ودعمت DCH، MB وFK قبل EPSRC اتبع على الصندوق. BL-V وDS تم دعم كل من MRC درجة الدكتوراة. وأيد KC بتمويل من منهاج الطب التجديدي المملكة المتحدة.

1. توليف PHNGAD (بولى [1،6-hexanodiol / neopentyl غليكول / دي (جلايكول الإثيلين) حمض الأديبيك -alt-] ديول) <img alt="مخطط 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51723/51723scheme1.jpg" width="500" /> مخطط 1: توليف PHNAGD تمثيل تخطيطي لتركيب PHNAGD. كان من رد الفعل من 1،6-Hexanodiol، جلايكول الاثيلين، وجلايكول neoppentyl وحمض الأديبيك أعدت PHNAGD. PHNAGD، بولي [1،6-hexanodiol / neopentyl غليكول / دي (جلايكول الإثيلين) حمض الأديبيك -alt-] ديول. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق المعالجة الحرارية للأحادية 1،6-الهيكسنديول، دي (جلايكول الإثيلين) وneopentyl غليكول عند 40 درجة مئوية لمدة 48 ساعة في فرن فراغ لإزالة أي المياه المتبقية. السماح للبرد وصولا الى RT تحت فراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 22 مليمول لكل مونومر وحمض الأديبيك (55 ملمول) إلى قاع القارورة ذهابا والعنق اثنين مجهزة أثار شريط ومتصلا جهاز عميد-ستارك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع التجمع كله في ظل فراغ والحرارة بلطف GLAssware عند 40 درجة مئوية لمدة 6 ساعة، من أجل تجنب أي امتصاص الرطوبة خلال إضافة المادة الكيميائية في قارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة عن طريق حقنة، قطرة قطرة، 0.0055 مول من التيتانيوم الحفاز (IV) باتوكسايد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحريك خليط التفاعل عند 180 درجة مئوية تحت جو N 2 لمدة 24 ساعة، وجمع المياه المتبقية في فخ عميد-ستارك. السماح لتبريد المنتج إلى RT. </li></ol> 2. توليف PU134 <img alt="مخطط 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51723/51723scheme2.jpg" width="500" /> مخطط 2: توليف PU134 تمثيل تخطيطي لتركيب البولي يوريثين 134. تم بواسطة تفاعل 1.0 EQUIV من PHNGAD مع 2.0 EQUIV من 4،4&#39;-Methylenebis (فينيل الإيزوسيانات) التي أعدت PU134، تليها إضافة 1.0. EQUIV من سلسلة الموسع 1،4-بيوتانديول. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلط أي ما يعادل واحد من PHNGAD البوليول (مليون ~ 1،800 دا، 3.2 ملمول) مع اثنين من مكافئات من 4&quot;4 Methylenebis (فينيل الإيزوسيانات) (6.4 ملمول) في اللامائية N، N -Dimethylformamide (12 مل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحريك خليط التفاعل عند 70 درجة مئوية، وتحت جو N 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة عن طريق حقنة، قطرة قطرة التيتانيوم الحفاز (IV) باتوكسايد (0.8٪ بالوزن). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 1 ساعة، إضافة يعادل واحد من سلسلة الموسع 1،4-بيوتانديول (3.2 ملمول). زيادة درجة الحرارة عند 90 درجة مئوية ويقلب لمدة 24 ساعة تحت جو N 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد رد فعل، وجمع البولي عن طريق الترسيب بإضافة ايثر (الهكسان أو الماء يمكن أن تستخدم أيضا) إسقاط الحكمة في حل رد فعل حتى يحدث هطول الأمطار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحل الطرد المركزي في 5،300 x ج لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب طاف وتجفيف قبالة عند 40 درجة مئوية في فرن فراغ حتى يتبخر المذيب. ملاحظة: من أجل ضمان أن المنتج النهائي للتفاعل تمتلك المعلمات الصحيحة بشأن لتوزيع الوزن الجزيئي، والحبو وظيفيةملاحظة من البوليمر، وذوبان ودرجات حرارة التحول الزجاجي، وتقنيات وأساليب تحليلية مختلفة يمكن استخدامها، مثل هلام تخلل اللوني الطيفي أو عيد الفطر. </li></ol> 3. إعداد حلول PU134 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن 200 ملغ من PU134 في زجاجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع PU134 إلى تركيز النهائي من 2٪ في عدد من المذيبات: الكلوروفورم، وهو مزيج من الكلوروفورم والتولوين في نسبة 1: 1، رباعي هيدرو الفوران، ومزيج من رباعي هيدرو الفوران وdicloromethane في نسبة 1: 1. ملاحظة: انتخاب المذيب المناسب تختلف تبعا لاستخدام البوليمر. مذيبات مختلفة تمتلك نقطة الغليان المختلفة التي يمكن أن تؤثر على ذوبان من البوليمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يهز الحل بقوة لمدة 20 دقيقة في RT باستخدام شاكر بسرعة 200 يذكره / دقيقة، حتى يصبح حل متجانس ويتم احترام أي راسب. </li></ol> 4. طلاء الزجاج الشرائح مع PU134 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ROUالثانية 15 مم 2 ساترة على المغطي تدور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 50 ميكرولتر من الحل PU134 إلى كل باستخدام ماصة. ضبط مستوى الصوت من الحل PU134 فقا لحجم ساترة يتطلب إبقاء حجم تطفو على السطح نسبة متناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور كل ساترة لمدة 7 ثانية في 23 × ز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الهواء ساترة الجافة في RT لمدة 24 ساعة على الأقل قبل التعقيم. </li></ol> 5. تشعيع ساترة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غاما أشرق البوليمر المغلفة ساترة من خلال تطبيق جرعة من 10 غرايز باستخدام irradiator المختبر لمدة 12 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأشعة فوق البنفسجية أشرق البوليمر المغلفة ساترة باستخدام 30 واط، مصباح الأشعة فوق البنفسجية لمدة 16 دقيقة كل جانب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع البوليمر المغلفة ساترة في مناسبة لوحة الثقافة الأنسجة وفقا لحجم الشريحة. </li></ol> 6. المجهر الإلكتروني <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معطف الذهب البوليمر ساترة بواسطة الاخرق لمدة 200 ثانية في جو من 5 × 10 -1 مليبار من الضغط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التقاط ميكروغرامraphs من البوليمر المغلفة ساترة باستخدام المجهر الإلكتروني الماسح في تسريع والجهد 20 كيلو فولت في وضع التصوير الإلكترون الثانوي. </li></ol> 7. الملاحظات القوة الذرية الميكروسكوب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح مساحة 20 × 20 ميكرون من سطح البوليمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء معدل المسح من 1.32 إلى 1.60 هرتز هرتز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشكيل لقرار 512 X 512 بكسل في المنطقة الممسوحة ضوئيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب الجذر يعني مربع (RMS أو RQ) للطلاء باستخدام متوسط ​​الانحرافات ارتفاع مأخوذة من طائرة بيانات الصورة يعني، معبرا عنه: <img fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/51723/51723eq1.jpg" width="123" /> حيث تسى هو القيمة Z الحالية، وN هو عدد من النقاط داخل منطقة معينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7.5 احسب الانحراف أو يعني خشونة السطح (رع) من الصورة باستخدام، <img fo:content-width="1.5in" src="/files/ftp_upload/51723/51723eq2.jpg" width="154" /> حيث Z (خ) هو الدالة التي تصف ركان السطح الشخصي تحليلها من حيث الارتفاع (Z) وموقف (س) من العينة على طول التقييم &quot;L&quot;. رع يمثل القيمة المتوسطة لسطح نسبة إلى الطائرة المركز. </li></ol> 8. زراعة الخلايا والتمايز <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الثقافة والتفريق بين الجنينية البشرية خط الخلايا الجذعية (HESC) H9 كما هو موضح في الحي 17. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الخلايا باستخدام كاشف التفكك وreplate لهم على PU134 الشرائح المغلفة في يوم 9 من عملية التمايز، في حضور وسيط الحرة المصل كما وصف في Szkolnicka 18،19. ملاحظة: يفضل استخدام لتفكك خلية الأنزيمية إلى انفصال الخلايا الجسدية. </li></ol> 9. السيتوكروم P450 الفحص وظيفية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس النشاط CYP3A باتباع إرشادات الشركة المصنعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان HESC خلايا الكبد المشتقة في يوم 13 أو يوم 19، وسائل الإعلام دون خلايا - كعنصر تحكم السلبية، مع SUBSTR المناسبأكل لمدة 5 ساعة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع supernatants من الخلايا وسائل الإعلام، وإجراء الفحص وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس مستوى النشاط CYP وتطبيع قريب للمساحة (سم 2). </li></ol> 10. المناعية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل HESC المستمدة خلايا الكبد مع برنامج تلفزيوني، لمدة 1 دقيقة، كرر مرتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الجليد الباردة الميثانول بنسبة 100٪ لإصلاح الخلايا، ومكان في -20 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق وتكرر مرتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الخلايا مع PBS / T (0.1٪ توين) / 10٪ BSA لمدة 1 ساعة على RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح حل PBST وإضافة الأجسام المضادة الأولية المناسبة المخفف في PBS / T (0.1٪ توين) / 1٪ BSA، احتضان عند 4 درجات مئوية مع طيف الانفعالات O / N. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مع PBS / T (0.1٪ توين) / 1٪ BSA لمدة 5 دقائق وكرر ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع الأجسام المضادة المناسب في PBS / T (0.1٪ توين) / 1٪ BSA، إضافة إلى الخلايا واحتضان في الظلام في RT لمدة 1 ساعة مع الإثارة لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق وتكرر ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة MOWIOL 488 (التي تحتوي على دابي 1: 1،000) إلى كل بئر، إضافة ساترة بلطف للحد من عدد من فقاعات الهواء. تخزين خلايا ثابتة في 4 درجات مئوية في الظلام. مراقبة تلطيخ باستخدام مجهر مع مرشح المناسب ومصباح الفلورسنت. يتم سرد الأجسام المضادة الأولية والثانوية الأمثل في الجدول 1. </li></ol>

<ol>
	<li>Zhou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUMOylation+of+HNF4&#945;+regulates+protein+stability+and+hepatocyte+function.">SUMOylation of HNF4&#945; regulates protein stability and hepatocyte function.</a> J Cell Sci. 125 (15), 3630-3635 (2012).</li><li>Banerjee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+hydrogel+modulus+on+the+proliferation+and+differentiation+of+encapsulated+neural+stem+cells.">The influence of hydrogel modulus on the proliferation and differentiation of encapsulated neural stem cells.</a> Biomaterials. 30 (27), 4695-4699 (2009).</li><li>Shanbhag, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+Progenitor+Cells+Grown+on+Hydrogel+Surfaces+Respond+to+the+Product+of+the+Transgene+of+Encapsulated+Genetically+Engineered+Fibroblasts.">Neural Progenitor Cells Grown on Hydrogel Surfaces Respond to the Product of the Transgene of Encapsulated Genetically Engineered Fibroblasts.</a> Biomacromolecules. 11 (11), 2936-2943 (2010).</li><li>Battista, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+matrix+composition+of+3D+constructs+on+embryonic+stem+cell+differentiation.">The effect of matrix composition of 3D constructs on embryonic stem cell differentiation.</a> Biomaterials. 26 (31), 6194-6207 (2005).</li><li>Tian, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronic+acid+hydrogel+as+Nogo-66+receptor+antibody+delivery+system+for+the+repairing+of+injured+rat+brain:+in+vitro.">Hyaluronic acid hydrogel as Nogo-66 receptor antibody delivery system for the repairing of injured rat brain: in vitro.</a> Journal of Controlled Release. 102 (1), 13-22 (2005).</li><li>Keshaw, H., Forbes, A., Day, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Release+of+angiogenic+growth+factors+from+cells+encapsulated+in+alginate+beads+with+bioactive+glass.">Release of angiogenic growth factors from cells encapsulated in alginate beads with bioactive glass.</a> Biomaterials. 26 (19), 4171-4179 (2005).</li><li>Baharvand, H., Hashemi, S. M., Kazemi Ashtiani, S., Farrokhi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+hepatocytes+in+2D+and+3D+culture+systems+in+vitro.">Differentiation of human embryonic stem cells into hepatocytes in 2D and 3D culture systems in vitro.</a> The International Journal of Developmental Biology. 50 (7), 645-652 (2006).</li><li>Cameron, K., Travers, P., Chander, C., Buckland, T., Campion, C., Noble, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+osteogenic+differentiation+of+human+mesenchymal+stem/precursor+cells+on+silicate+substituted+calcium+phosphate.">Directed osteogenic differentiation of human mesenchymal stem/precursor cells on silicate substituted calcium phosphate.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 101 (1), 13-22 (2013).</li><li>Pernagallo, S., Unciti-Broceta, A., Diaz-Mochon, J. J., Bradley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+cellular+morphology+and+biocompatibility+using+polymer+microarrays.">Deciphering cellular morphology and biocompatibility using polymer microarrays.</a> Biomedical Materials. 3 (3), 034112 (2008).</li><li>Li, Z., Guo, X., Matsushita, S., Guan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+cardiosphere-derived+cells+into+a+mature+cardiac+lineage+using+biodegradable+poly(N-isopropylacrylamide)+hydrogels.">Differentiation of cardiosphere-derived cells into a mature cardiac lineage using biodegradable poly(N-isopropylacrylamide) hydrogels.</a> Biomaterials. 32 (12), 3220-3232 (2011).</li><li>Tare, R. S., Khan, F., Tourniaire, G., Morgan, S. M., Bradley, M., Oreffo, R. O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microarray+approach+to+the+identification+of+polyurethanes+for+the+isolation+of+human+skeletal+progenitor+cells+and+augmentation+of+skeletal+cell+growth.">A microarray approach to the identification of polyurethanes for the isolation of human skeletal progenitor cells and augmentation of skeletal cell growth.</a> Biomaterials. 30 (6), 1045-1055 (2009).</li><li>Khan, F., Tare, R. S., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. C., Bradley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+cell+manipulation+and+skeletal+tissue+engineering+using+high-throughput+polymer+blend+formulation+and+microarray+techniques.">Strategies for cell manipulation and skeletal tissue engineering using high-throughput polymer blend formulation and microarray techniques.</a> Biomaterials. 31 (8), 2216-2228 (2010).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+thermoresponsive+and+chemically+defined+hydrogel+for+long-term+culture+of+human+embryonic+stem+cells.">A thermoresponsive and chemically defined hydrogel for long-term culture of human embryonic stem cells.</a> Nature Communications. 4 (1335), (2013).</li><li>Medine, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+high-fidelity+hepatotoxicity+models+from+pluripotent+stem+cells.">Developing high-fidelity hepatotoxicity models from pluripotent stem cells.</a> Stem Cells Translational Medicine. 2 (7), 505-509 (2013).</li><li>Hay, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+screening+of+polymer+libraries+to+define+novel+substrates+for+functional+hepatocytes+with+inducible+drug+metabolism.">Unbiased screening of polymer libraries to define novel substrates for functional hepatocytes with inducible drug metabolism.</a> Stem Cell Research. 6 (2), 92-102 (2011).</li><li>Lucendo-Villarin, B., Khan, F., Pernagallo, S., Bradley, M., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintaining+hepatic+stem+cell+gene+expression+on+biological+and+synthetic+substrata.">Maintaining hepatic stem cell gene expression on biological and synthetic substrata.</a> BioResearch Open Access. 1 (1), 50-53 (2012).</li><li>Hay, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+differentiation+of+hESCs+to+functional+hepatic+endoderm+requires+ActivinA+and+Wnt3a+signaling.">Highly efficient differentiation of hESCs to functional hepatic endoderm requires ActivinA and Wnt3a signaling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (34), 12301-12306 (2008).</li><li>Szkolnicka, D., Zhou, W., Lucendo-Villarin, B., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+Stem+Cell&#8211;Derived+Hepatocytes:+Potential+and+Challenges+in+Pharmacology.">Pluripotent Stem Cell&#8211;Derived Hepatocytes: Potential and Challenges in Pharmacology.</a> Annu Rev Pharmecol Toxicol. 53, 147-149 (2013).</li><li>Szkolnicka, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+prediction+of+drug-induced+liver+injury+using+stem+cell-derived+populations.">Accurate prediction of drug-induced liver injury using stem cell-derived populations.</a> Stem Cells Translational Medicine. 3 (2), 141-148 (2014).</li><li>Medine, C. N., Lucendo-Villarin, B., Zhou, W., West, C. C., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+Generation+of+Hepatocyte-like+Cells+from+Human+Embryonic+Stem+Cell+Populations.">Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations.</a> Journal of Visualized Experiments. (56), (2011).</li><li>Freed, L. E., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+organized+cell+communities.">Culture of organized cell communities.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 33 (1-2), 15-30 (1998).</li><li>Braam, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+Vitronectin+Is+a+Functionally+Defined+Substrate+That+Supports+Human+Embryonic+Stem+Cell+Self-Renewal+via+&#945;V&#946;5+Integrin.">Recombinant Vitronectin Is a Functionally Defined Substrate That Supports Human Embryonic Stem Cell Self-Renewal via &#945;V&#946;5 Integrin.</a> Stem Cells. 26 (9), 2257-2265 (2008).</li><li>Rodin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+culturing+of+human+embryonic+stem+cells+on+laminin-521/E-cadherin+matrix+in+defined+and+xeno-free+environment.">Clonal culturing of human embryonic stem cells on laminin-521/E-cadherin matrix in defined and xeno-free environment.</a> Nature Communications. 5 (3195), (2014).</li><li>Thaburet, J. -. F. O., Mizomoto, H., Bradley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Throughput+Evaluation+of+the+Wettability+of+Polymer+Libraries.">High-Throughput Evaluation of the Wettability of Polymer Libraries.</a> Macromolecular Rapid Communication. 25 (1), 336-370 (2003).</li><li>Lim, J. Y., Donahue, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Sensing+and+Response+to+Micro-+and+Nanostructured+Surfaces+Produced+by+Chemical+and+Topographic+Patterning.">Cell Sensing and Response to Micro- and Nanostructured Surfaces Produced by Chemical and Topographic Patterning.</a> Tissue Engineering. 13 (8), 1879-1891 (2007).</li><li>Teixeira, A. I., Abrams, G. A., Bertics, P. J., Murphy, C. J., Nealey, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+contact+guidance+on+well-defined+micro-+and+nanostructured+substrates.">Epithelial contact guidance on well-defined micro- and nanostructured substrates.</a> Journal of Cell Science. 116 (10), 1881-1892 (2003).</li><li>Biggs, M. J. P., Richards, R. G., Wilkinson, C. D. W., Dalby, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+adhesion+interactions+with+topographical+structures:+a+novel+method+for+immuno-SEM+labelling+of+focal+adhesions+in+S-phase+cells.">Focal adhesion interactions with topographical structures: a novel method for immuno-SEM labelling of focal adhesions in S-phase cells.</a> Journal of Microscopy. 231 (1), 28-37 (2008).</li><li>Karuri, N. W., Porri, T. J., Albrecht, R. M., Murphy, C. J., Nealey, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nano-+and+microscale+holes+modulate+cell-substrate+adhesion,+cytoskeletal+organization,+and+-beta1+integrin+localization+in+SV40+human+corneal+epithelial+cells.">Nano- and microscale holes modulate cell-substrate adhesion, cytoskeletal organization, and -beta1 integrin localization in SV40 human corneal epithelial cells.</a> IEEE Transactions on Nanobioscience. 5 (4), 273-280 (2006).</li><li>Hamilton, D. W., Brunette, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+substratum+topography+on+osteoblast+adhesion+mediated+signal+transduction+and+phosphorylation.">The effect of substratum topography on osteoblast adhesion mediated signal transduction and phosphorylation.</a> Biomaterials. 28 (1), 1806-1819 (2007).</li><li>Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+elasticity+directs+stem+cell+lineage+specification.">Matrix elasticity directs stem cell lineage specification.</a> Cell. 126 (4), 677-689 (2006).</li><li>Dang, J. M., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+Induction+of+Aligned+Mesenchymal+Stem+Cell+Sheets+by+Culture+on+Thermally+Responsive+Electrospun+Nanofibers.">Myogenic Induction of Aligned Mesenchymal Stem Cell Sheets by Culture on Thermally Responsive Electrospun Nanofibers.</a> Advanced Materials. 19 (19), 2775-2779 (2007).</li><li>Azevedo, E. C., Nascimento, E. M., Chierice, G. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UV+and+gamma+irradiation+effects+on+surface+properties+of+polyurethane+derivate+from+castor+oil.">UV and gamma irradiation effects on surface properties of polyurethane derivate from castor oil.</a> Pol&#237;meros. 23 (3), 305-311 (2013).</li><li>Rosu, L., Cascaval, C. N., Ciobanu, C., Rosu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+UV+radiation+on+the+semi-interpenetrating+polymer+networks+based+on+polyurethane+and+epoxy+maleate+of+bisphenol+A.">Effect of UV radiation on the semi-interpenetrating polymer networks based on polyurethane and epoxy maleate of bisphenol A.</a> Journal of Photochemistry and Photobilogy A: Chemistry. 169 (2), 177-185 (2005).</li><li>Yang, X. F., Tallman, D. E., Bierwagen, G. P., Croll, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blistering+and+degradation+of+polyurethane+coatings+under+different+accelerated+weathering+tests.">Blistering and degradation of polyurethane coatings under different accelerated weathering tests.</a> Polymer Degradation and Stability. 77 (1), 103-109 (2002).</li></ol>

DCH هو منظمات المجتمع المدني، مدير مؤسس ومساهم في FibromEd المنتجات المحدودة MB وJPI على المساهمين المؤسسين في FibromEd المنتجات المحدودة

تعتمد العديد من الطرق الحالية المستخدمة لتوليد خلايا الكبد من الخلايا الجذعية على المصفوفات غير محددة من أصل حيواني. يمكن لهذه ركائز يكون مكلفا ومتغير بدرجة كبيرة، مما يؤثر على وظائف الخلايا والاستقرار، وهو ما يمثل عائقا كبيرا أمام التطبيق. لذا، أجرينا شاشة للمواد ?...

وقد استخدمت على نطاق واسع المواد البيولوجية في صيانة وتمايز الخلايا الجذعية المحفزة 1. مع تمكين، وهذه ركائز البيولوجية غالبا ما تحتوي على عدد لا يحصى من المكونات غير محددة. Matrigel هو الركيزة تستخدم عادة لزراعة الخلايا الجذعية وتمايز. للأسف، تكوينه المتغير يؤثر وظائف الخلايا والنمط الظاهري. على الرغم من مجموعة متنوعة من المصفوفات البيولوجية البديلة، وأكثر تحديدا استخدمت 2-7، أصل حيواني أو ضعف قابلية يجعلهم مرشحين غير صالحة للتصنيع الصناعي. ولتحديد البدائل الاصطناعية، مع تكوين المعرفة والأداء الموثوق بها، هي الأهداف الرئيسية في أبحاث الخلايا الجذعية. في محاولة للتغلب على قيود غير محددة ركائز ثقافة الخلية، وقد حددت التخصصات التعاون بين الكيمياء وعلم الأحياء المواد الاصطناعية مع القدرة على دعم النمط الظاهري الخلية. موالفةركائز ETIC هي قابلة للتطوير، فعالة من حيث التكلفة، ويمكن تصنيعها في الهياكل المعقدة 3D، ومحاكاة البيئة في الجسم الحي. بسبب هذه الخصائص ركائز الاصطناعية واستخدمت على نطاق واسع لدعم ودفع التفريق بين العديد من أنواع الخلايا 8-10. وقد فحوصات متقدمة وعالية الإنتاجية تسهيل الفرز السريع للمواد الاصطناعية، من المكتبات الكبيرة، وتسليم مواد جديدة ذات خصائص مرنة مع تطبيقات واسعة في مجال البحوث الطبية الحيوية والتنمية 11-13. استخدام إنتاجية عالية البوليمر تكنولوجيا الفحص الصغيرة مجموعة، حددنا بسرعة البولي يوريثين بسيط (PU134)، ومناسبة لصيانة الخلايا الجذعية خلايا الكبد البشرية المشتقة. تم العثور على هذا البوليمر لتكون متفوقة على ركائز المستمدة الحيوانية فيما يتعلق التمايز الكبدية وظيفة 14-16. لقد الأمثل لاحقا عملية طلاء الظروف والتضاريس والتعقيم للوصول الآثارعلى الأداء البوليمر في تحقيق الاستقرار في وظيفة الكبدية وعمر. هذا له آثار هامة فيما يتعلق فهم أساسيات علم الأحياء الكبدية لنمذجة تستند خلية والتطبيقات الطب التجديدي. التكنولوجيا وصفها هنا تمثل مثالا على كيفية سطح البوليمر الاصطناعية يمكن أن يكون الأمثل للحفاظ على النمط الظاهري الخلية. ونحن نعتقد أن الجمع بين هذه التكنولوجيا مع مصل فعال الكبدية المجانية بروتوكول التمايز لديه القدرة على توفير إنتاج قابلة للاستخدام من خلايا الكبد في المختبر، والنمذجة في الطب التجديدي.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Synthesis, preparation, coating and characterization of polymer PU134 coated coverslips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>Edmun B&#252;hler</td>
			<td>KS-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Irradiator</td>
			<td>CIS Biointernational</td>
			<td>IBL 637&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin coater</td>
			<td>Specialty Coating System</td>
			<td>&#160;P-6708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope&#160;</td>
			<td>Philips</td>
			<td>XL30CPSEM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atomic Force Microscope</td>
			<td>DimensionV Nanoscope, VEECO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p4-GLO CYP3A4</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V8902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV bulb</td>
			<td>ESCO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoScope analysis software</td>
			<td>VEECO</td>
			<td></td>
			<td>version 1.20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>TH45200</td>
			<td>Use Volocity 4 Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture plates</td>
			<td>Corning, UK&#160;</td>
			<td>3527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass slides</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
			<td>MIC3308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethylene glycol</td>
			<td>Sigma&#8211;Aldrich</td>
			<td>93171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;1,6-hexanediol</td>
			<td>Sigma&#8211;Aldrich</td>
			<td>240117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neopentyl glycol</td>
			<td>Sigma&#8211;Aldrich</td>
			<td>408255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adipic acid</td>
			<td>Sigma&#8211;Aldrich</td>
			<td>9582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anhydrous N,N-Dimethylformamide</td>
			<td>Sigma&#8211;Aldrich</td>
			<td>227056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethyl ether</td>
			<td>Sigma&#8211;Aldrich</td>
			<td>676845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>titanium (IV) butoxide&#160;</td>
			<td>Sigma&#8211;Aldrich</td>
			<td>244112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,4-butanediol&#160;</td>
			<td>Sigma&#8211;Aldrich</td>
			<td>493732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum oven</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,4&#8217;-Methylenebis(phenyl isocyanate)</td>
			<td>Sigma&#8211;Aldrich</td>
			<td>101688</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrahydrofurane</td>
			<td>Sigma&#8211;Aldrich</td>
			<td>401757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputter coater</td>
			<td>Bal-Tec SCD 050</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Inmunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer saline (-MgCl2, -CaCl2)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010031</td>
			<td>&#160;Store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBST, PBS made up with 0.1% TWEEN 20&#160;</td>
			<td>&#160; Scientific Laboratory Supplies Ltd</td>
			<td>EC607&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>&#160; Scientific Laboratory Supplies Ltd</td>
			<td>CHE5010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, UK</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOWIOL 488 DAPI</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>475904</td>
			<td>Made up in Tris HCL and glycerol as per manufacturers instructions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cell culture and Functional assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CYP3A activity pGLO kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V8902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepatozyme</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17705021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TryLE express</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/12604013">12604013</a></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stabilizing hepatocellular phenotype using optimized synthetic surfaces

Currently, one of the major limitations in cell biology is maintaining differentiated cell phenotype. Biological matrices are commonly used for culturing and maintaining primary and pluripotent stem cell derived hepatocytes. While biological matrices are useful, they permit short term culture of hepatocytes, limiting their widespread application. We have attempted to overcome the limitations using a synthetic polymer coating. Polymers represent one of the broadest classes of biomaterials and possess a wide range of mechanical, physical and chemical properties, which can be fine-tuned for purpose. Importantly, such materials can be scaled to quality assured standards and display batch-to-batch consistency. This is essential if cells are to be expanded for high through-put screening in the pharmaceutical testing industry or for cellular based therapy. Polyurethanes (PUs) are one group of materials that have shown promise in cell culture. Our recent progress in optimizing a polyurethane coated surface, for long-term culture of human hepatocytes displaying stable phenotype, is presented and discussed.

المذيب البوليمر يؤثر على تضاريس سطح البوليمر المغلفة كان يذوب البولي يوريثين 134 في الكلوروفورم، إما وحدها أو بالاشتراك مع التولوين أو رباعي هيدرو الفوران أو ثنائي كلورو ميثان والشرائح الزجاجية المغلفة تدور مع تركيبات ?...

Watch this Scientific Journal Video about Stabilizing Hepatocellular Phenotype Using Optimized Synthetic Surfaces at JoVE.com

Stabilizing Hepatocellular Phenotype Using Optimized Synthetic Surfaces

هذه المادة سوف تركز على تطوير البوليمر المغلفة السطوح على المدى الطويل، ثقافة مستقرة من الخلايا الجذعية المستمدة خلايا الكبد البشرية.

استقرار الكبدي النمط الظاهري عن طريق الأسطح الاصطناعية محسن

Currently, one of the major limitations in cell biology is maintaining differentiated cell phenotype. Biological matrices are commonly used for culturing ...

stabilizing-hepatocellular-phenotype-using-optimized-synthetic

Research

JoVE Journal

Chemistry

10.2K Views.  University of Edinburgh.  هذه المادة سوف تركز على تطوير البوليمر المغلفة السطوح على المدى الطويل، ثقافة مستقرة من الخلايا الجذعية المستمدة خلايا الكبد البشرية. 

Video: Stabilizing Hepatocellular Phenotype Using Optimized Synthetic Surfaces

Covalent Binding of BMP-2 on Surfaces Using a Self-assembled Monolayer Approach

Bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) is a growth factor embedded in the extracellular matrix of bone tissue. BMP-2 acts as trigger of mesenchymal cell differentiation into osteoblasts, thus stimulating healing and de novo bone formation. The clinical use of recombinant human BMP-2 (rhBMP-2) in conjunction with scaffolds has raised recent controversies, based on the mode of presentation and the amount to be delivered. The protocol presented here provides a simple and efficient way to deliver BMP-2 for in vitro studies on cells. We describe how to form a self-assembled monolayer consisting of a heterobifunctional linker, and show the subsequent binding step to obtain covalent immobilization of rhBMP-2. With this approach it is possible to achieve a sustained presentation of BMP-2 while maintaining the biological activity of the protein. In fact, the surface immobilization of BMP-2 allows targeted investigations by preventing unspecific adsorption, while reducing the amount of growth factor and, most notably, hindering uncontrolled release from the surface. Both short- and long-term signaling events triggered by BMP-2 are taking place when cells are exposed to surfaces presenting covalently immobilized rhBMP-2, making this approach suitable for in vitro studies on cell responses to BMP-2 stimulation.

We describe a method for accomplishing efficient immobilization of BMP-2 on surfaces. Our approach is based on the formation of a self-assembled monolayer to achieve the covalent binding of BMP-2 via its free amine residues. This method is a useful tool to study signaling at the cell membrane.

التساهمية تجليد BMP-2 على السطوح باستخدام نهج أحادي الطبقة تجميعها الذاتي

Bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) is a growth factor embedded in the extracellular matrix of bone tissue. BMP-2 acts as trigger of mesenchymal cell ...

Towards Biomimicking Wood: Fabricated Free-standing Films of Nanocellulose, Lignin, and a Synthetic Polycation

Woody materials are comprised of plant cell walls that contain a layered secondary cell wall composed of structural polymers of polysaccharides and lignin. Layer-by-layer (LbL) assembly process which relies on the assembly of oppositely charged molecules from aqueous solutions was used to build a freestanding composite film of isolated wood polymers of lignin and oxidized nanofibril cellulose (NFC). To facilitate the assembly of these negatively charged polymers, a positively charged polyelectrolyte, poly(diallyldimethylammomium chloride) (PDDA), was used as a linking layer to create this simplified model cell wall. The layered adsorption process was studied quantitatively using quartz crystal microbalance with dissipation monitoring (QCM-D) and ellipsometry. The results showed that layer mass/thickness per adsorbed layer increased as a function of total number of layers. The surface coverage of the adsorbed layers was studied with atomic force microscopy (AFM). Complete coverage of the surface with lignin in all the deposition cycles was found for the system, however, surface coverage by NFC increased with the number of layers. The adsorption process was carried out for 250 cycles (500 bilayers) on a cellulose acetate (CA) substrate. Transparent free-standing LBL assembled nanocomposite films were obtained when the CA substrate was later dissolved in acetone. Scanning electron microscopy (SEM) of the fractured cross-sections showed a lamellar structure, and the thickness per adsorption cycle (PDDA-Lignin-PDDA-NC) was estimated to be 17 nm for two different lignin types used in the study. The data indicates a film with highly controlled architecture where nanocellulose and lignin are spatially deposited on the nanoscale (a polymer-polymer nanocomposites), similar to what is observed in the native cell wall.

The objective of this research was to form synthetic plant cell wall tissue using layer-by-layer assembly of nanocellulose fibrils and isolated lignin assembled from dilute aqueous suspensions.&#160; Surface measurement techniques of quartz crystal microbalance and atomic force microscopy were used to monitor the formation of the polymer-polymer nanocomposite material.

نحو Biomimicking الخشب: أفلام التجهيز الحرة الدائمة للNanocellulose، اللجنين، وPolycation الاصطناعية

Woody materials are comprised of plant cell walls that contain a layered secondary cell wall composed of structural polymers of polysaccharides and ...

In Situ SIMS and IR Spectroscopy of Well-defined Surfaces Prepared by Soft Landing of Mass-selected Ions

Soft landing of mass-selected ions onto surfaces is a powerful approach for the highly-controlled preparation of materials that are inaccessible using conventional synthesis techniques. Coupling soft landing with in situ characterization using secondary ion mass spectrometry (SIMS) and infrared reflection absorption spectroscopy (IRRAS) enables analysis of well-defined surfaces under clean vacuum conditions. The capabilities of three soft-landing instruments constructed in our laboratory are illustrated for the representative system of surface-bound organometallics prepared by soft landing of mass-selected ruthenium tris(bipyridine) dications, [Ru(bpy)3]2+ (bpy = bipyridine), onto carboxylic acid terminated self-assembled monolayer surfaces on gold (COOH-SAMs). In situ time-of-flight (TOF)-SIMS provides insight into the reactivity of the soft-landed ions. In addition, the kinetics of charge reduction, neutralization and desorption occurring on the COOH-SAM both during and after ion soft landing are studied using in situ Fourier transform ion cyclotron resonance (FT-ICR)-SIMS measurements. In situ IRRAS experiments provide insight into how the structure of organic ligands surrounding metal centers is perturbed through immobilization of organometallic ions on COOH-SAM surfaces by soft landing. Collectively, the three instruments provide complementary information about the chemical composition, reactivity and structure of well-defined species supported on surfaces.

In Situ SIMS and IR Spectroscopy of Well-defined Surfaces Prepared by Soft Landing of Mass-selected Ions

Soft landing of mass-selected ions onto surfaces is a powerful approach for the highly-controlled preparation of novel materials. Coupled with analysis by in situ secondary ion mass spectrometry (SIMS) and infrared reflection absorption spectroscopy (IRRAS), soft landing provides unprecedented insights into the interactions of well-defined species with surfaces.

في الموقع سيمز والأشعة تحت الحمراء الطيفي من السطوح محددة جيدا من إعداد لينة الهبوط من الأيونات اختيارها قداس-

Soft landing of mass-selected ions onto surfaces is a powerful approach for the highly-controlled preparation of materials that are inaccessible using ...

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. The most common techniques utilized are imaging modalities such as Magnetic Resonance Imaging (MRI), Positron Emission Topography (PET), and Computed Topography (CT) and are optimal for understanding the physical structure of the disease but can only be performed once every four to six weeks due to the use of imaging agents and overall cost. With this in mind, the development of &#8220;point of care&#8221; techniques, such as biosensors, which evaluate the stage of disease and/or efficacy of treatment in the clinician&#8217;s office and do so in a timely manner, would revolutionize treatment protocols.1 As a means to exploring ferrocene based biosensors for the detection of biologically relevant molecules2, methods were developed to produce ferrocene-biotin bio-conjugates described herein. This report will focus on a biotin-ferrocene-cysteine system that can be immobilized on a gold surface.

The synthesis of asymmetric species of ferrocene is challenging using solution techniques. This report focuses on the methods carried out to produce a ferrocene-biotin bioconjugate using facile and clean reactions accomplished via solid-phase synthesis. Incorporation of a thiolate moiety is shown to impart the ability for immobilization on gold surfaces.

منهجية الاصطناعية لغير المتماثلة الفيروسين المستمدة الأنظمة الحيوية المزدوجة عبر الصلبة منهجية تستند الراتنج المرحلة

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

Optimization of Synthetic Proteins: Identification of Interpositional Dependencies Indicating Structurally and/or Functionally Linked Residues

Protein alignments are commonly used to evaluate the similarity of protein residues, and the derived consensus sequence used for identifying functional units (e.g., domains). Traditional consensus-building models fail to account for interpositional dependencies &#8211; functionally required covariation of residues that tend to appear simultaneously throughout evolution and across the phylogentic tree. These relationships can reveal important clues about the processes of protein folding, thermostability, and the formation of functional sites, which in turn can be used to inform the engineering of synthetic proteins. Unfortunately, these relationships essentially form sub-motifs which cannot be predicted by simple &#8220;majority rule&#8221; or even HMM-based consensus models, and the result can be a biologically invalid &#8220;consensus&#8221; which is not only never seen in nature but is less viable than any extant protein. We have developed a visual analytics tool, StickWRLD, which creates an interactive 3D representation of a protein alignment and clearly displays covarying residues. The user has the ability to pan and zoom, as well as dynamically change the statistical threshold underlying the identification of covariants. StickWRLD has previously been successfully used to identify functionally-required covarying residues in proteins such as Adenylate Kinase and in DNA sequences such as endonuclease target sites.

Synthetic protein sequences based on consensus motifs typically ignore co-evolving residues, that imply interpositional dependencies (IPDs). IPDs can be essential to activity, and designs that disregard them may result in suboptimal results. This protocol uses StickWRLD to identify IPDs and help inform rational protein design, resulting in more efficient results.

الاستفادة المثلى من البروتينات التركيبية: تحديد فصل بين التبعيات مبينا هيكليا و / أو بقايا المرتبطة وظيفيا

Protein alignments are commonly used to evaluate the similarity of protein residues, and the derived consensus sequence used for identifying functional ...

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient radiolabeling of DBCO-group-functionalized gold nanoparticles using a copper-free click reaction. Radioiodination of the stannylated precursor (2) was carried out by using [125I]NaI and chloramine T as an oxidant at room temperature for 15 min. After HPLC purification of the crude product, the purified 125I-labeled azide (1) was obtained with high radiochemical yield (75 &plusmn; 10%, n = 8) and excellent radiochemical purity (&gt;99%). For the synthesis of radiolabeled 13-nm-sized gold nanoparticles, the DBCO-functionalized gold nanoparticles (3) were prepared by using a thiolated polyethylene glycol polymer. A copper-free click reaction between 1 and 3 gave the 125I-labeled gold nanoparticles (4) with more than 95% of radiochemical yield as determined by radio-thin-layer chromatography (radio-TLC). These results clearly indicate that the present radiolabeling method using a strain-promoted copper-free click reaction will be useful for the efficient and convenient radiolabeling of DBCO-group-containing nanomaterials.

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

A detailed procedure for the synthesis of a 125I-labeled azide and the radiolabeling of dibenzocyclooctyne (DBCO)-group-conjugated, 13-nm-sized gold nanoparticles using a copper-free click reaction is described.

بروتوكول الأمثل لRadiolabeling كفاءة من جزيئات الذهب عن طريق استخدام<sup&gt; 125</sup&gt; أزيد المجموعة الترقيعي المسمى أنا

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

Color Spot Test As a Presumptive Tool for the Rapid Detection of Synthetic Cathinones

Synthetic cathinones are a large class of new psychoactive substances (NPS) that are increasingly prevalent in drug seizures made by law enforcement and other border protection agencies globally. Color testing is a presumptive identification technique indicating the presence or absence of a particular drug class using rapid and uncomplicated chemical methods. Owing to their relatively recent emergence, a color test for the specific identification of synthetic cathinones is not currently available. In this study, we introduce a protocol for the presumptive identification of synthetic cathinones, employing three aqueous reagent solutions: copper(II) nitrate, 2,9-dimethyl-1,10-phenanthroline (neocuproine) and sodium acetate. Small pin-head sized amounts (approximately 0.1-0.2 mg) of the suspected drugs are added to the wells of a porcelain spot plate, and each reagent is then added dropwise sequentially before heating on a hotplate. A color change from very light blue to yellow-orange after 10 min indicates the likely presence of synthetic cathinones. The highly stable and specific test reagent has the potential for use in the presumptive screening of unknown samples for synthetic cathinones in a forensic laboratory. However, the nuisance of an added heating step for the color change result limits the test to laboratory application and decreases the likelihood of an easy translation to field testing.

Here we present a simple, inexpensive, and selective chemical spot test protocol for the detection of synthetic cathinones, a class of new psychoactive substances. The protocol is suitable for use in various areas of law enforcement that encounter illicit material.

اختبار الألوان الموضعية كأداة افتراضية للكشف السريع عن كاثينونيس الاصطناعية

Synthetic cathinones are a large class of new psychoactive substances (NPS) that are increasingly prevalent in drug seizures made by law enforcement and ...

Characterization of Synthetic Polymers via Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight (MALDI-TOF) Mass Spectrometry

There are many techniques that can be employed in the characterization of synthetic homopolymers, but few provide as useful of information for end group analysis as matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). This tutorial demonstrates methods for optimization of the sample preparation, spectral acquisition, and data analysis of synthetic polymers using MALDI-TOF MS. Critical parameters during sample preparation include the selection of the matrix, identification of an appropriate cationization salt, and tuning the relative proportions of the matrix, cation, and analyte. The acquisition parameters, such as mode (linear or reflector), polarization (positive or negative), acceleration voltage, and delay time, are also important. Given some knowledge of the chemistry involved to synthesize the polymer and optimizing both the data acquisition parameters and the sample preparation conditions, spectra should be obtained with sufficient resolution and mass accuracy to enable the unambiguous determination of the end groups of most homopolymers (masses below 10,000) in addition to the repeat unit mass and the overall molecular weight distribution. Though demonstrated on a limited set of polymers, these general techniques are applicable to a much wider range of synthetic polymers for determining mass distributions, though end group determination is only possible for homopolymers with narrow dispersity.

Characterization of Synthetic Polymers via Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight MALDI-TOF Mass Spectrometry

A protocol for the matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) characterization of synthetic polymers is described including the optimization of sample preparation, spectral acquisition, and data analysis.

توصيف البوليمرات الاصطناعية عن طريق مصفوفة بمساعدة الليزر الامتزاز التأين وقت الرحلة (استخدام-TOF) الطيف الكتلي

There are many techniques that can be employed in the characterization of synthetic homopolymers, but few provide as useful of information for end group ...

Light-driven Molecular Motors on Surfaces for Single Molecular Imaging

The design and synthesis of a synthetic system that aims for the direct visualization of a synthetic rotary motor at the single molecule level on surfaces are demonstrated. This work requires careful design, considerable synthetic effort, and proper analysis. The rotary motion of the molecular motor in solution is shown by 1H NMR and UV-vis absorption spectroscopy techniques. In addition, the method to graft the motor onto an amine-coated quartz is described. This method helps to gain more insight into molecular machines.

The manuscript describes how to synthesize and graft a molecular motor on surfaces for single molecular imaging.

المحركات الجزيئية يحركها الضوء على الأسطح للتصوير الجزيئي واحد

The design and synthesis of a synthetic system that aims for the direct visualization of a synthetic rotary motor at the single molecule level on surfaces ...

A Facile Synthetic Method to Obtain Bismuth Oxyiodide Microspheres Highly Functional for the Photocatalytic Processes of Water Depuration

Bismuth oxyhalide (BiOI) is a promising material for sunlight-driven-environmental photocatalysis. Given that the physical structure of this kind of materials is highly related to its photocatalytic performance, it is necessary to standardize the synthetic methods in order to obtain the most functional architectures and, thus, the highest photocatalytic efficiency. Here, we report a reliable route to obtain BiOI microspheres via the solvothermal process, using Bi(NO3)3 and potassium iodide (KI) as precursors, and ethylene glycol as a template. The synthesis is standardized in a 150 mL autoclave, at 126 &#176;C for 18 h. This results in 2-3 &#181;m-sized mesoporous microspheres, with a relevant specific surface area (61.3 m2/g). Shortening the reaction times in the synthesis results in amorphous structures, while higher temperatures lead to a slight increase in the porosity of the microspheres, with no effect in the photocatalytic performance. The materials are photo-active under UV-A/visible light irradiation for the degradation of the antibiotic ciprofloxacin in water. This method has demonstrated to be effective in interlaboratory tests, obtaining similar BiOI microspheres in Mexican and Chilean research groups.

This article describes a synthetic method to obtain bismuth oxyiodide microspheres, which are highly functional to perform the photocatalytic removal of organic pollutants, such as ciprofloxacin, in water under UV-A/visible light irradiation.

أسلوب اصطناعية سهلة للحصول على البزموت أوكسييوديدي الجزئي المجالات الخرز الصغير وظيفية عالية على بهوتوكاتاليتيك عمليات التنقية المياه

Bismuth oxyhalide (BiOI) is a promising material for sunlight-driven-environmental photocatalysis. Given that the physical structure of this kind of ...