويب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت عنوان &quot;نوع العينة&quot;، تعيين نوع العينة المناسبة لهذا المعيار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اكتب في تركيزات المتوقع لمعيار الكميات (QS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأنابيب الشعرية من كتلة برودة ووضعها في موقف المقابلة في دائري (تبريد كتلة عينة رقم 1 يجب أن توضع في موقف رقم 1 على دائري، الخ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع دائري في أجهزة الطرد المركزي ثم اضغط بداية الصك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الطرد المركزي وإزالة دائري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع دائري في الوقت الحقيقي PCR الصك. إغلاق الغطاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط على &quot;بدء تشغيل&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فإن الوقت الحقيقي PCR أداة التحقق من كل موقف لعينة. لا نهرب من الصك حتى يتم الانتهاء من هذا الاختيار، ESPEcially إذا كان واحد من الشعيرات الدموية ليست في دائري. وسوف نلاحظ هذا الصك وأسأل ما إذا كان على المدى هو أن يستمر. الإجابة نعم قبل ان يغادر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة على المدى كاملة، أغلق التقرير التي تم إنشاؤها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على &quot;المطلق الكميات&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على السهم بجانب اللون التعويضات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على زر &quot;اختر لون تعويضات&quot; من مربع القائمة المنسدلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار ملف تعويض اللون الأكثر الحالية لتطبيق التشغيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق موافق عندما ينبثق مربع تصل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على السهم من قبل ستاندرد المنحنى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد &quot;استخدام الخارجي&quot; من القائمة المنسدلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الملف منحنى معيار خارجي معظم الحالية، ثم انقر فوق موافق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ننظر في كل منحنى ضمن القائمة المطلقة الكمي للتأكد من أن منحنيات موجودة وليس خط مستو، إذا تم تعيين التركيز. ويتم تحليل الكمي المطلق ل705/Back 530 تلقائيا. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشوالسيطرة على ality <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توليد منحنى القياسية الجديدة كلما تلقيت الكثير الجديدة عدد من الكواشف، أو كل ستة أشهر، أيهما أكثر تواترا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10 ميكرولتر من كل مستوى لمزيج الرئيسي مع المغنيسيوم. النظر في المعايير المتضمنة في مجموعة الحمض النووي المستخرج كما في السابق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 ميكرولتر من الرقابة الداخلية لكل معيار على مزيج الرئيسي مع المغنيسيوم المستخدمة في توليد منحنى القياسية من أجل ضمان الكميات دقيقة. لا تضيف IC إلى مزيج الرئيسي مع المغنيسيوم للا قالب التحكم (NTC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد NTC وثلاثة مكررات من الكميات معايير QS 4، 3، 2، 1، وتخفيف 1:10 من QS4 على المدى لتوليد منحنى القياسية، يبلغ مجموعها 16 نقطة في البيانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد &quot;تكرار لل&quot; في القائمة المنسدلة للمعايير المتكررة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار قناة 530/back لا شيء وبدوره على تعويض اللون عند تحليل المدى، </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت عنوان &quot;المنحنى القياسي (في تشغيل)&quot;، حدد &quot;حفظ ك السابقينالخارجيون &quot;واسم المنحنى. أدخل تعليق &quot;كما هو مطبق منحنى القياسية&quot; عند حفظ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم بياني للنتائج. يجب ≥ معامل الخطي الناتجة 0.81. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لأشواط يوميا، وتشمل نسخة واحدة من QS3 أو QS4 كعنصر تحكم في التشغيل. يجوز استيرادها منحنى القياسية الخارجية الحالية في المدى خلال مرحلة التحليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضوابط تشغيل: أي سيطرة الحمض النووي، ومراقبة سلبية، وانخفاض، والضوابط الإيجابية العالية. يتم تحديد المتوقع الحمل الفيروسي وتعديلها لكل بائع والكثير العدد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة IC لكل عينة والسيطرة خلال استخراج الحمض النووي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان أي من الضوابط تقع خارج النطاق، وتسجيل نتائج غير مقبولة وتشير مقايسة لاستكشاف الأخطاء وإصلاحها. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تردد الضوابط <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدرج في كل شوط: أ NTC، سلبية، وانخفاض إيجابية، وارتفاع إيجابي، ومعيار السيطرة. </li></ol></li></ol> ملاحظة: حدود مقبولة لعناصر. لا ينبغي أن نلاحظ قممد لأي قالب (NTC) والضوابط السلبية. يجب أن تكون موجودة في قمم القناة 530 ويتم تحديد المتوقع الأحمال الفيروسية وتعديلها لكل بائع والكثير عدد لعناصر إيجابية المنخفضة والعالية.

<ol>
	<li>Hodinka, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Clnical Microbiology. 2, 1558-1574 (2011).</li><li>Lasry, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interstrain+variations+in+the+cytomegalovirus+(CMV)+glycoprotein+B+gene+sequence+among+CMV-infected+children+attending+six+day+care+centers.">Interstrain variations in the cytomegalovirus (CMV) glycoprotein B gene sequence among CMV-infected children attending six day care centers.</a> The Journal of infectious diseases. 174, 606-609 (1996).</li><li>Murph, J. R., Baron, J. C., Brown, C. K., Ebelhack, C. L., Bale Jr, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+occupational+risk+of+cytomegalovirus+infection+among+day-care+providers.">The occupational risk of cytomegalovirus infection among day-care providers.</a> JAMA : the journal of the American Medical Association. 265, 603-608 (1991).</li><li>Pass, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccine+prevention+of+maternal+cytomegalovirus+infection.">Vaccine prevention of maternal cytomegalovirus infection.</a> The New England journal of medicine. 360, 1191-1199 (2009).</li><li>McCoy, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=qPCR+increases+sensitivity+to+detect+cytomegalovirus+in+paraffin-embedded,+formalin-fixed+tissue+of+gastrointestinal+biopsies.">qPCR increases sensitivity to detect cytomegalovirus in paraffin-embedded, formalin-fixed tissue of gastrointestinal biopsies.</a> Human Pathology. 45, 48-53 (2014).</li><li>Mills, A. M., Guo, F. P., Copland, A. P., Pai, R. K., Pinsky, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+CMV+detection+in+gastrointestinal+mucosal+biopsies+using+immunohistochemistry+and+PCR+performed+on+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissue.">A comparison of CMV detection in gastrointestinal mucosal biopsies using immunohistochemistry and PCR performed on formalin-fixed, paraffin-embedded tissue.</a> The American journal of surgical pathology. 37, 995-1000 (2013).</li><li>Krech, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement-fixing+antibodies+against+cytomegalovirus+in+different+parts+of+the+world.">Complement-fixing antibodies against cytomegalovirus in different parts of the world.</a> Bulletin of the World Health Organization. 49, 103-106 (1973).</li><li>Chou, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Newer+methods+for+diagnosis+of+cytomegalovirus+infection.">Newer methods for diagnosis of cytomegalovirus infection.</a> Reviews of infectious diseases. 12 Suppl 7, (1990).</li><li>Brytting, M., Xu, W., Wahren, B., Sundqvist, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytomegalovirus+DNA+detection+in+sera+from+patients+with+active+cytomegalovirus+infections.">Cytomegalovirus DNA detection in sera from patients with active cytomegalovirus infections.</a> Journal of clinical microbiology. 30, 1937-1941 (1992).</li><li>Revello, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cytomegalovirus+in+blood+of+immunocompetent+persons+during+primary+infection:+prognostic+implications+for+pregnancy.">Human cytomegalovirus in blood of immunocompetent persons during primary infection: prognostic implications for pregnancy.</a> The Journal of infectious diseases. 177, 1170-1175 (1998).</li><li>Shinkai, M., Bozzette, S. A., Powderly, W., Frame, P., Spector, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+urine+and+leukocyte+cultures+and+plasma+DNA+polymerase+chain+reaction+for+identification+of+AIDS+patients+at+risk+for+developing+human+cytomegalovirus+disease.">Utility of urine and leukocyte cultures and plasma DNA polymerase chain reaction for identification of AIDS patients at risk for developing human cytomegalovirus disease.</a> The Journal of infectious diseases. 175, 302-308 (1997).</li></ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

العديد من الأساليب المختبرية المتاحة لتشخيص الفيروس المضخم للخلايا (CMV) العدوى، بما في ذلك الأمصال والثقافة الفيروسية، المقايسات افيروس الجزيئية، وعلم الأنسجة خزعة من المواد، وكما تجلى مؤخرا، المقايسات الجزيئية، (FFPE) خزعة الثابتة الفورمالين جزءا لا يتجزأ من البارا...

تفسير الفيروس المضخم للخلايا (CMV) إصابة في العينات السريرية أمر بالغ الأهمية. CMV هو عضو من فصيلة betaherpesvirinae من فيروس الهربس. مماثلة لفيروس الهربس الأخرى، CMV لديه القدرة على إقامة العدوى المستمرة أو الكامنة التي تتميز نقص تكاثر الفيروس النشط 1. قد يحدث تنشيط الفيروس اثناء اوقات التوتر أو كبت المناعة الأخرى، مما يؤدي إلى تكاثر الفيروس النشطة التي تتميز الإفراج الفيريون، والتي قد تترافق مع مظاهر المرض 2-4. في كثير من الأحيان تشمل الجهاز الهضمي (GI) أعراض المرض CMV آلام في البطن و / أو براز دموي 1. تشخيص التهاب المعدة والأمعاء CMV بواسطة الأنسجة يستخدم الهيماتوكسيلين ويوزين (H &amp; E) لتحديد CMV الادراج الفيروسية. في الحالات التي يتم فيها عالية بعد لم يلاحظ أي شوائب واضحة الاشتباه السريري، وكثيرا ما يستخدم المناعية (IHC) باعتبارها طريقة الاختبار مساعد. ومع ذلك، IHCويمكن أيضا أن يعوقها غير الكلاسيكية التي تظهر أنماط تلطيخ الخلوية نادرة (ملتبسة)، مما يجعل من الصعب تفسير (الشكل 2) 5. وقد سعى إلى استخدام الحمض النووي المستخرج من الفورمالين الثابتة، جزءا لا يتجزأ من البارافين (FFPE) الأنسجة خزعة GI والكمية البلمرة سلسلة من ردود الفعل (QPCR) للكشف عن الفيروس المضخم للخلايا في الخزعات GI. وقد تبين هذه التقنية لتكون ذات قيمة في الكشف عن الفيروس المضخم للخلايا في الخزعات GI، ومفيد خاصة في حالات ملتبسة تلطيخ IHC 5،6. أيضا، كما ثبت QPCR أنها تتطابق جيدا مع إضافية السريرية CMV اختبار البيانات عندما كان متوفرا 6. استخدام QPCR في الكشف عن الفيروس المضخم للخلايا قد تؤدي إلى التشخيص المبكر والعلاج في الحالات التي الاشتباه السريري لCMV عالية، ولكن H &amp; E وCMV IHC سلبية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="745">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">1.7 mL microfuge tubes</td>
			<td style="width:195px;">Costar</td>
			<td align="right" style="width:160px;">3620</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">serrated forceps</td>
			<td style="width:195px;">Electron Microscopy Services</td>
			<td style="width:160px;">62086-1S</td>
			<td>Micro Forceps MF-1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">Tabletop centrifuges (microfuge)</td>
			<td style="width:195px;">Eppendorf</td>
			<td align="right" style="width:160px;">5424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">Xylene</td>
			<td style="width:195px;">Fisher</td>
			<td style="width:160px;">Fisher Scientific: X3P</td>
			<td>1 gallon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">Ethanol</td>
			<td style="width:195px;">Fisher</td>
			<td style="width:160px;">Fisher Scientific: ET108</td>
			<td>96-100%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">microtome</td>
			<td style="width:195px;">Leica</td>
			<td style="width:160px;">RM2255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">QIAamp DNA FFPE Tissue Kit</td>
			<td style="width:195px;">Qiagen</td>
			<td align="right" style="width:160px;">56404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">artus CMV LightCycler PCR ASR</td>
			<td style="width:195px;">Qiagen</td>
			<td align="right" style="width:160px;">4500025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">CMV LC PCR Supplement Kit</td>
			<td style="width:195px;">Qiagen</td>
			<td align="right" style="width:160px;">1031873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">LightCycler centrifuge</td>
			<td style="width:195px;">Roche</td>
			<td align="right" style="width:160px;">75005087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">LightCycler Cooling Block</td>
			<td style="width:195px;">Roche</td>
			<td align="right" style="width:160px;">10800058001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">LightCycler Capping Tool</td>
			<td style="width:195px;">Roche</td>
			<td align="right" style="width:160px;">3357317</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">Color Compensation Kit</td>
			<td style="width:195px;">Roche</td>
			<td align="right" style="width:160px;">2158850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">LightCycler 20 &#956;L Capillaries</td>
			<td style="width:195px;">Roche</td>
			<td style="width:160px;">1 909 339</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:224px;">blades</td>
			<td style="width:195px;">Sakura</td>
			<td style="width:160px;">Fisher Scientific: 4689</td>
			<td>Accu-Edge low profile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

qpcr is a sensitive and rapid method for detection of cytomegaloviral dna in formalin-fixed, paraffin-embedded biopsy tissue

لا بد من تحديد الفيروس المضخم للخلايا (CMV) العدوى في الجهاز الهضمي (GI) المسالك المرضى كبت المناعة، نظرا خطر أكبر لتطوير عدوى حادة. وقد تم تطوير العديد من الأساليب المختبرية للكشف عن عدوى الفيروس المضخم للخلايا، بما في ذلك الأمصال والثقافة الفيروسية، والأساليب الجزيئية. في كثير من الأحيان، وهذه الأساليب تعكس الجهازية مع CMV ولا تعرف على وجه التحديد إشراك النسيج المحلية. لذلك، كثيرا ما يتم اكتشاف العدوى CMV في الجهاز الهضمي عن طريق الأنسجة التقليدية من الأنسجة الخزعة. ظلت الهيماتوكسيلين ويوزين (H &amp; E) تلطيخ بالتزامن مع المناعية (IHC) الدعائم الأساسية لدراسة هذه الخزعات. H &amp; E وIHC يؤدي في بعض الأحيان في غير نمطية (ملتبسة) أنماط تلطيخ، مما يجعل من الصعب تفسير. فقد تبين أن كمية البلمرة سلسلة من ردود الفعل (QPCR) لCMV يمكن أن يؤديها بنجاح على الفورمالين الثابتة، (FFPE) جزءا لا يتجزأ من البارافين الأنسجة خزعة للغايةحساسية عالية وخصوصية. الهدف من هذا البروتوكول هو لشرح كيفية أداء الاختبار QPCR للكشف عن الفيروس المضخم للخلايا في الأنسجة خزعة FFPE في إعداد مختبر السريرية. ومن المرجح أن تكون ذات فائدة كبيرة للمرضى في حالات ملتبسة لتلطيخ CMV في الخزعات GI هذا الأسلوب.

تم اختبار ما مجموعه 228 كتل الأنسجة بواسطة الكمية البلمرة سلسلة من ردود الفعل (QPCR)، الذي يتألف من 91 الفيروس المضخم للخلايا (CMV) حالات إيجابية على أساس علم الأنسجة والمناعية إيجابية (IHC)، 18 ملتبسة مع CMV IHC، و 79 ضوابط السلبية. كما هو موضح في الشكل 2، فإن حالات إيجابية...

Watch this Scientific Journal Video about qPCR Is a Sensitive and Rapid Method for Detection of Cytomegaloviral DNA in Formalin-fixed, Paraffin-embedded Biopsy Tissue at JoVE.com

qPCR Is a Sensitive and Rapid Method for Detection of Cytomegaloviral DNA in Formalin-fixed, Paraffin-embedded Biopsy Tissue

This protocol describes qPCR detection of cytomegalovirus in formalin-fixed, paraffin-embedded biopsy tissue, which is rapid, sensitive, specific, and useful for interpreting equivocal hematoxylin and eosin or immunohistochemical staining patterns.

QPCR هو أسلوب حساس وسريع للكشف عن الحمض النووي من Cytomegaloviral في الفورمالين الثابتة، جزءا لا يتجزأ من البارافين-الأنسجة خزعة

It is crucial to identify cytomegalovirus (CMV) infection in the gastrointestinal (GI) tract of immunosuppressed patients, given their greater risk for ...

qpcr-is-sensitive-rapid-method-for-detection-cytomegaloviral-dna

Research

JoVE Journal

Biology

15.7K Views.  Indiana University School of Medicine. This protocol describes qPCR detection of cytomegalovirus in formalin-fixed, paraffin-embedded biopsy tissue, which is rapid, sensitive, specific, and useful for interpreting equivocal hematoxylin and eosin or immunohistochemical staining patterns.

Video: qPCR Is a Sensitive and Rapid Method for Detection of Cytomegaloviral DNA in Formalin-fixed, Paraffin-embedded Biopsy Tissue

Rapid Homogeneous Detection of Biological Assays Using Magnetic Modulation Biosensing System

A magnetic modulation biosensing system (MMB) [1,2] rapidly and homogeneously detected biological targets at low concentrations without any washing or separation step. When the IL-8 target was present, a 'sandwich'-based assay attached magnetic beads with IL-8 capture antibody to streptavidin coupled fluorescent protein via the IL-8 target and a biotinylated IL-8 antibody. The magnetic beads are maneuvered into oscillatory motion by applying an alternating magnetic field gradient through two electromagnetic poles. The fluorescent proteins, which are attached to the magnetic beads are condensed into the detection area and their movement in and out of an orthogonal laser beam produces a periodic fluorescent signal that is demodulated using synchronous detection. The magnetic modulation biosensing system was previously used to detect the coding sequences of the non-structural Ibaraki virus protein 3 (NS3) complementary DNA (cDNA) [2]. The techniques that are demonstrated in this work for external manipulation and condensation of particles may be used for other applications, e.g. delivery of magnetically-coupled drugs in-vivo or enhancing the contrast for in-vivo imaging applications.

Magnetic modulation biosensing system is utilized to rapidly, sensitively and simply detect biological assays, such as DNA molecules and proteins.

متجانسة الكشف السريع عن طريق فحوصات البيولوجي المغناطيسي نظام Biosensing التحوير

A magnetic modulation biosensing system (MMB) [1,2] rapidly and homogeneously detected biological targets at low concentrations without any washing or ...

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of muscle specification, formation and function in model systems has provided valuable insight into muscle physiology. Therefore, identifying and characterizing molecular mechanisms that underlie muscle damage is critical. The structure of adult Drosophila multi-fiber muscles resemble vertebrate striated muscles 1 and the genetic tractability of Drosophila has made it a great system to analyze dystrophic muscle morphology and characterize the processes affecting muscular function in ageing adult flies 2. Here we present the histological technique for preparing paraffin-embedded and frozen sections of Drosophila thoracic muscles. These preparations allow for the tissue to be stained with classical histological stains and labeled with protein detecting dyes, and specifically cryosections are ideal for immunohistochemical detection of proteins in intact muscles. This allows for analysis of muscle tissue structure, identification of morphological defects, and detection of the expression pattern for muscle/neuron-specific proteins in Drosophila adult muscles. These techniques can also be slightly modified for sectioning of other body parts.

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Identification of mechanisms underlying muscle damage is crucial. Here we present the histological technique for preparing paraffin-embedded and frozen sections of Drosophila thoracic muscles. This allows analysis of muscle morphology and localization of protein and other muscle cell components.

البارافين ، جزءا لا يتجزأ من والمجمدة أقسام ذبابة الفاكهة</emالعضلات الكبار>

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of ...

DNA Extraction from Paraffin Embedded Material for Genetic and Epigenetic Analyses

Disease development and progression are characterized by frequent genetic and epigenetic aberrations including chromosomal rearrangements, copy number gains and losses and DNA methylation. Advances in high-throughput, genome-wide profiling technologies, such as microarrays, have significantly improved our ability to identify and detect these specific alterations. However as technology continues to improve, a limiting factor remains sample quality and availability. Furthermore, follow-up clinical information and disease outcome are often collected years after the initial specimen collection. Specimens, typically formalin-fixed and paraffin embedded (FFPE), are stored in hospital archives for years to decades. DNA can be efficiently and effectively recovered from paraffin-embedded specimens if the appropriate method of extraction is applied. High quality DNA extracted from properly preserved and stored specimens can support quantitative assays for comparisons of normal and diseased tissues and generation of genetic and epigenetic signatures 1. To extract DNA from paraffin-embedded samples, tissue cores or microdissected tissue are subjected to xylene treatment, which dissolves the paraffin from the tissue, and then rehydrated using a series of ethanol washes. Proteins and harmful enzymes such as nucleases are subsequently digested by proteinase K. The addition of lysis buffer, which contains denaturing agents such as sodium dodecyl sulfate (SDS), facilitates digestion 2. Nucleic acids are purified from the tissue lysate using buffer-saturated phenol and high speed centrifugation which generates a biphasic solution. DNA and RNA remain in the upper aqueous phase, while proteins, lipids and polysaccharides are sequestered in the inter- and organic-phases respectively. Retention of the aqueous phase and repeated phenol extractions generates a clean sample. Following phenol extractions, RNase A is added to eliminate contaminating RNA. Additional phenol extractions following incubation with RNase A are used to remove any remaining enzyme. The addition of sodium acetate and isopropanol precipitates DNA, and high speed centrifugation is used to pellet the DNA and facilitate isopropanol removal. Excess salts carried over from precipitation can interfere with subsequent enzymatic assays, but can be removed from the DNA by washing with 70% ethanol, followed by centrifugation to re-pellet the DNA 3. DNA is re-suspended in distilled water or the buffer of choice, quantified and stored at -20&deg;C. Purified DNA can subsequently be used in downstream applications which include, but are not limited to, PCR, array comparative genomic hybridization 4 (array CGH), methylated DNA Immunoprecipitation (MeDIP) and sequencing, allowing for an integrative analysis of tissue/tumor samples.

This video demonstrates the protocol for DNA extraction from formalin-fixed paraffin-embedded material. This is a multi-day procedure in which tissue sections are deparaffinized with xylene, rehydrated with ethanol and treated with proteinase K to purify and isolate DNA for subsequent gene-specific or genome-wide analysis.

استخراج الحمض النووي من مادة البارافين جزءا لا يتجزأ من التحليلات الجينية واللا جيني

Disease development and progression are characterized by frequent genetic and epigenetic aberrations including chromosomal rearrangements, copy number ...

Proteomic Sample Preparation from Formalin Fixed and Paraffin Embedded Tissue

Preserved clinical material is a unique source for proteomic investigation of human disorders. Here we describe an optimized protocol allowing large scale quantitative analysis of formalin fixed and paraffin embedded (FFPE) tissue. The procedure comprises four distinct steps. The first one is the preparation of sections from the FFPE material and microdissection of cells of interest. In the second step the isolated cells are lysed and processed using 'filter aided sample preparation' (FASP) technique. In this step, proteins are depleted from reagents used for the sample lysis and are digested in two-steps using endoproteinase LysC and trypsin. 
After each digestion, the peptides are collected in separate fractions and their content is determined using a highly sensitive fluorescence measurement. Finally, the peptides are fractionated on 'pipette-tip' microcolumns. The LysC-peptides are separated into 4 fractions whereas the tryptic peptides are separated into 2 fractions. In this way prepared samples allow analysis of proteomes from minute amounts of material to a depth of 10,000 proteins. Thus, the described workflow is a powerful technique for studying diseases in a system-wide-fashion as well as for identification of potential biomarkers and drug targets.

Archival formalin fixed and paraffin embedded (FFPE) clinical samples are valuable material for investigation of diseases. Here we demonstrate a sample preparation workflow allowing in-depth proteomic analysis of microdissected FFPE tissue.

إعداد نموذج البروتين من الفورمالين الثابتة والبارافين جزءا لا يتجزأ من نسيج

Preserved clinical material is a unique source for proteomic investigation of human disorders. Here we describe an optimized protocol allowing large scale ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA probes. This protocol, originally developed by Kloosterman and colleagues for broad use with Exiqon miRNA probes1, has been modified to overcome challenges inherent in miRNA analysis in kidney tissues. These include issues such as structure identification and hard to remove residual probe and antibody. Use of relatively thin, 5 mm thick, tissue sections allowed for clear visualization of kidney structures, while a strong probe signal was retained in cells. Additionally, probe concentration and incubation conditions were optimized to facilitate visualization of microRNA expression with low background and nonspecific signal. Here, the optimized protocol is described, covering the initial tissue collection and preparation through the mounting of slides at the end of the procedure. The basic components of this protocol can be altered for application to other tissues and cell culture models.

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

This article describes an in situ hybridization protocol optimized for colormetric detection of microRNA expression in formalin fixed kidney sections.

الرنا الميكروي<em&gt; في الوضع الطبيعي</em&gt; التهجين للأنسجة الكلى الفورمالين الثابتة

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. coli O157:H7 by targeting ORF Z3276. With this assay, we can detect as low as a few copies of the genome of DNA of E. coli O157:H7. The sensitivity and specificity of the assay were confirmed by intensive validation tests with a large number of E. coli O157:H7 strains (n = 369) and non-O157 strains (n = 112). Furthermore, we have combined propidium monoazide (PMA) procedure with the newly developed qPCR protocol for selective detection of live cells from dead cells. Amplification of DNA from PMA-treated dead cells was almost completely inhibited in contrast to virtually unaffected amplification of DNA from PMA-treated live cells. Additionally, the protocol has been modified and adapted to a 96-well plate format for an easy and consistent handling of a large number of samples. This method is expected to have an impact on accurate microbiological and epidemiological monitoring of food safety and environmental source.

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

A qPCR assay was developed for detection of Escherichia coli O157:H7 targeting a unique genetic marker, Z3276. The qPCR was combined with propidium monoazide (PMA) treatment for live cell detection. This protocol has been modified and adapted to a 96-well plate format for easy and consistent handling of numerous samples

الكشف عن لايف<em&gt; كولاي</em&gt; O157: H7 من قبل خلايا PMA-QPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to complete. We describe a method for the rapid isolation of mitochondria from mammalian biopsies using a commercial tissue dissociator and differential filtration. In this protocol, manual homogenization is replaced with the tissue dissociator&#8217;s standardized homogenization cycle. This allows for uniform and consistent homogenization of tissue that is not easily achieved with manual homogenization. Following tissue dissociation, the homogenate is filtered through nylon mesh filters, which eliminate repetitive centrifugation steps. As a result, mitochondrial isolation can be performed in less than 30 min. This isolation protocol yields approximately 2 x 1010 viable and respiration competent mitochondria from 0.18 &#177; 0.04 g (wet weight) tissue sample.

A method for rapid isolation of mitochondria from mammalian tissue biopsies is described. Rat liver or skeletal muscle preparations were homogenized with a commercial tissue dissociator and mitochondria were isolated by differential filtration through nylon mesh filters. Mitochondrial isolation time is &#60;30 min compared to 60 - 100 min using alternative methods.

عزل السريع وتنقية الميتوكوندريا لزرع الأنسجة بواسطة التفكك والتفضيلية الترشيح

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

Employing Digital Droplet PCR to Detect BRAF V600E Mutations in Formalin-fixed Paraffin-embedded Reference Standard Cell Lines

ddPCR is a highly sensitive PCR method that utilizes a water-oil emulsion system. Using a droplet generator, an extracted nucleic acid sample is partitioned into ~20,000 nano-sized, water-in-oil droplets, and PCR amplification occurs in individual droplets. The ddPCR approach is in identifying sequence mutations, copy number alterations, and select structural rearrangements involving targeted genes. Here, we demonstrate the use of ddPCR as a powerful technique for precisely quantitating rare BRAF V600E mutations in FFPE reference standard cell lines, which is helpful in identifying individuals with cancer. In conclusion, ddPCR technique offers the potential to precisely profile the specific rare mutations in different genes in various types of FFPE samples.

The goal of this video is to demonstrate how to perform&#160;automated DNA extraction from formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) reference standard cell lines and digital droplet PCR&#160;(ddPCR) analysis to detect rare mutations in a clinical setting. Detecting mutations in FFPE samples demonstrates the clinical utility of ddPCR in FFPE samples.

توظيف الرقمية القطرة PCR لكشف الطفرات BRAF V600E في البارافين جزءا لا يتجزأ من خطوط الخلايا المعيار المرجعي الفورمالين الثابتة

ddPCR is a highly sensitive PCR method that utilizes a water-oil emulsion system. Using a droplet generator, an extracted nucleic acid sample is ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad to extract cellular DNA from whole blood in less than 2 min. The blood specimen is treated with detergent, mixed briefly and applied by pipet to the separation membrane. The lysate wicks into the blotting pad due to capillary action, capturing the genomic DNA on the surface of the separation membrane. The extracted DNA is retained on the membrane during a simple wash step wherein PCR inhibitors are wicked into the absorbent blotting pad. The membrane containing the entrapped DNA is then added to the PCR reaction without further purification. This simple method does not require laboratory equipment and can be easily implemented with inexpensive laboratory supplies. Here we describe a protocol for highly sensitive detection and quantitation of HIV-1 proviral DNA from 100 &#181;l whole blood as a model for early infant diagnosis of HIV that could readily be adapted to other genetic targets.

We describe here a simple and rapid paper-based DNA extraction method of HIV proviral DNA from whole blood detected by quantitative PCR. This protocol can be extended for use in detecting other genetic markers or using alternative amplification methods.

عزل الترشيح من الأحماض النووية: وبسيطة وسريعة استخراج الحمض النووي الطريقة

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

Preparation of Formalin-fixed Paraffin-embedded Tissue Cores for both RNA and DNA Extraction

Formalin-fixed paraffin embedded tissue (FFPET) represents a valuable, well-annotated substrate for molecular investigations. The utility of FFPET in molecular analysis is complicated both by heterogeneous tissue composition and low yields when extracting nucleic acids. A literature search revealed a paucity of protocols addressing these issues, and none that showed a validated method for simultaneous extraction of RNA and DNA from regions of interest in FFPET. This method addresses both issues. Tissue specificity was achieved by mapping cancer areas of interest on microscope slides and transferring annotations onto FFPET blocks. Tissue cores were harvested from areas of interest using 0.6 mm microarray punches. Nucleic acid extraction was performed using a commercial FFPET extraction system, with modifications to homogenization, deparaffinization, and Proteinase K digestion steps to improve tissue digestion and increase nucleic acid yields. The modified protocol yields sufficient quantity and quality of nucleic acids for use in a number of downstream analyses, including a multi-analyte gene expression platform, as well as reverse transcriptase coupled real time PCR analysis of mRNA expression, and methylation-specific PCR (MSP) analysis of DNA methylation.

This modified extraction protocol improves RNA and DNA yields from more precisely targeted regions of interest in histopathologic tissue blocks.

إعداد النوى الأنسجة الثابتة الفورمالين جزءا لا يتجزأ من البارافين لكلا RNA واستخراج الحمض النووي

Formalin-fixed paraffin embedded tissue (FFPET) represents a valuable, well-annotated substrate for molecular investigations. The utility of FFPET in ...