This work was supported by National Institutes of Health (NIH) Grant number: NIH P50DC00422 (H.L.); NIH R01DC12058 (H.L.). This work also benefitted from the South Carolina Clinical and Translational Research Institution (SCTR) Clinical and Translational Science Award (NIH/NCRR UL1RR029882). The funders had no role in study design, data collection, and/or analysis. The authors would like to thank Lonnie E. Brown Jr. for his artistic and graphic contributions.

<ol>
	<li>Kimura, R. S., Iverson, N. A., Southard, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+lesions+of+the+vestibular+labyrinth.">Selective lesions of the vestibular labyrinth.</a> The Annals of otology, rhinology, and laryngology. 97, 577-584 (1988).</li><li>Dodson, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+and+survival+of+spiral+ganglion+neurons+in+the+guinea+pig+after+intracochlear+perfusion+with+aminoglycosides.">Loss and survival of spiral ganglion neurons in the guinea pig after intracochlear perfusion with aminoglycosides.</a> Journal of neurocytology. 26, 541-556 (1997).</li><li>Wanamaker, H. H., Gruenwald, L., Damm, K. J., Ogata, Y., Slepecky, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-related+vestibular+and+cochlear+effects+of+transtympanic+gentamicin.">Dose-related vestibular and cochlear effects of transtympanic gentamicin.</a> The American journal of otology. 19, 170-179 (1998).</li><li>Lee, K. S., Kimura, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ototoxic+drug+administration+to+the+endolymphatic+sac.">Effect of ototoxic drug administration to the endolymphatic sac.</a> The Annals of otology, rhinology, and laryngology. 100, 355-360 (1991).</li><li>Schmiedt, R. A., Okamura, H. O., Lang, H., Schulte, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ouabain+application+to+the+round+window+of+the+gerbil+cochlea:+a+model+of+auditory+neuropathy+and+apoptosis.">Ouabain application to the round window of the gerbil cochlea: a model of auditory neuropathy and apoptosis.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology : JARO. 3, 223-233 (2002).</li><li>Schmiedt, R. A., Lang, H., Okamura, H. O., Schulte, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+furosemide+applied+chronically+to+the+round+window:+a+model+of+metabolic+presbyacusis.">Effects of furosemide applied chronically to the round window: a model of metabolic presbyacusis.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 9643-9650 (2002).</li><li>Suzuki, M., Kikuchi, T., Ikeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocochlear+potential+and+endolymphatic+K++changes+induced+by+gap+junction+blockers.">Endocochlear potential and endolymphatic K+ changes induced by gap junction blockers.</a> Acta oto-laryngologica. 124, 902-906 (2004).</li><li>Chen, Z., Mikulec, A. A., McKenna, M. J., Sewell, W. F., Kujawa, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+intracochlear+drug+delivery+in+the+mouse.">A method for intracochlear drug delivery in the mouse.</a> Journal of neuroscience methods. 150, 67-73 (2006).</li><li>Husmann, K. R., Morgan, A. S., Girod, D. A., Durham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Round+window+administration+of+gentamicin:+a+new+method+for+the+study+of+ototoxicity+of+cochlear+hair+cells.">Round window administration of gentamicin: a new method for the study of ototoxicity of cochlear hair cells.</a> Hearing research. 125, 109-119 (1998).</li><li>Heydt, J. L., Cunningham, L. L., Rubel, E. W., Coltrera, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Round+window+gentamicin+application:+an+inner+ear+hair+cell+damage+protocol+for+the+mouse.">Round window gentamicin application: an inner ear hair cell damage protocol for the mouse.</a> Hearing research. 162, 65-74 (2004).</li><li>Palmgren, B., Jin, Z., Ma, H., Jiao, Y., Olivius, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Bungarotoxin+application+to+the+round+window:+an+in+vivo+deafferentation+model+of+the+inner+ear.">beta-Bungarotoxin application to the round window: an in vivo deafferentation model of the inner ear.</a> Hearing research. 265, 70-76 (2010).</li><li>Lang, H., Schulte, B. A., Schmiedt, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+chronic+furosemide+treatment+and+age+on+cell+division+in+the+adult+gerbil+inner+ear.">Effects of chronic furosemide treatment and age on cell division in the adult gerbil inner ear.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology : JARO. 4, 164-175 (2003).</li><li>Lang, H., Schulte, B. A., Schmiedt, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ouabain+induces+apoptotic+cell+death+in+type+I+spiral+ganglion+neurons,+but+not+type+II+neurons.">Ouabain induces apoptotic cell death in type I spiral ganglion neurons, but not type II neurons.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology : JARO. 6, 63-74 (2005).</li><li>Lang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+mouse+embryonic+stem+cells+into+the+cochlea+of+an+auditory-neuropathy+animal+model:+effects+of+timing+after+injury.">Transplantation of mouse embryonic stem cells into the cochlea of an auditory-neuropathy animal model: effects of timing after injury.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology : JARO. 9, 225-240 (2008).</li><li>Stevens, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heptanol+application+to+the+mouse+round+window:+a+model+for+studying+cochlear+lateral+wall+regeneration.">Heptanol application to the mouse round window: a model for studying cochlear lateral wall regeneration.</a> Otolaryngology--head and neck surgery : official journal of American Academy of Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 150, 659-665 (2014).</li><li>Zheng, Q. Y., Johnson, K. R., Erway, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+hearing+in+80+inbred+strains+of+mice+by+ABR+threshold+analyses.">Assessment of hearing in 80 inbred strains of mice by ABR threshold analyses.</a> Hearing research. 130, 94-107 (1999).</li><li>Hequembourg, S., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spiral+ligament+pathology:+a+major+aspect+of+age-related+cochlear+degeneration+in+C57BL/6+mice.">Spiral ligament pathology: a major aspect of age-related cochlear degeneration in C57BL/6 mice.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology : JARO. 2, 118-129 (2001).</li><li>Ohlemiller, K. K., Gagnon, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apical-to-basal+gradients+in+age-related+cochlear+degeneration+and+their+relationship+to+'primary'+loss+of+cochlear+neurons.">Apical-to-basal gradients in age-related cochlear degeneration and their relationship to 'primary' loss of cochlear neurons.</a> The Journal of comparative neurology. 479, 103-116 (2004).</li><li>Tadros, S. F., D'Souza, M., Zhu, X., Frisina, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis-related+genes+change+their+expression+with+age+and+hearing+loss+in+the+mouse+cochlea.">Apoptosis-related genes change their expression with age and hearing loss in the mouse cochlea.</a> Apoptosis : an international journal on programmed cell death. 13, 1303-1321 (2008).</li><li>Souza, M., Zhu, X., Frisina, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+approach+to+select+genes+from+RMA+normalized+microarray+data+using+functional+hearing+tests+in+aging+mice.">Novel approach to select genes from RMA normalized microarray data using functional hearing tests in aging mice.</a> Journal of neuroscience. 171, 279-287 (2008).</li><li>Tang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+hearing+loss:+GABA,+nicotinic+acetylcholine+and+NMDA+receptor+expression+changes+in+spiral+ganglion+neurons+of+the+mouse.">Age-related hearing loss: GABA, nicotinic acetylcholine and NMDA receptor expression changes in spiral ganglion neurons of the mouse.</a> Neuroscience. 259, 184-193 (2014).</li><li>Borkholder, D. A., Zhu, X., Frisina, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Round+window+membrane+intracochlear+drug+delivery+enhanced+by+induced+advection.">Round window membrane intracochlear drug delivery enhanced by induced advection.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 174, 171-176 (2014).</li><li>Tadros, S. F., D'Souza, M., Zhu, X., Frisina, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+changes+for+antioxidants+pathways+in+the+mouse+cochlea:+relations+to+age-related+hearing+deficits.">Gene expression changes for antioxidants pathways in the mouse cochlea: relations to age-related hearing deficits.</a> PloS one. 9, e90279 (2014).</li><li>Lang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox2+up-regulation+and+glial+cell+proliferation+following+degeneration+of+spiral+ganglion+neurons+in+the+adult+mouse+inner+ear.">Sox2 up-regulation and glial cell proliferation following degeneration of spiral ganglion neurons in the adult mouse inner ear.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology : JARO. 12, 151-171 (2011).</li></ol>

لا تنافس المصالح المالية. الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

تم الحصول على نتائج البروتوكول والتمثيلية المذكورة أعلاه في نموذج الفأر CBA / CAJ بما في ذلك كلا الجنسين. تم تأسيس هذه السلالة الفطرية كذلك معيار &quot;الاستماع الجيد&quot; و &quot;الشيخوخة الطبيعية&quot; نموذج في البحث السمع. 16-23 وصف استخدام هذا البروتوكول في نماذج الثدييات الأخرى خارج نطاق هذا النص. القارئ ينبغي أن نلاحظ، مع ذلك، أن تقنية التطبيق RWN تقدم العديد من المزايا لدراسة الأذن الداخلية الثدييات. من هذه، وأبرزها هو أنه يتجنب انقطاع المباشر من التركيب التشريحي الدقيق والتدرجات الكيميائية الحيوية التي توجد داخل جدران الكبسولة أذني. إجراءات مثل فغر القوقعة وزرع مضخات حقن لديها الميل إلى تنتهك مباشرة الهياكل الأذن الداخلية مما يؤدي إلى تحولات عتبة الدائمة؛ وهذه حقيقة يجب أن تؤخذ بعين الاعتبار عند تحليل النتائج. اختلال الهياكل الجدار الجانبي القوقعة التي كتبها metho الغازيةقد DS أيضا الحد من استخدام وكلاء السامة مثل فوروسيميد أو heptanol، الذين محدد المنطقة من تأثير يقتصر على هذا الموقع. 15،24 النهج غير الغازية البديلة مثل الحقن عبر الطبلي والحقن الوريدية قد تعاني من نتائج لا يمكن الاعتماد عليها و / أو سمية جهازية إلى نموذج حيواني. وقد أثبتت هذه الطريقة تطبيق لتجنب كل من هذه العيوب، وتحقيق مستوى من الاتساق يقترب ذلك من أساليب أكثر الغازية التي نوقشت أعلاه. وتشمل المزايا الأخرى لهذه التقنية يتم تطبيقها على نطاق واسع لعدد من النماذج الحيوانية وجدوى لتدرج في بنية تحتية المختبرات القائمة. بخصوص هذا الأخير، ليس هناك حاجة لالكواشف الكيميائية المتخصصة أو جانبا من اختيار السامة وكلاء، والتخدير، والمسكنات. وتستخدم وكلاء السامة عادة بتركيز ثابت ومختلطة في حجم كبير بما فيه الكفاية من حل (5 مل) إلى آخر فترات طويلة من الزمن النظرجي كل تطبيق يستخدم حوالي 10 ميكرولتر (في الفئران). وهكذا، وبعد الشراء الأولي من اللوازم والأدوات والمحققين أحرار نسبيا من مضيعة للوقت إعداد الحل أو الاستبدال المتكرر للمواد. كما يوفر هذا الأسلوب تخفيضات في الوقت المنطوق، والتي قد تكون كبيرة بالمقارنة مع الإجراءات التي تنطوي على زرع مضخات حقن المحيط باللمف أو cochleostomies. عند بلوغ مستوى من الكفاءة الفنية، وكان لدينا متوسط ​​وقت الانتهاء من شق الأولي لإغلاق عادة 20 دقيقة إلى 1.5 ساعة اعتمادا على طول التعرض المطلوب للعامل السامة. قد بسهولة أن تكتمل ثلاث أو أربع عمليات جراحية في يوم واحد، مما يتيح لزيادة الكفاءة وزيادة إمكانية الحصول على نتائج ناجحة. كما هو موضح أعلاه، هذه التقنية يمكن أيضا تطبيقها بسهولة إلى مجموعة متنوعة من نماذج القوارض بما في ذلك الفئران والجرذان والخنازير الغينية والجربوع. وتتركز القيود المفروضة على هذا الأسلوب علىمتوسطة منحنى التعلم حاد بحاجة إلى السيطرة عليه وانخفض النتائج المتوقعة حتى يتم التوصل إلى الكفاءة الفنية. كما ستتم مناقشته بمزيد من التفصيل أدناه، سوف الأخطاء الصغيرة خلال النهج الجراحية أو التصور الكافي للالجراحي الميداني تؤدي دائما تقريبا إلى نتائج سيئة. النتائج الدقيقة التي قد تفشل مبتدئ الاعتراف، مثل سميك فقاعة الهواء لمنعها من الوصول دون ملليمتر من وكيل إلى إطار غشاء مستديرة أو السائل الخلالي تمييع وكيل، يستغرق وقتا طويلا لنقدر وتطوير المهارات الحركية اللازمة لتصحيحها. ومع ذلك، مع الأداء المتكرر لإجراء هذه العقبات والتغلب عليه بسهولة، وتشكل تحديا تقنيا أقل ترويعا للمحققين من بعض الأساليب الغازية المذكورة آنفا. وأخيرا، ويرتبط هذا الأسلوب مع الحد النسبي الذي الإصابة قوقعة لا يمكن إلا أن يتسبب في نقطة واحدة في الوقت المناسب أثناء التعرض للعمليات الجراحية. هذا يمكن التغلب عليها لدرجة معينة، عن طريق ملء RWN مع الإسفنج الجيلاتين امتصاص غارقة في عامل كما وصفت من قبل Heydt وآخرون. 10 والجيلاتين الإسفنج امتصاص ممتص مع مرور الوقت، ولكن قد تسمح للفترة تعرض أطول مما هو تحقيقه من خلال تطبيق محلول مائي وحدها. من أجل محقق لتحقيق المزايا الكاملة لهذا الأسلوب وتجنب أي عثرات، فمن الأهمية بمكان أن ندرك اثنين من العناصر الحاسمة لهذه التقنية: 1) الحفاظ على التصور للفضاء الأذن الوسطى وRWN باستمرار. و2) القدرة على الحفاظ على الجراحي الميداني خالية من السائل الخلالي و / أو الدم. في تحقيق سابق من هذه، وأهمية رأس صاحب السليم لا يمكن المبالغة في التأكيد عليها. تثبيت آمن للرأس الحيوان يضمن رأي مستقر تحت المجهر. أهمية التي تصبح واضحة بسهولة عندما أجهزة خفية يتغير بشكل جذري وضعية الهياكل تحت التكبير. A ح جيدةحامل EAD التي يمكن أن تدور حول محور منقاري-الذيلية الحيوان يسهل أيضا تغييرات ديناميكية مهمة في خط المحقق من الموقع. في كثير من الأحيان، يمكن أن بضعة ملليمترات الدوران حول هذا المحور يعني الفرق بين التصور من RWN والتصور فقط الكبسولة العظام أذني. القدرة على تغيير باستمرار نظرا أيضا قصوى لضمان السائل الخلالي وإزالتها بشكل صحيح من أعماق المتخصصة وأيضا أن وكيل السامة تتم إزالة تماما بين التطبيقات على النحو المبين في الجزء 5. في تجربتنا، والدم، والتكثيف، أو السائل الخلالي الذي يدخل حيز الأذن الوسطى لديه القدرة على التدخل مع التجربة برمتها. وهذا ليس مستغربا، حيث أن كمية ضئيلة من وكيل السامة تطبيقها على نافذة مستديرة (~ 10 ميكرولتر) يمكن بسهولة أن تضعف من قبل ملامسة حتى كميات صغيرة من السوائل دخيلة. لهذا السبب، تشريح جراحي دقيق، uncapping الجزئية من الفقاعة الطبلية وpreservat دقيقأيون الشريان الركابي هي بمثابة النتائج التجريبية الناجحة. إذا لوحظ وما زالت لم تحقق النتائج المتوقعة الخطوات الحاسمة المذكورة أعلاه، يجب أن تبدأ استكشاف الأخطاء وإصلاحها. في تجربتنا، وغالبا ما يكون من المفيد أن تؤدي الاختلافات محاكمة اثنين من العناصر الإجرائية. الأول هو تعديل التردد الذي يتم تجديدها وكيل السامة في إطار الجولة. اعتمادا على وكيل المستخدمة، ومجموع وقت التعرض ما بين 30 دقيقة و 1 ساعة، مع فتل كامل واستبدال لاحق للعامل كل 10 دقيقة. إذا تعرض لفترات أقصر، وزيادة التعرض الإجمالي قد تسمح للعامل مزيد من الوقت لنزع فتيل عبر نافذة غشاء المستديرة. تعرض إضافي وتجديد قد يساعد أيضا على تجنب تخفيف غير المرغوب فيها من وكيل السامة عن طريق الدم، والتكثيف، أو فراغي على النحو المذكور أعلاه. ينبغي الحفاظ الحذر عند استخدام هذا النهج، ومع ذلك، لأنه يميل إلى زيادة خطر غير مقصودلاي اصابة الشريان الركابي و / أو إدخال السائل الخلالي إلى RWN. هذه التقنية هي كبيرة في ما تقدم أن التحقيقات في علم وظائف الأعضاء القوقعة والفيزيولوجيا المرضية. تسمح هذه التقنية التنظيرية دراسة مفصلة عن العمليات الكيميائية الحيوية الحساسة، وكان بمثابة في تعزيز أبحاثنا التي تهدف إلى تقييم إمكانات التجدد القوقعة. 12،24 هذا النهج الجراحية والتعرض ويرد أيضا عبر مجموعة متنوعة من التقنيات فرع الأخرى، ونتائج ناجحة باستخدام هذه تم الإبلاغ عن طريقة في دراسات قوقعة زرع الخلايا الجذعية. ولا يزال 14 هناك قدر كبير معروف عن القوقعة، ولكن هذا الأسلوب، جنبا إلى جنب مع عتاد أوسع متاح للمحققين، سوف تساعد في تضييق هذه الفجوة المعرفية.

وقد استخدم الباحثون مجموعة واسعة من نماذج حيوانية لدراسة وظيفة طبيعية من النظام السمعي فضلا عن الفيزيولوجيا المرضية لفقدان السمع. هذه النماذج هي أيضا مفيدة للغاية لإجراء دراسات تدخل ضد العمليات المرضية المختلفة وتكون بمثابة الأساس لتطبيقات متعدية في البشر. بالنسبة لمعظم البحوث التي القوقعة السمعية والمسارات المرتبطة بها، يجب وضع حد للأضرار أو تعطل النظام. في كثير من الأحيان، ويهدف الضرر عمدا لخلق آفة معينة، مما يسمح للمحققين لدراسة تأثير تلك الآفة على وظيفة عادية، وكذلك القدرة قوقعة للتعافي من ذلك. عند اختيار نموذج معين الحيوان و / أو تقنية (الصورة) لإدخال الضرر، يجب النظر في عدد من العوامل لتحقيق أفضل النتائج الممكنة. نماذج حيوانية مختلفة قد تستجيب لمختلف التدخلات، في حين أن الآثار المباشرة وغير المباشرة لتقنية قد تكونضارة تماما إلى النتيجة المرجوة. في معظم الحالات، سوف الداخلي بروتوكول ضرر الأذن المثالي تجنب سمية جهازية، بسرعة وبشكل موثوق ينتج الضرر، وخلق الآفة دقيقة ومتناسقة، وتكون النجاة للسماح للمزيد من الدراسة للتغييرات وظيفية، الخلوية والجزيئية. من الناحية المثالية، فإن هذه الأساليب أيضا الحفاظ على المعمارية المصغرة والكهروكيميائية التدرجات الحساسة من القوقعة إلى أقصى حد ممكن. حتى الآن، نجح الباحثون في إنشاء عدد من التقنيات للحث على إصابة الأذن الداخلية. معظم هذه تنطوي على فضح القوقعة إلى وكيل السامة إما بشكل منتظم أو عن طريق النهج الجراحية. وتشمل تقنيات الحقن الحقن، حقن داخل الصفاق، حقن العابر للطبلي، حقن الكيس اللمفي الباطن، وفغر القوقعة مع نضح اللمف المحيطي. وقد استخدمت هذه التقنيات لتقديم مجموعة متنوعة من العوامل السامة، مثل فوروسيميد، جنتاميسين، ابائين، وheptanol 1-5بينما نجحت في خلق الآفات قوقعة محددة، والتقنيات المذكورة أعلاه أيضا واعترف القيود. يمكن حقن النظامية تكون سامة للغاية للحيوان وقد يترافق مع الشتائم قوقعة غير المقصودة والنتائج غير متناسقة. كما تم المرتبطة العيب الأخير مع الحقن عبر الطبلي. تقنيات مثل فغر القوقعة ونضح اللمف المحيطي، في حين قادرة على إحداث تقرحات سريعة وموثوق بها للغاية، والغازية مباشرة إلى بنية الأذن الداخلية وظيفة. ترتبط العديد من الطرق الجراحية أيضا مع وجود درجة عالية من الصعوبة التقنية وقد تتطلب ترك أجسام غريبة في الحيوانات، مثل التحلل MICROPUMP. 2-4،6-8 لا تقنية واحدة خالية من العيوب، ويجب أن المحققين اختيار طرق بعناية لتناسب احتياجاتهم التجريبية. هنا، نحن تصف بالتفصيل، النافذة المستديرة المتخصصة (RWN) تقنية طلب تسليم موضعي وكلاء السامة في فئران بالغة. فايوصف RST من قبل HUSMANN وآخرون في عام 1998 عندما كان يدرس تأثير الجنتاميسين على الحسي انحطاط خلية الشعر في نموذج الطيور، تم العثور على هذه التقنية لتكون قادرة على إنتاج الآفات بشكل ملحوظ أكثر موثوقية من تطبيق الجنتاميسين النظامية، مع تجنب السميات المصاحبة. 9 منذ ذلك الحين، وقد استخدمت عدد من المحققين الآخرين، بما في ذلك المختبر لدينا، هذه التقنية نجاحا كبيرا. في عام 2004، Heydt وآخرون. تكييفه مع نموذج الفأر وصفها تعزيز القدرة على التحكم في حجم الآفة عن طريق ملء RWN مع الإسفنج الجيلاتين امتصاص غارقة في تركيزات الجنتاميسين متفاوتة. 10 Palmgren آخرون، في عام 2010، ودرس الآثار السامة من بيتا بنغاروتوكسين، وهي قوية عنصر في السم من التايوانيين النطاقات قفص، من خلال تطبيق نموذج مائي منه إلى RWN الجرذان الكبار. 11 وبالإضافة إلى ذلك، فإن عددا من الدراسات السابقة من مختبرنا وقد استخدمت النهج نافذة مستديرة لدراسة الآثار السامة من furosemidه، وابائين، وheptanol. 5،6،12-15 نتائج هذه الدراسات أثبتت أهمية السوائل القوقعة والأيونات التوازن على السمع، اكتشفت خلية القدرة التكاثري في العقدة الحلزونية والجدار الجانبي قوقعة، وتعزز فهمنا لل المرتبطة بالعمر فقدان السمع. ينطوي على النهج التالي في الوصول جراحيا في الأذن الوسطى عن طريق شق خلف صيوان الأذن وunroofing جزئية من طبلي الفقاعة العظمية. وهذا يسمح للتعرض الممتاز للRWN والغشاء الذي وكيل السامة ومن الممكن أن تطبق مباشرة. وكيل السائل ثم برك في الغور مثل كوب من RWN (أو ببطء تستنزف من امتصاص الناقل الإسفنج الجيلاتين المشبعة معبأة في RWN) وينتشر من خلال النافذة غشاء جولة في الفضاء اللمف المحيطي من الدهليز القوقعة. ولم يرصد أي فغر القوقعة مباشرة في هذا النهج. وتشمل مزايا هذا الأسلوب الحفاظ على الأذن الداخلية المعمارية المصغرة، وتجنبالسمية الجهازية، وبدل من عنصر تحكم الأذن داخل الحيوان، بداية العاجل من التأثير، انحطاط انتقائية في بعض أنواع الخلايا قوقعة (على سبيل المثال، النوع الأول دوامة الخلايا العصبية العقدية مع التعرض ابائين ونوع القوقعة II الخلايا الليفية الناجم عن علاج heptanol)، والنتائج استنساخه / موثوقة. هذه التقنية يمكن تطبيقها مع بعض التعديلات بين أنواع القوارض الأخرى، بما في ذلك الفئران والخنازير الغينية، والجربوع. وتشمل النواحي منحنى التعلم التقني حاد والحد النسبي من إهانة السامة التي مقيدة إلى نقطة واحدة في الوقت المناسب.

&#160;
<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">1-Heptanol 98%</td>
			<td rowspan="2">Sigma-Aldrich</td>
			<td>H2805&#160;</td>
			<td rowspan="2"><a>PubChem Substance ID 24895536</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250ML</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketaset Injectable&#160;</td>
			<td rowspan="2">Patterson Veterinary</td>
			<td>07-803-6637&#160;</td>
			<td>Concentrate 100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Ketamine HCl)</td>
			<td>10ml</td>
			<td>Schedule CIII controlled substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anased Injectable</td>
			<td rowspan="2">Lloyd Laboratories</td>
			<td>NADA# 139-236</td>
			<td rowspan="2">Concentrate 20mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Xylazine)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex Injectable&#160;</td>
			<td rowspan="2">Patterson Veterinary</td>
			<td>07-850-2280&#160;</td>
			<td>Concentrate 0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Buprenorphine HCl)</td>
			<td>5 ampules per box</td>
			<td>Schedule CIII controlled substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Skin Prep Solution</td>
			<td rowspan="2">Medline</td>
			<td><a href="http://www.medline.com/sku/item/MDPMDS093941;ecomsessionid=1UZWKxhkYkuy9vK2NXBaBA__">MDS093941&#160;</a></td>
			<td rowspan="2">1 Quart screw top bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Povidone-Iodine)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% Sterile Saline</td>
			<td>Variable</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For mixing solutions and injections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Table of Equipment, Surgical Instruments, and Specific Techniques</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Material Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue Number</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>32192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Controlled Acoustics Environment Sound Booth</td>
			<td>Industrial Acoustics Company</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Surgical Head Holder</td>
			<td>Custom Made &#8211;&#160;</td>
			<td rowspan="2">Please see Figure 3</td>
			<td rowspan="2"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical University of South Carolina</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="3">Neck Soft-Tissue Retractor (Wire Speculum, Titanium) 1.75inch</td>
			<td rowspan="3">World Precision Instruments</td>
			<td rowspan="3">555801L</td>
			<td>Maximum spread 20mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedded in disposable putty to affix dynamically to head holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90N Dental Belt Driven Hand Drill&#160;</td>
			<td>Emesco</td>
			<td>N/A (Vintage Item)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle Size6</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>MEDC-011990</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">#15c Stainless Steel Surgical Scalpel Blade&#160;</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td rowspan="2">SKU: 097-7215</td>
			<td rowspan="2">50 Blades/Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Via ACE Surgical Supply Code</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Tip Jewelers Forceps&#160;</td>
			<td>Bernell</td>
			<td>MIL17304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors Curved</td>
			<td>Medline</td>
			<td><a href="https://www.medline.com/sku/item/MDPDYND04026;ecomsessionid=ozXzkfIx-tj0MIi8FkGQ0A__">DYND04026&#160;</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors Straight</td>
			<td>Medline</td>
			<td><a href="http://www.medline.com/sku/item/MDPDYND04025;ecomsessionid=+43JREOby+Mfz6IIgoSg5A__">DYND04025&#160;</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens Tenotomy Scissors Straight</td>
			<td>Medline</td>
			<td><a href="http://www.medline.com/sku/item/MDPMDG3222111">MDG3222111&#160;</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosen Ear Needle Straight Shaft, Lightly Curved Tip</td>
			<td>MytaMed</td>
			<td>Item# 6.56.00</td>
			<td>Figure 1 demonstrates angled shaft picks. This was later substituted for the Rosen picks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosen Ear Needle Straight Shaft, Strongly Curved Tip</td>
			<td>MytaMed</td>
			<td>Item# 6.56.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Kimwipes Delicate Task Wipers&#160;</td>
			<td rowspan="2">Kimtech Science</td>
			<td rowspan="2">CODE 34155&#160;</td>
			<td rowspan="2">White, Size 4.4x8.4 Inch. Cut to triangles and rolled into fine tip wicks.</td>
		</tr>
		<tr>
		</tr>
		<tr>
			<td>House Ear Curette, 6&#8221; shaft, light angle</td>
			<td>Medline</td>
			<td><a href="https://www.medline.com/sku/item/MDPMDG0396486">MDG0396486&#160;</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (absorbable gelatin sponge) Size 100</td>
			<td>Medline</td>
			<td><a href="https://www.medline.com/sku/item/MDPIIS34201">IIS34201&#160;</a></td>
			<td>Substitutions may be made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton pellets #3 4mm</td>
			<td>Richmond</td>
			<td>Manufacturer Code 100108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ElectroSurgical Unit 100 E M/M</td>
			<td>Elmed</td>
			<td>List No. 52-5770</td>
			<td>Bipolar and Monopolar Capable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1cc U-100 Insulin Syringe 28G, 0.5&#8221; length needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>Product Number: 329410</td>
			<td>Optional for delivery of Ototoxic agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23G, blunt tip, 1&#8221; length needle</td>
			<td>Kendall</td>
			<td>Product Code 8881202397</td>
			<td>For controlled delivery of Ototoxic agent with less risk of damaging stapedial artery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Mask</td>
			<td>U-line</td>
			<td>S-10478</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Exam Grade Nitrile Surgical Gloves</td>
			<td>U-line</td>
			<td><a href="http://www.uline.com/Product/Detail/S-12549/Nitrile-Gloves/Nitrile-Exam-Gloves-Powder-Free">S-12549</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Hair Clippers</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple models may be substituted</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 Nylon black monofilament suture on PC-1&#160;13mm 3/8 circle needle</td>
			<td>Ethilon</td>
			<td>1855G</td>
			<td>Substitutions may be made.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Instant Sealing Sterilization Pouch</td>
			<td rowspan="2">Fisher</td>
			<td rowspan="2">01-812054</td>
			<td rowspan="2"></td>
		</tr>
		<tr>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="3">Dry Sterilizer</td>
			<td rowspan="3">ROBOZ</td>
			<td rowspan="3">Germinator TM 500</td>
			<td rowspan="3"></td>
		</tr>
		<tr>
		</tr>
		<tr>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the mouse round-window approach for ototoxic agent delivery: a rapid and reliable technique for inducing cochlear cell degeneration

Investigators have utilized a wide array of animal models and investigative techniques to study the mammalian auditory system. Much of the basic research involving the cochlea and its associated neural pathways entails exposure of model cochleae to a variety of ototoxic agents. This allows investigators to study the effects of targeted damage to cochlear structures, and in some cases, the self-repair or regeneration of those structures. Various techniques exist for delivery of ototoxic agents to the cochlea. When selecting a particular technique, investigators must consider a number of factors, including the induction of inadvertent systemic toxicity, the amount of cochlear damage produced by the surgical procedure itself, the type of lesion desired, animal survivability, and reproducibility/reliability of results. Currently established techniques include parenteral injection, intra-peritoneal injection, trans-tympanic injection, endolymphatic sac injection, and cochleostomy with perilymphatic perfusion. Each of these methods has been successfully utilized and is well described in the literature; yet, each has various shortcomings. Here, we present a technique for topical application of ototoxic agents directly to the round window niche. This technique is non-invasive to inner ear structures, produces rapid onset of reliably targeted lesions, avoids systemic toxicity, and allows for an intra-animal control (the contra-lateral ear). Results stemming from this approach have helped deeper understanding of auditory pathophysiology, cochlear cell degeneration, and regenerative capacity in response to an acute injury. Future investigations may use this method to conduct interventional studies involving gene therapy and stem cell transplantation to combat hearing loss.

في دراسة حديثة أجراها ستيفنز وآخرون باستخدام بروتوكول أعلاه، تعرضت الفئران CBA / CAJ الكبار من كلا الجنسين عن طريق مستديرة نافذة نشرها لheptanol 15 Heptanol فجوة تقاطع الامم المتحدة مقرنة المعروف أن تنتج المستهدفة، إصابة القابلة للخلايا الجدار الجانبي القوقعة. وكان الغرض من هذه الدراسة هو إنتاج نموذج موثوق عن الضرر القوقعة المستهدفة، مما يسمح للتحقيق في تجديد بعد الجراحة من أي عناصر التالفة. عتبات جلسة استماع قبل الجراحة وبعد الجراحة كانت بمثابة نقطة النهاية وظيفية. استخدمت المجهر وتقنيات تلطيخ المناعى لدراسة التغيرات الشكلية. وقد لوحظت زيادات كبيرة في عتبات ABR في الفئران المعالجة heptanol (الشكل 9). الحيوانات السيطرة تلقي جراحة صورية، مع تسليم المالحة بدلا من heptanol، لم تثبت عتبة تحولات كبيرة في أي التردد المختبرة. المناعية ضد تصحيح باطنهقناة البوتاسيوم (قير) 4.1 بمثابة الطريقة غير المباشرة لتصور الضرر / استرداد الهياكل القوقعة. أظهرت هذه الاختلافات استنساخه للغاية بين العلاج والسيطرة الأذنين. وقد انخفضت كثافة تلطيخ الشاملة بشكل ملحوظ داخل عائي السطر (STV) وبين الخلايا الليفية في الرباط دوامة (SLF) بعد 1-3 أيام بعد التعرض heptanol، تدل على كميات كبيرة من الأضرار التي تستهدف هذه المناطق. كان هناك انخفاض معين في قير كثافة 4.1 تلطيخ في مجالات النوع الثاني والنوع الرابع SLFs (الشكل 10) وSTV (الشكل 11). واعتبر دليلا على سلامة النووية تعطلت والكروموسومات التكثيف / الفقاعات نموذجية من الخلايا الخلوية أيضا على counterstains النووية في هذه المناطق قوقعة (الشكل 10). مناطق فجوية قير 4.1 تلطيخ حل ملحوظ في 7 أيام، وكانت غائبة تماما في 14 يوما. عندما كان كميا قير 4.1 كثافة تلطيخ في مجالات STV، تظاهر آذان يعامل هذا initiآل الحوض يليه تحولا كبيرا (P &lt;0.05) مرة أخرى نحو شدة السيطرة بعد 7 أيام التعرض heptanol (الشكل 12). <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig1.jpg" /> تعيين الرقم 1. صك تصل. تصوير من قبل الجراحة مجموعة المتابعة من الأجهزة. وينبغي أن يكون الوصول إليها بسهولة في مجال الجراحة المعقمة جميع المعدات. ويشمل الأجهزة نموذجي 2 مقص حاد تشريح، 2-3 على التوالي و / أو ملقط المنحنية الجواهري طرف مع كرتس الأذن، يختار طب الأذن رمح منحنية (في وقت لاحق استبداله مع روزين يختار - لا يظهر)، ووحدة الكهربائية الكي مع ملقط غرامة منحني الجواهري طرف ل خوذة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img aLT = &quot;الشكل 2&quot; SRC = &quot;/ ملفات / ftp_upload / 53131 / 53131fig2.jpg&quot; /&gt; الشكل 2. إمدادات جراحية. إمدادات إضافية للحفاظ على البيئة RWN. القواطع labwipe تعقيمها لتشكيل الفتيل ورقة (يسار)، ورقة شكلت بإحكام ويكس مصنوعة من مناديل معقمة المختبر (في الوسط)، و 4 الكريات مم القطن (يمين) وتستخدم لمسح السوائل الزائدة والفيضانات الدم في إطار الجولة المتخصصة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig2large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig3.jpg" /> الشكل 3. الحيوان صاحب الرأس. صورة تصور صاحب ورئيس كتلة دغة. الثقوب في كتلة تناسب وتأمين القواطع الوسطى العلوية. وشددت المشبك بلطف على خطم ظهري لتأمين الحيوان في المكان. استخدام صاحب الرأس أمر بالغ الأهمية لنجاح outc الجراحيةيا انا. من الناحية المثالية، ينبغي أن تكون قادرة على تدوير حول محور منقاري الذيلية للحيوان لتحسين وجهات النظر الجراحي للالفقاعة أثناء العملية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 4" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig4.jpg" /> الرقم 4. Cleidomastoideus م. البياني. تخطيطي تصور علم التشريح الأساسي للالقوارض عضلات عنق الرحم وارتباطه الوريد الوداجي الخارجي. عضلة cleidomastoideus هي العضلة الأكثر تحديدها بسهولة خلال النهج الجراحية. الإفراج عن لفافة يغلف تليها الخلفية / الظهرية تراجع من الجسم العضلات سيوجه تشريح جراحي نحو الفقاعة الطبلية (دائرة سوداء). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة ال</a>نسخة arger من هذا الرقم. <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig5.jpg" /> الرقم 5. منطقة التعرض الجراحية. يصور تعرض بعد تشريح عبر طبقات الدهون الجلدية وتحت الجلد. وتشمل المعالم الهيكلية للمذكرة فرع من العصب القحفي الحادي عشر تغمر العضلات cleidomastoideus (A)، حبل الوريد الخارجي (B)، ويتعرض النسيج النكفية (C). وكثيرا ما يرتبط الجمجمة فرع العصب الحادي عشر مع سفينة صغيرة ويجب أن تقسم قبل المتابعة. اليمين إلى اليسار على الصورة يتوافق مع محور منقاري الذيلية الحيوان. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (6)" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig6.jpg" /> الرقم 6. فضح بوLLA. التعرض للالفقاعة الطبلية بعد تراجع من cleidomastoideus والهياكل المحيطة بها. وتشمل المعالم البارزة الجسم العضلات cleidomastoideus (A) يعكس الخلف / ظهريا، والعصب الوجهي (B)، وقبة لامعة من السمحاق الفقاعة الطبلي (C). أيضا، لاحظ الإدراج عضلة sternomastoideus في الجانب الأيسر من الذيلية الفقاعة الطبلية (النجمة). وجود العصب الوجهي في ظهري ومنقاري الجانب من الفقاعة معلما حاسما لتحديد الحقيقي للالفقاعة. اليمين إلى اليسار على الصورة يتوافق مع محور منقاري الذيلية الحيوان. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 7" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig7.jpg" /> الرقم 7. تعريض الجولة نافذة المتخصصة I. صورة التي تصور tympaشركة الاستثمارات الوطنية الفقاعة يتعرض بشكل كامل بعد تشريح السمحاق المغطي. هو الأقدر ثقب التجريبية عند نقطة في منتصف الطريق بين الحافة الذيلية للالفقاعة القبة وخط مبهمة خفية تصور داخل الجانب منقاري الفقاعة (تمثل الغشاء الطبلي). والثاني، ثقب التجريبية المجاورة قد يسهل أسهل الامم المتحدة تسقيف العظم الفقاعة. ينبغي أن تؤخذ تجنب الحفر العميق حتى لا تجرح الشريان الركابي الأساسي. و، جسم معدني داكن في الجزء السفلي من الصورة هو ضام الأنسجة الرخوة التيتانيوم. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig7large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 8" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig8.jpg" /> الرقم 8. تعريض نافذة مستديرة المتخصصة II. الفقاعة الطبلية لم يسبق لهم اللعب مع التعرض من النافذة مكانة المستديرة (السهم) والشريان الركابي (هيكل الأحمر1-2 ملم الوحشي لمحراب) كما ينظر تحت 20X التكبير. مكانة غالبا ما يضع في موقف مدسوس تحت زاوية حادة شكلتها الفقاعة قبة مع الكبسولة أذني في الجانب الذيلية القبة. ومن الضروري أن التصور الكامل للمكانة تتحقق قبل تطبيق كيل السامة أو فتل. وينبغي أيضا تجنب إزالة العظام المفرطة خلال uncapping كما تميل الخلالي السوائل / الدم لإغراق تجويف عندما تم إنشاؤها فتحات كبيرة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig8large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 9" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig9.jpg" /> الرقم 9. ممثل النتائج - Heptanol الناجم عن فقدان السمع والانتعاش يعني استجابة الدماغ السمعية (ABR) عتبات (ديسيبل SPL) تآمر بوصفها وظيفة من لهجة نقطةتردد. يتم تجميع القياسات وفقا لمرحلة ما قبل التعرض (الأسود التحكم) واليوم بعد العمليات الجراحية (POD) 1 و 7 و 14 (الأحمر). أشرطة الخطأ تمثل SEM. وكان الرقم إعادة تآمر-من ستيفنز وآخرون. 2014. 15 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig9large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 10" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig10.jpg" /> الرقم 10. ممثل النتائج - استهداف الضرر القوقعة بعد التعرض heptanol الجزء الأول التغيرات في البوتاسيوم المعدل الداخلية (قير) قناة 4.1 تلطيخ داخل عائي السطر (STV) من آذان تعامل مع heptanol والسيطرة على الأذنين. (A) عادي قير 4.1 تلطيخ نموذجية من آذان السيطرة مع تقارب خلية strial القوي لقير 4.1 (الخضراء). (B) علاج الأذن على POD1. مناطق vacuolized كبيرة من decrوينظر خففت قير 4.1 تقارب في STV (النصال) جنبا إلى جنب مع انخفاض عام في STV قير 4.1 كثافة تلطيخ. وcounterstained نوى مع اليود propidium (أحمر) (B). = شريط نطاق 15 ميكرون. وكان الرقم إعادة تآمر-من ستيفنز وآخرون، 2014. 15 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig10large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 11" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig11.jpg" /> الرقم 11. ممثل النتائج - استهداف الضرر القوقعة بعد التعرض heptanol الجزء الثاني التغييرات في الرباط دوامة (SL) من heptanol الأذن المعالجة مقارنة للسيطرة على الأذن. (A) عادي قير 4.1 تلطيخ (الأخضر) داخل SL نموذجية من السيطرة الأذن مع نوع العادي الظهور II الخلايا الليفية الرباط لولبية (II). (B) Heptanol رالأذن reated مع انخفاض ملحوظ في قير كثافة 4.1 تلطيخ في مجال النوع الثاني الخلايا الليفية الرباط لولبية، واختلال النووي والكروموسومات التكثيف / الفقاعات تتفق مع موت الخلايا المبرمج (السهام). وcounterstained نوى مع اليود propidium (الحمراء). = شريط نطاق 15 ميكرون. وكان الرقم إعادة تآمر-من ستيفنز وآخرون، 2014. 15 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig11large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 12" src="/files/ftp_upload/53131/53131fig12.jpg" /> الرقم 12. ممثل النتائج - استرداد قوقعة كثافة تلطيخ بعد التعرض heptanol يعني الإنارة النسبية قير تآمر 4.1 تلطيخ بوصفها وظيفة من يوم بعد التعرض. يتم احتساب الإنارة النسبية كما قير 4.1 كثافة العاكسة تحت المجهر متحد البؤر في heptanol علاجآذان إد اتخذت كنسبة مئوية من نفسه في آذان السيطرة. يتم تجميع البيانات ملاحظة POD14-28 باعتبارها نقطة واحدة على المنحنى. وتمثل الدوائر الصلبة القيم المتوسطة بينما تمثل قضبان الخطأ الخطأ المعياري للمتوسط. وقد أظهر انتعاشا كبيرا من الإنارة النسبية بين POD 7 وتواريخ لاحقة (ر ص اختبار الطالب &lt;0،05، النجمة). وكان الرقم إعادة تآمر-من ستيفنز وآخرون، 2014. 15 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53131/53131fig12large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about The Mouse Round-window Approach for Ototoxic Agent Delivery: A Rapid and Reliable Technique for Inducing Cochlear Cell Degeneration at JoVE.com

The Mouse Round-window Approach for Ototoxic Agent Delivery: A Rapid and Reliable Technique for Inducing Cochlear Cell Degeneration

Various methods exist for introducing ototoxic agents to the cochleae of animal models. Presented is a surgical protocol for delivery of ototoxic agents to the round window niche. The procedure is reliable, creates targeted intra-cochlear lesions, and avoids mechanical damage to the microarchitecture. Examination of cochlear self-repair/regeneration is possible.

النهج ماوس جولة نافذة للالسامة وكيل التسليم: A السريع وتقنيات موثوقة لإحداث قوقعة تحلل الخلية

Investigators have utilized a wide array of animal models and investigative techniques to study the mammalian auditory system. Much of the basic research ...

the-mouse-round-window-approach-for-ototoxic-agent-delivery-rapid

Research

JoVE Journal

Medicine

17.0K Views.  Medical University of South Carolina. Various methods exist for introducing ototoxic agents to the cochleae of animal models. Presented is a surgical protocol for delivery of ototoxic agents to the round window niche. The procedure is reliable, creates targeted intra-cochlear lesions, and avoids mechanical damage to the microarchitecture. Examination of cochlear self-repair/regeneration is possible. 

Video: The Mouse Round-window Approach for Ototoxic Agent Delivery: A Rapid and Reliable Technique for Inducing Cochlear Cell Degeneration

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting. Protocols that allow researchers to study the biological pathways of the stress response in health and disease are fundamental to the progress of research in stress and anxiety.1 Although numerous protocols exist for inducing stress response in the laboratory, many neglect to provide a naturalistic context or to incorporate aspects of social and psychological stress. Of psychological stress protocols, meta-analysis suggests that the Trier Social Stress Test (TSST) is the most useful and appropriate standardized protocol for studies of stress hormone reactivity.2 In the original description of the TSST, researchers sought to design and evaluate a procedure capable of inducing a reliable stress response in the majority of healthy volunteers.3 These researchers found elevations in heart rate, blood pressure and several endocrine stress markers in response to the TSST (a psychological stressor) compared to a saline injection (a physical stressor).3 Although the TSST has been modified to meet the needs of various research groups, it generally consists of a waiting period upon arrival, anticipatory speech preparation, speech performance, and verbal arithmetic performance periods, followed by one or more recovery periods. The TSST requires participants to prepare and deliver a speech, and verbally respond to a challenging arithmetic problem in the presence of a socially evaluative audience.3 Social evaluation and uncontrollability have been identified as key components of stress induction by the TSST.4 In use for over a decade, the goal of the TSST is to systematically induce a stress response in order to measure differences in reactivity, anxiety and activation of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) or sympathetic-adrenal-medullary (SAM) axis during the task.1 Researchers generally assess changes in self-reported anxiety, physiological measures (e.g. heart rate), and/or neuroendocrine indices (e.g. the stress hormone cortisol) in response to the TSST. Many investigators have adopted salivary sampling for stress markers such as cortisol and alpha-amylase (a marker of autonomic nervous system activation) as an alternative to blood sampling to reduce the confounding stress of blood-collection techniques. In addition to changes experienced by an individual completing the TSST, researchers can compare changes between different treatment groups (e.g. clinical versus healthy control samples) or the effectiveness of stress-reducing interventions.1

This article describes a protocol for inducing psychological stress in participants, which enables researchers to measure psychological, physiological and neuroendocrine responses to stress within single participants or between groups.

اختبار الإجهاد ترير الاجتماعي بروتوكول لإحداث الضغط النفسي

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time and temperature restrictions, technical sophistication, and cost of reagents, in particular monoclonal antibodies to measure CD4 on blood cells, the only currently acceptable method. A commonly used cost-saving and time-saving laboratory strategy is to calculate, rather than measure certain blood values. For example, LDL levels are calculated using the measured levels of total cholesterol, HDL, and triglycerides1. Thus, identification of cell-free correlates that directly regulate the number of CD4+ T cells could provide an accurate method for calculating CD4 counts due to the physiological relevance of the correlates.
The number of stem cells that enter blood and are destined to become circulating CD4+ T cells is determined by the chemokine CXCL12 and its receptor CXCR4 due to their influence on locomotion2. The process of stem cell locomotion into blood is additionally regulated by cell surface human leukocyte elastase (HLECS) and the HLECS-reactive active &alpha;1proteinase inhibitor (&alpha;1PI, &alpha;1antitrypsin, SerpinA1)3. In HIV-1 disease, &alpha;1PI is inactivated due to disease processes 4. In the early asymptomatic categories of HIV-1 disease, active &alpha;1PI was found to be below normal in 100% of untreated HIV-1 patients (median=12 &mu;M, and to achieve normal levels during the symptomatic categories4, 5. This pattern has been attributed to immune inactivation, not to insufficient synthesis, proteolytic inactivation, or oxygenation. We observed that in HIV-1 subjects with &gt;220 CD4 cells/&mu;l, CD4 counts were correlated with serum levels of active &alpha;1PI (r2=0.93, p&lt;0.0001, n=26) and inactive &alpha;1PI (r2=0.91, p&lt;0.0001, n=26) 5. Administration of &alpha;1PI to HIV-1 infected and uninfected subjects resulted in dramatic increases in CD4 counts suggesting &alpha;1PI participates in regulating the number of CD4+ T cells in blood 3.
With stimulation, whole saliva contains sufficient serous exudate (plasma containing proteinaceous material that passes through blood vessel walls into saliva) to allow measurement of active &alpha;1PI and the correlation of this measurement is evidence that it is an accurate method for calculating CD4 counts. Briefly, sialogogues such as chewing gum or citric acid stimulate the exudation of serum into whole mouth saliva. After stimulating serum exudation, the activity of serum &alpha;1PI in saliva is measured by its capacity to inhibit elastase activity. Porcine pancreatic elastase (PPE) is a readily available inexpensive source of elastase. PPE binds to &alpha;1PI forming a one-to-one complex that prevents PPE from cleaving its specific substrates, one of which is the colorimetric peptide, succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide (SA3NA). Incubating saliva with a saturating concentration of PPE for 10 min at room temperature allows the binding of PPE to all the active &alpha;1PI in saliva. The resulting inhibition of PPE by active &alpha;1PI can be measured by adding the PPE substrate SA3NA. (Figure 1). Although CD4 counts are measured in terms of blood volume (CD4 cells/&mu;l), the concentration of &alpha;1PI in saliva is related to the concentration of serum in saliva, not to volume of saliva since volume can vary considerably during the day and person to person6. However, virtually all the protein in saliva is due to serum content, and the protein content of saliva is measurable7. Thus, active &alpha;1PI in saliva is calculated as a ratio to saliva protein content and is termed the &alpha;1PI Index. Results presented herein demonstrate that the &alpha;1PI Index provides an accurate and precise physiologic method for calculating CD4 counts.

The &amp;#945;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

A CD4 enumeration method, the &#x03B1;-test, is described which uses whole saliva to provide rapid and accurate CD4 counts. The &alpha;-test costs pennies and eliminates the need for technical training, costly reagents such as monoclonal antibodies, instrumentation, refrigeration, transport of samples, as well as collection and handling of blood.

وα الاختبار: رابيد تعداد CD4 خالية من الخلايا عن طريق اللعاب الجامعة

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

This is a compact visual description of a combination of surgical technique and device for the delivery of (gene and cell) therapies into the spinal cord. While the technique is demonstrated in the animal, the procedure is FDA-approved and currently being used for stem cell transplantation into the spinal cords of patients with ALS. While the FDA has recognized proof-of-principle data on therapeutic efficacy in highly characterized rodent models, the use of large animals is considered critical for validating the combination of a surgical procedure, a device, and the safety of a final therapy for human use. The size, anatomy, and general vulnerability of the spine and spinal cord of the swine are recognized to better model the human. Moreover, the surgical process of exposing and manipulating the spinal cord as well as closing the wound in the pig is virtually indistinguishable from the human. We believe that the healthy pig model represents a critical first step in the study of procedural safety.

Short visual description of the surgical technique and device used for the delivery of (gene and cell) therapies into the spinal cord. The technique is demonstrated in the animal but is entirely translatable and currently being used for human application.

تقنية جراحية لتسليم الحبل الشوكي من العلاجات: مظاهرة الداخلي في Minipigs جوتنجن

This is a  compact visual description of a combination of surgical technique and device  for the  delivery of (gene and cell) therapies into the spinal ...

High Throughput Characterization of Adult Stem Cells Engineered for Delivery of Therapeutic Factors for Neuroprotective Strategies

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to develop strategies for treating a variety of diseases. The purpose of this study was to develop and characterize MSCs as cellular vehicles engineered for delivery of therapeutic factors as part of a neuroprotective strategy for rescuing the damaged or diseased nervous system. In this study we used mouse MSCs that were genetically modified using lentiviral vectors, which encoded brain-derived neurotrophic factor (BDNF) or glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF), together with green fluorescent protein (GFP). 
Before proceeding with in vivo transplant studies it was important to characterize the engineered cells to determine whether or not the genetic modification altered aspects of normal cell behavior. Different culture substrates were examined for their ability to support cell adhesion, proliferation, survival, and cell migration of the four subpopulations of engineered MSCs. High content screening (HCS) was conducted and image analysis performed. 
Substrates examined included: poly-L-lysine, fibronectin, collagen type I, laminin, entactin-collagen IV-laminin (ECL). Ki67 immunolabeling was used to investigate cell proliferation and Propidium Iodide staining was used to investigate cell viability. Time-lapse imaging was conducted using a transmitted light/environmental chamber system on the high content screening system.
Our results demonstrated that the different subpopulations of the genetically modified MSCs displayed similar behaviors that were in general comparable to that of the original, non-modified MSCs. The influence of different culture substrates on cell growth and cell migration was not dramatically different between groups comparing the different MSC subtypes, as well as culture substrates. 
This study provides an experimental strategy to rapidly characterize engineered stem cells and their behaviors before their application in long-term in vivo transplant studies for nervous system rescue and repair.

This study describes an experimental platform to rapidly characterize engineered stem cells and their behaviors before their application in long-term in vivo transplant studies for nervous system rescue and repair.

عالية الإنتاجية توصيف الخلايا الجذعية البالغة المهندسة لتسليم العوامل العلاجية لاستراتيجيات اعصاب

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to ...

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices currently entering the market. In order to evaluate the safety of these devices, in preclinical studies, reliable techniques are needed. However, the hard metal components utilised in some retinal implants are not compatible with traditional histological processes, particularly in consideration for the delicate nature of the surrounding tissue. Here we describe techniques for assessing the health of the eye directly adjacent to a retinal implant secured epiretinally with a metal tack.
Retinal prostheses feature electrode arrays in contact with eye tissue. The most commonly used location for implantation is the epiretinal location (posterior chamber of the eye), where the implant is secured to the retina with a metal tack that penetrates all the layers of the eye. Previous methods have not been able to assess the proximal ocular tissue with the tack in situ, due to the inability of traditional histological techniques to cut metal objects. Consequently, it has been difficult to assess localized damage, if present, caused by tack insertion.
Therefore, we developed a technique for visualizing the tissue around a retinal tack and implant. We have modified an established technique, used for processing and visualizing hard bony tissue around a cochlear implant, for the soft delicate tissues of the eye. We orientated and embedded the fixed eye tissue, including the implant and retinal tack, in epoxy resin, to stabilise and protect the structure of the sample. Embedded samples were then ground, polished, stained, and imaged under various magnifications at incremental depths through the sample. This technique allowed the reliable assessment of eye tissue integrity and cytoarchitecture adjacent to the metal tack.

Here we describe histological techniques for visualising ocular tissue directly adjacent to a metal epiretinal tack and retinal prosthesis.

تقنيات لمعالجة عيون مزروع مع الشبكية الأطراف الاصطناعية للالمترجمة تحليل المرضية: الجزء 2 فوق الشبكي يزرع مع الشبكية المسامير

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

A Surgical Procedure for Resecting the Mouse Rib: A Model for Large-Scale Long Bone Repair

This protocol introduces researchers to a new model for large-scale bone repair utilizing the mouse rib. The procedure details the following: preparation of the animal for surgery, opening the thoracic body wall, exposing the desired rib from the surrounding intercostal muscles, excising the desired section of rib without inducing a pneumothorax, and closing the incisions. Compared to the bones of the appendicular skeleton, the ribs are highly accessible. In addition, no internal or external fixator is necessary since the adjacent ribs provide a natural fixation. The surgery uses commercially available supplies, is straightforward to learn, and well-tolerated by the animal. The procedure can be carried out with or without removing the surrounding periosteum, and therefore the contribution of the periosteum to repair can be assessed. Results indicate that if the periosteum is retained, robust repair occurs in 1 - 2 months. We expect that use of this protocol will stimulate research into rib repair and that the findings will facilitate the development of new ways to stimulate bone repair in other locations around the body.

The overall goal of this procedure is to successfully resect a portion of bone from the rib of a mouse. The procedure was developed as a model to study large-scale long bone repair.

عملية جراحية لResecting الماوس الضلع: نموذج لواسعة النطاق إصلاح العظام الطويلة

This protocol introduces researchers to a new model for large-scale bone repair utilizing the mouse rib. The procedure details the following: preparation ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent re-oxygenation of the tissues (reperfusion). In the skin, ischemia-reperfusion (IR) is the main contributing factor to the pathophysiology of pressure ulcers. While the cascade of events leading up to the inflammatory response has been well studied, the spatial and temporal responses of the different subsets of immune cells to an IR injury are not well understood. Existing models of IR using the clamping technique on the skin flank are highly invasive and unsuitable for studying immune responses to injury, while similar non-invasive magnet clamping studies in the skin flank are less-than-ideal for intravital imaging studies. In this protocol, we describe a robust model of non-invasive IR developed on mouse ear skin, where we aim to visualize in real-time the cellular response of immune cells after reperfusion via multiphoton intravital imaging (MP-IVM).

This protocol describes the induction of an ischemia-reperfusion (IR) model on mouse ear skin using magnet clamping. Using a custom-built intravital imaging model, we study in vivo inflammatory responses post-reperfusion. The rationale behind the development of this technique is to extend the understanding of how leukocytes respond to skin IR injury.

حمل إصابة نقص التروية ضخه في الجلد الأذن ماوس لحيوي داخلي Multiphoton التصوير من الاستجابات المناعية

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Posterior Semicircular Canal Approach for Inner Ear Gene Delivery in Neonatal Mouse

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of inner ear gene therapy is to find a delivery method which results in consistent transduction efficiency of targeted cell types while minimizing hearing loss. In this study, we describe the posterior semicircular canal approach as a viable method for inner ear gene delivery in neonatal mice. We show that gene delivery through the posterior semicircular canal is able to perfuse the entire inner ear. The easy anatomic identification of the posterior semicircular canal, as well as minimal manipulation of the temporal bone required, make this surgical approach an attractive option for inner ear gene delivery.

In this study, we describe the posterior semicircular canal approach as a reliable method for inner ear gene delivery in neonatal mice. We show that gene delivery through the posterior semicircular canal is able to perfuse the entire inner ear.

النهج الخلفي نصف دائري قناة لإيصال الجينات الإذن الداخلية في الماوس الأطفال حديثي الولادة

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of ...

Updated Technique for Reliable, Easy, and Tolerated Transcranial Electrical Stimulation Including Transcranial Direct Current Stimulation

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a noninvasive method of neuromodulation using low-intensity direct electrical currents. This method of brain stimulation presents several potential advantages compared to other techniques, as it is noninvasive, cost-effective, broadly deployable, and well-tolerated provided proper equipment and protocols are administered. Even though tDCS is apparently simple to perform, correct administration of the tDCS session, especially the electrode positioning and preparation, is vital for ensuring reproducibility and tolerability. The electrode positioning and preparation steps are traditionally also the most time consuming and error-prone. To address these challenges, modern tDCS techniques, using fixed-position headgear and pre-assembled sponge electrodes, reduce complexity and setup time while also ensuring that the electrodes are consistently placed as intended. These modern tDCS methods present advantages for research, clinic, and remote-supervised (at home) settings. This article provides a comprehensive step-by-step guide for administering a tDCS session using fixed-position headgear and pre-assembled sponge electrodes. This guide demonstrates tDCS using commonly applied montages intended for motor cortex and dorsolateral prefrontal cortex (DLPFC) stimulation. As described, selection of the head size and montage-specific headgear automates electrode positioning. Fully assembled pre-saturated snap-electrodes are simply affixed to the set position snap-connectors on the headgear. The modern tDCS method is shown to reduce setup time and reduce errors for both novice and expert operators. The methods outlined in this article can be adapted to different applications of tDCS as well as other forms of transcranial electrical stimulation (tES) such as transcranial alternating current stimulation (tACS) and transcranial random noise stimulation (tRNS). However, since tES is application specific, as appropriate, any methods recipe is customized to accommodate subject, indication, environment, and outcome specific features.

When administering transcranial direct current stimulation (tDCS), reproducible electrode preparation and placement are vital for a tolerated and effective session. The purpose of this article is to demonstrate updated modern setup procedures for the administration of tDCS and related transcranial electrical stimulation techniques, such as transcranial alternating current stimulation (tACS).

تحديث تقنيه لتحفيز الكهربائية موثوقه وسهله والتسامح جمجمة بما في ذلك جمجمة التحفيز الحالي المباشر

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a noninvasive method of neuromodulation using low-intensity direct electrical currents. This method of ...

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore potential treatment options. This mouse model allows researchers to induce significant lymphedema lasting at least 8 weeks. Lymphedema is induced using a combination of fractioned radiotherapy and surgical ablation of lymphatics. This model requires that the mice get a dose of 10 Gray (Gy) radiation before and after surgery. The surgical part of the model involves ligation of three lymph vessels and extraction of two lymph nodes from the mouse hindlimb. Having access to microsurgical tools and a microscope is essential, due to the small anatomical structures of mice. The advantage of this model is that it results in statistically significant lymphedema, which provides a good basis for evaluating different treatment options. It is also a great and easily available option for microsurgical training. The limitation of this model is that the procedure can be time consuming, especially if not practiced in advance. The model results in objectively quantifiable lymphedema in mice, without causing severe morbidity and has been tested in three separate projects.

This animal model enables researchers to induce statistically significant secondary lymphedema in the hindlimb of mice, lasting at least 8 weeks. The model can be used to study the pathophysiology of lymphedema and to investigate novel treatment options.

طريقه منقحه للحث علي الوذمه اللمفية الثانوية في الأطراف السفلية من الفئران

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...