يسمح تصميمنا الهجين microdrive للمجربين ليس فقط لتسجيل من مناطق الدماغ متعددة، ولكن أيضا لاختيار أنواع مختلفة من الأقطاب لتحسين العائد والاستقرار. قمنا بدمج تسعة tetrodes ، ومسبار خطي السيليكون ، والألياف البصرية القابلة للتعديل وإعادة الاستخدام في مجموعة microdrive للتجارب الحية مع الفئران تتحرك بحرية. ويمكن بسهولة تكييف هذه التقنية مع الحيوانات الأخرى الكبيرة مثل الفئران أو المارموسيتس.
مسابير السيليكون هشة للغاية. نحن بحاجة إلى توخي الحذر عند التعامل مع المسابير، على سبيل المثال، عند تكييف الألياف البصرية وعند تناوب تجميع المكوك في microdrive. يتكون الصفيف microdrive من خمسة أجزاء.
لإعداد المسمار microdrive لمسبار السيليكون أول 3D طباعة نمط من البلاستيك microdrive ووضع الشريط حول نمط لجعل جدار مؤقت حول نمط. صب هلام السيليكون السائل في نمط وإزالة فقاعات الهواء مع اهتزاز لطيف. عندما شفي السيليكون، وإزالة بعناية قالب هلام السيليكون من النمط.
المقبل استخدام طاحونة دوارة لخفض 18 و 9.5mm أطوال 23 قياس الفولاذ المقاوم للصدأ الأسلاك أنبوب واستخدام طاحونة لتخشين أعلى 2 إلى 3mm من الأنابيب. تطبيق حجم صغير من زيت السيليكون إلى المسمار مخصص وتعيين الأنابيب والمسمار في القالب. صب الاكريليك الأسنان في القالب واستخدام حقنة للقضاء على أي فقاعات الهواء حول الأنابيب والمسمار.
عندما الشفاء تماما الاكريليك الأسنان إزالة المسمار microdrive من العفن واستخدام كماشة لثني 6mm من نهاية واحدة من طرف سلك 18mm إلى زاوية 60 درجة. باستخدام أداة تحول تدوير المسمار microdrive للتحقق من الجودة ثم تثبيت المسمار microdrive في الجسم مجموعة microdrive وتحويل المسمار للتحقق مما إذا كان قادرا على التحرك صعودا وهبوطا بسلاسة. لإعداد المكوك لمسبار السيليكون استخدام مقص حاد لقطع اثنين من أطوال 5mm من PEEK ومحاذاة الأنابيب في كلا الجانبين من المكوك.
الغراء الأنابيب إلى المكوك مع الايبوكسي وتطبيق حجم صغير من زيت السيليكون إلى وظائف دليل. عندما جفف الايبوكسي، ضع المكوك على وظائف دليل من الجسم مجموعة microdrive للتحقق من الجودة. يجب أن يتحرك المكوك بسلاسة دون احتكاك مفرط.
لإعداد optorode استخدام قاطع روبي لشق قطعة من الألياف البصرية إلى 21mm في الطول وطحن تلميح الألياف حتى انها مسطحة ولامعة. عندما تكون الحافة جاهزة، ضع الألياف البصرية بلطف على الجانب الأمامي من مسبار السيليكون 200 إلى 300 ميكرومتر فوق الجزء العلوي من مواقع القطب الكهربائي وتأمين الألياف بشكل مؤقت مع الشريط الشفاف ثم الغراء الألياف البصرية إلى قاعدة مسبار السيليكون مع حجم صغير من الايبوكسي والسماح للايبوكسي لعلاج لمدة خمس ساعات. لإرفاق المكوك بمسبار السيليكون تطبيق حجم صغير من الايبوكسي في الجزء الخلفي من قاعدة مسبار السيليكون وعقد بلطف الجزء السفلي من المكوك ضد قاعدة مسبار السيليكون لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق لتجنب تشكيل فجوة بين المكوك وقاعدة مسبار السيليكون.
عندما الشفاء الايبوكسي تماما عقد الأخدود من المكوك مع ملاقط غرامة واستخدام المجهر لوضع أنابيب المكوك بعناية على وظائف دليل من الجسم الرئيسي. بدوره المسمار لإدراج المسمار microdrive في ثقب المسمار وإدراج غيض من أنبوب L على شكل في الأخدود من رئيس المكوك لإشراك مسبار السيليكون ومكرودرايف المسمار. المقبل قطع اثنين من مسامير عدد 0 إلى طول الموضوع 3.5mm وطحن نصائح لإزالة نتوءات.
ضع حامل موصل المسبار على جسم الصفيف وأدخل الموصل الكهربائي لمسبار السيليكون في الحامل. أدخل مسامير رقم 0 للاحتفاظ بموصل حامل التحقيق. استخدام الايبوكسي لتأمين موصل مسبار السيليكون في حامل مع الحرص على عدم الغراء التحقيق إلى الجسم مجموعة microdrive.
لإرفاق حامل اللولب بمسبار opto-silicon والجسم صفيف microdrive، قطع اثنين من مسامير عدد 0 إلى طول الموضوع 6mm وطحن النصائح. طحن خارج اثنين من عدد 0 آلة المكسرات المسمار لجعل المكسرات الهكية الصغيرة مع 2.5 إلى 3mm أقطار الخارجي وإدراج عدد 0 المسمار في مكون A من حامل. الغراء رؤساء المسمار مع الايبوكسي.
تطبيق كمية صغيرة من الشحوم السيليكون إلى المكونات A و B للحد من الاحتكاك مع الجسم. استخدام ملاقط العكسية لإدراج مؤقتا المكون ألف في الجسم ووضع المكون باء على مسامير المكون A.Thread المكسرات المخصصة على مسامير واستخدام كماشة لتشد من المكسرات لتأمين حامل فير على للجسم. إدراج الألياف في شراسة الأخدود من حامل الألياف الحماسية مع الحرص على أن الألياف هو الشائكة 4 إلى 5mm من حامل.
تطبيق كمية صغيرة من الايبوكسي بين النهمة وحامل الأخدود. عندما يتم الشفاء الايبوكسي، وتخفيف المكسرات وتحويل المسمار microdrive للتحقق من المكوك وحامل النبير للحركة على نحو سلس ثم تأكد من أن تلميح التحقيق يتراجع تماما في الجسم عندما حامل شراسة هو في موقف أعلى والأنابيب المكوكية لا تزال مرتبطة مع وظائف دليل. لإرفاق مخروط الدرع، قم بربط مسامير عدد 3.5 مم من خارج المخروط للاحتفاظ بالميكرودرايف في مكانه.
يمكن إعداد صفيف microdrive في غضون خمسة أيام إذا تم الانتهاء من البناء وفقًا للجدول الزمني الموضح في الجدول. بعد يمكن اختبار الأداء السلوكي تعديل tetrode على مسار خطي وفي حقل مفتوح. في كلا النوعين من التجارب يسمح للماوس لاستكشاف بحرية لمدة 30 دقيقة تقريبا في حين يتم تسجيل إشارات الكهربائية دون ضوضاء شديدة ذات الصلة الحركة طوال جلسة التسجيل.
ويمكن بعد ذلك أن يتم تنفيذ التحفيز الضوئي في القشرة entorhinal الوسيط لتحفيز طبقة القشرة entorhinal medial 3 الخلايا العصبية التي مشروع إلى ca1 subfield من الحصين. ثم يتم تسجيل أنشطة الأبراج التلقائية وإمكانات الحقل المحلي من التيتروديس ومسبار السيليكون عندما ينام الماوس. في هذه التجربة التمثيلية أظهرت إمكانات الحقل الأيسر المسجلة في tetrodes أنشطة تموج كبيرة مما يشير إلى أن جميع التيتروديس تم وضعها في محيط طبقة الخلية الهرمية CA1.
لوحظت الأنشطة المتجاوبة المستحثة للضوء في هذا الفحص لأول مرة في قشرة الأنف الوسيط متبوعة بأنشطة داخل CA1 مع 13 إلى 18 مللي ثانية من الكمون. الحرص على إدراج opto-السيليكون التحقيق في الجسم microdrive في بيئة حرة كهرباء. يمكن استبدال مخروط التدريع بمواد مثل ورقة من الورق والشريط.
وهذا سوف يقلل من معدل microdrive بنسبة تصل إلى 20٪ لدينا microdrive تصميم يوفر خيارات مرنة لمزيج فعال من تسجيل أقطاب لقياس ومعالجة مناطق الدماغ متعددة والتحقيق في ديناميات والتفاعلات من هياكل الدماغ المختلفة.
