يعد إنشاء الأورام كجزء خلفي من العين أمرا صعبا. تتيح هذه الطريقة تحريض أورام سرطان الجلد المشيمية القابلة للتكاثر في الفئران ، والتصوير الحي لنمو الورم للتقييم. يستخدم هذا البروتوكول التصوير الحي OCT لتقييم موقع الأورام بالفعل في وقت تلقيح الخلايا السرطانية ، ومتابعة نمو الورم في الحيوانات الحية.
سرطان الجلد العنبي هو مرض مدمر مع ما يقرب من 50 ٪ من معدل ورم خبيث. يعد تطوير النماذج التجريبية أمرا أساسيا لتطوير الأبحاث التي تهدف إلى إمكانيات علاجية جديدة. ميزة هذه الطريقة هي أن التقييم الفوري لنجاح الحقن يسمح بالوصول إلى مجموعات الدراسة ذات الأورام المتجانسة ومتابعتها باستمرار عن طريق التصوير الحي.
لفحص تطور الورم. يتطلب الحقن في عيون الفأر الصغير الممارسة. تتيح لك القدرة على تصور الخلايا المحقونة تقييم نجاحك على الفور والتكرار مع المزيد من الفئران حسب الضرورة.
سيوضح الإجراء الدكتور ديميتري جابر من مختبر أبحاث طب العيون في مركز كابلان الطبي. للبدء ، ضع 0.4٪ مخدر موضعي للعين ، أوكسيبوبروكائين على كلتا عيني الفأر المخدر. ثم ضع موضعيا 0.5٪ تروبيكاميد على كلتا العينين لتوسيع حدقة العين ، متبوعا ب 1.4٪ هيدروكسي إيثيل السليلوز كمواد تشحيم لتجنب جفاف العينين.
راقب عين واحدة من الماوس تحت مجهر التشغيل. امسك الجفون مفتوحة بملقط معقم داخل العين. ثم امسك الملتحمة الصدغية العلوية واسحبها نحو وضع الأنف تحت الأرض.
تأمين هذا الموقف عن طريق عقد الملتحمة النسيان طوال العملية. باستخدام طرف إبرة قياس 30 ، قم بعمل محيط ملتحمة صغير في المنطقة الصدغية الظهرية حوالي واحد إلى ملليمترين خلف الطرف. إزالة كبسولة الأوتار الزائدة من فتحة الصفاق.
أدخل طرف الإبرة لاختراق الصلبة لإنشاء مسار في الفضاء تحت المشيمية حتى يظهر اللون البني للمشيمية من خلال المادة البيضاء المكشوفة للصلب. قم بتحميل الخلايا في حقنة هاميلتون زجاجية معقمة سعة 10 ميكرولتر مثبتة بإبرة حادة قياس 32 ملتوية بزاوية 45 درجة. أدخل إبرة المحقنة المحملة حوالي مليمترين في القناة التي تم إنشاؤها ، وحقن ميكرولتر من تعليق الخلية.
ثبت الإبرة في مكانها بعد الحقن لمدة ثانيتين إلى ثلاث ثوان حتى يتم التخلص من كل السوائل. قم بإزالة الإبرة عن طريق سحبها برفق لتجنب التسرب من المسالك. مباشرة بعد تلقيح خلايا سرطان الجلد ، لاحظ العين المحقونة للحيوان عن طريق مسح OCT.
بناء على عمليات الفحص ، قم بتصنيف انفصال الشبكية أو أنماط RD وفقا لثلاث فئات RD المحلية أو التسرب إلى الجسم الزجاجي أو RD الممتد. افتح برنامج تحليل تجزئة OCT للتنبؤ بحجم الورم بناء على ارتفاع RD. قم بقياس ارتفاع RD المحلي في عمليات فحص OCT ، وصنفها إلى ثلاث مجموعات. في مرحلة ما بعد الجراحة ، ضع 0.3٪ من أوفلوكساسين موضعيا.
يصور هذا الشكل التنبؤ القائم على OCT لنمو الورم بعد حقن الخلايا تحت المشيمية. أظهرت الفئران ثلاثة أنماط من RD ، البؤري ، التسرب إلى الجسم الزجاجي ، و RD الممتد. كان هناك ارتباط بين نمط RD مباشرة بعد الحقن ، وتوطين الأورام بعد خمسة أيام من الحقن. ارتبط RD البؤري بنمو الخلايا السرطانية التي اقتصرت على المشيمية.
ومع ذلك ، فإن ملاحظة الخلايا في الجسم الزجاجي بعد الحقن في الحيوانات التي تظهر RD البؤري تشير إلى نمو الورم في التجويف الزجاجي والمشيمية. عندما لوحظ RD الممتد بعد الحقن ، تم تفريق الأورام في جميع أنحاء المشيمية والجسم الزجاجي بعد خمسة أيام. يمكن تقسيم نطاق أحجام الورم المستحثة في هذا النموذج إلى صغيرة ومتوسطة وكبيرة.
تظهر هنا صور تمثيلية لقياس OCT لارتفاع RD بعد الحقن ، وصورة قاع العين المقابلة ، ومسح OCT أفقي لارتفاع الورم وعرضه في اليوم الخامس بعد الحقن ، وصورة قاع العين المقابلة له ، وقسم العين الملطخة H&E المقابل الذي يوضح قياسات الورم المماثلة. يتم عرض قياسات حجم الورم للفئران التي قدمت RD صغيرة أو متوسطة أو كبيرة مباشرة بعد حقن الخلايا هنا. يمكن أن يؤثر ضبط قوة الحقن على حجم الورم وموقعه.
من المهم معايرة هذا وتقييم نمط انفصال الشبكية المستحث بواسطة OCT بعد الحقن. يعد التصوير المباشر لأورام المشيمية أداة تجريبية مهمة تسمح بفحص تأثير العوامل المختلفة أو العلاجات المحتملة على تطور الورم.
