المؤلفون ممتنون لدان Firl، كريس كوربيت وجيسي Denson، دكتوراه. تم توفير التمويل من قبل المعاهد الوطنية للصحة NINDS R01 NS060765 إلى ريال، وبرنامج P30 كوبر التجريبية لLJ وبرنامج التوقيع صحة الطفل إلى LJ في جامعة نيو مكسيكو.

وافق الرعاية المؤسسية واللجان استخدم في مستشفى بوسطن للأطفال على حد سواء وجامعة مركز العلوم الصحية ولاية نيو مكسيكو جميع الإجراءات التجريبية. ملاحظة: قبل البدء في الإجراء، وختم، وتعقيم الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية والستائر الجراحية. بالإضافة إلى ذلك، تعد الأدوية اللاحقة للعمليات الجراحية في قارورة معقمة بما في ذلك 0.125٪ bipivucaine و 0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين. إعداد أيضا حل lipopolysaccharide في (LPS) sterilely: 0.04 ملغ / مل LPS (0111: B4) في المياه المالحة العقيمة التي تحتوي على تمييع صبغة زرقاء ايفان. 1. التخدير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حمل التخدير في يوم 18 (E18) حامل الفئران سبراغ داولي الجنينية بمزيج من 3٪ الأيزوفلورين متوازن 70٪ نيتروجين و 30٪ أكسجين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الفئران من غرفة تحريض ووضع مستلق على الفئران رايات الجراحية بطانية المياه المنتشرة التي حددت في 37 ° C. نقل التخدير لمخروط الأنف وتقليل isofluraمستوى ني إلى 2٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بلطف تطبيق مرهم للعين إلى كل عين لمنع جفاف القرنية. أثناء إجراء رصد مستمر في درجة الحرارة ومعدل التنفس ومعدل ضربات القلب من الحيوان. وينبغي أن يظل علم وظائف الأعضاء الأمهات مستقر في جميع أنحاء الداخلي. </li></ol> 2. الجراحية الإعدادية وفرك <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام كليبرز الحيوانات الصغيرة إزالة كل الشعر في منطقة البطن السفلى. يحلق في نمط مستطيلة مع الحرص على تجنب الخدش الحلمات أو توليد الحلاقة طفح التي يمكن أن تكون مزعجة للتمريض في المستقبل من الجراء ولدت حية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد جلد البطن بالتناوب تطبيق بوفيدون اليود و 70٪ من الإيثانول فرك مع قطعة قطن معقمة. تكرار فرك بحيث بوفيدون اليود و 70٪ من الإيثانول هي كل تطبيق 3X بالتناوب في الموضة. اسمحوا الجافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكيد عمق التخدير عن طريق عدم وجود إصبع القدم قرصة المنعكس. في غياب رد الفعل والمحفزات للألم والحد من مستوى الأيزوفلورين إلى 1٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المناشف الجراحية المعقمة،ثنى الحيوان. احرص على وضع الستائر في زاوية مناسبة بحيث أنها تعظيم كمية السائل الري أنها تمتص في حين عدم عرقلة تدفق الدم إلى الرحم قرون. </li></ol> 3. البطن البطن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مشرط جعل شق خط الوسط 3 سم في جلد البطن المعدة. بصراحة تشريح طبقة الجلد من اللفافة البطن مع مقص. باستخدام ملقط ومقص جراحي، رفع طبقة اللفافي البطن وإجراء شق في ألبا اوعائي الخط للوصول إلى التجويف البريتوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الشاش الجراحي على السطح الخارجي من شق وبلل بمحلول ملحي معقم. باستخدام الملقط حادة والضغوط الخارجية على البطن، إزالة بلطف قرون الرحم من التجويف البريتوني وترتيب على شاش مبلل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجنب بعناية التشابك والاتصال مع الأمعاء. ترتيب الأجنة باستخدام ملقط عن طريق الاتصال الأنسجة العضلية فقط بين الحويصلات الذي يحيط بالجنين الفردية.فضح وعزل شرايين الرحم 4 باستخدام تشريح حادة. يجب الحرص على تشريح شرايين الرحم: ملاحظة. الأنسجة المحيطة والأوعية أنفسهم حساسة للغاية. تلف الأوعية الأمهات يمكن أن يسبب النزيف، وفي الحالات الشديدة، وفاة الجنين والأم. </li></ol> 4. التنسيب من تمدد الأوعية الدموية كليب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع فأر 30 G كليب تمدد الأوعية الدموية في كل الشريان الرحمي. ضمان وقف تدفق الدم، بما في ذلك الداني والقاصي البقول، وسواد من السفن الرحم بما في ذلك مشيمة الفردية. تغطية قرون المكشوفة والجراحي الميداني كامل مع الشاش وري بمحلول ملحي معقم. احرص على إبقاء مجال رطبة مع الري تقريبا كل 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 60 دقيقة، وإزالة الشاش ولري الحقل. ضمان قرون الرحم والأوعية وترطيبها بشكل كاف لإزالة مقطع ناجحة. بلطف إزالة كل مقطع تمدد الأوعية الدموية باستخدام ملقط. الحرص على عدم تسبب صدمة للسفينة، وصيانةسلامة الأنسجة العين أثناء الإزالة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تماما ري قرون الرحم والميدان، مع الحرص على إزالة أي المواضيع الضالة من الشاش من الحويصلات الذي يحيط بالجنين. </li></ol> 5. حقن lipopolysaccharide في الدخول إلى الأمنيوسي الحويصلات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند قاعدة كل الكيس السلوي الفردية، فقط الأمامي لوحة المشيمة، وضخ 100 ميكرولتر من LPS (4 ميكروغرام / كيس) مع صبغة زرقاء المخفف ايفان في لالسائل الذي يحيط بالجنين. استخدام الملقط حادة لتحقيق الاستقرار وتناوب كل الكيس السلوي في لموقف الأمثل للحقن. صبغة زرقاء مخفف ايفان هو عامل تباين التي هي مفيدة في تأكيد موضع الحقنة المناسبة والحقن. ملاحظة: لا تستخدم إلا لغاية في الدقة حقنة الأنسولين مع 0.3 مل تعلق 8 ملم 31 G إبرة لحقن داخل الأمنيوسي. وذلك باستخدام إبر عيار أكبر تؤدي إلى فقدان السائل الذي يحيط بالجنين المزمنة، وفاة الجنين واستيعابهم من الحمل. كميات صغيرة من تسرب السائل الذي يحيط بالجنين على إزالة حقنة يمكن أن يكون mitigATED بواسطة الضغط المباشر على الكيس السلوي. بعض الأجنة الفئران قد تحمل قدرا من قلة السائل السلوي. ومع ذلك، فقد السوائل الذي يحيط بالجنين الحادة من ثقب مع الإبر كبيرة قياس، أو ثقب عرضي مما أدى إلى تسرب السوائل المزمن، والنتائج في فقدان الجنين، وفي الحالات الشديدة، وفقدان الحمل المجاورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لري الرحم قرون 3X بمحلول ملحي معقم. </li></ol> 6. إغلاق البطن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط، والعودة بعناية قرون الرحم إلى التجويف البريتوني. ضمان مساحة كافية بين الحويصلات الذي يحيط بالجنين وشق خط الوسط، وإعادة تقريب-حواف طبقة عضلي لفافي باستخدام تشغيل خياطة 3-0 الحرير. يكون على بينة من وضع الحويصلات الذي يحيط بالجنين في حين إغلاق شق العضلات. أن يكون حريصا على عدم خياطة داخل أو من خلال الكيس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة تقريب طبقة الجلد، وذلك باستخدام تشغيل خياطة 3-0 الحرير، وإغلاق طبقة الجلد. ملاحظة: يجب إغلاق البطن في طبقتين من خيوط مستمرة للسماح للللبشرة وتوسيع العضلات مع زيادة الحمل. خيوط مستمرة تسمح لتوزيعها بالتساوي التوتر الجرح. هي أقل المطلوب الغرز توقف كما عقدة متعددة هي مزعجة ويمكن أن تمضغ بسهولة عن طريق الفئران على التعافي من التخدير. لم يتم المطلوب الدبابيس الجراحية. يجب أن تقطع ذيول عقدة جراحية قصيرة جدا (&lt;3 مم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن 1 مل من 0.125٪ بوبيفكين تحت الجلد حواف الجرح حول باستخدام إبرة 26 G. إدارة جرعة واحدة من 0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين تحت الجلد في مؤخر العنق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيقاف الأيزوفلورين والفئران الجاف منشفة الضرورة. وضع في قفص نظيف المنزل ورصد الانتعاش من التخدير. ضمان الفئران لا يصبح منخفض الحرارة. </li></ol> 7. ما بعد الجراحة والعناية الانتعاش <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الفئران كل 8-12 ساعة لمدة 72 ساعة وبعد ذلك يوميا حتى ولدت الجراء (حوالي E22 أو E23). إدارة جرعات إضافية من البوبرينورفين q8-12 ساعة / 72 ساعة أو PRN وفقا لما تمليه IACUC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الفئران لعلامات الألم، وعدم الراحة، والنزيف المهبلي أو نزيف من موقع الجراحية. تفقد الغرز وشق والحرص على ضمان الفئران لا مضغ أو إزالة الغرز قبل الأوان. وإن كان نادرا للغاية، الفئران التي تضر الغرز هم في خطر لتفزر الجرح. ملاحظة: أحيانا الفئران قد استوعب كميات كبيرة من الفراش أو المواد غير الغذائية، ووصف بيكا، كأثر جانبي للإدارة البوبرينورفين. على الرغم من النادر جدا، يجب مراقبة الفئران لبيكا والمحتملة لاحقة انسداد الأمعاء. </li></ol> 8. معالجة الأنسجة وCryosectioning <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتحضير لالهيماتوكسيلين ويوزين (H &amp; E) تلطيخ من الدماغ بعد الولادة، وإزالة الجراء من قفص المنزل على بعد الولادة يوم 2 (P2). باستخدام مقص جراحي قطع رأس الفئران الوليدة وبلطف إزالة الدماغ من الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إسقاط الإصلاح المخ في 15 مل أنبوب مخروطي يحتوي 7 مل من 4٪ لامتصاص العرق في الفوسفات مخزنة المالحة(PBS). وضع الدماغ في 4 درجات مئوية، وإصلاح لمدة 72 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 72 ساعة، نقل أدمغة إلى حل PBS العقيمة التي تحتوي على 30٪ سكروز (ث / ت) والعودة إلى 4 درجات مئوية. ملاحظة: بمجرد إسقاط العقول في حل السكروز هم على استعداد ليكون مقطوع على ناظم البرد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بسرعة تجميد العقول وجبل على مدقة ناظم البرد لاقتناء أقسام الاكليلية المجمدة. قطع 20 ميكرون أقسام الاكليلية المجمدة وجبل على الشرائح. يتم جمع ضمان أقسام متسلسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمح الشرائح لتجف في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها. متجر الشرائح في -20 درجة مئوية. </li></ol> 9. الهيماتوكسيلين ويوزين تلطيخ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ الشريحة التي شنت أقسام المجمدة ودافئة في درجة حرارة الغرفة. ملاحظة: إعداد جميع الحلول الطازجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الشرائح على شريحة دفئا مجموعة إلى 50 درجة مئوية لمدة 2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الشرائح إلى رف تلطيخ. تراجع الشرائح 10X في الماء منزوع الأيونات المزدوج المقطر ([ده 2 O). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الشرائح في 100٪ الهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق. منظمة الشفافية الدوليةلي في الهيماتوكسيلين يمكن أن يكون الأمثل اعتمادا على درجة من تلطيخ الأرجواني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تراجع الشرائح 4X في الاستفادة من H 2 O، واسمحوا الوقوف في نظيفة الصنبور H 2 O لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تراجع الشرائح 15X في الكحول الحمضية (250 مل 70٪ من الإيثانول + 1 مل تتركز حمض الهيدروكلوريك). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تراجع الشرائح 4X في الاستفادة من H 2 O، واسمحوا الوقوف في نظيفة الصنبور H 2 O لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان في 1٪ كربونات الليثيوم لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تراجع الشرائح 4X في الاستفادة من H 2 O، واسمحوا الوقوف في نظيفة الصنبور H 2 O لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان في 95٪ من الإيثانول لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تراجع الشرائح 7X في 100٪ يوزين. عدد من الانخفاضات في يوزين يمكن تعديل اعتمادا على درجة من تلطيخ الوردي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تراجع الشرائح 5X في 95٪ من الإيثانول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5X شريحة تراجع في التغيير جديدة من 95٪ من الإيثانول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الشرائح في الإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الشرائح في التغيير جديدة من الإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الشرائح في 100٪ الزيلين لمدة 15 دقيقة. ملاحظة: الخطوات الزيلين وcoverslipping ينبغي أن يحدث في غطاء الدخان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الشرائح في تغييرات جديدة من الزيلين لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ساترة مع Permount واسمحوا الجافة في غطاء الدخان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صورة الشرائح مع المجهر الضوئي. </li></ol>

<ol>
	<li>Blencowe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preterm+birth+associated+neurodevelopmental+impairment+estimates+at+regional+and+global+levels+for+2010.">Preterm birth associated neurodevelopmental impairment estimates at regional and global levels for 2010.</a> Pediatr Res. 74, 17-34 (2013).</li><li>Mwaniki, M. K., Atieno, M., Lawn, J. E., Newton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+neurodevelopmental+outcomes+after+intrauterine+and+neonatal+insults+a+systematic+review.">Long term neurodevelopmental outcomes after intrauterine and neonatal insults a systematic review.</a> Lancet. 379, 445-452 (2012).</li><li>Dammann, O., Leviton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittent+or+sustained+systemic+inflammation+and+the+preterm+brain.">Intermittent or sustained systemic inflammation and the preterm brain.</a> Pediatr Res. 75, 376-380 (2014).</li><li>Leviton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiologic+and+histologic+characteristics+of+the+extremely+preterm+infant's+placenta+predict+white+matter+damage+and+later+cerebral+palsy.">Microbiologic and histologic characteristics of the extremely preterm infant's placenta predict white matter damage and later cerebral palsy.</a> the ELGAN study Pediatr Res. 67, 95-101 (2010).</li><li>Redline, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+responses+in+the+placenta+and+umbilical+cord.">Inflammatory responses in the placenta and umbilical cord.</a> Semin Fetal Neonatal Med. 11, 296-301 (2006).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+chorioamnionitis+is+the+most+common+placental+lesion+in+late+preterm+birth.">Chronic chorioamnionitis is the most common placental lesion in late preterm birth.</a> Placenta. 34, 681-689 (2013).</li><li>Lee, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+histologic+chorioamnionitis+is+a+risk+factor+for+adverse+neonatal+outcome+in+late+preterm+birth+after+preterm+premature+rupture+of+membranes.">Acute histologic chorioamnionitis is a risk factor for adverse neonatal outcome in late preterm birth after preterm premature rupture of membranes.</a> PloS one. 8, e79941 (2013).</li><li>Pappas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chorioamnionitis+and+early+childhood+outcomes+among+extremely+low+gestational+age+neonates.">Chorioamnionitis and early childhood outcomes among extremely low gestational age neonates.</a> JAMA Peds. 168, 137-147 (2014).</li><li>Gaillard, R., Arends, L. R., Steegers, E. A., Hofman, A., Jaddoe, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second+and+third+trimester+placental+hemodynamics+and+the+risks+of+pregnancy+complications+the+Generation+R+Study.">Second and third trimester placental hemodynamics and the risks of pregnancy complications the Generation R Study.</a> Am J Epidemiol. 177, 743-754 (2013).</li><li>Trivedi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+placental+inflammation+but+not+adrenal+activation+is+associated+with+extreme+preterm+delivery.">Fetal placental inflammation but not adrenal activation is associated with extreme preterm delivery.</a> Am J Obstet Gynecol. 206, 236 (2012).</li><li>Yanowitz, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+disturbances+in+premature+infants+born+after+chorioamnionitis+association+with+cord+blood+cytokine+concentrations.">Hemodynamic disturbances in premature infants born after chorioamnionitis association with cord blood cytokine concentrations.</a> Pediatr Res. 51, 310-316 (2002).</li><li>Jantzie, L. L., Corbett, C. J., Firl, D. J., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+Erythropoietin+Mitigates+Impaired+Cerebral+Cortical+Development+Following+Subplate+Loss+from+Prenatal+Hypoxia+Ischemia.">Postnatal Erythropoietin Mitigates Impaired Cerebral Cortical Development Following Subplate Loss from Prenatal Hypoxia Ischemia.</a> Cereb Cortex. , (2014).</li><li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+attenuates+loss+of+potassium+chloride+co+transporters+following+prenatal+brain+injury.">Erythropoietin attenuates loss of potassium chloride co transporters following prenatal brain injury.</a> Mol Cell Neurosci. 61, 152-162 (2014).</li><li>Jantzie, L. L., Miller, R. H., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+signaling+promotes+oligodendrocyte+development+following+prenatal+systemic+hypoxic+ischemic+brain+injury.">Erythropoietin signaling promotes oligodendrocyte development following prenatal systemic hypoxic ischemic brain injury.</a> Pediatric Res. 74, 658-667 (2013).</li><li>Mazur, M., Miller, R. H., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+erythropoietin+treatment+mitigates+neural+cell+loss+after+systemic+prenatal+hypoxic+ischemic+injury.">Postnatal erythropoietin treatment mitigates neural cell loss after systemic prenatal hypoxic ischemic injury.</a> J Neurosurg Peds. 6, 206-221 (2010).</li><li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+induced+by+graded+prenatal+systemic+hypoxic+ischemic+insults+in+rats.">Developmental changes induced by graded prenatal systemic hypoxic ischemic insults in rats.</a> Neurobiol Dis. 18, 568-581 (2005).</li><li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroanatomical+sensorimotor+and+cognitive+deficits+in+adult+rats+with+white+matter+injury+following+prenatal+ischemia.">Neuroanatomical sensorimotor and cognitive deficits in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia.</a> Brain Pathol. 22, 1-16 (2012).</li><li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+prenatal+ischemia+on+behavior+cognitive+abilities+and+neuroanatomy+in+adult+rats+with+white+matter+damage.">Impact of prenatal ischemia on behavior cognitive abilities and neuroanatomy in adult rats with white matter damage.</a> Behav Brain Res. 232, 233-244 (2012).</li><li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+musculoskeletal+and+locomotor+alterations+in+adult+rats+with+white+matter+injury+following+prenatal+ischemia.">Mild musculoskeletal and locomotor alterations in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia.</a> Intl J Devel Neurosci. 29, 593-607 (2011).</li><li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+pattern+of+interaction+between+in+utero+hypoxia+ischemia+and+intra+amniotic+inflammation+disrupts+brain+development+and+motor+function.">Complex pattern of interaction between in utero hypoxia ischemia and intra amniotic inflammation disrupts brain development and motor function.</a> J Neuroinflam. 11, 131 (2014).</li><li>Back, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+vulnerability+of+late+oligodendrocyte+progenitors+to+hypoxia+ischemia.">Selective vulnerability of late oligodendrocyte progenitors to hypoxia ischemia.</a> J Neurosci. 22, 455-463 (2002).</li><li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+Expression+of+N+Methyl+d+Aspartate+(NMDA)+Receptor+Subunits+in+Human+White+and+Gray+Matter+Potential+Mechanism+of+Increased+Vulnerability+in+the+Immature+Brain.">Developmental Expression of N Methyl d Aspartate (NMDA) Receptor Subunits in Human White and Gray Matter Potential Mechanism of Increased Vulnerability in the Immature Brain.</a> Cereb Cortex. 25, 482-495 (2015).</li><li>Jantzie, L. L., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+Models+of+Encephalopathy+of+Prematurity.">Preclinical Models of Encephalopathy of Prematurity.</a> Devel Neurosci. , (2015).</li><li>Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+transformations+of+neurodevelopmental+sequences+across+mammalian+species.">Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species.</a> J Neurosci. 33, 7368-7383 (2013).</li><li>Herlenius, E., Lagercrantz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+neurotransmitter+systems+during+critical+periods.">Development of neurotransmitter systems during critical periods.</a> Exper Neurol. 190, S8-S21 (2004).</li><li>Kelsom, C., Lu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+specification+of+GABAergic+cortical+interneurons.">Development and specification of GABAergic cortical interneurons.</a> Cell Biosci. 3, 19 (2013).</li><li>Kinney, H., Back, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+oligodendroglial+development+Relationship+to+periventricualr+leukomalacia.">Human oligodendroglial development Relationship to periventricualr leukomalacia.</a> Semin Pediatr Neuro. 5, 180-189 (1998).</li><li>Robinson, S., Li, Q., DeChant, A., Cohen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+loss+of+gamma+amino+butyric+acid+pathway+expression+after+human+perinatal+brain+injury.">Neonatal loss of gamma amino butyric acid pathway expression after human perinatal brain injury.</a> J Neurosurg Peds. 104, 396-408 (2006).</li><li>Xu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late+development+of+the+GABAergic+system+in+the+human+cerebral+cortex+and+white+matter.">Late development of the GABAergic system in the human cerebral cortex and white matter.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 70, 841-858 (2011).</li><li>Segovia, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arrested+oligodendrocyte+lineage+maturation+in+chronic+perinatal+white+matter+injury.">Arrested oligodendrocyte lineage maturation in chronic perinatal white matter injury.</a> Ann Neurol. 63, 520-530 (2008).</li><li>Robinson, S., Li, Q., Dechant, A., Cohen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+loss+of+gamma+aminobutyric+acid+pathway+expression+after+human+perinatal+brain+injury.">Neonatal loss of gamma aminobutyric acid pathway expression after human perinatal brain injury.</a> J Neurosurg. 104, 396-408 (2006).</li><li>Boksa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prenatal+infection+on+brain+development+and+behavior+a+review+of+findings+from+animal+models.">Effects of prenatal infection on brain development and behavior a review of findings from animal models.</a> Brain Behav Immun. 24, 881-897 (2010).</li><li>Burd, I., Brown, A., Gonzalez, J. M., Chai, J., Elovitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+term+chorioamnionitis+unraveling+causes+of+adverse+neurological+outcomes.">A mouse model of term chorioamnionitis unraveling causes of adverse neurological outcomes.</a> Repro Sci. 18, 900-907 (2011).</li><li>Bergeron, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+matter+injury+and+autistic+like+behavior+predominantly+affecting+male+rat+offspring+exposed+to+group+B+streptococcal+maternal+inflammation.">White matter injury and autistic like behavior predominantly affecting male rat offspring exposed to group B streptococcal maternal inflammation.</a> Devel Neurosci. 35, 504-515 (2013).</li><li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ureaplasma+parvum+lipoprotein+multiple+banded+antigen+on+pregnancy+outcome+in+mice.">Effects of Ureaplasma parvum lipoprotein multiple banded antigen on pregnancy outcome in mice.</a> J Reprod Immunol. 100, 118-127 .</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

التهاب الدماغ الخداج من الصعب نموذج في الحيوانات بسبب التفاعل المعقد بين مسببات، دوام النمو العصبي، تعقيد تشكيل شبكة الدماغي البشري، وتداخل آليات الإصابة، والظواهر المتنوعة للCNS شتائم اضحة في الخدج الإنسان. ويرتبط EOP مع نقاط الضعف المحددة الخلية من نوع (أي قليل...

مع أكثر من 12٪ من الرضع الذين ولدوا في الولايات المتحدة قبل سن 37 أسبوعا يقدر الحمل 1، إصابات الدماغ فترة ما حول الولادة (PBI) من الخداج هو سببا مهما من أسباب العجز الدائم. PBI من الخداج، اعتلال الدماغ يطلق عليه أيضا من الخداج (EOP)، ويؤثر على الجهاز العصبي المركزي بأكمله (CNS). إصابة الجهاز العصبي المركزي غالبا ما يبدأ في الرحم، وتزداد سوءا بسبب عمليات ما قبل الولادة بما في ذلك شريوأمنيونيتيس ومضاعفات ما بعد الولادة مثل نقص الأكسجين وتعفن الدم. PBI من الشتائم النظامية يغير من النمو العصبي ويؤدي إلى الشلل الدماغي، الصرع، التأخر المعرفي والعديد من الاضطرابات العصبية والنفسية التي تؤثر على التنظيم العاطفي والذاكرة وظيفة تنفيذية 1،2. على الرغم من إحراز تقدم كبير، لا يزال هناك فهم محدود لكيفية العواقب الخلوية والجزيئية من إصابة الجهاز العصبي المركزي من الولادة المبكرة تترجم إلى العديد من عقابيل عصبية في الأطفال الذين يولدون قبل الأوان. هذا النقص في المعرفة هندالمتطلبات البيئية في الوقت الحقيقي تشخيص CNS شدة الإصابة والجرعات علم التدخلات الناشئة. بالإضافة إلى ذلك، لا تزال الاستراتيجيات العلاجية المناسبة للفئة العمرية لهذه الفئة من السكان المعرضين للخطر المريض بعيد المنال. التهاب داخل الرحم هو شائع جدا في الخداج الشديد وينطوي على سلسلة التهابات الجنين-الأم والمشيمة معقدة 3. العدوى داخل الرحم غالبا ما يكون تحت الإكلينيكي. النتائج المشيمة محددة تتفق مع التهاب حاد، أو شريوأمنيونيتيس] نسيجية، هي المحددات الرئيسية للاستجابة التهابية الجنين وهي تتزامن مع إصابات الدماغ المرتبطة الولادة المبكرة 3-5. والواقع أن الاستجابة الالتهابية الجنين لها آثار إكلينيكية واضحة المعالم لتحقيق نتائج على المدى الطويل من الولادة المبكرة. الرضع الذين صغير بالنسبة لسن الحمل (SGA) أو الذين يعانون من عدوى معرضون بشكل استثنائي إلى عجز عصبي 3،4. شريوأمنيونيتيس هي الولادة قبل الأوان التشخيص المرضي النموذجية التالية <sup&gt; 6،7، والفحص النسيجي يكشف عن علامات الالتهاب في 70٪ من مشيمة من مواليد الخدج جدا (4). وعلاوة على ذلك، يرتبط شريوأمنيونيتيس مع الضعف الادراكي في عامين 8. ويرتبط دليل على underperfusion الأوعية الدموية الأمهات في المشيمة من الأطفال الذين يولدون قبل الأوان للغاية أيضا مع الشلل الدماغي في مرحلة الطفولة 9. تأثير التآزر من شريوأمنيونيتيس والمشيمة العيوب نضح ويتضح جيدا من خطر ارتفاع ملحوظ في نتائج عصبية غير طبيعية في هذه الفئة من السكان المريض في الثانية من العمر 10،11. لتقليد النظامية عيوب المشيمة نضح الإنسان وشريوأمنيونيتيس المرتبطة الناجم عن العوامل المسببة للأمراض الالتهاب، وضعنا نموذجا للما قبل الولادة عابرة النظامية نقص الأكسجة نقص التروية (TSHI) جنبا إلى جنب مع lipopolysaccharide في داخل الأمنيوسي (LPS) في الفئران. كان هدفنا على التكيف نموذجنا للTSHI وحدها في الفئران 12-16 لتشمل التهاب داخل الرحم،لتسهيل النمذجة قبل السريرية للإصابة الجهاز العصبي المركزي المرتبطة الولادة المبكرة. TSHI كشفت وحده الخسارة المستمرة لخلايا النسب oligodendroglial، العصبونات القشرية، وزيادة موت الخلايا، ورفع مستويات خلوى الموالية للالتهابات، مع فترات الدماغية تقدمية مما أدى إلى نمط متدرج الإصابة بما يتفق مع إصابات الدماغ قبل الولادة 16. وقد أثبتت تعديلات على مكونات الدماغية من هذا النموذج أيضا العجز في ترميز الذاكرة، قصيرة والذاكرة طويلة المدى والتعديلات العضلات والعظام خفيفة في الفئران مع تقدمهم في السن 17-19. في الواقع، لقد أثبتنا سابقا أن الجمع بين TSHI + LPS يلخص بصمات المرضية من EOP، بما في ذلك دبقية قليلة التغصن وفقدان الخلايا العصبية، والإصابة محور عصبي، التهاب الخلوية والتشوهات الوظيفية 20.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" >
	<tbody>
		<tr >
			<td >Saline Solution, 0.9%</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >S8776</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LPS 011B4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Evan&#39;s Blue Dye</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical gloves</td>
			<td>Biogel</td>
			<td>40870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >OR Towels</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>287000-008</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PDI Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Mini Arco Rechargeable Clippers</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td>CL8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Betadine surgical scrub</td>
			<td>Purdue Products L.P.</td>
			<td>67618-151-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eye Lubricant</td>
			<td>Refresh Lacri Lube</td>
			<td>00023-0312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Blunt Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-8100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6808</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14002-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309628</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td>25G 5/8</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305128</td>
			<td>30G 1</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton-tipped Applicators</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>23-400-114</td>
			<td>Small, 6 inch sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton Gauze Sponge</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle Holders</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td>INS600109</td>
			<td>12.5 CM STR</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vessel Clips</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td>INS600120</td>
			<td>30G Pressure</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3-0 Perma Hand Silk Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>1684G</td>
			<td>Black braided, 3-0 (2 metric), 18&#34;, non-absorbable,&#160; PS-1 24mm needle, 3/8 circle</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>328438</td>
			<td>0.3cc 3mm 31G</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pentobarbital</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bupivacaine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Lithium Carbonate</td>
			<td>Acros Chemicals</td>
			<td>554-13-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48311-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hematoxylin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3801521</td>
			<td>Surgipath Gill II Hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eosin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3801601</td>
			<td>Surgipath Eosin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylenes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>X3S-4</td>
			<td>Histological Grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Permount</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>SP15-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Coverglass</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-548-5P</td>
			<td>Fisher Finest Premium Coverglass</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling encephalopathy of prematurity using prenatal hypoxia-ischemia with intra-amniotic lipopolysaccharide in rats

التهاب الدماغ الخداج (EOP) هو المصطلح الذي يشمل نظام العصبي المركزي (CNS) التشوهات المرتبطة الولادة المبكرة. ولأفضل الأهداف مسبقا متعدية وكشف استراتيجيات علاجية جديدة لإصابات الدماغ المرتبطة الولادة المبكرة، يجب نماذج ما قبل السريرية من EOP تشمل آليات مماثلة الإصابة العالمية قبل الولادة لوحظ في البشر وإشراك عناصر متعددة من النظام الأم والجنين المشيمة،. من الناحية المثالية، ينبغي أن نماذج تنتج مجموعة مماثلة من عجز وظيفي في الحيوان ناضجة وألخص جوانب متعددة من الفيزيولوجيا المرضية. لتقليد النظامية عيوب الإنسان المشيمة نضح، underperfusion المشيمة و / أو شريوأمنيونيتيس المرتبطة التهاب الناجم عن العوامل المسببة للأمراض في أوائل الولادة قبل الأوان، وضعنا نموذجا للما قبل الولادة عابرة النظامية نقص الأكسجة نقص التروية (TSHI) جنبا إلى جنب مع lipopolysaccharide في داخل الأمنيوسي (LPS). في الحوامل الفئران سبراغ داولي، TSHI عبر الرحم انسداد الشريان سن يوم الجنينية 18 (E18) يؤدي الى خلل underperfusion المشيمة متدرج المرتبطة بزيادة الضرر CNS في الجنين. عندما يقترن حقن LPS البينية الذي يحيط بالجنين، يتم زيادة التهاب المشيمة وتفاقم الضرر CNS مع الأبيض المرتبطة المسألة، مشية والتصوير شذوذ. قبل الولادة TSHI وTSHI + LPS الشتائم قبل الولادة تلبية العديد من المعايير لنموذج EOP بما في ذلك تلخص الإهانة داخل الرحم، مما تسبب في فقدان الخلايا العصبية، الخلايا قليلة التغصن والمحاور، وفقدان subplate، وعجز وظيفي في الحيوانات البالغة التي تحاكي تلك التي لوحظت في الأطفال الذين يولدون للغاية قبل الأوان. وعلاوة على ذلك، وهذا النموذج يسمح للتشريح الالتهاب الناجم عن أنواع الإصابات المختلفة.

بعد TSHI + LPS في E18، الهيماتوكسيلين ويوزين تلطيخ يكشف تشوهات كبيرة في أنسجة كل من المشيمة (الشكل 1) والدماغ (الشكل 2). مشيمة فحص على E19 E21 هي وذمي بشكل صارخ مع نزيف الصغير، ونخر في جميع أنحاء الساقط والمتاهة. ويلاحظ أيضا ارتشاح التهابي كبير وزيادة في الأوعي?...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats at JoVE.com

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

النمذجة دماغي من الولادة المبكرة قبل الولادة عن طريق نقص الأكسجة-نقص التروية مع lipopolysaccharide في البينية الذي يحيط بالجنين في الفئران

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

modeling-encephalopathy-prematurity-using-prenatal-hypoxia-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

11.2K Views.  University of New Mexico. Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

Video: Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران -- الشرق انسداد الشريان الدماغي مع نموذج الشعيرة

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to return to normal in a large majority of patients2, which is mainly due to current lack of clinical treatment for acute stroke. This necessitates understanding the physiological effects of cerebral ischemia on brain tissue over time and is a major area of active research. Towards this end, experimental progress has been made using rats as a preclinical model for stroke, particularly, using non-invasive methods such as 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) coupled with Positron Emission Tomography (PET) imaging3,10,17. Here we present a strategy for inducing cerebral ischemia in rats by middle cerebral artery occlusion (MCAO) that mimics focal cerebral ischemia in humans, and imaging its effects over 24 hr using FDG-PET coupled with X-ray computed tomography (CT) with an Albira PET-CT instrument. A VOI template atlas was subsequently fused to the cerebral rat data to enable a unbiased analysis of the brain and its sub-regions4. In addition, a method for 3D visualization of the FDG-PET-CT time course is presented. In summary, we present a detailed protocol for initiating, quantifying, and visualizing an induced ischemic stroke event in a living Sprague-Dawley rat in three dimensions using FDG-PET.

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Brain damage resulting from cerebral ischemia may be non-invasively imaged and studied in rats using pre-clinical positron emission tomography coupled with the injectable radioactive probe, 18F-fluorodeoxyglucose. Further, the use of modern software tools that include volume of interest (VOI) brain templates dramatically increase the quantitative information gleaned from these studies.

التصوير غير الغازية وتحليل الدماغي نقص التروية في الفئران الحية عن طريق تقنية متقدمة في البوزيتروني مع<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

A الخنزير الصغير نموذج من الأطفال حديثي الولادة نقص الأوكسجين، اعتلال الدماغ الإقفاري

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Assessing Transmissible Spongiform Encephalopathy Species Barriers with an In Vitro Prion Protein Conversion Assay

Studies to understanding interspecies transmission of transmissible spongiform encephalopathies (TSEs, prion diseases) are challenging in that they typically rely upon lengthy and costly in vivo animal challenge studies. A number of in vitro assays have been developed to aid in measuring prion species barriers, thereby reducing animal use and providing quicker results than animal bioassays. Here, we present the protocol for a rapid in vitro prion conversion assay called the conversion efficiency ratio (CER) assay. In this assay cellular prion protein (PrPC) from an uninfected host brain is denatured at both pH 7.4 and 3.5 to produce two substrates. When the pH 7.4 substrate is incubated with TSE agent, the amount of PrPC that converts to a proteinase K (PK)-resistant state is modulated by the original host&#8217;s species barrier to the TSE agent. In contrast, PrPC in the pH 3.5 substrate is misfolded by any TSE agent. By comparing the amount of PK-resistant prion protein in the two substrates, an assessment of the host&#8217;s species barrier can be made. We show that the CER assay correctly predicts known prion species barriers of laboratory mice and, as an example, show some preliminary results suggesting that bobcats (Lynx rufus) may be susceptible to white-tailed deer (Odocoileus virginianus) chronic wasting disease agent.

Assessing Transmissible Spongiform Encephalopathy Species Barriers with an In Vitro Prion Protein Conversion Assay

Measuring the barrier to the interspecies transmission of prion diseases is challenging and typically involves animal challenges or biochemical assays. Here, we present an in vitro prion protein conversion assay with the ability to predict species barriers.

تقييم المنقولة جنون الأنواع دماغي الحواجز مع<em&gt; في المختبر</em&gt; بريون تحويل البروتين الفحص

Studies to understanding interspecies transmission of transmissible spongiform encephalopathies (TSEs, prion diseases) are challenging in that they ...

Simultaneous PET/MRI Imaging During Mouse Cerebral Hypoxia-ischemia

Dynamic changes in tissue water diffusion and glucose metabolism occur during and after hypoxia in cerebral hypoxia-ischemia reflecting a bioenergetics disturbance in affected cells. Diffusion weighted magnetic resonance imaging (MRI) identifies regions that are damaged, potentially irreversibly, by hypoxia-ischemia. Alterations in glucose utilization in the affected tissue may be detectable by positron emission tomography (PET) imaging of 2-deoxy-2-(18F)fluoro-&#7429;-glucose ([18F]FDG) uptake. Due to the rapid and variable nature of injury in this animal model, acquisition of both modes of data must be performed simultaneously in order to meaningfully correlate PET and MRI data. In addition, inter-animal variability in the hypoxic-ischemic injury due to vascular differences limits the ability to analyze multi-modal data and observe changes to a group-wise approach if data is not acquired simultaneously in individual subjects. The method presented here allows one to acquire both diffusion-weighted MRI and [18F]FDG uptake data in the same animal before, during, and after the hypoxic challenge in order to interrogate immediate physiological changes.

The method presented here uses simultaneous positron emission tomography and magnetic resonance imaging. In the cerebral hypoxia-ischemia model, dynamic changes in diffusion and glucose metabolism occur during and after injury. The evolving and irreproducible damage in this model necessitates simultaneous acquisition if meaningful multi-modal imaging data are to be acquired.

في وقت واحد التصوير PET / MRI خلال الماوس الدماغي نقص الأكسجة-نقص التروية

Dynamic changes in tissue water diffusion and glucose metabolism occur during and after hypoxia in cerebral hypoxia-ischemia reflecting a bioenergetics ...

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA thrombolysis) rarely produces benefits in mechanical occlusion-based experimental models, which dominate preclinical stroke research. This split between the bench and bedside suggests the need to employ tPA-responsive models in preclinical stroke research. To this end, a simple and tPA-reactive thrombotic stroke model is invented and described here. This model consists of transient occlusion of the unilateral common carotid artery and delivery of 7.5% oxygen through a face mask in adult mice for 30 min, while maintaining the animal rectal temperature at 37.5 &#177; 0.5 &#176;C. Although reversible ligation of the unilateral carotid artery or hypoxia each suppressed cerebral blood flow only transiently, the combination of both insults caused lasting reperfusion deficits, fibrin and platelet deposition, and large infarct in the middle cerebral artery-supplied territory. Importantly, tail-vein injection of recombinant tPA at 0.5, 1, or 4 hr post-tHI (10 mg/kg) provided time-dependent reduction of the mortality rate and infarct size. This new stroke model is simple and can be standardized across laboratories to compare experimental results. Further, it induces thrombosis without craniectomy or introducing pre-formed emboli. Given these unique merits, the tHI model is a useful addition to the repertoire of preclinical stroke research.

Thromboembolic stroke models are vital tools for optimizing the recanalization therapy. Here we report a murine thrombotic stroke model based on transient cerebral hypoxic-ischemic (tHI) insult, which triggers thrombosis and infarction, and responds favorably to tissue plasminogen activator (tPA)-mediated fibrinolysis in a therapeutic window similar to those in stroke patients.

A السكتة الدماغية نموذج الخثاري بناء على عابر الدماغي نقص الأكسجة-نقص التروية

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

Circumscribed Capsular Infarct Modeling Using a Photothrombotic Technique

Recent increase in the prevalence rate of white matter stroke demands specific research in the field. However, the lack of a pertinent animal model for white matter stroke has hampered research investigations. Here, we describe a novel method for creating a circumscribed capsular infarct that minimizes damage to neighboring gray matter structures. We used pre-surgery neural tracing with adeno-associated virus-green fluorescent protein (AAV-GFP) to identify somatotopic organization of the forelimb area within the internal capsule. The adjustment of light intensity based on different optical properties of gray and white matter contributes to selective destruction of white matter with relative preservation of gray matter. Accurate positioning of optical-neural interface enables destruction of entire forelimb area in the internal capsule, which leads to a marked and persistent motor deficit. Thus, this technique produces highly replicable capsular infarct lesions with a persistent motor deficit. The model will be helpful not only to study white matter stroke (WMS) at the behavioral, circuit, and cellular levels, but also to assess its usefulness for development of new therapeutic and rehabilitative interventions.

This manuscript describes a modeling technique of capsular infarct. Here we utilized a modified photothrombotic technique with low intensity of light after pre-surgery target mapping. Using this technique, we created a circumscribed capsular infarct model with persistent motor impairment.

مقيدة المحفظة عائق النمذجة باستخدام تقنية Photothrombotic

Recent increase in the prevalence rate of white matter stroke demands specific research in the field. However, the lack of a pertinent animal model for ...

Preparation of Decellularized Kidney Scaffolds in Rats

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs to replace diseased or damaged organs. Scaffolds are needed to facilitate the generation of three-dimensional organs or tissues using differentiated stem cells in vivo. In this report, we describe a novel method for developing vascularized scaffolds using decellularized rat kidneys. Eight-week-old Sprague-Dawley rats were used in this study, and heparin was injected into the heart to facilitate flow into the renal vessels, allowing heparin to perfuse into the renal vessels. The abdominal cavity was opened, and the left kidney was collected. The collected kidneys were perfused for 9 h using detergents, such as Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate, to decellularize the tissue. Decellularized kidney scaffolds were then gently washed with 1% penicillin/streptomycin and heparin to remove cellular debris and chemical residues. Transplantation of stem cells with the decellularized vascular scaffolds is expected to facilitate the generation of new organs. Thus, the vascularized scaffolds may provide a foundation for tissue engineering of organ grafts in the future.

This protocol introduces a method to develop a scaffold using decellularized rat kidneys. The protocol includes decellularization and recellularization processes to confirm bioavailability. Decellularization is performed using Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate.

إعداد سقالات الكلى المزيلة في الفئران

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs ...

Analysis of Raw and Processed Cyperi Rhizoma Samples Using Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry in Rats with Primary Dysmenorrhea

Cyperi rhizoma (CR) is widely used in gynecology and is a general medicine for treating women's diseases in China. Since the analgesic effect of CR is enhanced after processing with vinegar, CR processed with vinegar (CRV) is generally used clinically. However, the mechanism by which the analgesic effect is enhanced by vinegar processing is unclear. In this study, the ultra-high pressure liquid chromatographytandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) technique was used to examine changes in the blood levels of the exogenous constituents and metabolites between CR-treated and CRV-treated rats with dysmenorrhea. The results revealed differing levels of 15 constituents and two metabolites in the blood of these rats. Among them, the levels of (-)-myrtenol and [(1R,2S,3R,4R)-3-hydroxy-1,4,7,7-tetramethylbicyclo[2.2.1]hept-2-yl]acetic acid in the CRV group were considerably higher than in the CR group. CRV reduced the level of 2-series prostanoids and 4-series leukotrienes with proinflammatory, platelet aggregation, and vasoconstriction activities and provided analgesic effects by modulating arachidonic acid and linoleic acid metabolism and the biosynthesis of unsaturated fatty acids. This study revealed that vinegar processing enhances the analgesic effect of CR and contributes to our understanding of the mechanism of action of CRV.

Here, a comparative analysis of raw and processed Cyperi rhizoma (CR) samples is presented using ultra-high performance liquid chromatography-high-resolution tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) in rats with primary dysmenorrhea. The changes in blood levels of the metabolites and the sample constituents were examined between rats treated with CR and CR processed with vinegar (CRV).

تحليل عينات جذمور Cyperi الخام والمعالجة باستخدام قياس الطيف الكتلي الترادفي للكروماتوغرافيا السائلة في الفئران المصابة بعسر الطمث الأولي

Cyperi rhizoma (CR) is widely used in gynecology and is a general medicine for treating women's diseases in China. Since the analgesic effect of CR is ...

التلاعب Tuina موحدة لهشاشة العظام في الركبة في الفئران

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its mechanism. Therefore, the manipulation of animal models of knee osteoarthritis is critical. This protocol provides a standard process for Tuina manipulation on KOA rats and a preliminary exploration of the mechanism of Tuina for KOA. The press and kneading manipulation method (a kind of Tuina manipulation that refers to pressing and kneading the specific area of the body surface) is applied on 5 acupoints around the knee joint of rats. The force and frequency of the manipulation were standardized by finger pressure recordings, and the position of the rat during manipulation is described in detail in the protocol. The effect of manipulation can be measured by pain behavior tests and microscopic findings in synovial and cartilage. KOA rats showed significant improvement in pain behavior. The synovial tissue inflammatory infiltration was reduced in the Tuina group, and the expression of tumor necrosis factor (TNF)-&#945; was significantly lower. Compared to the control group, chondrocyte apoptosis was less in the Tuina group. This study provides a standardized protocol for Tuina manipulation on KOA rats and preliminary proof that the therapeutic effects of Tuina may be related to reducing synovial inflammation and delayed chondrocyte apoptosis.

تسليط الضوء على المؤلف: فهم آلية التلاعب Tuina في الفئران 

We present a protocol for Tuina manipulation performed on plaster-immobilized-induced knee osteoarthritis rats. Based on the preliminary results, it suggested that the efficacy of the method relied on the reduction of inflammation and cartilage loss.

التلاعب Tuina للحد من الالتهاب وفقدان الغضروف في الفئران هشاشة العظام في الركبة

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...