فحص الجزيئات الصغيرة واختبار السمية في يرقات الزرد في المراحل المبكرة

للبدء ، اجمع أجنة الزرد في المراحل المبكرة بعد ثلاثة أيام من الإخصاب في طبق بتري. باستخدام ماصة صغيرة سعة 1000 ميكرولتر مضبوطة على حجم 100 ميكرولتر، انقل جنينا واحدا مفقس صحي المظهر إلى كل بئر من لوح 96 بئر. الآن ، قم بإدخال الكمية اللازمة من مادة الاختبار الكيميائية في كل بئر من صفيحة 12 بئر.

ثم اضبط الحجم الإجمالي على 2.4 مل مع E3 متوسط. قم بإعداد التحكم في السيارة وفقا للمذيب المستخدم لإذابة مادة كيميائية لاختبار المخزون. باستخدام ماصة سعة 200 ميكرولتر، قم بإزالة أي محلول E3 موجود من كل بئر من لوحة البئر 96.

استخدم ماصة صغيرة ثماني القنوات لاستبدالها ب 100 ميكرولتر من وسط الاختبار المحضر لكل تركيز. تأكد من اختبار ما مجموعه 24 يرقة لكل تركيز. بعد 24 ساعة ، استخدم مجهر ضوئي ستيريو لإجراء التسجيل المورفولوجي.

قم بتسجيل التشكل باستخدام طريقة ثنائية ، حيث يشير الغائب إلى التشكل الطبيعي ويشير الحاضر إلى وجود خلل مورفولوجي. عند اكتمال التسجيل ، قم بإزالة 50 ميكرولترا من الوسط من كل بئر. استبدله ب 50 ميكرولتر من وسط الاختبار الطازج.

قم بإزالة وتسجيل أي يرقات ميتة ، ثم احتضان اليرقات عند 28.5 درجة مئوية مع دورة ضوء 14 ساعة و 10 ساعات من الظلام. أظهرت أسماك الزرد بعد خمسة أيام من الإخصاب أنماطا ظاهرية متنوعة بعد يومين من التعرض للأدوية. لوحظت أسماك الحمار الوحشي غير المتأثرة كالمعتاد ، بينما كانت الوذمة التامور الخفيفة واضحة في بعض الأسماك.

لوحظ وذمة التامور الشديدة ، مصحوبة بنزيف صفار البيض وامتداد صفار البيض في حالات أخرى. كما لوحظ تأخر التطور مع انخفاض التصبغ ومثانة السباحة والطول الإجمالي. تضمنت الأنماط الظاهرية الإضافية أسماك الزرد ذات الصفار المتورم والزعنفة الذيلية الملتوية ، والزعنفة الذيلية الغائبة ، والحبل الظهري المنحني.

أظهرت الحالات الشديدة اقتطاعا ووفيات مع نخر.