يمكن استخدام هذه الطريقة العملية والقابلة للاستنساخ لتصور تفاعلات الكريات البيض البطين التي تؤدي إلى تجنيد الكريات البيض داخل فأرة سليمة. هذه التقنية أيضاً تقدم أداة قوية لرصد العمليات الفسيولوجية والفيزيولوجية في داخل سلسلة تجنيد الكريات البيض في الجسم الحي. يمكن تطبيق هذه الطريقة في نماذج الالتهابات والتعفن المختلفة.
على سبيل المثال، لقد أبرزنا مؤخراً أهميتها في دراسة العضلات التي تنطوي على تسلل مبالغ فيه في الكريات البيض العضلية. اقتراحنا لزملائه العلماء الذين يفكرون في استخدام هذه التقنية هو الحصول على أكبر قدر ممكن من الخبرة العملية حيث أن الطريقة عرضة جدا للانحرافات الطفيفة. إثبات الإجراء سيكون سيمون كرانيغ، طبيب كبير وعالم كبير من مختبري.
بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع في الحيوان التجريبي المُغدّر، قم بإصلاح الفأرة في موضع إعادة خياطة الظهر على وسادة تسخين 37 درجة مئوية واستخدام خياطة معقم غير قابلة للتأكم 6-0 لرياح حلقة بسيطة حول الأسنان الأمامية. الشريط نهايات الانضمام من خياطة إلى وسادة التدفئة واستخدام ملاقط لرفع بلطف الجلد في خط الوسط. بعد ذلك، جعل فتحة دائرية قطرها 1-2 سنتيمتر فوق الرقبة والصدر العلوي واستخدام ملاقط لتشريح بعناية العضلات المحيطة، والدهون، والأنسجة الضامة.
ضع خياطة تحت القصبة الهوائية. استخدم مقصًا جراحيًا صغيرًا لصنع مقطع عرضي 1.3 ملليمتر تقريبًا في القصبة الهوائية وإدخال أنبوب البولي إيثيلين في نهاية القصبة الهوائية لتأمين الشعب الهوائية العليا. إصلاح أنبوب الموجود مع خياطة عقدة دائرية واحدة وتحديد موقع الشريان السباتي على طول الجانب الأيمن من القصبة الهوائية.
تشريح الأنسجة المحيطة من جدار الشريان السباتي وتمرير قطعتين من خياطة تحت الشريان. ربط أول خياطة الجمجمة قريبة إلى تشعب الشرايين السباتية ووضع خياطة الثانية حوالي خمسة إلى ثمانية ملليمترات من الخياطة الأولى دون ربط. بعد ذلك، قم بإرفاق قطعة من أنابيب البولي إيثيلين طولها 30 سنتيمترًا بإبرة حقنة ملليلتر واحدة مليئة بالملح واستخدام مقطع وعاء من سبعة ملليمترات لتضييق الشريان السباتي بشكل سوي على الغرزة الثانية.
جعل ما يقرب من 0.5 ملليمتر قطع عرضية في الشريان السباتي وإدخال أنبوب البولي ايثيلين العقيمة في الشريان. تأمين أنبوب مع خياطة الثانية وإزالة مقطع السفينة. ثم الاكتئاب بلطف المكبس حقنة لطرد المالحة في السفينة.
لتحضير عضلة كريمستر، قم بنقل الفأرة إلى إطار مجهر بلاستيكي مصنوع خصيصًا مع كيس الصفن الذي يواجه مرحلة المجهر، واتّهم بعناية كيس الصفن في نهايته الأكثر اتّجاهًا مع ملاقط. سحب كيس الصفن بلطف، وإزالة دائرية حول مقطع قطره خمسة ملليمترات من الجلد النحوي حفظ الأنسجة المفتوحة رطبة جيدا مع المالحة. استخدام اثنين من ملاقط لتشريح النسيج الضام فضفاضة وتحديد موقع كل الخصيتين.
فهم واحد الخصية و بلطف تبدأ سحب الأنسجة التناسلية إزالة أي الأنسجة الضامة المحيطة خطوة بخطوة. بمجرد أن يتم اسخاء الخصية، قم بتم تثبيت نهاية الأنسجة البعيدة في الحلقة المطاطية المحيطة بالمرحلة وهيدرات الأنسجة بالملوحة المالحة. بعد ذلك، قم بإزالة الأنسجة الضامة بعناية دون الإضرار بالعضلات الأساسية.
من المهم إزالة جميع الأنسجة الضامة التي من شأنها أن تؤدي إلى صور ضبابية دون الإضرار بالعضلات الكامنة في كريمستر. عندما تمت إزالة جميع الأنسجة، وجعل شق عرضي ملليمتر واحد لفتح العضلات cremaster قبل إجراء شق طولي من مجردة جدا إلى نهاية قريبة من الأنسجة. يجب أن تفتح العضلات كرويا.
نشر العضلات بعناية على مرحلة الزجاج وثب العضلات على حلقة المطاط مع الحرص على عدم لمس أو إيذاء المنطقة الوسطى من الأنسجة. ثم قم بتعلق الخصية المتبقية على الجانب لإعطاء الوصول إلى المنطقة ذات الاهتمام وهيدرات الأنسجة مع PSS. للتصور داخل مدينة الأوعية العضلية، ضع عضلات cremaster المثبتة في المجهر المستقيم وحدد الهدف 40X.
تنفيذ التسجيلات تحت القذف المستمر مع 35 إلى 37 درجة مئوية PSS من خلال قطعة من أنابيب صغيرة التي تم تسجيلها إلى الهدف من تستقيم من المجهر للسماح نازف مستمر من PSS جنبا إلى جنب مع الهدف إلى أسفل على العضلات والأنسجة. تحديد في سن ما بعد الشعرية الدموية. قياس دوران الدقيقة على venules مع 20 إلى 40 ميكرومتر القطر.
ثم تسجيل صور عالية الدقة من دوران الدقيقة من العضلات cremaster على مدى فترة 30 ثانية تعديل التركيز باستمرار بسبب تغييرات طفيفة في انكماش وتخفيف الأنسجة العضلية. يمكن أن يؤدي النسيج الضام الزائد إلى صور مجهرية ضبابية. في هذه الصورة المجهرية التمثيلية، يمكن تحديد فينومي ما بعد الشعرية التي ينبغي أن تكون بين 20 إلى 40 ميكرومتر في القطر من قبل التقاء اثنين من أصغر السفن.
يمكن تصور الكريات البيض الملتمَر والمتداولة أثناء تعميم الكريات البيض فقط في إعادة الحركة البطيئة من مقاطع الفيديو المسجلة. قد تؤثر العديد من المعلمات على تجنيد الكريات البيض في الجسم الحي بما في ذلك إخراج القلب وقطر السفينة وسرعة الخط المركزي ومعدل القص الجداري وعدد الكريات البيض المتداولة. لاحظ أن سرعة الخط المركزي تتأثر بإخراج القلب ومقاومة الأوعية الدموية الطرفية وحجم الأوعية الدموية الداخلية.
على سبيل المثال، يزيد حجم كبير من رودامين أو مادة تجريبية أخرى تُعطى عبر القسطرة السباتية من سرعة خط الوسط بعد الشعيرات الدموية ويمنع التقاط الكريات البيض والمتداول. على العكس من ذلك، قد يؤدي فشل القلب أو التخدير العميق أو انخفاض حرارة الجسم إلى تقليل تدفق ما بعد الشعيرات الدموية. لتحديد سرعة الخط المركزي، يمكن استخدام الكريات البيض الفلورية المتداولة بحرية أو يجب اغلاج الكريات البيض بمكواشف الفلورسنت مثل رودامين.
لاحظ أن سلالات الأنواع البرية قد تظهر تباينًا فسيولوجيًا. على سبيل المثال، تظهر فئران C57BL/6 الكريات البيض المحسنة بوضوح، والتصاق، والهجرة العابرة مقارنة بالحيوانات C57BL/10ScSn. مراحل التخطيط والتوحيد مهمة لإتقان هذه التقنية وخاصة أثناء إعداد العضلات cremaster للمجهر.
ويمكن إجراء طرق أخرى لتصور تجنيد الكريات البيض لتوفير معلومات إضافية وللمساعدة في تشريح المساهمة الفردية للعلامات الكرية وخلايا البطانية في سلسلة التوظيف. توفر هذه التقنية منصة للتقييم قبل الإكلينيكي للمتأملين الدوائيين والمواد المقومة المناعية الجديدة.
