وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من وكالة الاستخبارات الوطنية (بلان برنامج العلوم العصبية)، FRC (الاتحاد من أجل لا بحوث SUR LE Cerveau)، مدينة باريس (ظهور البرنامج)، INSERM ومستشفى لا بيتييه Salpêtrière (عقد الأبحاث المترجمة) إلى NR، من Neuropôle دي بحوث Francilien ([نرف]) إلى الضعف الجنسي، من جامعة بيير وماري كوري UPMC (التقارب برنامج) ومن معهد دو Cerveau آخرون البريد لا Moelle epiniere (باريس) إلى GH

<ol>
	<li>Huberfeld, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamatergic+pre-ictal+discharges+emerge+at+the+transition+to+seizure+in+human+epilepsy.">Glutamatergic pre-ictal discharges emerge at the transition to seizure in human epilepsy.</a> Nature Neuroscience. 14 (5), 627-634 (2011).</li><li>Kwan, P., Brodie, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+identification+of+refractory+epilepsy.">Early identification of refractory epilepsy.</a> New England Journal of Medicine. 342 (5), 314-319 (2000).</li><li>Van Pelt, J., Corner, M. A., Wolters, P. S., Rutten, W. L. C., Ramakers, G. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longterm+stability+and+developmental+changes+in+spontaneous+network+burst+firing+patterns+in+dissociated+rat+cerebral+cortex+cell+cultures+on+multielectrode+arrays.">Longterm stability and developmental changes in spontaneous network burst firing patterns in dissociated rat cerebral cortex cell cultures on multielectrode arrays.</a> Neuroscience Letters. 361 (1-3), 86-89 (2004).</li><li>Sun, J. -. J., Luhmann, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatio-temporal+dynamics+of+oscillatory+network+activity+in+the+neonatal+mouse+cerebral+cortex:+Network+oscillations+in+neonatal+cerebral+cortex.">Spatio-temporal dynamics of oscillatory network activity in the neonatal mouse cerebral cortex: Network oscillations in neonatal cerebral cortex.</a> European Journal of Neuroscience. 26 (7), 1995-2004 (2007).</li><li>Dossi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Regeneration+of+the+ex-vivo+Reconstructed+Mesocorticolimbic+Dopaminergic+System.">Functional Regeneration of the ex-vivo Reconstructed Mesocorticolimbic Dopaminergic System.</a> Cerebral cortex. 23 (12), 2905-2922 (1991).</li><li>Darbon, P., Scicluna, L., Tscherter, A., Streit, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+controlling+bursting+activity+induced+by+disinhibition+in+spinal+cord+networks.">Mechanisms controlling bursting activity induced by disinhibition in spinal cord networks.</a> The European journal of neuroscience. 15 (4), 671-683 (2002).</li><li>Cohen, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+Origin+of+Interictal+Activity+in+Human+Temporal+Lobe+Epilepsy+in+Vitro.">On the Origin of Interictal Activity in Human Temporal Lobe Epilepsy in Vitro.</a> Science. 298 (5597), 1418-1421 (1126).</li><li>Huberfeld, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perturbed+chloride+homeostasis+and+GABAergic+signaling+in+human+temporal+lobe+epilepsy.">Perturbed chloride homeostasis and GABAergic signaling in human temporal lobe epilepsy.</a> The Journal of neuroscience. 27 (37), 9866-9873 (2007).</li><li>Maier, N., Morris, G., Johenning, F. W., Schmitz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Approach+for+Reliably+Investigating+Hippocampal+Sharp+Wave-Ripples+In+Vitro.">An Approach for Reliably Investigating Hippocampal Sharp Wave-Ripples In Vitro.</a> PLoS ONE. 4 (9), (2009).</li><li>H&#225;jos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintaining+network+activity+in+submerged+hippocampal+slices:+importance+of+oxygen+supply.">Maintaining network activity in submerged hippocampal slices: importance of oxygen supply.</a> European Journal of Neuroscience. 29 (2), 319-327 (2009).</li><li>Wittner, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epileptic+human+hippocampal+cornu+ammonis+2+region+generates+spontaneous+interictal-like+activity+in+vitro.">The epileptic human hippocampal cornu ammonis 2 region generates spontaneous interictal-like activity in vitro.</a> Brain. 132 (11), 3032-3046 (2009).</li><li>Dzhala, V., Valeeva, G., Glykys, J., Khazipov, R., Staley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+alterations+in+GABA+signaling+disrupt+hippocampal+network+activity+in+the+developing+brain.">Traumatic alterations in GABA signaling disrupt hippocampal network activity in the developing brain.</a> The Journal of neuroscience. 32 (12), 4017-4031 (2012).</li><li>Menendezdela de la Prida, L., Huberfeld, G., Cohen, I., Miles, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Threshold+Behavior+in+the+Initiation+of+Hippocampal+Population+Bursts.">Threshold Behavior in the Initiation of Hippocampal Population Bursts.</a> Neuron. 49 (1), 131-142 (2006).</li><li>Avoli, M., Drapeau, C., Louvel, J., Pumain, R., Olivier, A., Villemure, J. -. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epileptiform+activity+induced+by+low+extracellular+magnesium+in+the+human+cortex+maintained+in+vitro.">Epileptiform activity induced by low extracellular magnesium in the human cortex maintained in vitro.</a> Annals of neurology. 30 (4), 589-596 (1991).</li><li>Heinemann, U., Dreier, J., Leschinger, A., Stabel, J., Draguhn, A., Zhang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+anticonvulsant+drugs+on+hippocampal+neurons.">Effects of anticonvulsant drugs on hippocampal neurons.</a> Hippocampus. 4 (3), 291-296 (1994).</li><li>Li Zhang, C., Dreier, J. P., Heinemann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paroxysmal+epileptiform+discharges+in+temporal+lobe+slices+after+prolonged+exposure+to+low+magnesium+are+resistant+to+clinically+used+anticonvulsants.">Paroxysmal epileptiform discharges in temporal lobe slices after prolonged exposure to low magnesium are resistant to clinically used anticonvulsants.</a> Epilepsy research. 20 (2), 105-111 (1995).</li><li>Buzs&#225;ki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+of+extracellular+fields+and+currents+-+EEG,+ECoG,+LFP+and+spikes.">The origin of extracellular fields and currents - EEG, ECoG, LFP and spikes.</a> Nature Reviews Neuroscience. 13 (6), 407-420 (2012).</li></ol>

وقدمت رعايتها من قبل أنظمة متعددة القنوات لإنتاج ونشر الفيديو والوصول المفتوح.

Pharmacoresistant الصرع هو حالة نادرة، والتي يمكن استكشافها في الأنسجة البشرية في المختبر. وهذا يسمح بدراسة القشرة الإنسان الصرع، والذي يعرض العيوب المحددة التي استنسخت جزئيا فقط في النماذج الحيوانية. طريقة وصفها هنا يسمح بإعداد وتسجيل الأنسجة البشرية ما بعد الجراحة المجراة سابقا مع الحفاظ على سلامة والشبكات بحيث تنتج بشكل عفوي الصرع الأنشطة الخلوية. الاحتفاظ بأنشطة مماثلة من تلك المسجلة في الجسم الحي لا بد من دراسة آليات نشأة الأنشطة المرضية. وعلاوة على ذلك، تسمح هذه الطرق استكشاف الأنسجة البشرية والحيوانية تجنب نماذج مثالية غير المرض. ومع ذلك، ودراسة الأنسجة البشرية يتطلب التزامن بين جراحي الأعصاب والمختبر التجريبي. يتطلب نقل الأنسجة الرعاية الخاصة لا تكون مؤلمة. وبالإضافة إلى ذلك، فإن كلا من كمية العينات والأنسجة محدودة. أخيرا، والوصول إلى الأنسجة الرقابة السليمة هي ماين القلق. مع هذا المستحضر، الأنسجة بعد العملية تنتج بشكل عفوي التصريف مثل النشبات في العادي ACSF 7،8. كما يمكن استخلاصها أحداث شبيهة نشبي في تعديلها، ACSF proconvulsive بحيث يمكن التحقيق في آليات بدء الحجز والانتقال من دولة إلى النشبات المضبوطات. الأنسجة البشرية يمكن أن تظل قابلة للحياة لمدة تصل إلى 10 ساعة في ظروف واجهة. واعتبرت شرائح قابلة للحياة عندما لوحظ نشاط أو مجال وحدة متعددة الإمكانات بشكل عفوي وعندما أثار هذه الأنشطة عن طريق زيادة استثارة من خلال زيادة البوتاسيوم خارج الخلية و / أو نقص المغنيسيوم. على الرغم من التقلبات في النشاط ويحدث، من المرجح أن تعكس الاختلافات في الأمراض والمناطق القشرية، اكتشفنا خصائص المولدة للصرع من الأنسجة فقط في شرائح صحية تظهر عفوية وأثار النشبات التصريف نشبي. من أجل الحفاظ على حيوية الأنسجة والنشاط، يتم استخدام واجهة غرفة لتخزين ركان شرائح في 36-37 درجة مئوية لمدة التعافي قبل التسجيل مع نظام MEA. في الواقع، العديد من الجماعات قد أظهرت بوضوح مزايا نظام التخزين القائمة على واجهة مقابل تخزين دورق قياسي وأهمية درجة الحرارة للحفاظ على نشاط الشبكة مثل عفوية حادة موجة التموجات أو الذبذبات التي يسببها الكوليني 9،10. تخزين واجهة من شرائح تم استخدامها سابقا لتسجيل النشاط الصرع من قرن آمون البشري وشرائح مرفدي 1،11. مع تقنية MEA الحالية، بعد فترة النقاهة تشريح في ظروف من واجهة، يتم تسجيل نشاط الشبكة في ظروف المغمورة، في حضور ارتفاع معدل التدفق (5-6 مل / دقيقة) عند 37 درجة مئوية، مع نظام MEA. انخفاض قطرها (1.8 سم) من رقاقة MEA، ما يخفف من حجم غرفة صغيرة (&lt;1.5 مل)، مع زيادة معدل التدفق، ويعزز امدادات الاوكسجين للشريحة التي ثبت أن تكون عاملا حاسما لعفوية وفاrmacologically الناجم عن أنشطة الشبكة 9،10. وعلاوة على ذلك، فإن المبلغ المخفض تعميم ACSF يسهل الاختبار الدوائي. إجراء تشريح هو إلا وصدمة للأنسجة 12. ويبدو أن كلا العمارة العصبية وكلوريد التوازن أن مضطرب على سطح الأنسجة (50 ميكرون). أصل الأنشطة التي سجلتها رقائق MEA، الذي عينة الأنسجة في معظمها سطحية دون اختراق عميق، قد تنشأ من المناطق المصابة. ومع ذلك، تظهر بياناتنا أن إمكانات حقل خارج الخلية المكتشفة محليا يتم تسجيلها في معظم أقطاب الشرق الأوسط وأفريقيا وإظهار الأعمال السابقة التي تتكامل أنهم على مسافة من 100 الى 200 ميكرون من موقع تسجيل 13، مما يشير إلى أن المضبوطات المسجلة في إعداد دينا من غير المرجح أن يكون التي تنتجها المناطق المصابة. وعلاوة على ذلك، في الدراسات التي أجريت مع أقطاب التنغستن تمكين اختراق عميق، والأنشطة الصرع المسجلة في الأنسجة البشرية متشابهةلتلك التي لوحظت في مرضى الصرع 1،7،8. حد آخر من خارج الحي تسجيل الأنسجة هو تعطيل الاتصالات بين مناطق الدماغ المختلفة، وبالتالي تقييد neuromodulations ديناميكية. هذا قد يفسر لماذا في مثل هذه الأنسجة يتم تسجيلها بشكل عفوي أي حال من تشبه نشبي، ولكن يتطلب أن يكون سببها التلاعب الأيونية أو الدوائية تحفيز تعزيز استثارة. وفقا لذلك، في هذا البروتوكول، وبفعل أحداث مثل الاستيلاء من خلال الجمع بين التغير في K + خارج الخلية من 3 إلى 6 ملم والحد من المغنيسيوم 2+ الخارجي من 1.3 ملم إلى المغنيسيوم 2+ خالية ACSF، من أجل زيادة استثارة الأنسجة وإزالة المغنيسيوم 2+ NMDA معتمد على كتلة المستقبلة. في الواقع، قد سبق تبين أن نشاط صرعي يتسبب في شرائح القشرة المخية الحديثة وقرن آمون الإنسان باستخدام المغنيسيوم 2+ خالية ACSF يشبه المضبوطات electrographic المسجلة في الجسم الحي 14. الى جانب ذلك،وقد تبين أن عمليات التصريف صرعي حصلت في شرائح الفص الصدغي تصبح مقاومة للمضادات المستخدمة سريريا بعد التعرض لفترات طويلة للالمغنيسيوم 2+ خالية ACSF 15،16، وبالتالي تقديم نموذج للتحقيق في أحداث pharmacoresistant مثل الاستيلاء في المختبر. الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف تتيح تسجيل على حد سواء، امكانات الحقل وأنشطة متعددة الوحدات التي تتكون في الخلايا العصبية إمكانات العمل خارج الحي. وبالتالي، الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف هي أداة قوية الكهربية مقابل رسم المخ، مما استكشاف امكانات الحقل الناتجة عن أنشطة وقت واحد من الفرق العصبية في الجسم الحي، ولكن لا تعطي الوصول إلى الخلايا العصبية واحدة السلوكيات 17. على الرغم من أن أكثر الميكروية الأخيرة يمكن تسجيل أنشطة متعددة الوحدات التي تتكون في الجسم الحي في إمكانات العمل العصبية، فهي الغازية، بحيث يقتصر استخدامها في الغالب لغرض الأبحاث خلال التسجيلات داخل الجمجمة. على وجه الخصوص، والتسجيلات الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف تمثل الأسلوب المفضللدراسة الأنماط المكانية والزمانية لأحداث الصرع، وآليات الضبط والسيطرة على بداية انتشار والعمل من العقاقير المضادة للصرع الكلاسيكية والجديدة. بشكل ملحوظ، لكشف أنواع الخلايا وأساس إشارات من التصريفات الصرع، ارتفاع تقنيات الفرز ويجب الجمع بين التجارب الدوائية مع تقنيات الشرق الأوسط وأفريقيا. على الرغم من الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف يمكن أن تعطي الوصول إلى طفرات فردية، فإنها لا توفر معلومات حول الخصائص الفيزيائية الحيوية ومتشابك. في المستقبل، يجب أن يقترن تقنيات أخرى لتسجيلات الشرق الأوسط وأفريقيا من أجل تحسين السلوك الخلوي عينة، وأنشطة الشبكة وإشارات متشابك. على سبيل المثال، والتصوير مضان لكشف الخلايا العصبية أو سلوك الخلايا الدبقية، وكذلك ديناميات أيون، يمكن الجمع بين الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف التسجيلات. يمكن للمزيد من التحليل اللاحق النسيجي تكشف أيضا عن تغييرات محددة من أنواع الخلايا والبروتينات أو مستقبلات بحيث يمكن ربط موقع الصرع مع إعادة ترتيب الأنشطة المحددة للهيكل العصبي. ويمكن أيضا أن تكون جزءا لا يتجزأ نظام الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف في التصحيح، المشبك انشاء لربط الخلايا واحد أو المواصلة مع الأنشطة السكانية. في المستقبل، ويمكن أيضا أن تستخدم أدوات optogenetic، شريطة أن شرائح الإنسان يمكن تربيتها في المدى الطويل، كما أجريت لشرائح عضوي النمط، بحيث ترنسفكأيشن أو العدوى من أنواع معينة من الخلايا لا يمكن أن يؤديها.

الصرع هو اضطراب مزمن في ونوبات الصرع، والتي هي منقوشة التصريف متقطعة استمرت عدة ثوان لعشرات ثانية على الكهربي (EEG) التسجيلات المرتبطة المظاهر السريرية، يقطع دولة النشبات، والتي تتميز بوجود التصريف العصبية المتزامنة عشرات الالف دائم ودعا أحداث النشبات 1. أنه يؤثر على السكان حوالي 1٪ العالم، وعلى الرغم من أن يتم التحكم في نوبات لغالبية المرضى، ما يقرب من ثلث المصابين بالصرع لا تظهر استجابة كافية للأدوية المضادة للصرع 2. في هذه الحالة، يسمى الصرع pharmacoresistant والآليات التي لا يزال يتعين تحديدها بوضوح، والاستئصال الجراحي لجزء محدد من الدماغ يدعى منطقة للمصادرة يصيب يبقى العلاج البديل الوحيد إعطاء نتائج إيجابية للمرضى. وبالتالي، فإن العينات مقطوعة من جراحة تسفر عن opportunity لدراسة آليات التصريف النشبات وتوليد الحجز ونشر، وكذلك pharmacoresistance على النسيج العصبي المركزي البشرية قابلة للحياة خارج الحي. متعدد القطب صفائف (الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف)، تتكون من ترتيب الميكروية موزعة مكانيا، والسماح التحفيز في وقت واحد وتسجيل النشاط الكهربية من عدة مواقع من الأنسجة، مما يوفر طريقة ممتازة لدراسة الأنماط المكانية والزمانية من النشاط العفوي ومنبهات المسموعة . هذه التقنية، أول تطبيق لرصد التغيرات التنموية للنشاط زراعة الخلايا العصبية 3 ثم تكييفها لالدماغ الحاد وعضوي النمط وشرائح الحبل الشوكي 6 - 4، وتعتبر في الوقت الحاضر أداة الكهربية قيمة. يصف البروتوكول الحالي كيفية تحضير شرائح القشرية الإنسان من الأنسجة مقطوعة جراحيا وتسجيل مع الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف السادس موثوق السابقفو النشبات وأحداث تشبه مصادرة من هذه الشرائح. وبالتالي هذا الأسلوب يوفر وسيلة لمعالجة الآليات الأساسية الكامنة وراء الصرع بدء الأنشطة، ونشر آثار العقاقير المضادة للصرع على المستويين الخلوي والشبكة. ويتم هنا وصف كافة الإجراءات المتبعة للحصول على وإعداد وصيانة وتسجيل شرائح الإنسان في التفاصيل.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="826">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:227px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:201px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:279px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:227px;">Brain Slice Chamber-2: Interface</td>
			<td style="width:201px;">AutoMate Scientific, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">S-BSC2</td>
			<td style="width:279px;">It requires separate temperature controller</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:227px;">2-channel Temperature Controller</td>
			<td style="width:201px;">Multichannel Systems, Germany</td>
			<td style="width:119px;">TC02</td>
			<td style="width:279px;">It allows to plug in and use 2 interface chambers.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:227px;">Special cable for connection of TC01 to S-BSC2 with external reference PT100</td>
			<td style="width:201px;">Multichannel Systems, Germany</td>
			<td style="width:119px;">CA3</td>
			<td style="width:279px;">The reference PT100 is placed near the slices&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:227px;">6pin plug-connector with PT100</td>
			<td style="width:201px;">Multichannel Systems, Germany</td>
			<td style="width:119px;">TS-PT100</td>
			<td style="width:279px;">External reference for CA3 cable</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:227px;">MEA workstation for recording data from 120-electrode MEAs</td>
			<td style="width:201px;">Multichannel Systems, Germany</td>
			<td style="width:119px;">MEA2100-120</td>
			<td style="width:279px;">It includes MEA2100-120 headstage and MEA2100 interface board. www.multichannelsystems.com</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:227px;">Microelectrode array for MEA2100-120</td>
			<td style="width:201px;">Multichannel Systems, Germany</td>
			<td style="width:119px;">120MEA200/30</td>
			<td style="width:279px;">Electrode spacing: 200 &#181;m; electrode diameter: 30 &#181;m; glass ring: 6 mm high. Different configurations (spacing, diameter, ring) possible.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:227px;">Video Microscope Table</td>
			<td style="width:201px;">Multichannel Systems, Germany</td>
			<td style="width:119px;">MEA-VMT-1</td>
			<td style="width:279px;">Table with a video microscope underneath to image the electrode field of the MEAs in an amplifier placed on top of the table and transfer the image to a computer.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:227px;">Perfusion cannula</td>
			<td style="width:201px;">Multichannel Systems, Germany</td>
			<td style="width:119px;">PH01</td>
			<td style="width:279px;">Heatable perfusion cannula with temperature sensor; temperature can be programmed with TC02 controller</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:227px;">MC_Rack</td>
			<td style="width:201px;">Multichannel Systems, Germany</td>
			<td></td>
			<td style="width:279px;">Software for data acquisition and recordings</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:227px;">Magnetic Perfusion Holder</td>
			<td style="width:201px;">Multichannel Systems, Germany</td>
			<td style="width:119px;">MPH</td>
			<td style="width:279px;">Magnetic perfusion holder for PH01 element to fix the perfusion cannula and connect the perfusion system to the amplifier&#39;s ground</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:227px;">Neuroexplorer</td>
			<td style="width:201px;">Nex Technologies</td>
			<td></td>
			<td style="width:279px;">Software for data analysis; info@neuroexplorer.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:227px;">Peristaltic pump (drive unit)</td>
			<td style="width:201px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F155001</td>
			<td style="width:279px;">0,01 to 48 rp</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:227px;">Peristaltic pump (pump head)</td>
			<td style="width:201px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F117800</td>
			<td style="width:279px;">R2 two channel</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:227px;">Ultrasonic aspirator</td>
			<td style="width:201px;">Integra Life sciences, USA</td>
			<td style="width:119px;">Cusa Excel +</td>
			<td style="width:279px;">It allows blunt subpial dissection of the cortex</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:227px;">Neuronavigation</td>
			<td style="width:201px;">Isis Solutions, France</td>
			<td style="width:119px;">Surgiscope</td>
			<td style="width:279px;">It allows real time identification of the brain structure on the preoperative MRI</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:227px;">Vibratome HM 650 V</td>
			<td style="width:201px;">Microm</td>
			<td></td>
			<td style="width:279px;">Block slicing into 400 &#956;m thick slices</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

multi-electrode array recordings of human epileptic postoperative cortical tissue

الصرع، مما يؤثر على حوالي 1٪ من السكان، وتضم مجموعة من الاضطرابات العصبية التي تتميز بحدوث نوبات من الدوري، والتي تعرقل وظيفة المخ المعتادة. على الرغم من العلاج بالأدوية المضادة للصرع المتوفرة حاليا تستهدف الوظائف العصبية، وثلث المرضى الذين يعانون من الصرع pharmacoresistant. في هذه الحالة، استئصال الجراحي للمنطقة الدماغ توليد النوبات يبقى العلاج البديل الوحيد. ساهم دراسة الأنسجة صرع الإنسان لفهم الآليات المولدة للصرع جديدة خلال السنوات ال 10 الماضية. في الواقع، هذه الأنسجة ينتج الصرع النشبات التصريف عفوية وكذلك الأحداث نشبي التي يسببها دواء التي يمكن تسجيلها مع تقنيات الكهربية الكلاسيكية. بشكل ملحوظ، صفائف متعدد القطب (الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف)، والتي هي أجهزة microfabricated تضمين مجموعة من الميكروية ترتيب مكانيا، توفر فرصة فريدة لتحفيز في وقت واحد وتسجيل بوتيه الحقلntials، فضلا عن إمكانات العمل من الخلايا العصبية متعددة من مناطق مختلفة من الأنسجة. هكذا الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف التسجيلات توفر نهجا ممتازا لدراسة الأنماط المكانية والزمانية لالنشبات عفوية وأحداث تشبه أثار استيلاء ومصادرة الآليات الكامنة وراء ظهور والانتشار. نحن هنا تصف كيفية تحضير شرائح القشرية الإنسان من الأنسجة مقطوعة جراحيا وتسجيل مع الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف النشبات وتشبه نشبي أحداث خارج الحي.

تسجيل النشاط البشري شريحة القشرية يبدأ حين perfusing الأنسجة مع التسجيل العادي ACSF (كما هو موضح سابقا) 7،8. في هذه الحالة، عندما يتم الحفاظ على الأنسجة أثناء الجراحة، وكذلك في وقت لاحق خلال نقل الأنسجة من إعداد المستشفى وشريحة، ويمكن للمرء أن يلاحظ النشاط العفوي، في شكل أحداث شبيهة النشبات الصغيرة، والكشف عن مجموعات صغيرة من أقطاب الشرق الأوسط وأفريقيا. وتألفت التصريف مثل النشبات في إمكانيات الحقل، عادة ثنائية الطور، تتألف من انحراف سلبي حاد الأولي، حيث بلغ عشرات microvolts، تليها موجة معاكسة تعد تستغرق عدة عشرات من ميلي ثانية. وعادة ما تكون جزءا لا يتجزأ من أنشطة متعددة الوحدات السريعة في إمكانيات الحقل أساسا في الجزء الأول. ويتضح من الأمثلة التمثيلية النشاط مثل النشبات في الشكل 3Aii، حيث يظهر أثر سجلتها قطب الشرق الأوسط وأفريقيا. لتسجيل نوبات الصرع من فيالمختبر شرائح القشرية الإنسان، فمن الضروري أن يروي لهم مع &quot;مولدة للصرع&quot; ACSF، التي المغنيسيوم 2+ غائب ويتم رفع K + إلى 6 ملم، لتعزيز الأنسجة استثارة 1 (زيادة K + من 3 إلى 6 ملم وحده لا يكفي للحث على المضبوطات، والبيانات لا تظهر). مرة نضح مع 0 المغنيسيوم 2+ 6 ملي K + ACSF بدأت، ونشاط شرائح القشرية يزيد تدريجيا ويبدو الاستيلاء الأول في غضون 15 إلى 20 دقيقة (15.4 ± 1.7 دقيقة، ن = 10، 5 من المرضى، الشكل (3) منظمة العفو الدولية ). نحن أثار النشاط مثل نشبي، كما هو مبين في الشكل (3)، في 75٪ من المرضى اختبار و66.7٪ من جميع شرائح المسجلة. تسجل نشاطات الصرع من الأقطاب الكهربائية المجاورة للرقاقة الشرق الأوسط وأفريقيا، ومقارنة ديناميات بداية الأحداث المحتملة المجال يسمح يدرسون موقعهم من سفر التكوين والانتشار. والاستيلاء تمثيلي المسجلة من شريحة من همهمةويرد على قشرة الدماغ مع نظام MEA في الشكل 3B (أثر الممثلين الاستيلاء سجلت من قبل القطب MEA واحد هو مبين في القرار الزماني العالي في الشكل 3 AIII). لاحظ أن مصادرة يسجل تقريبا من جميع الأقطاب من الشريحة الشرق الأوسط وأفريقيا، مما يشير إلى أنه قادر على نشر إلى منطقة القشرية كبيرة. وعلاوة على ذلك، والنظر في آثار واحدة سجلت كل من القطب، فمن الممكن لمراقبة انتشار التدريجي للاستيلاء عبر النسيج: في الواقع، ويبدأ لأول مرة في المنطقة القشرية التي تغطي النصف الأيمن من مجموعة القطب، وينتشر تدريجيا ل المنطقة التي تغطي النصف الأيسر (. ط ه، ومقارنة آثار من L6 القطب وB6، الشكل 3B). <img alt="الشكل 1" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/51870/51870fig1highres.jpg" width="300" /> الشكل 1: أ النمو الشاذ لالقشريةهو تصور د زواله الجراحية نوع أ تايلور التنسج القشري البؤري (السهم الأبيض) جزءا لا يتجزأ من الفص الجبهي الأيسر التلم على التصوير بالرنين المغناطيسي قبل الجراحة (A)، وأكد في وقت لاحق من خلال وضع العلامات كيناز الفحص النسيجي (ب) خريطة؛ شريط مقياس: 200 ميكرون) مما يدل على dyslamination القشرية، الخلايا العصبية غير الطبيعية والمسار على الخلايا العصبية مع الهجرة غير مكتملة في المادة البيضاء أقل. أثناء الجراحة، المترجمة إلى النمو الشاذ وفقا لبيانات التصوير بالرنين المغناطيسي مع نظام neuronavigation (C). تصور التلفيف التي تحتوي على التنسج أثناء الجراحة (D). <img alt="الرقم 2" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51870/51870fig2highres.jpg" width="400" /> الشكل 2: معدات وإجراءات إعداد شريحة القشرية البشري يتم استخدام غرفة اجهة للحفاظ على شرائح القشرية الإنسان فيفو السابقين (A). بقية شرائح على ورقة من النسيج عدسة في منطقة مسطحة في الجزء العلوي من غرفة (B)، حيث استشعار درجة الحرارة (C، اليسار)، متصلا إلى وحدة تحكم في درجة الحرارة (C، الحق، حتى) من خلال مزدوج كابل العضوية (C، حق، أسفل)، يتم وضعها للحفاظ على 37 درجة مئوية طوال الوقت شريحة الحضانة. وبمجرد الحصول عليها، ضع مقطوعة كتلة من الأنسجة في طبق بتري مليئة الجليد الباردة ACSF القائم على السكروز (D) وإزالة الجلطات الدموية والأوعية والسحايا، لتسهيل التقطيع. إذا كانت كتلة الأنسجة أكبر من غرف MEA، عزل قطعة من أبعاد مناسبة بشفرة (E) والغراء على لوحة العينة vibratome (F). قطع 400 ميكرون شرائح سميكة وبمساعدة ملعقة (G) نقلها على قطع من الأنسجة عدسة (H)، واحتضان لهم في غرفة واجهة (I). قبل التسجيل، ريمولقد أنسجة عدسة من قبل غمر الشريحة في طبق بتري مليئة ACSF وتحويلها إلى ACSF شغل MEA رقاقة مع ملعقة (J). إزالة الحل للسماح للشريحة تلتزم في الشرق الأوسط وأفريقيا (K) ويبقيه في المركز باستخدام مرساة البلاتين. وضع MEA في مكبر للصوت (L)، وبدء نضح والتسجيل. <img alt="الرقم 3" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/51870/51870fig3highres.jpg" width="300" /> الرقم 3: التسجيلات MEA من نوبات الصرع في شرائح القشرية الإنسان (A) يظهر تتبع ممثل من النشاط البشري شريحة القشرية التي سجلتها قطب الشرق الأوسط وأفريقيا في لوحة ط. بحضور ACSF طبيعي، فمن الممكن لمراقبة النشاط مثل النشبات العفوي (مستطيل رمادي صغير، التكبير في لوحة الثاني)؛ ثم، عندما نضح مع 0 المغنيسيوم 2+ 6 ملي K + ACSF قد بدأ، وseizu الأولإعادة يظهر بعد ~ 15 دقيقة تأخير وتبعتها أحداث أخرى في فترة 2-3 دقائق. لوحة الثالث يظهر الحجز في المستطيل الرمادي الكبير في الفريق الأول مع نطاق التكبير. ويوضح تتبع الأزرق التكبير من النشاط، كما يتبين من الخط الأزرق والسهم. الجلسة الرابعة) تظهر البيانات المصورة في لوحة III) تمريرة عالية تصفيتها في 250 هرتز، والتي تكشف متعددة وحدة النشاط عند التكبير (تتبع الأزرق). (ب) تسجيل ممثلا لمصادرة بحضور 0 المغنيسيوم 2+ 6 ملي K + ACSF من جميع أقطاب الشرق الأوسط وأفريقيا. يمثل كل مربع إلكترود 12 × 12 MEA مجموعة ويظهر نافذة الوقت 80 ثانية؛ خط منقط يشير إلى موضع السطح القشري نسبيا لمجموعة الشرق الأوسط وأفريقيا.

Watch this Scientific Journal Video about Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue at JoVE.com

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

نحن هنا تصف كيفية إجراء التسجيلات مجموعة متعدد القطب الأنسجة القشرية صرع الإنسان. وأظهرت استئصال الأنسجة الصرع، إعداد شريحة ومجموعة متعدد القطب تسجيلات لأحداث النشبات ونشبي بالتفصيل.

متعدد القطب تسجيلات صفيف من داء الصرع بعد الجراحة القشرية الأنسجة البشرية

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

multi-electrode-array-recordings-human-epileptic-postoperative

Research

JoVE Journal

Medicine

20.4K Views.  CNRS UMR 7241, INSERM U1050, Collège de France.  نحن هنا تصف كيفية إجراء التسجيلات مجموعة متعدد القطب الأنسجة القشرية صرع الإنسان. وأظهرت استئصال الأنسجة الصرع، إعداد شريحة ومجموعة متعدد القطب تسجيلات لأحداث النشبات ونشبي بالتفصيل. 

Video: Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

Progress in prostate cancer research is severely limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems, which limit our ability to understand genetic and molecular events underlying prostate disease initiation. Toward developing better model systems for studying human prostate carcinogenesis, we and others have taken advantage of the unique pro-prostatic inductive potential of embryonic rodent prostate stroma, termed urogenital sinus mesenchyme (UGSM). When recombined with certain pluripotent cell populations such as embryonic stem cells, UGSM induces the formation of normal human prostate epithelia in a testosterone-dependent manner. Such a human model system can be used to investigate and experimentally test the ability of candidate prostate cancer susceptibility genes at an accelerated pace compared to typical rodent transgenic studies. Since Human embryonic stem cells (hESCs) can be genetically modified in culture using inducible gene expression or siRNA knock-down vectors prior to tissue recombination, such a model facilitates testing the functional consequences of genes, or combinations of genes, which are thought to promote or prevent carcinogenesis.
The technique of isolating pure populations of UGSM cells, however, is challenging and learning often requires someone with previous expertise to personally teach. Moreover, inoculation of cell mixtures under the renal capsule of an immunocompromised host can be technically challenging. Here we outline and illustrate proper isolation of UGSM from rodent embryos and renal capsule implantation of tissue mixtures to form human prostate epithelium. Such an approach, at its current stage, requires in vivo xenografting of embryonic stem cells; future applications could potentially include in vitro gland formation or the use of induced pluripotent stem cell populations (iPSCs).

To unravel the earliest molecular mechanisms underlying prostate cancer initiation, novel and innovative human model systems and approaches are desperately needed. The potential of pre-prostatic urogenital sinus mesenchyme (UGSM) to induce pluripotent stem cell populations to form human prostate epithelium is a powerful experimental tool in prostate research.

تشكيل الظهارة البروستاتا الذي يصيب الانسان عن طريق إعادة التركيب الأنسجة من القوارض البولي التناسلي اللحمة المتوسطة الجيوب الأنفية والخلايا الجذعية البشرية

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular weight metabolites in tissues of the treated host to achieve long-term survival. The semipermeable membrane allows engrafted encapsulated cells to avoid rejection by the immune system. The encapsulation procedure was designed to enable a controlled release of bioactive compounds, such as insulin, other hormones, and cytokines. Here we describe a method for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production and energy dissipation (thermogenesis) in the intra-abdominal adipose tissue of obese mice. Encapsulation of thermogenic catabolic cells may be potentially applicable to the prevention and treatment of obesity and type 2 diabetes. Another potential application of catabolic cells may include detoxification from alcohols or other toxic metabolites and environmental pollutants.

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

التغليف حرارة Preadipocytes للزراعة إلى الدهنية مستودعات الأنسجة

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

العمل مع الأنسجة البشرية لبالحركة أبحاث السرطان

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

3D Ultrasound Imaging: Fast and Cost-effective Morphometry of Musculoskeletal Tissue

The developmental goal of 3D ultrasound imaging (3DUS) is to engineer a modality to perform 3D morphological ultrasound analysis of human muscles. 3DUS images are constructed from calibrated freehand 2D B-mode ultrasound images, which are positioned into a voxel array. Ultrasound (US) imaging allows quantification of muscle size, fascicle length, and angle of pennation. These morphological variables are important determinants of muscle force and length range of force exertion. The presented protocol describes an approach to determine volume and fascicle length of m.&#160;vastus lateralis and m.&#160;gastrocnemius medialis. 3DUS facilitates standardization using 3D anatomical references. This approach provides a fast and cost-effective approach for quantifying 3D morphology in skeletal muscles. In healthcare and sports, information on the morphometry of muscles is very valuable in diagnostics and/or follow-up evaluations after treatment or training.

3D ultrasound imaging (3DUS) allows fast and cost-effective morphometry of musculoskeletal tissues. We present a protocol to measure muscle volume and fascicle length using 3DUS.

التصوير بالموجات فوق الصوتية ثلاثية الأبعاد: مورفوميتري سريعة وفعالة من حيث التكلفة لانسجة العضلات والعظام

The developmental goal of 3D ultrasound imaging (3DUS) is to engineer a modality to perform 3D morphological ultrasound analysis of human muscles. 3DUS ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

تقييم الدالة Microvascular الأنسجة الدهنية البشرية باستخدام فيديوميكروسكوبي

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

A Mouse Model of Orthopedic Surgery to Study Postoperative Cognitive Dysfunction and Tissue Regeneration

Surgery is commonly used to improve and maintain quality of life. Unfortunately, in vulnerable patients such as the elderly, complications may occur and significantly diminish the outcome. Indeed, after routine orthopedic surgery to repair a fracture, as many as 50% of elderly patients suffer from neurologic complications like delirium. Also, the capacity to heal and regenerate tissue after surgery decreases with age, and can impact the quality of fracture repair and even osseous integration of implants. Thus, a better understanding of mechanisms that drive these age-dependent changes could provide strategic targets to minimize risk for such complications and optimize outcomes. Here, we introduce a clinically relevant mouse model of tibial fracture. The postoperative changes in these mice mimic some of the cognitive impairments commonly observed after routine orthopedic surgery in humans. Briefly, an incision is performed in the right hind limb under strictly aseptic conditions. Muscles are disassociated, and a 0.38-mm stainless steel pin is inserted into the upper crest of the tibia, inside the intramedullary canal. Osteotomy is then performed, and the wound is stapled. We have used this model to investigate the effects of surgical trauma on postoperative neuroinflammation and behavioral changes. By applying this fracture model in combination with parabiosis, a surgical model in which 2 mice are anastomosed, we have studied cells and secreted factors that systemically rejuvenate organ function and tissue regeneration after injury. By following our step-by-step protocol, these models can be reproduced with high fidelity, and can be adapted to interrogate many biologic pathways that are altered by surgical trauma.

This protocol describes a mouse model of orthopedic surgery that has been used to study mechanisms of postoperative neuroinflammation and behavioral changes, and when combined with parabiosis, to study tissue regeneration during aging.

نموذج ماوس لجراحة العظام لدراسة الخلل المعرفي بعد العملية الجراحية وتجديد الأنسجة

Surgery is commonly used to improve and maintain quality of life. Unfortunately, in vulnerable patients such as the elderly, complications may occur and ...

Generation of Human 3D Lung Tissue Cultures (3D-LTCs) for Disease Modeling

Translation of novel discoveries to human disease is limited by the availability of human tissue-based models of disease. Precision-cut lung slices (PCLS) used as 3D lung tissue cultures (3D-LTCs) represent an elegant and biologically highly relevant 3D cell culture model, which highly resemble in situ tissue due to their complexity, biomechanics and molecular composition. Tissue slicing is widely applied in various animal models. 3D-LTCs derived from human PCLS can be used to analyze responses to novel drugs, which might further help to better understand the mechanisms and functional effects of drugs in human tissue. The preparation of PCLS from surgically resected lung tissue samples of patients, who experienced lung lobectomy, increases the accessibility of diseased and peritumoral tissue. Here, we describe a detailed protocol for the generation of human PCLS from surgically resected soft-elastic patient lung tissue. Agarose was introduced into the bronchoalveolar space of the resectates, thus preserving lung structure and increasing the tissue&#39;s stiffness, which is crucial for subsequent slicing. 500 &#181;m thick slices were prepared from the tissue block with a vibratome. Biopsy punches taken from PCLS ensure comparable tissue sample sizes and further increase the amount of tissue samples. The generated lung tissue cultures can be applied in a variety of studies in human lung biology, including the pathophysiology and mechanisms of different diseases, such as fibrotic processes at its best at (sub-)cellular levels. The highest benefit of the 3D-LTC ex vivo model is its close representation of the in situ human lung in respect of 3D tissue architecture, cell type diversity and lung anatomy as well as the potential for assessment of tissue from individual patients, which is relevant to further develop novel strategies for precision medicine.

Generation of Human 3D Lung Tissue Cultures 3D-LTCs for Disease Modeling

Here, we present a protocol for the preparation of agarose-filled human precision-cut lung slices from resected patient tissue that are suitable for generating 3D lung tissue cultures to model human lung diseases in biological and biomedical studies.

جيل زرع الأنسجة البشرية الرئة 3D (3D-الصلب) للنمذجة المرض

Translation of novel discoveries to human disease is limited by the availability of human tissue-based models of disease. Precision-cut lung slices (PCLS) ...

Nanoscopic Imaging of Human Tissue Sections via Physical and Isotropic Expansion

In modern pathology, optical microscopy plays an important role in disease diagnosis by revealing microscopic structures of clinical specimens. However, the fundamental physical diffraction limit prevents interrogation of nanoscale anatomy and subtle pathological changes when using conventional optical imaging approaches. Here, we describe a simple and inexpensive protocol, called expansion pathology (ExPath), for nanoscale optical imaging of common types of clinical primary tissue specimens, including both fixed-frozen or formalin-fixed paraffin embedded (FFPE) tissue sections. This method circumvents the optical diffraction limit by chemically transforming the tissue samples into tissue-hydrogel hybrid and physically expanding them isotropically across multiple scales in pure water. Due to expansion, previously unresolvable molecules are separated and thus can be observed using a conventional optical microscope.

Nanoscale imaging of clinical tissue samples can improve understanding of disease pathogenesis. Expansion pathology (ExPath) is a version of expansion microscopy (ExM), modified for compatibility with standard clinical tissue samples, to explore the nanoscale configuration of biomolecules using conventional diffraction limited microscopes.

التصوير النانوسكوبي لأقسام الأنسجة البشرية عن طريق التوسع البدني والنظائري

In modern pathology, optical microscopy plays an important role in disease diagnosis by revealing microscopic structures of clinical specimens. However, ...

A Postoperative Evaluation Guideline for Computer-Assisted Reconstruction of the Mandible

Valid comparisons of postoperative accuracy results in computer-assisted reconstruction of the mandible are difficult due to heterogeneity in imaging modalities, mandibular defect classification, and evaluation methodologies between studies. This guideline uses a step-by-step approach guiding the process of imaging, classification of mandibular defects and volume assessment of three-dimensional (3D) models, after which a legitimized quantitative accuracy evaluation method can be performed between the postoperative clinical situation and the preoperative virtual plan. The condyles and the vertical and horizontal corners of the mandible are used as bony landmarks to define virtual lines in the computer-assisted surgery (CAS) software. Between these lines the axial, coronal, and both sagittal mandibular angles are calculated on both pre- and postoperative 3D models of the (neo)mandible and subsequently the deviations are calculated. By superimposing the postoperative 3D model to the preoperative virtually planned 3D model, which is fixed to the XYZ axis, the deviation between pre- and postoperative virtually planned dental implant positions can be calculated. This protocol continues and specifies an earlier publication of this evaluation guideline.

Here, we propose a practical, feasible and reproducible evaluation guideline for computer-assisted reconstruction of the mandible in order to create uniformity between studies regarding postoperative accuracy evaluation. This protocol continues and specifies an earlier publication of this evaluation guideline.

مبادئ توجيهية للتقييم بعد الجراحة لإعادة بناء الفك السفلي بمساعدة الحاسوب

Valid comparisons of postoperative accuracy results in computer-assisted reconstruction of the mandible are difficult due to heterogeneity in imaging ...

Preparation of Human Myocardial Tissue for Long-Term Cultivation

Cardiomyocyte cultivation has seen a vast number of developments, ranging from two-dimensional (2D) cell cultivation to iPSC derived organoids. In 2019, an ex vivo way to cultivate myocardial slices obtained from human heart samples was demonstrated, while approaching in vivo condition of myocardial contraction. These samples originate mostly from heart transplantations or left-ventricular assist device placements. Using a vibratome and a specially developed cultivation system, 300 &#181;m thick slices are placed between a fixed and a spring wire, allowing for stable and reproducible cultivation for several weeks. During cultivation, the slices are continuously stimulated according to individual settings. Contractions can be displayed and recorded in real-time, and pharmacological agents can be readily applied. User-defined stimulation protocols can be scheduled and performed to assess vital contraction parameters like post-pause-potentiation, stimulation threshold, force-frequency relation, and refractory period. Furthermore, the system enables a variable pre- and afterload setting for a more physiological cultivation.
Here, we present a step-by-step guide on how to generate a successful long-term cultivation of human left ventricular myocardial slices, using a commercial biomimetic cultivation solution.

We present a protocol for ex vivo cultivation of human ventricular myocardial tissue. It allows for detailed analysis of contraction force and kinetics, as well as the application of pre- and afterload to mimic the in vivo physiological environment more closely.

إعداد أنسجة عضلة القلب البشرية للزراعة على المدى الطويل

Cardiomyocyte cultivation has seen a vast number of developments, ranging from two-dimensional (2D) cell cultivation to iPSC derived organoids. In 2019, ...