الزرع الجراحي للخلايا السرطانية في الحبل الشوكي للفئران

يتمثل نطاق بحثنا في تطوير نموذج الفئران للورم الدبقي في الحبل الشوكي. نهدف إلى الإجابة على أسئلة مثل ، كيف يمكن تحسين قابلية تكرار النموذج؟ ما هي التقنيات الجراحية المحسنة لزرع الخلايا السرطانية؟

وكيف يمكن أن يساعد هذا النموذج في تطوير علاج فعال للورم الدبقي في الحبل الشوكي؟ تكمن التحديات التجريبية الحالية بشكل أساسي في ثلاثة جوانب. أولا ، من الصعب ممارسة تحديد موضع الحقن في الحبل الشوكي.

ثانيا ، يعد تقليل انقسام الخلايا بعد الحقن أمرا بالغ الأهمية. أخيرا ، يتطلب تقليل الضرر المادي للحبل الشوكي أثناء العملية مهارات تشغيلية محسنة. عالج بروتوكولنا الفجوة البحثية في نماذج الورم الدبقي في الحبل الشوكي الفئران الحالية.

غالبا ما تفتقر النماذج الحالية إلى قابلية التكاثر والتحسين في التقنيات الجراحية. نهدف إلى تعزيز ذلك من خلال تطوير نموذج أكثر موثوقية بطرق حقن دقيقة وتقليل الضرر المادي لتعزيز البحث واستكشاف العلاج. للبدء ، قم بزراعة خط خلايا GL261-luciferase في DMEM الكامل حتى مرحلة النمو اللوغاريتمي.

ثم اغسل الخلايا السرطانية مرتين باستخدام PBS معقم واحتضانه بمحلول 0.05٪ تريبسين EDTA لمدة ثلاث دقائق. انقل تعليق الخلية الناتج إلى أنبوب جديد وجهاز طرد مركزي عند 500 جرام لمدة خمس دقائق. تخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة وأعد تعليق الحبيبات في PBS.

بعد ذلك ، قم بتلطيخ الخلايا باللون الأزرق وعد الخلايا القابلة للحياة باستخدام عداد الخلايا. تحضير معلق الخلية بتركيز خمسة في 10 إلى قوة ست خلايا لكل مليلتر في PBS المعقم. للبدء ، ضع الفأر المخدر على طاولة جراحية.

كشف الجلد وإعداد نافذة جراحية نظيفة. بعد حلق الشعر من منطقة الرقبة الظهرية ، قم بتطهير الجلد بمحلول اليود ، متبوعا بالمسح بالكحول بنسبة 75٪ لإزالة اليود. ضع الفأر بحيث يكون جانبه الظهري متجها لأعلى وقم بتثبيت الأطراف على الطاولة باستخدام شريط طبي.

ضع وسادة شاش بسمك واحد إلى سنتيمترين أسفل منطقة الرقبة للحصول على الدعم لتوفير وصول أفضل إلى الحبل الشوكي. بعد ذلك ، باستخدام مشرط وشفرة جراحية ، قم بعمل شق طولي حوالي 1.5 سم على طول الرقبة. افصل عضلات الرقبة برفق باستخدام تشريح حاد ، مع تجنب إصابة أي أوعية دموية.

الآن قم بتشريح العضلات المجاورة لفقرات عنق الرحم بعناية لفضح العملية الشوكية للفقر العنقي السابع ، وهي معلم عظمي مميز في الفئران. اضبط نقطة البزل على 0.5 إلى 0.9 ملم من خط الوسط للعمود الفقري. اشطف حقنة إبرة مسطحة سعة 10 ميكرولتر جيدا باستخدام PBS المعقم مرتين إلى ثلاث مرات.

اسحب ميكرولترين من تعليق الخلية السرطانية في المحقنة دون إدخال فقاعات هواء. قم بتثبيت العملية الشائكة للفقر العنقي عن طريق الإمساك بها برفق ورفعها باستخدام الملقط. استخدم إبرة مشطوفة لثقب الأم الجافية.

ثم قم بالتبديل إلى حقنة إبرة مسطحة لحقن الخلايا السرطانية. بعد الحقن ، أغلق شق الجلد عن طريق الخياطة بخياطة 3/0 من النايلون. بعد 10 أيام من الجراحة ، أظهرت الفئران التي تم تلقيحها بخلايا GL261-luciferase ضعفا في الأطراف الخلفية وفقدانا كبيرا في الوزن بنسبة 20٪ تقريبا مع انخفاض معدل البقاء على قيد الحياة ، وتطورت إلى شلل الأطراف الخلفية مع الأورام ، والتي تم تأكيدها من خلال التصوير الحيوي والتصور الإجمالي والفحص النسيجي.

أظهر نموذج الورم الميلانيني B16-F10 تطورا مشابها للورم GL261 مع التصوير الحيوي والتصور الإجمالي ، مما يؤكد إنشاء ورم الحبل الشوكي جنبا إلى جنب مع فقدان الوزن والوفيات في غضون 18 يوما. أظهر تحليل ما بعد الجراحة أن إصابات الحبل الشوكي الخفيفة تحل في غضون ثلاث ساعات في 54 فأرا وإصابات متوسطة في ثلاثة فئران تحل في غضون ثلاثة أيام. أظهرت الفئران التي تعاني من إصابات متوسطة خسارة أكبر في وزن الجسم مقارنة بتلك التي تعاني من إصابات خفيفة.