وأيد هذا العمل من خلال منحة بحثية من المعاهد الكندية للأبحاث الصحية (CIHR ، MOP - 86749). L. ليو هي المستفيدة من جائزة CIHR محقق جديد (MSH - 95374).

1. جاذب كيميائي في إعداد جيل Agarose <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 10 مل من برنامج تلفزيوني × 2 في أنبوب 50 مل المخروطية ، والاحماء أنبوب من خلال وضعه في دورق يحتوي على ماء ساخن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 10 مل من الماء المقطر وإضافة مسحوق agarose 0.4 غرام في آخر أنبوب 50 مل المخروطية (مع غطاء لها خففت قليلا) والحرارة الخليط حتى الغليان فقط في فرن الميكروويف (1 ~ لدقيقة في فرن الميكروويف 700 واط) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة تحسنت 2 × PBS إلى حل agarose أنبوب ، والحل في دوامة المختلطة وإبقائه دافئا في دورق الماء الساخن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Micropipette حل جاذب كيميائي (على سبيل المثال ، 10 ميكرولتر من 0.5 ميكروغرام من chemokine CXC MIP - 2 أو 12 ميكرولتر من WKYMVm 1 ملم) في غطاء أنبوب إيبندورف 1.5 مل تحتوي على 3 ميكرولتر الحبر الهند وتخلط جيدا من قبل التطلع باستخدام micropipette (تجنب فقاعة الهواء). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع نهاية غيض من طرف الماصة 200 ميكرولتر وmicropipette 110 ميكرولتر من محلول agarose (42 درجة مئوية) في غطاء وتخلط جيدا فورا باستخدام طرف آخر ماصة (تجنب فقاعة الهواء). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين هلام جاذب كيميائي المحتوية على +4 درجة مئوية. </li></ol> 2. إعداد العضلات المشمرة عن الميكروسكوب Intravital (الشكل 1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير ماوس البالغين الذكور من خلال حقنة الملكية الفكرية من خليط من زيلازين ملغم / كغم من 10 و 200 ملغم / كغم هيدروكلوريد الكيتامين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق فوق منطقة الوريد الوداجي الخارجي ، والحق في الجانب الامامي من كيس الصفن مع الحلاقة الكهربائية. بعد التخدير ، من المهم أن تولي اهتماما خاصا ورعاية الماوس تخدير. ويمكن استخدام مصباح الحرارة لمنع الفأرة من انخفاض حرارة الجسم. يجب أن تكون خالية من الماوس منعكس الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق أفقي ، العثور على ويقثطر حبل الوريد باستخدام أنابيب PE - 10 مليئة المالحة الهيبارين 100 U / مليلتر. وهناك حاجة للقسطرة الوريد الوداجي لادارة التخدير والأدوية إضافية عند الحاجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح ساقيه الخلفيتين الماوس مع الشريط السري مع الماوس مواجهة الكذب على منزل من صنع مجلس العضلات المشمرة (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل لوحة الى 37 درجة مئوية دائري المياه للحفاظ على العضلات والجسم المشمرة الماوس الدافئة. </li></ol> ملاحظة : يجب تنفيذ جميع الإجراءات 2،6-2،14 بلطف شديد 5. <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق في الجلد صفني لفضح العضلة المشمرة اليسار. بعناية تشريح العضلات من اللفافة المرتبطة بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Superfuse العضلة المشمرة مع 37 درجة مئوية حرارة بيكربونات - مخزنة المالحة (131.9 كلوريد الصوديوم ، 4.7 بوكل ، 1.2 MgSO 4 و 20 NaHCO 3 ، مم ، ودرجة الحموضة 7.4) باستخدام مضخة تمعجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربطة عنق خياطة 4-0 في نهاية البعيدة للعضلة المشمرة لأنه عقد لأسفل على زجاج رمى عرض واضح للمجلس المشمرة العضلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يكوي العضلة المشمرة طوليا. مع خياطة 4-0 ، عقد الشقة العضلات وثبته على طول الحواف على قاعدة التمثال. فصل الخصية والبربخ ومن العضلات الأساسية ونقلها إلى تجويف البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Superfuse عضلة في ~ 0.6 مل / دقيقة مع العازلة ° 37 C - نضح وتحسنت تغطية العضلات تعرضت مع 22 × 22 مم ساترة الزجاج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مجلس العضلات المشمرة على المسرح مجهر فحص العضلات تحت المجهر ، والعثور على الوريد مناسبة شعيرة وريدية (حدد الوريد الذي يتم على التوالي وunbranched وطبيعي معدل القص وقطر في 25-40 ميكرون) ، وضبط كاميرا فيديو السماح للالوريد إلى أن تصور في وضع عمودي على حد سواء إلى اليمين أو اليسار لمراقبة التلفزيون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التوازن بعد 30 دقيقة ، وتسجيل صور الفيديو من الوريد للشعيرة وريدية المختارة لمدة 5 دقائق والتحكم في بيانات خط الأساس باستخدام جهاز تسجيل الفيديو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف وإزالة superfusion ساترة على العضلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع علامة ~ 1 ملم 3 الحجم جاذب كيميائي المحتوية على الجل على سطح العضلة المشمرة في منطقة انتقاؤه من 350 ميكرون وموازية لشعيرة وريدية في الوريد لوحظ ، إضافة ساترة لعقد هلام في مكان وsuperfuse في الأنسجة العضلية في غاية بطء معدل (≤ 10 ميكرولتر / دقيقة) للسماح بإنشاء التدرج من جاذب كيميائي التي يطلق ببطء وشكلت من هلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سجل صورة الفيديو لمدة 90 دقيقة بعد إضافة الجل التي تحتوي على جاذب كيميائي. أثناء التسجيل ، وضبط والحفاظ على التركيز على التمسك المجهر ، الزحف ، وtransmigrating chemotaxing الكريات البيض داخل الوريد والأنسجة العضلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التجربة ، واستيراد ملف الفيديو إلى جهاز كمبيوتر لتحليلها. </li></ol> 3. تعقب الخلايا باستخدام ImageJ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على جهاز كمبيوتر ، واستخراج وتحويل الفيديو إلى صيغة AVI (على سبيل المثال ، والاستخدام المجاني bitRipper برامج الكمبيوتر لتحويل الفيديو DVD إلى ملف AVI). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام برامج تحرير الفيديو لتوليد الفيلم الوقت ساقطا. على سبيل المثال ، استخدام Windows Movie Maker لصنع فيلم الوقت ساقطا (1 / 512 أو 1 / 1024 الوقت الفاصل بين aر 30 إطارا في الثانية معدل) من شريط الفيديو الأصلي في الوقت الحقيقي. تحويل وحفظ الوقت مضغوط ساقطا الفيلم DV - AVI الشكل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل صور ميكرومتر المعايرة تحت المجهر إعداد نفسه ، استيراد الصور إلى الكمبيوتر ، فتح الصور مع ImageJ. في ImageJ ، بكسل مجموع تظهر على أعلى يسار الشاشة (على سبيل المثال ، 720 × 480 بكسل). قياس حجم الشاشة في كل من X و Y محاور (على سبيل المثال ، 200 × 150 ميكرون). من هذا ، وحساب عدد بكسل لكل ميكرومتر (على سبيل المثال ، س = 720 / 200 = 3.6 بكسل / ميكرون ، و y = 480 / 150 = 3.2 بكسل / ميكرون). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لاستيراد الفيلم ، فتح ImageJ مرة أخرى ، انقر فوق &quot;ملف والاستيراد عن طريق أفلام كويك تايم ، بلج في&quot; ، حدد الفيلم ليتم تحليلها وانقر على زر &quot;موافق&quot; في واجهة &quot;فتاحة الفيلم كيو تي&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على زر &quot;الإضافات ، مختصر تعقب&quot; لتعقب الخلايا. املأ المعلومات ذات الصلة في الحقول في الجزء السفلي قبل بدء تتبع. لفترة وجيزة ، <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفاصل الزمني (في ثانية) = fold-time-lapse/30 (على سبيل المثال ، 1020 × مرور الزمن سيكون من 1020-1030 = 34 ثانية / الإطار الزمني). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> س / ص = قياس المعايرة ميكرون / بكسل باستخدام معايرة صورة ميكرون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ض = 0 المعايرة (كما في عضلة المشمرة الماوس هو طبقة رقيقة جدا من الأنسجة والخلايا الزحف والهجرة هي 2D تقريبا تحت مشرق الميدان تضوء). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البحث عن توسيط حجم مربع = 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حجم نقطة / خط العرض / حجم الخط : يمكن تعديلها إذا لزم الأمر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد نقطة ثابتة وواضحة كنقطة مرجعية. وهذا يمكن أن يكون نقطة مرجعية واضحة وأي نقطة صغيرة الهيكلية التي لا تزال دون تغيير ، ومستقرة في كافة مراحل التجربة برمتها. انقر على زر &quot;إضافة المسار&quot; لتعقب نقطة مرجعية من الأول إلى الإطار الأخير وانقر على &quot;المسار النهاية&quot;. البيانات تظهر النتائج على الجدول تلقائيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المسار الزحف والهجرة العدلات واحدا تلو الآخر : انقر على زر &quot;إضافة المسار&quot; لتعقب الخلية من ظهورها في الأنسجة للاختفاء في كل إطار وانقر على &quot;المسار النهاية&quot; لإنهاء وحفظ النتائج في Microsoft Excel. </li></ol> 4. تحليل معلمات التوظيف العدلات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح ملف النتائج في Microsoft Excel ، وتحليل البيانات (اتخاذ تغييرات النقطة المرجعية في التحليل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الزحف داخل اللمعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الزحف مسافة : المسافة الإجمالية الخلية يزحف في لمعة من موقع ملتصقة الأولي إلى موقع التهجير الأمثل (ميكرون). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سرعة الزحف : الزحف المسافة / الزمن (ميكرون / دقيقة). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transendothelial الهجرة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التهجير الوقت : من الساعة الخلية يبدأ transmigrate عبر البطانة إلى الوقت الذي يكون فيه خلايا الجسم كله خارج الوريد ويمكن أن ينظر إلى أي خلية في الجسم تجويف (دقيقة أو ثانية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مفرزة الوقت : من الساعة خلايا الجسم كله خارج الوريد (مباشرة بعد التهجير) إلى نقطة زمنية عندما الخلية يفقد الاتصال مع الوريد (يسحب الذيل) (دقيقة أو ثانية). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكيميائي في الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المسافة الهجرة : مجموع المسافة الخلية ينتقل من نقطة البداية إلى نقطة النهاية في الهجرة في الأنسجة (ميكرون). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سرعة الهجرة : الهجرة في الأنسجة المسافة / الزمن (ميكرون / دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المسافة الكيميائي : مجموع الخلية المسافة يهاجر في المحور س في الأنسجة (ميكرون). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سرعة الكيميائي : الكيميائي المسافة / الزمن (ميكرون / دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مؤشر الكيميائي : نسبة تقسيم المسافة التي الكيميائي المسافة الهجرة في الأنسجة. </li></ol></li></ol> 5. ممثل النتائج : على الرغم من أن يستخدم bightfield intravital المجهري لدراسة التفاعلات بين الخلايا الكريات البيض والبطاني قد لا تكون بالضرورة لالعدلات ، وأكد لنا أنه من خلال الدراسات الأنسجة لدينا ، وأكثر من 95 ٪ من الخلايا العدلة المعينين في عضلات المشمرة جاذب كيميائي المعالجة كانت في الواقع العدلات . في هذا التقرير ، وذلك باستخدام العدلة انتقائية chemoattractants ، نقدم تتبع إجراءات توظيف العدلات في الجسم الحي. على وجه التحديد ، وصفنا على بروتوكول الزحف تتبع العدلة داخل اللمعة ، والهجرة transendothelial ، والكيميائي في الأنسجة العضلية المشمرة في الفئران باستخدام تخدير الوقت الفاصل بين المجهر والفيديو intravital ImageJ. الجل agarose جاذب كيميائي المحتوية على العضلات ببطء المشمرة النشرات جاذب كيميائي ويسمح بإنشاء التدرج جاذب كيميائي في الأنسجة. العدلة جاذب كيميائي يحرض تفاعلات الخلايا العدلة البطاني في الوريدات مشمري شعيرة وريدية في الفئران. التجربة كلها تصور تحت المجهر brightfield تستقيم intravital مع صور الفيديو التي يتوقع لون كاميرا فيديو إلى جهاز التلفزيون وتسجيلها من قبل جهاز الفيديو. عقدنا العزم على العدلةالزحف داخل اللمعة ، والهجرة والهجرة وtransendothelial الكيميائي في الأنسجة العضلية ردا على العدلة جاذب كيميائي MIP - 2 و WKYMVm أعد في agarose هلام (الشكل 2). وجدنا أن MIP - 2 (0.5 ميكرومتر في) وWKYMVm (حوالي 0.1 ملم) أثارت الزحف داخل اللمعة العدلة في سرعة مماثلة ، والهجرة transendothelial العدلة ومفرزة من الوريد لمدة مماثلة من الوقت ، والهجرة العدلة والكيميائي في الأنسجة العضلية في ما يقرب من نفس السرعة وفهارس مماثلة مع العدلات الكيميائي (P&gt; 0.05 في اختبار الطلاب طن). <img src="/files/ftp_upload/3296/3296fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. الرسم التوضيحي التخطيطي نظام intravital المجهر. هو exteriorized عضلة المشمرة الماوس على عرض التمثال واضحة من مجلس العضلات المشمرة على خشبة المسرح المجهر وsuperfused مع 37 درجة مئوية حرارة بيكربونات - مخزنة المالحة. توصيل المجهر تستقيم مع كاميرا فيديو CCD لون intravital brightfield المجهري. يرتبط أيضا أحادية اللون في أعماق تبريد كاميرا رقمية CCD الى ميناء المجهر للفحص المجهري intravital مضان ، والصور التي يتم معالجتها مباشرة من جهاز الكمبيوتر. <img src="/files/ftp_upload/3296/3296fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الرقم التوظيف العدلات 2. معالم brightfield intravital المجهري. وكان المستحث العدلة تجنيد من قبل الافراج التدريجي للجاذب كيميائي العدلة MIP - 2 أو WKYMVm في إعداد جيل agarose 350 ميكرون وضعت بالقرب من الوريد شعيرة وريدية. وقد تم تحليل بيانات الوقت ساقطا الفيديو ImageJ بعد معالجة الفيديو في الوقت الحقيقي تسجيل التجربة. وتم تحديد العدلة الزحف داخل اللمعة (A) ، والوقت وقت التهجير مفرزة (B) ، والسرعة وسرعة الهجرة الكيميائي في الأنسجة (C) ، ومؤشر الكيميائي في العضلات المشمرة (D) بعد إقامة MIP - 2 أو WKYMVm agarose هلام على المشمرة العضلات في الفئران C57BL / 6 (ن = 3 ، # تعقب الخلايا = 22 (في ألف وباء) و 27 (في C و D) على التوالي لMIP - 2 ، و 26 = (في ألف وباء) و 44 ( في C و D) على التوالي لWKYMVm).

<ol>
	<li>Liu, L., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+leukocyte+recruitment:+organ-specific+mechanisms+of+action.">Molecular mechanisms of leukocyte recruitment: organ-specific mechanisms of action.</a> Thromb. Haemost. 89, 213-220 (2003).</li><li>Petri, B., Phillipson, M., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physiology+of+leukocyte+recruitment:+an+in+vivo+perspective.">The physiology of leukocyte recruitment: an in vivo perspective.</a> J. Immunol. 180, 6439-6446 (2008).</li><li>Phillipson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+crawling+of+neutrophils+to+emigration+sites:+a+molecularly+distinct+process+from+adhesion+in+the+recruitment+cascade.">Intraluminal crawling of neutrophils to emigration sites: a molecularly distinct process from adhesion in the recruitment cascade.</a> J. Exp. Med. 203, 2569-2575 (2006).</li><li>Wong, C. H., Heit, B., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulators+of+leucocyte+chemotaxis+during+inflammation.">Molecular regulators of leucocyte chemotaxis during inflammation.</a> Cardiovasc. Res. 86, 183-191 (2010).</li><li>Gavins, F. N., Chatterjee, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+for+the+study+of+mouse+microcirculation+in+anti-inflammatory+drug+research:+focus+on+the+mesentery+and+cremaster+preparations.">Intravital microscopy for the study of mouse microcirculation in anti-inflammatory drug research: focus on the mesentery and cremaster preparations.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 49, 1-14 (2004).</li><li>Bullen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+imaging+techniques+for+drug+discovery.">Microscopic imaging techniques for drug discovery.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 7, 54-67 (2008).</li><li>Hazelwood, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entering+the+Portal:+Understanding+the+Digital+Image+Recorded+Through+a+Microscope.">Entering the Portal: Understanding the Digital Image Recorded Through a Microscope.</a> Imaging Cellular and Molecular Biological Functions. , 3-43 (2007).</li><li>Hickey, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-selectin+facilitates+emigration+and+extravascular+locomotion+of+leukocytes+during+acute+inflammatory+responses+in+vivo.">L-selectin facilitates emigration and extravascular locomotion of leukocytes during acute inflammatory responses in vivo.</a> J. Immunol. 165, 7164-7170 (2000).</li><li>Cara, D. C., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+as+a+tool+for+studying+recruitment+and+chemotaxis.">Intravital microscopy as a tool for studying recruitment and chemotaxis.</a> Methods Mol. Biol. 239, 123-132 (2004).</li><li>Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LSP1+is+an+endothelial+gatekeeper+of+leukocyte+transendothelial+migration.">LSP1 is an endothelial gatekeeper of leukocyte transendothelial migration.</a> J. Exp. Med. 201, 409-418 (2005).</li><li>Heit, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+accelerates,+but+is+not+required+for,+neutrophil+chemotaxis+to+fMLP.">PI3K accelerates, but is not required for, neutrophil chemotaxis to fMLP.</a> J. Cell Sci. 121, 205-214 (2008).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Intravital المجهر هو أداة أساسية للكشف عن الآليات الخلوية والجزيئية لتجنيد الكريات البيض خلال الالتهاب. التصور الكمي لتحديد التفاعلات خلية الكريات البيض البطاني في الأنسجة microvasculature transluscent مثل العضلات والمشمرة مساريق تبقى المعيار الذهبي لتطبيق هذه التقنية 1،5. وintr...

الجدول : مواد والكواشف والمعدات الخاصة <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم كاشف / المعدات </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> أنابيب البولي إثيلين ، وPE10 </td><td> بيكتون ديكنسون </td><td> 427401 </td><td> معرف × 0.28mm 0.61mm OD </td></tr><tr><td> الهند الحبر </td><td> فنون كرة السرعه </td><td> سوبر الأسود </td><td> 100 ٪ ، أي صبغة أسود الكربون الأصباغ </td></tr><tr><td> كينا </td><td> آرون الطبية </td><td> AA03 </td><td></td></tr><tr><td> زيلازين </td><td> باير للرعاية الصحية ، شركة باير </td><td> DIN 02169592 </td><td></td></tr><tr><td> كيتامين هيدروكلوريد </td><td> Bioniche الحيوان وزارة الصحة الكندية ، وشركة </td><td> DIN 01989529 </td><td></td></tr><tr><td> المؤتلف MIP - 2 الفئران </td><td> R &amp; D نظم </td><td> 452 - M2 </td><td></td></tr><tr><td> WKYMVm </td><td> طائر الفينيق صيدلة ، وشركة </td><td> 072-12 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td> عالى النقاء </td></tr><tr><td> الهيبارين </td><td> سيغما </td><td> H - 3393 </td><td></td></tr><tr><td> تستقيم المجهر </td><td> اوليمبوس </td><td> BX61WI </td><td></td></tr><tr><td> 3CCD كاميرا فيديو ملونة </td><td> SONY </td><td> DXC - 990 </td><td></td></tr><tr><td> HD - DVD مسجل فيديو </td><td> شركة إل جي إلكترونيكس </td><td> RH398H - M </td><td></td></tr><tr><td> رصد التلفزيون </td><td> شركة إل جي إلكترونيكس </td><td> 22LG30 </td><td></td></tr><tr><td> مياه دائري </td><td> الحرارية العلمية </td><td> HAAKE DC10 </td><td></td></tr><tr><td> مضخة تمعجية </td><td> جيلسون ؛ فارماسيا </td><td> جيلسون MINIPULS 3 ؛ فارماسيا P - 3 </td><td></td></tr><tr><td> المشمرة مجلس العضلات </td><td> جامعة ساسكاتشيوان </td><td></td><td> الصنع </td></tr></table>

tracking neutrophil intraluminal crawling, transendothelial migration and chemotaxis in tissue by intravital video microscopy

توظيف تعميم الكريات البيض من مجرى الدم إلى الأنسجة الملتهبة هو عملية حاسمة ومعقدة من 1،2 الالتهابات. في الوريدات شعيرة وريدية من الأنسجة الملتهبة ، الكريات البيض في البداية حبل ولفة على سطح الجدار وريدي اللمعية. المتداول الكريات البيضاء القبض على التصاق البطانة والخضوع الشركة استجابة لchemokine chemoattractants أو أخرى على السطح وريدي. ووصف عملية نقل العديد من الكريات البيض ملتصق من موقع الأولي للانضمام الى موقع التسرب صلي في البطانة ، داخل اللمعة الزحف 3. التالية الزحف والتحرك عبر بطانة الكريات البيض (التهجير) وتهاجر في أنسجة خارج الأوعية نحو مصدر جاذب كيميائي (الكيميائي) 4. Intravital المجهر هو أداة قوية لتصور التفاعلات خلية الكريات البيض في الجسم الحي البطاني وكشف الآليات الخلوية والجزيئية للتجنيد 2،5 الكريات البيض. في هذا التقرير ، ونحن نقدم وصفا شاملا لاستخدام brightfield intravital المجهري لتصور وتحديد العمليات التفصيلية للتجنيد في العضلات العدلة المشمرة الماوس ردا على التدرج من جاذب كيميائي العدلة. للحث على تجنيد العدلة ، وقطعة صغيرة من هلام agarose (~ 1 ملم 3 الحجم) التي تحتوي على جاذب كيميائي العدلة MIP - 2 (CXCL2 ، وهو chemokine CXC) أو WKYMVm (التربتوفان ، اليس ، صور ، فال - D - الأرصاد الجوية ، والتناظرية الاصطناعية يوضع من الببتيد الجرثومي) على الأنسجة العضلية المجاورة للشعيرة وريدية في الوريد ملاحظتها. مع مرور الوقت ، ساقطا التصوير الفوتوغرافي والفيديو وبرامج الكمبيوتر ImageJ ، العدلة الزحف داخل اللمعة على البطانة ، والهجرة transendothelial العدلة والهجرة والكيميائي في الأنسجة وتصور ومجنزرة. هذا البروتوكول يسمح التحليل الكمي وموثوق بها العديد من المعلمات التوظيف العدلة مثل سرعة الزحف داخل اللمعة ، والوقت التهجير ، مفرزة الوقت والسرعة والهجرة ، وسرعة الكيميائي والكيميائي المؤشر في الأنسجة. علينا أن نظهر أن استخدام هذا البروتوكول ، ويمكن توظيف هذه المعلمات العدلة تحديد ستابلي وتنقل خلية واحدة تتبع بسهولة في الجسم الحي.

Watch this Scientific Journal Video about Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy at JoVE.com

Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

وصفنا على بروتوكول المجهري brightfield intravital لقياس ديناميكية التفاعلات الخلية العدلة البطاني خلال تجنيد العدلة ردا على مصدر جاذب كيميائي العدلة في الجسم الحي. العدلة الزحف داخل اللمعة ، والهجرة وtransendothelial الكيميائي في الأنسجة العضلية الماوس المشمرة وتصور مع التصوير الفيديو وانقضى الوقت مع ImageJ مجنزرة.

تتبع الزحف داخل اللمعة العدلات ، والهجرة والانجذاب الكيميائي Transendothelial في الأنسجة بواسطة الميكروسكوب فيديو Intravital

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

tracking-neutrophil-intraluminal-crawling-transendothelial-migration

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

19.5K Views.  University of Saskatchewan. وصفنا على بروتوكول المجهري brightfield intravital لقياس ديناميكية التفاعلات الخلية العدلة البطاني خلال تجنيد العدلة ردا على مصدر جاذب كيميائي العدلة في الجسم الحي. العدلة الزحف داخل اللمعة ، والهجرة وtransendothelial الكيميائي في الأنسجة العضلية الماوس المشمرة وتصور مع التصوي?...

Video: Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

Neutrophil Extracellular Traps: How to Generate and Visualize Them

Neutrophil granulocytes are the most abundant group of leukocytes in the peripheral blood. As professional phagocytes, they engulf bacteria and kill them intracellularly when their antimicrobial granules fuse with the phagosome. We found that neutrophils have an additional way of killing microorganisms: upon activation, they release granule proteins and chromatin that together form extracellular fibers that bind pathogens. These novel structures, or Neutrophil Extracellular Traps (NETs), degrade virulence factors and kill bacteria1, fungi2 and parasites3. The structural backbone of NETs is DNA, and they are quickly degraded in the presence of DNases. Thus, bacteria expressing DNases are more virulent4. Using correlative microscopy combining TEM, SEM, immunofluorescence and live cell imaging techniques, we could show that upon stimulation, the nuclei of neutrophils lose their shape and the eu- and heterochromatin homogenize. Later, the nuclear envelope and the granule membranes disintegrate allowing the mixing of NET components. Finally, the NETs are released as the cell membrane breaks. This cell death program (NETosis) is distinct from apoptosis and necrosis and depends on the generation of Reactive Oxygen Species by NADPH oxidase5. 
Neutrophil extracellular traps are abundant at sites of acute inflammation. NETs appear to be a form of innate immune response that bind microorganisms, prevent them from spreading, and ensure a high local concentration of antimicrobial agents to degrade virulence factors and kill pathogens thus allowing neutrophils to fulfill their antimicrobial function even beyond their life span. There is increasing evidence, however, that NETs are also involved in diseases that range from auto-immune syndromes to infertility6.
We describe methods to isolate Neutrophil Granulocytes from peripheral human blood7 and stimulate them to form NETs. Also we include protocols to visualize the NETs in light and electron microscopy.

Neutrophil Extracellular Traps (NETs) are an important innate immune mechanism to fight pathogenic bacteria, fungi and parasites. Here we describe methods to isolate neutrophil granulocytes from human blood and to activate them to form NETs. We present preparation techniques to visualize NETs in light and electron microscopy.

الفخاخ خارج الخلية العدلات : كيفية إنشاء وتصور لهم

Neutrophil granulocytes are the most abundant group of leukocytes in the peripheral blood. As professional phagocytes, they engulf bacteria and kill them ...

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune response and therefore, the development of effector cells. As such, LNs are key to fighting invading pathogens and maintaining health. The choice of LN to study is dictated by accessibility and the desired model; the inguinal lymph node is well situated and easily supports studies of biologically relevant models of skin and genital mucosal infection.
The inguinal LN, like all LNs, has an extensive microvascular network supplying it with blood. In general, this microvascular network includes the main feed arteriole of the LN that subsequently branches and feeds high endothelial venules (HEVs). HEVs are specialized for facilitating the trafficking of immune cells into the LN during both homeostasis and infection. How HEVs regulate trafficking into the LN under both of these circumstances is an area of intense exploration. The LN feed arteriole, has direct upstream influence on the HEVs and is the main supply of nutrients and cell rich blood into the LN. Furthermore, changes in the feed arteriole are implicated in facilitating induction of adaptive immune response. The LN microvasculature has obvious importance in maintaining an optimal blood supply to the LN and regulating immune cell influx into the LN, which are crucial elements in proper LN function and subsequently immune response. 
The ability to study the LN microvasculature in vivo is key to elucidating how the immune system and the microvasculature interact and influence one another within the LN. Here, we present a method for in vivo imaging of the inguinal lymph node. We focus on imaging of the microvasculature of the LN, paying particular attention to methods that ensure the study of healthy vessels, the ability to maintain imaging of viable vessels over a number of hours, and quantification of vessel magnitude. Methods for perfusion of the microvasculature with vasoactive drugs as well as the potential to trace and quantify cellular traffic are also presented. 
Intravital microscopy of the inguinal LN allows direct evaluation of microvascular functionality and real-time interface of the direct interface between immune cells, the LN, and the microcirculation. This technique potential to be combined with many immunological techniques and fluorescent cell labelling as well as manipulated to study vasculature of other LNs.

A technique for performing intravital microscopy of the inguinal lymph node (LN) is outlined. Such technique allows for real-time, in vivo study of the lymph node microvasculature and structure both during homeostasis and infection. This technique can be adapted to cell trafficking studies and to other lymph node sites.

Intravital الميكروسكوب من العقدة الليمفاوية الأربي

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to the infiltration of tissues with migrating inflammatory cells, primarily neutrophils.&#160;This process has the potential to be destructive to tissues if excessive or held in an unresolved state.&#160; Cocultured in vitro models can be utilized to study the unique molecular mechanisms involved in pathogen induced neutrophil trans-epithelial migration.&#160;This type of model provides versatility in experimental design with opportunity for controlled manipulation of the pathogen, epithelial barrier, or neutrophil.&#160;Pathogenic infection of the apical surface of polarized epithelial monolayers grown on permeable transwell filters instigates physiologically relevant basolateral to apical trans-epithelial migration of neutrophils applied to the basolateral surface.&#160;The in vitro model described herein demonstrates the multiple steps necessary for demonstrating neutrophil migration across a polarized lung epithelial monolayer that has been infected with pathogenic P. aeruginosa (PAO1).&#160;Seeding and culturing of permeable transwells with human derived lung epithelial cells is described, along with isolation of neutrophils from whole human blood and culturing of PAO1 and nonpathogenic K12 E. coli (MC1000).&#160; The emigrational process and quantitative analysis of successfully migrated neutrophils that have been mobilized in response to pathogenic infection is shown with representative data, including positive and negative controls.&#160;This in vitro model system can be manipulated and applied to other mucosal surfaces.&#160;Inflammatory responses that involve excessive neutrophil infiltration can be destructive to host tissues and can occur in the absence of pathogenic infections.&#160;A better understanding of the molecular mechanisms that promote neutrophil trans-epithelial migration through experimental manipulation of the in vitro coculture assay system described herein has significant potential to identify novel therapeutic targets for a range of mucosal infectious as well as inflammatory diseases.

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

Neutrophil trans-epithelial migration in response to mucosal bacterial infection contributes to epithelial injury and clinical disease.&#160;An in vitro model has been developed that combines pathogen, human neutrophils, and polarized human epithelial cell layers grown on transwell filters to facilitate investigations towards unraveling the molecular mechanisms orchestrating this phenomenon.

في المختبر المقايسة المشتركة لتقييم الهجرة العدلية المستحثة المسببة للأمراض عبر الظهارية

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Quantitative Assessment of Human Neutrophil Migration Across a Cultured Bladder Epithelium

The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. During infection of the urinary bladder, polymorphonuclear leukocytes (PMN; neutrophils) migrate from the bloodstream and traverse the bladder epithelium. Failure to resolve infection in the absence of a neutrophilic response demonstrates the importance of PMN in bladder defense. To facilitate colonization of the bladder epithelium, uropathogenic Escherichia coli (UPEC), the causative agent of the majority of urinary tract infections (UTIs), dampen the acute inflammatory response using a variety of partially defined mechanisms. To further investigate the interplay between host and bacterial pathogen, we developed an in vitro model of this aspect of the innate immune response to UPEC. In the transuroepithelial neutrophil migration assay, a variation on the Boyden chamber, cultured bladder epithelial cells are grown to confluence on the underside of a permeable support. PMN are isolated from human venous blood and are applied to the basolateral side of the bladder epithelial cell layers. PMN migration representing the physiologically relevant basolateral-to-apical direction in response to bacterial infection or chemoattractant molecules is enumerated using a hemocytometer. This model can be used to investigate interactions between UPEC and eukaryotic cells as well as to interrogate the molecular requirements for the traversal of bladder epithelia by PMN. The transuroepithelial neutrophil migration model will further our understanding of the initial inflammatory response to UPEC in the bladder.

We developed an in vitro model that mimics an important component of the acute inflammatory response during infection of the bladder with uropathogenic Escherichia coli. The transuroepithelial neutrophil migration assay enables quantitative assessment of human neutrophil migration across bladder epithelia, cultured on permeable supports, in response to bacterial infection or chemoattractant substances.

التقييم الكمي للهجرة العدلات الإنسان وعبر مثقف المثانة الظهارة

The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. ...

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick tissue samples and organs in health and disease. By controlling the scanning pattern in multi-photon microscopy and applying appropriate numerical algorithms, we developed a striped-illumination approach, which enabled us to achieve 3-fold better axial resolution and improved signal-to-noise ratio, i.e. contrast, in more than 100 &#181;m tissue depth within highly scattering tissue of lymphoid organs as compared to standard multi-photon microscopy. The acquisition speed as well as photobleaching and photodamage effects were similar to standard photo-multiplier-based technique, whereas the imaging depth was slightly lower due to the use of field detectors. By using the striped-illumination approach, we are able to observe the dynamics of immune complex deposits on secondary follicular dendritic cells &#8211; on the level of a few protein molecules in germinal centers.

High-resolution intravital imaging with enhanced contrast up to 120 &#181;m depth in lymph nodes of adult mice is achieved by spatially modulating the excitation pattern of a multi-focal two-photon microscope. In 100 &#181;m depth we measured resolutions of 487 nm (lateral) and 551 nm (axial), thus circumventing scattering and diffraction limits.

حل غاية intravital المجهري مخطط في الإضاءة مراكز جرمينال

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in vivo is crucial for understanding the molecular basis of leukocyte transendothelial migration and interaction with vascular endothelium. One powerful approach involves intravital microscopy on transgenic mice expressing fluorescent proteins in cells of interest.
Here we present a protocol for imaging monocytes and neutrophils in the CX3CR1gfp/wt mouse i.v. injected with orange dye-labeled neutrophils with an inverted confocal microscope. Time-lapse movies gathered from 30 min&#160;to several hours of imaging allow the analysis of leukocyte behavior in mesenteric veins under both steady state and inflammatory conditions. We also describe the steps to locally induce blood vessel inflammation with TLR2/TLR1 agonist Pam3SK4 and monitor the subsequent recruitment of neutrophils and monocytes.
The presented technique can also be used to monitor other populations of leukocytes and investigate molecules implicated in leukocyte recruitment or trafficking using other stimuli or transgenic mice.

We detail a protocol to monitor the behavior of neutrophils and monocytes in mesenteric veins under steady state and inflammatory conditions using intravital confocal microscopy on anaesthetized mice.

التصوير العدلات وحيدات في مساريقي الأوردة التي كتبها حيوي داخلي المجهري على الفئران مخدرة في الوقت الحقيقي

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Intravital Imaging of Neutrophil Priming Using IL-1&#946; Promoter-driven DsRed Reporter Mice

Neutrophils are the most abundant leukocytes in human blood circulation and are quickly recruited to inflammatory sites. Priming is a critical event that enhances the phagocytic functionality of neutrophils. Although extensive studies have unveiled the existence and importance of neutrophil priming during infection and injury, means of visualizing this process in vivo have been unavailable. The protocol provided enables monitoring of the dynamic process of neutrophil priming in living animals by combining three methodologies: 1) DsRed reporter signal &#8212; used as a measure of priming 2) in vivo neutrophil labeling &#8212; achieved by injection of fluorescence-conjugated anti-lymphocyte antigen 6G (Ly6G) monoclonal antibody (mAb) and 3) intravital confocal imaging. Several critical steps are involved in this protocol: oxazolone-induced mouse ear skin inflammation, appropriate sedation of animals, repeated injections of anti-Ly6G mAb, and prevention of focus drift during imaging. Although a few limitations have been observed, such as the limit of continuous imaging time (~ 8 hr) in one mouse and the leakage of fluorescein isothiocyanate-dextran from blood vessels in the inflammatory state, this protocol provides a fundamental framework for intravital imaging of primed neutrophil behavior and function, which can easily be expanded to examination of other immune cells in mouse inflammation models.

Intravital Imaging of Neutrophil Priming Using IL-1&amp;#946; Promoter-driven DsRed Reporter Mice

This current protocol employs fluorescent reporters, in vivo labeling, and intravital imaging techniques to enable monitoring of the dynamic process of neutrophil priming in living animals.

التصوير حيوي داخلي من العدلات الاشعال عن طريق IL-1β يحركها المروج عن dsRed الفئران مراسل

Neutrophils are the most abundant leukocytes in human blood circulation and are quickly recruited to inflammatory sites. Priming is a critical event that ...

An All-on-chip Method for Rapid Neutrophil Chemotaxis Analysis Directly from a Drop of Blood

Neutrophil migration and chemotaxis are critical for our body's immune system. Microfluidic devices are increasingly used for investigating neutrophil migration and chemotaxis owing to their advantages in real-time visualization, precise control of chemical concentration gradient generation, and reduced reagent and sample consumption. Recently, a growing effort has been made by the microfluidic researchers toward developing integrated and easily operated microfluidic chemotaxis analysis systems, directly from whole blood. In this direction, the first all-on-chip method was developed for integrating the magnetic negative purification of neutrophils and the chemotaxis assay from small blood volume samples. This new method permits a rapid sample-to-result neutrophil chemotaxis test in 25 min. In this paper, we provide detailed construction, operation and data analysis method for this all-on-chip chemotaxis assay with a discussion on troubleshooting strategies, limitations and future directions. Representative results of the neutrophil chemotaxis assay testing a defined chemoattractant, N-Formyl-Met-Leu-Phe (fMLP), and sputum from a chronic obstructive pulmonary disease (COPD) patient, using this all-on-chip method are shown. This method is applicable to many cell migration-related investigations and clinical applications.

This article provides the detailed method of performing a rapid neutrophil chemotaxis assay by integrating the on-chip neutrophil isolation from whole blood and the chemotaxis test on a single microfluidic chip.

طريقة الكل على رقاقة للتحليل الكيميائي العدلات السريعة مباشرة من قطرة الدم

Neutrophil migration and chemotaxis are critical for our body's immune system. Microfluidic devices are increasingly used for investigating neutrophil ...

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

In response to invading pathogens, neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which are extracellular networks of DNA decorated with histones and antimicrobial proteins. Excessive NET formation (NETosis) and citH3 release during sepsis is associated with multiple organ dysfunction and mortality in mice and humans but its implications in dogs are unknown. Herein, we describe a technique to isolate canine neutrophils from whole blood for observation and quantification of NETosis. Leukocyte-rich plasma, generated by dextran sedimentation, is separated by commercially available density gradient separation media and granulocytes collected for cell count and viability testing. To observe real-time NETosis in live neutrophils, cell permeant and cell impermeant fluorescent nucleic acid stains are added to neutrophils activated either by lipopolysaccharide (LPS) or phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA). Changes in nuclear morphology and NET formation are observed over time by fluorescence microscopy. In vitro NETosis is further characterized by co-colocalization of cell-free DNA (cfDNA), myeloperoxidase (MPO) and citrullinated histone H3 (citH3) using a modified double-immunolabelling protocol. To objectively quantify NET formation and citH3 expression using fluorescence microscopy, NETs and citH3-positive cells are quantified in a blinded manner using available software. This technique is a specific assay to evaluate the in vitro capacity of canine neutrophils to undergo NETosis.

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

We describe methods to isolate canine neutrophils from whole blood and visualize NET formation in live neutrophils using fluorescence microscopy. Also described are protocols to quantify NET formation and citrullinated histone H3 (citH3) expression using immunofluorescence microscopy.

في المختبر تشكيل الكلاب العَدلات فخ خارج الخلية: التحليل الكمي ودينامية بالفحص المجهري الأسفار

In response to invading pathogens, neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which are extracellular networks of DNA decorated with ...

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. Two-photon intravital microscopy (2P-IVM) allows the observation of cell interactions in deep tissue in living animals, while minimizing the photobleaching generated during image acquisition. To date, different models for 2P-IVM of lymphoid and non-lymphoid organs have been described. However, imaging of respiratory organs remains a challenge due to the movement associated with the breathing cycle of the animal.
Here, we describe a protocol to visualize in vivo immune cell interactions in the trachea of mice infected with influenza virus using 2P-IVM. To this purpose, we developed a custom imaging platform, which included the surgical exposure and intubation of the trachea, followed by the acquisition of dynamic images of neutrophils and dendritic cells (DC) in the mucosal epithelium. Additionally, we detailed the steps needed to perform influenza intranasal infection and flow cytometric analysis of immune cells in the trachea. Finally, we analyzed neutrophil and DC motility as well as their interactions during the course of a movie. This protocol allows for the generation of stable and bright 4D images necessary for the assessment of cell-cell interactions in the trachea.

In this study, we present a protocol to perform two-photon intravital imaging and cell interaction analysis in the murine tracheal mucosa after infection with influenza virus. This protocol will be relevant for researchers studying immune cell dynamics during respiratory infections.

تصوير تفاعل الخلية في الغشاء المخاطي الرغامى أثناء عدوى فيروس الإنفلونزا باستخدام الفحص المجهري إينترافيتال اثنين-فوتون

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...