الهدف العام لهذا الإجراء هو استهداف انتقائية الخلايا الجذعية المشتقة من teratomas في الفئران لتقييم فعالية في الجسم الحي من الحيوانية الصغيرة العلاج الإشعاعي شعاع خارجي. الميزة الرئيسية للعلاج الإشعاعي الخارجي هو أنه هو العلاج المستهدف لتيريتوماس الخلايا الجذعية المرتبطة التي تتجنب الآثار السلبية خارج الأهداف من العلاجات التي تقدمها بشكل نظامي. وقد مكنت التطورات في العلاج الإشعاعي شعاع الخارجية استهداف محددة من teratomas الصغيرة مع تجنب تلف الأنسجة الطبيعية، مما يجعل هذا العلاج مثالية لعلاج المشعة الحساسة.
هذه الطريقة لا يمكن أن توفر فقط نظرة ثاقبة في تحسين استراتيجيات لعلاج الخلايا، كما أن لديها القدرة على أن تصبح قابلة للتطبيق سريريا في العلاجات البشرية. تبدأ من خلال اتخاذ لوحة ستة جيدا تحتوي على iPSCs. للحث على تشكيل رباعيات الأطراف في الحيوانات المناعية إضافة ملليلتر واحد من مزيج انزيم تفكك الخلايا المؤتلف في بئر من لوحة 6-well التي تحتوي على الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية المنقولة مع جين مراسل مزدوجة الاندماج لاحتضان خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.
في نهاية الحضانة تفريق الخلايا عن طريق الأنابيب ووقف رد فعل الأنزيمية عن طريق إضافة حجم متساو من خلية ثقافة المتوسطة لكل بئر. سحب تعليق خلية واحدة في أنبوب مخروطي 15 ملليلتر للعد. بعد الطرد المركزي هو الكامل، وpirate supernatate وssuspend بيليه في 30 ميكرولترات من حل Matrigel مصفوفة ووضع الأنبوب على الجليد.
إذا استخدام الخلايا المُصابة بالعدوى المزدوجة في الانصهار، فيجب أيضاً تعليق هذه الخلايا الإيجابية المزدوجة في 30 ميكرولترات من المصفوفة. المقبل, تحميل كل مجموعة الخلايا في حقنة ملليلتر واحد مجهزة إبرة قياس 28.5 وتأكيد عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القدم في كل مخدر ثمانية إلى 10 أسابيع القديمة athymic فأرة المتلقي عارية. ثم، حقن تحت الجلد خليط مصفوفة خلية واحدة في الجناح الظهري لكل المتلقي.
في الوقت المناسب نقطة تجريبية بعد تلقيح حقن 375 ملليغرام لكل كيلوغرام من deluciferon intraperitoneally في كل المتلقي. بعد 10 دقائق صورة إشارة الإضاءة الحيوية في كل مسبار مراسل تخدير حقن الحيوان لمدة 30 دقيقة باستخدام نوافذ الاستحواذ دقيقة واحدة على فترات زمنية خمس دقائق، وفقا لبروتوكولات التصوير الاحيائية القياسية. للإشعاعات المسخة, عند نقطة الوقت التجريبي المناسبة، ضع أولاً متلقي مخدر على سرير جهاز إشعاعي موجه بالصور قبل الظهر والحصول على مجموعة من 400 صورة تصوير تصويرية دقيقة محسوبة على مدى 360 درجة باستخدام 40 كيلوفولتاج الذروة، 2 ملليمتر شعاع الأشعة السينية، وإعادة بناء الصورة في صور حجمية بحجم بكسلي متساوي التروبية يبلغ 0.2 ملليمتر.
من المهم إعادة بناء الصور الحجمية للثدي. هذه الصور سوف تساعد على التخطيط للعلاجات الإشعاعية للتسليم المحدد للعلاج إلى teratomas فقط، مع تقليل أي إشعاع خارج الهدف من الأنسجة المحيطة بها. ثم استخدم صور التصوير المقطعي المصغر وحزمة برامج الصور RT لتخطيط بروتوكول معالجة الإشعاع.
إدارة العلاج لمدة ثلاثة أيام متتالية لتقديم ما مجموعه 18 الرمادية إلى الورم المستهدف. الفئران المحقونة عادة ما تظهر تشكيل نمو المسخة أربعة إلى أربعة أسابيع بعد حقن الخلايا السرطانية كما أكد ذلك من قبل التصوير الاحتيام الحيوية. عندما تشع مع تراكمي لا من 18 الرمادية بعد شهر واحد من تسليم الخلايا والأورام سوف تتقلص بشكل كبير مما أدى إلى انخفاض ملحوظ متزامن في إشارة لوسيفراز.
والأهم من ذلك، كما توضح هذه الصور، أن خزعات الأنسجة الطبيعية التي تحصد خمسة ملليلترات من الموقع المشعر لا يبدو أنها تعرضت لأي ضرر كبير. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم واضح لكيفية إنشاء الخلايا الجذعية المشتقة من التهيّم في الجسم الحي وعلاجها بشكل فعال وآمن مع إشعاع شعاع خارجي. يتطلب هذا النهج البسيط الحصول على صور تصويرية مقطعية عالية الدقة لموضوع يمكن بعده وصف سلسلة من علاجات شعاع الإشعاع لتشعيع الأورام المستهدفة ، مع تجنب الأنسجة المجاورة.
لا تنس أن العمل مع الإشعاع يمكن أن يكون خطيرا للغاية، وأنه ينبغي اتخاذ الاحتياطات، مثل استخدام الدروع المناسبة، دائما أثناء تنفيذ هذا الإجراء.
