تمكن عملية الجراحة لدينا تحرير الجينات محددة من خلايا leptomeningeal لدراسة وظيفتها في العديد من الحالات الفسيولوجية والمرضية مثل النمو العصبي وانتشار التهاب السحايا البكتيري. لتقليل الضرر أثناء التسليم داخل الجمجمة من endoxifen ، نستخدم إبرة عازمة التي يمكن تأمينها ضد حافة السد من الجمجمة لمنعها من اختراق أعمق في الأنسجة. ويمكن استخدام هذا الإجراء للتحقيق في دور الجينات التي تعبر عن الخلايا اللينتومينية من خلال فقدان واكتساب تجارب الوظيفة.
ويمكن أيضا أن تعتمد لتتبع تدفق السائل النخاعي. سوف مظاهرة بصرية من هذه الطريقة ضمان تحديد ناجحة من موقع الحقن للحقن intracisternal وفهم كيفية تأمين الإبرة ضد عظم القذالي. تبدأ من خلال إعداد حقنة هاملتون مع إبرة مشطوفة قياس 30 للحقن.
استخدام ملقط لثني الإبرة إلى 30 درجة ثلاثة ملليمترات من طرف. المقبل, تخفيف endoxifen في 10٪ DMSO إلى تركيز واحد مليغرام لكل ملليلتر والردم الحقنة. تخدير الحيوان في غرفة ايزوفلوران.
ثم ضبط حامل رأس الماوس بحيث يكون لسان حال تقريبا في زاوية 30 درجة من سطح الجدول الجراحي وإصلاح رأس الحيوان على حامل. لتحسين إمكانية الوصول إلى ماغنا سيستيرنا، ضع جسم الحيوان عند حوالي 30 درجة من سطح الطاولة مع الرأس مائل للأسفل والذي سينشئ زاوية 120 درجة مع بقية الجسم ويمتد الجزء الخلفي من الرقبة لتسهيل الوصول إلى ماغنا سيستيرنا. مرة واحدة يتم وضع الحيوان بشكل صحيح، وتطبيق مرهم العيون، حلق الجزء الخلفي من رقبته، وتطهير المنطقة مع مناديل الكحول وبيتادين.
استخدم المقص الجراحي لعمل شق في خط الوسط يبدأ من مستوى العظم القذالي ويمتد من الخلف. فصل بلطف النسيج الضام السطحي وعضلات الرقبة عن طريق سحب جانبية من خط الوسط مع ملاقط تلميح غرامة والتي سوف تعرض غشاء دورال الإفراط في magna cisterna. ضع فاصل جراحي صغير لتمكين التصور للماجنا cisterna طوال العملية.
تحديد نهاية السد من عظم القذالي وإدراج إبرة عازمة سابقا تحت مباشرة. مرة واحدة وقد ثقب dura، والسماح غيض عازمة من إبرة لاختراق تحت السطح عن طريق سحب بلطف حقنة صعودا وموازيا لجسم الحيوان الذي سيضمن استقرار أفضل. حقن المركب ببطء لتجنب التداخل مع تدفق السائل النخاعي الطبيعي.
بعد الحقن، والسماح للإبرة بقية داخل لمدة دقيقة واحدة، ثم إزالته بعناية مع مساعدة من ملقط تلميح غرامة. أغلق الجلد ببضع قطرات من مادة السيانواكريلات اللاصقة، ثم ضعي مخدر موضعي في موقع الحقن. إزالة الحيوان من حامل ووضعها في قفص نظيف على وسادة التدفئة.
ثم تأكد من مراقبة الحيوان حتى يستعيد وعيه. الحقن داخل الجمجمة من endoxifen في الفئران المعدلة وراثيا التعبير عن Creer تحت المروج Cx30، مراسل الفلورسنت غير قابل للتكرير يسمح لإعادة الكومبتورة محددة من الخلايا اللينتومينانجية دون وضع علامة Cx30 المجاورة التعبير عن الخلايا الفلكية السطحية وparenchymal الفلكيات في القشرة. يستفيد بروتوكول الحقن هذا من الحركة الفسيولوجية للسائل النخاعي، لذا يتم توزيع محلول الإندوكسيفين في جميع أنحاء الفضاء تحت العنكبوتي للخلايا اللبانية التي تحتوي على خلايا ليمبتينجية لإعادة الكومبون بكفاءة فوق المصابيح الشمية والقشرة والمخيخ.
الحل لا يعبر حاجز السحا الدماغ أو يأتي في اتصال مع الخلايا الفلكية من parenchyma بدلا من الإدارة النظامية من خلال gavage الشفوي. تم تحديد إعادة دمج الخلايا العديمة بعد الحقن داخل الجمجمة من خلال تفاعل Pdgfr-Alpha في حين ظلت الخلايا الفلكية السطحية والبارينشيمية المعبرة عن Gfap غير مُصمَّم. عند محاولة هذه التجربة، من المهم تحديد موقع الحقن للتسليم داخل الجمجمة.
يوفر هذا العرض التوضيحي المرئي الدراية الفنية لتنفيذ الإجراء مع تقليل خطر إتلاف الأنسجة العصبية تحته. ويمكن إجراء دراسات الاستئصال الجيني باستخدام هذه التقنية للتحقيق في دور الخلايا اللينتومينية في تكوين الكورتيوجين وتنظيم تكوين السائل النخاعي وتحديد مواقع إضافية لنشر البكتيريا في الفضاء دون العنكبوتي.
