يوفر بروتوكولنا عملية واضحة لدراسة الآثار السلوكية العصبية للمواد والملوثات ذات الاهتمام على يرقات حمار وحشي والكشف عن السمية العصبية المحتملة لهذه العوامل. ويمكن تنفيذ هذه التقنية باستخدام اختبار الإنتاجية العالية للمناقب العصبية في نموذج سمك الحمار الوحشي. ويمكن تطبيق هذه الطريقة لتقييم الآثار السلوكية العصبية الليلية للملوثات لإثبات السمية العصبية المحتملة على البشر نحن البشر، حيث أن جينوم سمك الحمار الوحشي لديه homology عالية مع البشر، لذلك يمكن أن توفر مؤشرات للإدارة الكيميائية ومشاكل الصحة العامة الناجمة عن الملوثات.
وبما أن أسماك الحمار الوحشي تتمتع بميزة الفرز عالي الإنتاجية، فإن هذه الطريقة توفر نظرة ثاقبة على كل من تطوير العقاقير العقلية والبحوث المتعلقة بالسميات البيئية. لا تخافوا من دراسة التجربة الأولى. إذا اتبعت البروتوكول، سيكون لديك نتيجة ناجحة.
قبل ساعتين على الأقل من إجراء التجربة، حدد درجة حرارة الغرفة إلى 28 درجة مئوية وأضف 800 ميكرولترات من محلول التعرض لكل بئر من 48 بئرًا. ثم استخدم ماصة من ميليلتر واحد مع طرف معدل لنقل يرقة واحدة في 200 ميكرولترات من محلول التعرض لكل بئر من اللوح الصغير استعدادا لتجربة زاوية الحركة والمسار. لإعداد 6 آبار صغيرة لتجارب السلوك الاجتماعي ، إضافة أربعة ملليلترات من محلول التعرض لكل بئر من الستة البئر ونقل يرقتين في 200 ميكرولترات من محلول التعرض لكل بئر.
قبل البدء في الاختبار، افتح برنامج مراقبة الإنتاجية العالية وحدد وحدة زوايا مسار الدورانات. نقل 48 جيدا microplate إلى منصة تسجيل وسحب أسفل الغطاء. انقر فوق ملف وإنشاء بروتوكول لبدء إنشاء بروتوكول جديد وأدخل 48 في موضع عدد المواقع.
انقر فوق معلمات و معلمات البروتوكول والوقت، قم بتعيين مدة التجربة إلى ساعة واحدة و 10 دقائق، وفترة التكامل إلى 60 ثانية. باستخدام أداة الشكل البيضاوي، قم برسم دائرة حول الأعلى الأيمن جيدًا. حدد الدائرة وانقر فوق نسخ، أعلى اليمين، لصق، و تحديد.
استخدم الماوس لسحب الدائرة المنسوخة إلى أعلى اليمين بشكل جيد وانقر فوق نسخ، أعلى علامة إلى اليمين، لصق، ثم تحديد مرة أخرى. ثم اسحب الدائرة المنسوخة إلى أسفل اليمين بشكل جيد وانقر فوق إنشاء و مسح علامات. سيقوم النظام تلقائيا رسم دائرة على كل بئر أخرى من لوحة.
بعد ذلك، انقر على رسم مقياس ورسم خط معايرة على الشاشة. أدخل طول الخط، واضبط الوحدة، وانقر على تطبيق على المجموعة. تعيين لون الحيوان إلى الأسود وتعيين عتبة الكشف إلى 16 إلى 18 للسماح للكشف عن الحيوانات، وتعيين غير نشط للسرعة الصغيرة إلى 0.5 سنتيمتر في الثانية الواحدة والسرعة الصغيرة إلى كبيرة إلى 2.5 سم في الثانية.
تعيين فئات زاوية المسار من ناقص 180 إلى زائد 180 كما هو مبين. لتعيين ظروف الإضاءة، انقر فوق المعلمات، القيادة الخفيفة، يستخدم أحد أساليب تشغيل 3 أدناه، ومحفزات محسنة لضبط ظروف الضوء. انقر فوق الحافة وتعيين فترة مظلمة من 10 دقيقة، تليها ثلاث دورات من فترات الضوء والظلام بالتناوب 10 دقيقة.
ثم حفظ البروتوكول. عندما يتم تعيين جميع المعلمات ، قم بإيقاف الإضاءة في غرفة الاختبار ، والسماح لليرقات بالتأقلم في النظام لمدة 10 دقائق. في نهاية فترة التأقلم، انقر فوق تجربة وتنفيذ، ثم قم بإنشاء المجلد الذي يتم فيه حفظ الملفات التجريبية.
ثم أدخل اسم النتيجة وانقر فوق الخلفية و ابدأ. في نهاية التجربة، انقر على التجربة والتوقف. ثم العودة إلى 48 جيدا microplate مرة أخرى إلى حاضنة ضوء للتجارب اللاحقة.
لأن كل مجموعة يمكن أن تشمل 16 الحيوانات، يمكن استخدام النظام لإجراء اختبارات عالية الإنتاجية من زاوية الحركة والمسار في ظل ظروف العلاج المختلفة في 48 جيدا microplate واحد. يمكن اختبار النشاط الاجتماعي لليرقات باستخدام لوحات ستة آبار. وفي هذه التجربة التمثيلية، أظهرت أعلى مجموعة تركيز من الإيثر الثنائي الفينيل العشاري البروم-47 نقص نشاط واضح خلال الفترة المظلمة، في حين لم تلاحظ أي تغييرات نتيجة للتعرض للإيثر الثنائي الفينيل العشاري البروم-47 خلال فترات الضوء.
وعلاوة على ذلك، فإن مجموعة التركيزات العالية من 6-هيدروكسي-BDE-47 كان أداؤها أقل روتينية ومتوسطة في خمسة أيام بعد الإخصاب. ومع ذلك، فإن المنعطفات الأكثر استجابة قد تم حثها في مجموعات التعرض 6-ثيروكسي-BDE47. وقد تم تحفيز النشاط الاجتماعي لسمك الحمار الوحشي من خلال البارافين-70 المكلورة والبارافين-52b قصير السلسلة، في حين أن البارافين-52a المكلور للسلسلة الطويلة اختصر مدة ملامسة اليرقات.
من المهم التأكد من أن اليرقات المنقولة للاختبار يجب أن يكون لها قدرة سباحة طبيعية ولا تشوهات. يمكن تضمين متغيرات أخرى، مثل تفضيل اللون، وتفضيل الضوء والظلام، وجميع الظلام، وحركات ذيل حمار وحشي، للإجابة على أسئلة إضافية حول السمية العصبية السلوكية للملوثات البيئية. إن حلول التعرض للـ BDE-47 هي سُمّية عصبية ولها إمكانية اضطراب الغدد الصماء، لذا تأكد من تجنب الاتصال المباشر بالبشرة.
