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Basic Principles for Purification Using Supercritical Fluid Chromatography - ADVERTISEMENT

Although supercritical fluid chromatography (SFC) is not a new technique, preparative SFC is becoming increasingly more popular with advances in ...

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&#x79BB;&#x5B50;&#x5BF9;&#x53CD;&#x76F8;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5206;&#x6790;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#xFF1A; &#x4FDD;&#x7559;&#x9884;&#x6D4B;&#x3002;

An ion-pair reversed-phase HPLC method was evaluated for the separation of synthetic oligonucleotides. Mass transfer in the stationary phase was found to be a major factor contributing to peak broadening on porous C18 stationary phases. A small sorbent particle size (2.5 microm), elevated temperature and a relatively slow flow-rate were utilized to enhance mass transfer. A short 50 mm column allows for an efficient separation up to 30mer oligonucleotides. The separation strategy consists of a shallow linear gradient of organic modifier, optimal initial gradient strength, and the use of an ion-pairing buffer. The triethylammonium acetate ion-pairing mobile phases have been traditionally used for oligonucleotide separations with good result. However, the oligonucleotide retention is affected by its nucleotide composition. We developed a mathematical model for the prediction of oligonucleotide retention from sequence and length. We used the model successfully to select the optimal initial gradient strength for fast HPLC purification of synthetic oligonucleotides. We also utilized ion-pairing mobile phases comprised of triethylamine (TEA) buffered by hexafluoroisopropanol (HFIP). The TEA-HFIP aqueous buffers are useful for a highly efficient and less sequence-dependent separation of heterooligonucleotides.

Ion-pair reversed-phase high-performance liquid chromatography analysis of oligonucleotides: retention prediction.

Une m&eacute;thode de CLHP en phase inverse paire d&#39;ions a &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;e pour la s&eacute;paration des oligonucl&eacute;otides synth&eacute;tiques. Transfert de masse dans la phase stationnaire s&#39;est av&eacute;r&eacute; un facteur majeur contribuant &agrave; pic &eacute;largir sur phases stationnaires poreuses de C18. Une taille de petites particules de sorbant (2,5 microm), temp&eacute;rature &eacute;lev&eacute;e et un faible d&eacute;bit ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s pour am&eacute;liorer le transfert de masse. Une colonne courte 50 mm permet une s&eacute;paration efficace jusqu&#39;&agrave; des oligonucl&eacute;otides 30mer. La strat&eacute;gie de s&eacute;paration est compos&eacute; d&#39;un d&eacute;grad&eacute; lin&eacute;aire peu profond du modificateur organique, la force de gradient initial optimal et l&#39;utilisation d&#39;un tampon de paires d&#39;ions. Les tri&eacute;thylammonium ac&eacute;tate paires d&#39;ions phases mobiles ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s traditionnellement pour les s&eacute;parations d&#39;oligonucl&eacute;otides avec bon r&eacute;sultat. Toutefois, la r&eacute;tention d&#39;oligonucl&eacute;otide est affect&eacute;e par sa composition en nucl&eacute;otides. Nous avons d&eacute;velopp&eacute; un mod&egrave;le math&eacute;matique pour la pr&eacute;diction de r&eacute;tention oligonucl&eacute;otidiques de s&eacute;quence et de la longueur. Avec succ&egrave;s, nous avons utilis&eacute; le mod&egrave;le pour s&eacute;lectionner la force de gradient initiale optimale pour rapide purification par CLHP des oligonucl&eacute;otides synth&eacute;tiques. Nous avons utilis&eacute; aussi des paires d&#39;ions des phases mobiles de tri&eacute;thylamine (TEA) tamponn&eacute;e par hexafluoroisopropanol (HFIP). Les tampons de th&eacute;-HFIP aqueuses sont utiles pour une s&eacute;paration tr&egrave;s efficace et moins d&eacute;pendante de la s&eacute;quence de heterooligonucleotides.

Analyse de chromatographie liquide &agrave; haute performance en phase inverse de paire d&#39;ions d&#39;oligonucl&eacute;otides : pr&eacute;diction de la r&eacute;tention.

Ionenpaar-Umkehrphasen-Hochleistungs-Fl&#xFC;ssigkeits-Chromatographie-Analyse von Oligonukleotiden: Retention Vorhersage.

Un metodo HPLC di ion-coppia fase inversa &egrave; stato valutato per la separazione dei oligonucleotides sintetici. Trasferimento di massa in fase stazionaria &egrave; stato trovato per essere un importante fattore che contribuisce a picco ampliando su porose fasi stazionarie C18. Una dimensione piccola particella assorbente (2.5 microm), temperatura elevata e una portata relativamente lenta sono state utilizzate per migliorare il trasferimento di massa. Una colonna corta 50 mm consente un&#39;efficiente separazione fino a 30mer oligonucleotidi. La strategia di separazione consiste di una sfumatura lineare bassa di modificatore biologico, forza di gradiente iniziale ottima e l&#39;uso di un buffer di abbinamento-ione. Il triethylammonium acetato abbinamento ion-fasi mobili sono state tradizionalmente usate per le separazioni del oligonucleotide con buoni risultati. Tuttavia, la ritenzione del oligonucleotide &egrave; influenzata dalla sua composizione nucleotidica. Abbiamo sviluppato un modello matematico per la previsione di ritenzione del oligonucleotide sequenza e lunghezza. Abbiamo usato il modello con successo per selezionare la forza di gradiente iniziale ottima per purificazione HPLC veloce dei oligonucleotides sintetici. Abbiamo anche utilizzato abbinamento-ione mobile fasi composto da trietilammina (t&egrave;) tamponato da hexafluoroisopropanol (HFIP). I buffer acquosi t&egrave;-HFIP sono utili per una separazione altamente efficiente e meno dipendente dalla sequenza di heterooligonucleotides.

Analisi cromatografia liquida ad alte prestazioni di controfase Ion-coppia di oligonucleotidi: previsione di ritenzione.

&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5BFE;&#x9006;&#x76F8; hplc &#x5408;&#x6210;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7269;&#x8CEA;&#x79FB;&#x52D5;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x591A;&#x5B54;&#x8CEA; C18 &#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x3067;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x53CE;&#x7740;&#x5264;&#x7C92;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA; (2.5 microm&#xFF09;&#x3001;&#x9AD8;&#x6E29;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x9045;&#x3044;&#x6D41;&#x91CF;&#x7269;&#x8CEA;&#x79FB;&#x52D5;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6D3B;&#x304B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x77ED;&#x3044; 50 mm &#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x96E2; 30mer &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x307E;&#x3067;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x96E2;&#x6226;&#x7565;&#x306E;&#x6709;&#x6A5F;&#x4FEE;&#x98FE;&#x5B50;&#x3001;&#x6700;&#x9069;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x52FE;&#x914D;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3068;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5BFE;&#x306E;&#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x6D45;&#x3044;&#x7DDA;&#x5F62;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79FB;&#x52D5;&#x76F8;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5BFE; triethylammonium &#x9162;&#x9178;&#x4F1D;&#x7D71;&#x7684;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x826F;&#x3044;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4FDD;&#x6301;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5869;&#x57FA;&#x7D44;&#x6210;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4FDD;&#x6301;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x9577;&#x3055;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6570;&#x7406;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x7DCF;&#x5408;&#x7684;&#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x9AD8;&#x901F;&#x9AD8;&#x901F;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x7CBE;&#x88FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x521D;&#x671F;&#x52FE;&#x914D;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30E2;&#x30D0;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x76F8;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5BFE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3; &#xFF08;&#x8336;&#xFF09; hexafluoroisopropanol (hfip &#x6EB6;&#x5A92;) &#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8336; hfip &#x6EB6;&#x5A92;&#x306E;&#x6C34;&#x69D8;&#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x306F; heterooligonucleotides &#x306E;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x3068;&#x4F4E;&#x3044;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4FBF;&#x5229;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5BFE;&#x9006;&#x76F8;&#x9AD8;&#x901F;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;: &#x4FDD;&#x6301;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3002;

&#xC774;&#xC628; &#xC30D; &#xBC18;&#xC804; &#xC0C1; HPLC &#xBC29;&#xBC95; &#xD569;&#xC131; oligonucleotides &#xBD84;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xBC1B;&#xC558;&#xB2E4;. &#xACE0;&#xC815; &#xC704;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300;&#xB7C9; &#xC804;&#xC1A1; &#xD53C;&#xD06C; &#xB2E4;&#xACF5;&#xC131; C18 &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xD655;&#xB300;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xB420; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC740; sorbent &#xC785;&#xC790; &#xD06C;&#xAE30; (2.5 microm), &#xC628;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC2B9;&#xB41C; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB290;&#xB9B0; &#xC720;&#xB7C9; &#xB300;&#xB7C9; &#xC804;&#xC1A1; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9E7;&#xC740; 50mm &#xC5F4; 30mer oligonucleotides &#xCD5C;&#xB300; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xAE30; &#xD55C;&#xC815;&#xC790;, &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xAC15;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC774;&#xC628; &#xC30D; &#xBC84;&#xD37C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xC21C; &#xC120;&#xD615; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC804;&#xB7B5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. Triethylammonium &#xCD08; &#xC0B0; &#xC774;&#xC628; &#xC30D; &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC88B;&#xC740; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; oligonucleotide &#xBD84;&#xD310; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5B4; &#xC654;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; oligonucleotide &#xBCF4;&#xC874;&#xC758; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; oligonucleotide &#xBCF4;&#xC874; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC640; &#xAE38;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xCE21;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xD559;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD569;&#xC131; oligonucleotides&#xC758; &#xBE60;&#xB978; HPLC &#xC815;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xAC15;&#xB3C4; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; triethylamine (&#xCC28;) hexafluoroisopropanol (HFIP)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC84;&#xD37C;&#xB9C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xC774;&#xC628; &#xC30D; &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xD65C;&#xC6A9;. &#xCC28; HFIP &#xC218;&#xC131; &#xBC84;&#xD37C;&#xB294; heterooligonucleotides&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xB35C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC885;&#xC18D; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC720;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Oligonucleotides&#xC758; &#xC774;&#xC628; &#xC30D; &#xBC18;&#xC804; &#xC0C1; &#xACE0;&#xC131;&#xB2A5; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xBD84;&#xC11D;: &#xBCF4;&#xC874; &#xC608;&#xCE21;.

Se evalu&oacute; un m&eacute;todo HPLC de fase inversa ion pares para la separaci&oacute;n de oligonucle&oacute;tidos sint&eacute;ticos. Transferencia de masa en la fase estacionaria result&oacute; para ser un factor importante que contribuye al pico ampliar en fases estacionarias de C18 porosas. Un tama&ntilde;o de peque&ntilde;a part&iacute;cula absorbente (2,5 microm), elevada temperatura y caudal relativamente lento se utilizaron para mejorar la transferencia de masa. Una columna de 50 mm corto permite una separaci&oacute;n eficiente hasta oligonucle&oacute;tidos 30mer. La estrategia de separaci&oacute;n consiste en un degradado lineal superficial de modificador org&aacute;nico, fuerza del gradiente inicial &oacute;ptima y el uso de un tamp&oacute;n de emparejamiento de ion. Las Trietilamonio acetato emparejamiento de ion fases m&oacute;viles se han utilizado tradicionalmente para separaciones de oligonucle&oacute;tidos con buen resultado. Sin embargo, la retenci&oacute;n del oligonucle&oacute;tido es afectada por su composici&oacute;n de nucle&oacute;tidos. Hemos desarrollado un modelo matem&aacute;tico para la predicci&oacute;n de la retenci&oacute;n de oligonucle&oacute;tidos de secuencia y duraci&oacute;n. Se utiliz&oacute; con &eacute;xito el modelo para seleccionar la fuerza del gradiente inicial &oacute;ptima para la purificaci&oacute;n de HPLC r&aacute;pido de oligonucle&oacute;tidos sint&eacute;ticos. Tambi&eacute;n utilizamos el emparejamiento de ion fases m&oacute;viles de trietilamina (t&eacute;) protegido por hexafluoroisopropanol (HFIP). Los buffers acuosos de t&eacute;-HFIP son &uacute;tiles para una separaci&oacute;n muy eficiente y menos dependiente de la secuencia de heterooligonucleotides.

An&aacute;lisis de cromatograf&iacute;a l&iacute;quida de alto rendimiento de fase inversa ion-par de oligonucle&oacute;tidos: predicci&oacute;n de la retenci&oacute;n.

&#x79BB;&#x5B50;&#x5BF9;&#x53CD;&#x76F8;&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5; (HPLC RP) &#x88AB;&#x5229;&#x7528;&#x8D1F;&#x79BB;&#x5B50;&#x7535;&#x55B7;&#x96FE;&#x98DE;&#x884C;&#x65F6;&#x95F4;&#x8D28;&#x8C31; (ESI-&#x98DE;&#x884C;&#x65F6;&#x95F4;&#x8D28;&#x8C31;) &#x5206;&#x6790;&#x672C;&#x673A;&#x548C;&#x5316;&#x5B66;&#x4FEE;&#x9970;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x914D;&#x5408;&#x3002;&#x5728;&#x6324;&#x6EE1;&#x4E86;&#x591A;&#x5B54; C(18) &#x8131;&#x786B;&#x5242; 2.5 microm &#x7C92;&#x5B50;&#x5927;&#x5C0F;&#x4E0E; 140 A.&#x5E73;&#x5747;&#x5B54;&#x9699;&#x76F4;&#x5F84; 1.0 x 50 mm &#x5217;&#x4E0A;&#x6267;&#x884C;&#x5206;&#x79BB;&#x8FD9;&#x5C06;&#x6700;&#x5927;&#x5316;&#x7684;&#x8272;&#x8C31;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x8D28;&#x8C31;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x4F7F;&#x7528;&#x542B;&#x4E09;&#x4E59;&#x80FA;&#x548C; 1,1,1,3,3,3-&#x6C34;&#x5408;&#x516D;-2-&#x4E19;&#x9187;&#x7532;&#x9187;&#x68AF;&#x5EA6;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x7F13;&#x51B2;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x88AB;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;ESI-&#x98DE;&#x884C;&#x65F6;&#x95F4;&#x8D28;&#x8C31;&#x8C03;&#x8C10;&#x53C2;&#x6570;&#x4E5F;&#x88AB;&#x4F18;&#x5316;&#x4EE5;&#x5C3D;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11;&#x5728;&#x6E90;&#x788E;&#x7247;&#xFF0C;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6700;&#x4F73;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x5EA6;&#x3002;&#x672C;&#x673A;&#x3001; &#x786B;&#x4EE3;&#x78F7;&#x9178;&#x548C;&#x5BCC;&#x542B;&#x9E1F;&#x560C;&#x5464;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x7531; LC/&#x5973;&#x58EB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9650;&#x5236;&#x4E86; 125 ppm &#x5E73;&#x5747;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x7CBE;&#x5EA6; sub-picomole &#x7EA7;&#x522B;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x3002;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684; LC/MS &#x5206;&#x6790;&#x8D77;&#x6765;&#x5230; 110mer &#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x78B1;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x5F15;&#x7528;&#x7684;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x654F;&#x611F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4E0E;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF; (UV) &#x68C0;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684; UV MS &#x5B9A;&#x91CF; &#xFF08;UV&#xFF09; &#x548C;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x53CA;&#x5176;&#x6545;&#x969C;&#x5E8F;&#x5217;&#x7247;&#x6BB5;/&#x4EE3;&#x8C22;&#x7269;&#x8868;&#x5F81; (MS)&#x3002;

&#x672C;&#x673A;&#x548C;&#x5316;&#x5B66;&#x4FEE;&#x9970;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4E32;&#x8054;&#x79BB;&#x5B50;&#x5BF9;&#x53CD;&#x76F8;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;/&#x7535;&#x55B7;&#x96FE;&#x7535;&#x79BB;&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Ion-pair reversed-phase high-performance liquid chromatography (IP-RP-HPLC) was utilized in tandem with negative-ion electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry (ESI-TOFMS) for the analysis of native and chemically modified oligonucleotides. Separation was performed on a 1.0 x 50 mm column packed with porous C(18) sorbent with a particle size of 2.5 microm and an average pore diameter of 140 A. A method was developed which maximizes both chromatographic separation and mass spectrometric sensitivity using an optimized buffer system containing triethylamine and 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol with a methanol gradient. The ESI-TOFMS tuning parameters were also optimized in order to minimize in-source fragmentation and achieve the best sensitivity. Analyses of native, phosphorothioate, and guanine-rich oligonucleotides were performed by LC/MS. Detection limits were at sub-picomole levels with an average mass accuracy of 125 ppm. The described method allowed for the LC/MS analysis of oligonucleotides up to 110mer in length with little alkali cation adduction. Since sensitive detection of oligonucleotides was achieved with ultraviolet (UV) detection, we utilized a combination of UV-MS for quantitation (UV) and characterization (MS) of oligonucleotides and their failure sequence fragments/metabolites.

Analysis of native and chemically modified oligonucleotides by tandem ion-pair reversed-phase high-performance liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry.

Chromatographie liquide &agrave; haute performance en phase inverse paire d&#39;ions (IP-RP-HPLC) a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e en tandem avec les ions n&eacute;gatifs d&#39;ionisation de temps de vol spectrom&eacute;trie de masse electrospray (ESI-TOFMS) pour l&#39;analyse des oligonucl&eacute;otides natifs et modifi&eacute;s chimiquement. La s&eacute;paration a &eacute;t&eacute; faite sur une colonne de 1,0 x 50 mm, remplie de C(18) poreux absorbants avec une granulom&eacute;trie de microm 2,5 et un diam&egrave;tre moyen de pore de 140 A. Une m&eacute;thode a &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute;e qui maximise la s&eacute;paration chromatographique et sensibilit&eacute; par spectrom&eacute;trie de masse en utilisant un syst&egrave;me de tampon optimis&eacute;e contenant de la tri&eacute;thylamine et 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol avec un gradient de m&eacute;thanol. Les param&egrave;tres de r&eacute;glage ESI-TOFMS on a aussi optimis&eacute;s afin de minimiser la fragmentation &agrave; la source et de r&eacute;aliser la meilleure sensibilit&eacute;. Analyses de native phosphorothioate et riche en guanine oligonucl&eacute;otides ont &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;es par LC/MS. d&eacute;tection limites &eacute;taient &agrave; des niveaux de sub-picomole avec une pr&eacute;cision de masse moyenne de 125 ppm. La m&eacute;thode d&eacute;crite autoris&eacute;e pour l&#39;analyse de LC/MS d&#39;oligonucl&eacute;otides vers le haut &agrave; 110mer en longueur avec little adduction de cations alcalins. &Eacute;tant donn&eacute; la sensibilit&eacute; de d&eacute;tection des oligonucl&eacute;otides a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e avec d&eacute;tection dans l&#39;ultraviolette (UV), nous avons utilis&eacute; une combinaison de UV-MS de quantification (UV) et de caract&eacute;risation (MS) des oligonucl&eacute;otides et leurs fragments de s&eacute;quence &eacute;chec/m&eacute;tabolites.

Analyse des oligonucl&eacute;otides natifs et modifi&eacute;s chimiquement par paire d&#39;ions en phase inverse haute performance chromatographie en phase liquide/electrospray ionisation spectrom&eacute;trie de masse.

Analyse der nat&#xFC;rlichen und chemisch modifizierte Oligonukleotide, die durch Tandem-Ionenpaar-Umkehrphasen-Hochleistungs-Fl&#xFC;ssigchromatographie / Elektrospray-Ionisations-Massenspektrometrie.

Coppia-ioni ad alte prestazioni liquido cromatografia in controfase (IP-RP-HPLC) &egrave; stato utilizzato in tandem con ioni negativi ionizzazione a tempo di volo electrospray (ESI-TOFMS) per l&#39;analisi dei oligonucleotides nativo e chimicamente modificati. Separazione &egrave; stata eseguita su una colonna di 1.0 x 50 mm imballata con C(18) porosa assorbente con una dimensione di particella di 2.5 microm e un diametro medio dei pori di 140 A. &Egrave; stato sviluppato un metodo che massimizza sia separazione cromatografica e sensibilit&agrave; di spettrometria di massa utilizzando un sistema ottimizzato tampone contenente trietilammina e 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanolo con una sfumatura di metanolo. I parametri di ottimizzazione ESI-TOFMS inoltre sono stati ottimizzati al fine di ridurre al minimo la frammentazione in origine e ottenere la miglior sensibilit&agrave;. Analisi dei nativi, fosforotioato e ricco di guanina oligonucleotidi sono state effettuate dal rilevamento di LC/MS limiti erano a livelli sub-picomole con un&#39;accuratezza di massa media di 125 ppm. Il metodo descritto consentito per l&#39;analisi di LC/MS dei oligonucleotides fino a 110mer in lunghezza con poco adduzione di cationi alcalini. Poich&eacute; la rilevazione sensibile dei oligonucleotides &egrave; stato raggiunto con il rilevamento di raggi ultravioletto (UV), abbiamo utilizzato una combinazione di UV-MS per la quantificazione (UV) e caratterizzazione (MS) di oligonucleotidi e loro mancata sequenza frammenti o metaboliti.

Analisi dei oligonucleotides nativo e chimicamente modificati da tandem ion-coppia fase inversa ad alte prestazioni liquido cromatografia/ionizzazione electrospray.

&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5BFE;&#x9006;&#x76F8;&#x9AD8;&#x901F;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; (IP &#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF09; &#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x3067;&#x8CA0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x98DB;&#x884C;&#x6642;&#x9593;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5; (ESI TOFMS&#xFF09; &#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3068;&#x5316;&#x5B66;&#x4FEE;&#x98FE;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x591A;&#x5B54;&#x8CEA; C(18) 2.5 microm &#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068;&#x3001;&#x5E73;&#x5747;&#x7D30;&#x5B54;&#x5F84; 140 &aring; &#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x5264;&#x3092;&#x5145;&#x586B; 1.0 &times; 50 mm &#x30AB;&#x30E9;&#x30E0;&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8; &#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x3068; 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB; &#x30E1;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6700;&#x5927;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ESI TOFMS &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x65AD;&#x7247;&#x5316;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x6291;&#x3048;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3082;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30ED;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30F3; &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;LC &#x3055;&#x3093; 125 ppm &#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x8CEA;&#x91CF;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3067; sub-picomole &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E; LC/MS &#x5206;&#x6790;&#x7528;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x5C11;&#x3057;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5185;&#x8EE2;&#x3068;&#x9577;&#x3055;&#x3067; 110mer &#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x691C;&#x51FA;&#x3068;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA; (UV) &#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F; UV MS &#x306E;&#x5B9A;&#x91CF; (UV) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5931;&#x6557;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;/&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; (MS) &#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3068;&#x5316;&#x5B66;&#x4FEE;&#x98FE;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5BFE;&#x9006;&#x76F8;&#x9AD8;&#x901F;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;/&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x89E3;&#x6790;

&#xC774;&#xC628; &#xC30D; &#xBC18;&#xC804; &#xC0C1; &#xACE0;&#xC131;&#xB2A5; &#xC561;&#xCCB4; &#xCC29; &#xC0C9; &#xC778;&#xC1C4;&#xAE30; (IP-&#xB77C;&#xC778;&#xB780;&#xD2B8;-HPLC) &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xC628; &#xBD84;&#xBB34; &#xC774;&#xC628;&#xD654; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xBE44;&#xD589; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (ESI TOFMS) &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC218;&#xC815; oligonucleotides &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xACF5;&#xC131; C(18) sorbent 140 &#xB300;&#xB2F5;&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xAE30; &#xACF5; &#xC9C1;&#xACBD; 2.5 microm&#xC758; &#xC785;&#xC790; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; &#xD3EC;&#xC7A5; 1.0 x 50 m m &#xC5F4;&#xC5D0; &#xC218;&#xD589; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xCD5C;&#xB300;&#xD654; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8; &#xBD84;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xB300;&#xB7C9; spectrometric &#xAC10;&#xB3C4; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; triethylamine&#xC640; 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol &#xBA54;&#xD0C4;&#xC62C; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xBC84;&#xD37C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. ESI TOFMS &#xD29C;&#xB2DD; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xC18C;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC870;&#xAC01;&#xD654;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xB2EC;&#xC131; &#xB610;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C;, phosphorothioate, &#xBC0F; guanine &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; oligonucleotides&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; LC/&#xC591; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC81C;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4; &#xD3C9;&#xADE0; 125 p p m&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; &#xB300;&#xB7C9; sub-picomole &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC124;&#xBA85;&#xB41C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC57D;&#xAC04; &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC608;&#xC99D;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE38;&#xC774;&#xAC00; 110mer&#xC5D0; &#xCD5C;&#xB300; oligonucleotides LC/MS &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9;. Oligonucleotides&#xC758; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC790;&#xC678;&#xC120; (UV) &#xAC80;&#xCD9C; &#xB2EC;&#xC131;, &#xC774;&#xD6C4; &#xC6B0;&#xB9AC; oligonucleotides &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC2E4;&#xD328; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC01;/metabolites&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; (MS)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xB7C9; (UV) &#xC790;&#xC678;&#xC120; MS&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9;.

&#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC218;&#xC815; oligonucleotides &#xD0E0;&#xB364; &#xC774;&#xC628; &#xC30D; &#xBC18;&#xC804; &#xC0C1; &#xACE0;&#xC131;&#xB2A5; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;/&#xBD84;&#xBB34; &#xC774;&#xC628;&#xD654; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D;.

Ion-par fase inversa alta cromatograf&iacute;a l&iacute;quida (IP-RP-HPLC) fue utilizada en t&aacute;ndem con iones negativos electrospray ionization tiempo de vuelo mass spectrometry (ESI-TOFMS) para el an&aacute;lisis de oligonucle&oacute;tidos nativas y qu&iacute;micamente modificados. Separaci&oacute;n se realiz&oacute; en una columna de 1.0 x 50 mm provista C(18) poroso absorbente con un tama&ntilde;o de part&iacute;cula de 2.5 microm y un di&aacute;metro de poro promedio de 140 A. Se desarroll&oacute; un m&eacute;todo que maximiza la separaci&oacute;n cromatogr&aacute;fica tanto sensibilidad espectrometr&iacute;a de masa usando un sistema optimizado que contiene trietilamina y 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol con un gradiente de metanol. Los par&aacute;metros de sintonizaci&oacute;n ESI-TOFMS tambi&eacute;n fueron optimizados para minimizar la fragmentaci&oacute;n en origen y lograr la mayor sensibilidad. Se realizaron an&aacute;lisis de nativos, medicamento y oligonucle&oacute;tidos ricos en guanina por detecci&oacute;n de LC/MS. l&iacute;mites estaban en niveles de sub-picomole con una precisi&oacute;n de masa promedio de 125 ppm. El m&eacute;todo descrito permitido el an&aacute;lisis de la LC/MS de oligonucle&oacute;tidos para arriba 110mer de longitud con la aducci&oacute;n de cationes alcalinos poco. Ya que se logr&oacute; la detecci&oacute;n sensible de oligonucle&oacute;tidos con detecci&oacute;n de ULTRAVIOLETA (UV), utilizamos una combinaci&oacute;n de UV-MS para la cuantificaci&oacute;n (UV) y caracterizaci&oacute;n (MS) de oligonucle&oacute;tidos y sus falta de secuencia fragmentos/metabolitos.

An&aacute;lisis de oligonucle&oacute;tidos nativas y qu&iacute;micamente modificados por espectrometr&iacute;a total en t&aacute;ndem ion-par fase inversa cromatograf&iacute;a l&iacute;quida de alto rendimiento/electrospray ionizaci&oacute;n.

A method for the analysis and characterization of therapeutic and diagnostic oligonucleotides has been developed using a combination of liquid chromatography and mass spectrometry (LC-MS). The optimized ion-pairing buffers permit a highly efficient separation of native and chemically modified antisense oligonucleotides (AS-ODNs) from their metabolites or failure synthetic products. The mobile phases were MS compatible, allowing for direct and sensitive analysis of components eluting from the column. The method was applied for the quantitation and characterization of AS-ODNs, including phosphorothioates and 2'-O-methyl-modified phosphorothioates. Tandem LC-MS analysis confirmed the identity of the oligonucleotide metabolites, failure products, the presence of protection groups not removed after synthesis, and the extent of depurination or phosphorothioate backbone oxidation.

Characterization of therapeutic oligonucleotides using liquid chromatography with on-line mass spectrometry detection.

&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x4E0E;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x548C;&#x8BCA;&#x65AD;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5DF2;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x548C;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5; (LC-MS) &#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x914D;&#x5BF9;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#x5141;&#x8BB8;&#x672C;&#x673A;&#x548C;&#x5316;&#x5B66;&#x4FEE;&#x9970;&#x53CD;&#x4E49;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (AS ODNs) &#x9AD8;&#x6548;&#x5206;&#x79BB;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x6216;&#x5931;&#x8D25;&#x5408;&#x6210;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x79FB;&#x52A8;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x662F; MS &#x517C;&#x5BB9;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x76F4;&#x63A5;&#x548C;&#x654F;&#x611F;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6D17;&#x8131;&#x4ECE;&#x5217;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x8BE5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x88AB;&#x5E94;&#x7528;&#x5B9A;&#x91CF;&#x548C;&#x8868;&#x5F81;&#x4E3A;&#x5BE1;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; phosphorothioates &#x548C; phosphorothioates 2&#39;-O-&#x7532;&#x57FA;&#x4FEE;&#x9970;&#x3002;&#x4E32;&#x8054;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x3001; &#x6545;&#x969C;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3001; &#x4FDD;&#x62A4;&#x56E2;&#x4F53;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0D;&#x62C6;&#x9664;&#x540E;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x4E0E; depurination &#x6216;&#x786B;&#x4EE3;&#x9AA8;&#x5E72;&#x6C27;&#x5316;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3002;

&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x8D28;&#x8C31;&#x5728;&#x7EBF;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E0E;&#x6CBB;&#x7597;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

A d&eacute;velopp&eacute; une m&eacute;thode pour l&#39;analyse et la caract&eacute;risation des oligonucl&eacute;otides th&eacute;rapeutiques et diagnostiques &agrave; l&#39;aide d&#39;une combinaison de chromatographie en phase liquide et spectrom&eacute;trie de masse (LC-MS). Les tampons de paires d&#39;ions optimis&eacute;es permettent une s&eacute;paration tr&egrave;s efficace des oligonucl&eacute;otides antisens natifs et modifi&eacute;s chimiquement (AS-ODN) ou leurs m&eacute;tabolites produits synth&eacute;tiques. Les phases mobiles &eacute;taient Mme compatible, permettant une analyse directe et sensible des composants &agrave; &eacute;lution de la colonne. La m&eacute;thode a &eacute;t&eacute; appliqu&eacute;e pour la quantification et la caract&eacute;risation des AS-ODN, y compris les phosphorothioates et 2&#39;--O m&eacute;thyl-modifi&eacute; phosphorothioates. L&#39;analyse LC-MS en tandem a confirm&eacute; l&#39;identit&eacute; des m&eacute;tabolites de l&#39;oligonucl&eacute;otide, produits de d&eacute;faillance, la pr&eacute;sence de groupes de protection retir&eacute; apr&egrave;s la synth&egrave;se et l&#39;ampleur de l&#39;oxydation d&#39;&eacute;pine dorsale d&eacute;purination ou phosphorothioate.

Caract&eacute;risation des oligonucl&eacute;otides th&eacute;rapeutiques &agrave; l&#39;aide de la chromatographie en phase liquide avec d&eacute;tection par spectrom&eacute;trie de masse en ligne.

Charakterisierung von therapeutischen Oligonukleotiden unter Verwendung von Fl&#xFC;ssigchromatographie mit Online-Massenspektrometrie-Detektion.

Un metodo per l&#39;analisi e la caratterizzazione dei oligonucleotides diagnostico e terapeutico &egrave; stato sviluppato utilizzando una combinazione di cromatografia liquida e spettrometria di massa (LC-MS). I buffer di ion-abbinamento ottimizzati permettono una separazione altamente efficiente di oligonucleotidi antisenso nativi e chimicamente modificati (AS-ODNs) da loro metaboliti o fallimento prodotti sintetici. Le fasi mobili erano MS compatibile, consentendo analisi diretta e sensibile di componenti eluizione dalla colonna. Il metodo &egrave; stato applicato per la quantificazione e caratterizzazione di AS-ODNs, compresi fosforotioati e 2&#39;--O metil-modificato fosforotioati. Tandem analisi LC-MS ha confermato l&#39;identit&agrave; dei metaboliti del oligonucleotide, prodotti di fallimento, la presenza di gruppi di protezione non rimosso dopo la sintesi e la misura di depurinazione o fosforotioato ossidazione della spina dorsale.

Caratterizzazione dei oligonucleotides terapeutico mediante cromatografia liquida con rivelazione a spettrometria di massa on-line.

&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8A3A;&#x65AD;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6CD5;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x53CA;&#x3073;&#x8CEA;&#x91CF; (LC-MS) &#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5BFE;&#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC; &#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3068;&#x5316;&#x5B66;&#x4FEE;&#x98FE;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; (AS-ODNs) &#x306E;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x5206;&#x96E2;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x969C;&#x5BB3;&#x304B;&#x3089;&#x5408;&#x6210;&#x88FD;&#x54C1;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30D0;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x306F;&#x3001;MS &#x306E;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x3001;&#x30AB;&#x30E9;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6EB6;&#x51FA;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;&#x304A;&#x3088;&#x3073; AS-ODNs &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30ED;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068; 2&#39;--O &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;-&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30ED;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x306E; LC-MS &#x5206;&#x6790;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7523;&#x7269;&#x3001;&#x6545;&#x969C;&#x88FD;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x4FDD;&#x8B77;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x5408;&#x6210;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; depurination &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30ED;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C8; &#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x5F8C;&#x306A;&#x3044;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AA;&#x30F3;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC640; &#xC9C4;&#xB2E8; oligonucleotides &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBC29;&#xBC95; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (MS LC)&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xC774;&#xC628; &#xC30D; &#xBC84;&#xD37C;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C; &#xB610;&#xB294; &#xC2E4;&#xD328;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD569;&#xC131; &#xC81C;&#xD488; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC218;&#xC815; &#xC13C;&#xC2A4; oligonucleotides (AS-ODNs)&#xC758; &#xACE0;&#xD6A8;&#xC728; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4; MS &#xD638;&#xD658; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xC5F4;&#xC5D0;&#xC11C; eluting&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xAC00; &#xC815;&#xB7C9; &#xBC0F; AS-ODNs, phosphorothioates &#xBC0F; phosphorothioates 2&#39;-O &#xBA54; &#xD2F8;-&#xC218;&#xC815; &#xB4F1;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD611;&#xB3D9; LC MS &#xBD84;&#xC11D; oligonucleotide &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;, &#xC2E4;&#xD328; &#xC81C;&#xD488;, &#xBCF4;&#xD638; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xD569;&#xC131;&#xACFC; depurination &#xB610;&#xB294; phosphorothioate &#xBC31;&#xBCF8; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC815;&#xB3C4; &#xD6C4; &#xC81C;&#xAC70; &#xB418;&#xC9C0; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC561;&#xCCB4; &#xCC29; &#xC0C9; &#xC778;&#xC1C4;&#xAE30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC628;&#xB77C;&#xC778; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xAC80;&#xCD9C; &#xCE58;&#xB8CC; oligonucleotides&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Un m&eacute;todo para el an&aacute;lisis y caracterizaci&oacute;n de oligonucle&oacute;tidos diagn&oacute;sticas y terap&eacute;uticas se ha desarrollado usando una combinaci&oacute;n de cromatograf&iacute;a l&iacute;quida y espectrometr&iacute;a de masas (LC-MS). Los buffers de emparejamiento de ion optimizados permiten una separaci&oacute;n muy eficiente de oligonucle&oacute;tidos antisentidos nativas y qu&iacute;micamente modificados (AS-ODNs) de sus metabolitos o productos sint&eacute;ticos. Las fases m&oacute;viles fueron MS compatible, permitiendo an&aacute;lisis directo y sensible de componentes liberador de la columna. Se aplic&oacute; el m&eacute;todo para la cuantificaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n de AS-ODNs, incluyendo fosforotioatos y fosforotioatos 2&#39;-O-metil-modificado. El an&aacute;lisis por LC-MS t&aacute;ndem confirm&oacute; la identidad de los metabolitos de oligonucle&oacute;tidos, productos de fracaso, la presencia de grupos de protecci&oacute;n no se quita despu&eacute;s de s&iacute;ntesis y el grado de oxidaci&oacute;n de columna vertebral depurinaci&oacute;n o medicamento.

Caracterizaci&oacute;n de oligonucle&oacute;tidos terap&eacute;uticas mediante cromatograf&iacute;a l&iacute;quida con detecci&oacute;n de espectrometr&iacute;a de masas en l&iacute;nea.

&#x4E00;&#x79CD;&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x5728;&#x7EBF;&#x8131;&#x76D0;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x79BB;&#x5B50;&#x5BF9;&#x53CD;&#x76F8;&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5; (HPLC RP) &#x53D7;&#x96C7;&#x4E8E;&#x8D1F;&#x9762;&#x7535;&#x55B7;&#x96FE;&#x8D28;&#x8C31; (ESI-MS) &#x968F;&#x4F8B;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x4E2D;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x3002;&#x8131;&#x76D0;&#x4E0A;&#x6324;&#x6EE1;&#x4E86; 3.5 microm C(18) &#x8131;&#x786B;&#x5242;&#x77ED; 10 x 2.1 m m &#x8B66;&#x536B;&#x5217;&#x6267;&#x884C;&#x3002;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8FDE;&#x63A5;&#x4E32;&#x8054;&#x5230;&#x6B63;&#x4EA4; ESI &#x8D28;&#x8C31;&#x8BA1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x901A;&#x8FC7;&#x516D;&#x4E2A;&#x7AEF;&#x53E3;&#x3001; &#x4E24;&#x4E2A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x5F00;&#x5173;&#x9600;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x8131;&#x76D0;&#x8DDF;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x6838;&#x9178;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x4EFB;&#x52A1;&#x5468;&#x671F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x90FD;&#x4F4E;&#x81F3;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6837;&#x672C;&#x7684; 1.5 &#x5206;&#x949F;&#x3002;&#x8FD9;&#x5141;&#x8BB8;&#x6BCF;&#x4E2A; 24 h &#x65F6;&#x671F;&#xFF0C;&#x662F;&#x9002;&#x5408;&#x4E8E;&#x4E2D;&#x5C0F;&#x578B;-&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5927;&#x7EA6; 950 &#x6837;&#x54C1;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x5E73;&#x5747;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; 80 &#x9875;/&#x5206;&#x949F;&#xFF0C;&#x5230; 110 mer &#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x5916;&#x90E8;&#x6821;&#x51C6;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x3002;&#x8BE5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7528;&#x4E8E;&#x5408;&#x6210;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x8D28;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x5206;&#x6790; DNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7247;&#x6BB5;&#x3002;

&#x7535;&#x55B7;&#x96FE;&#x7535;&#x79BB;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5206;&#x6790;&#x6838;&#x9178;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x5728;&#x7EBF;&#x8131;&#x76D0;&#x3002;

A rapid on-line desalting method utilizing ion-pair reversed-phase high-performance liquid chromatography (IP-RP-HPLC) was employed in tandem with negative electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) for the routine analysis of nucleic acids. Desalting was performed on a short 10 x 2.1 mm guard column packed with 3.5 microm C(18) sorbent. The HPLC system was connected in-line to an orthogonal ESI-TOF mass spectrometer via a six-port, two-position switching valve, allowing desalting followed by mass analysis of nucleic acids. Duty cycle times for the method were as low as 1.5 min per sample. This allowed for the analysis of approximately 950 samples per 24-h time period, which is suitable for medium- to high-throughput applications. Average mass accuracy was determined to be 80 ppm for oligonucleotides up to 110 mer in length with external calibration. The method was utilized for synthetic oligonucleotide quality control and analysis of DNA genotyping fragments.

Electrospray ionization mass spectrometric analysis of nucleic acids using high-throughput on-line desalting.

&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x5217;&#x5E26;&#x4F20;&#x64AD;&#x3001; LC &#x7CFB;&#x7EDF;&#x64CD;&#x4F5C;&#x538B;&#x529B;&#x548C;&#x5206;&#x79BB;&#x6E29;&#x5EA6;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E3A; sub-2-microm &#x7C92;&#x5B50;&#x5217;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; UPLC &#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5377;&#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x5217;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6027;&#x80FD;&#x533A;&#x522B;&#x5217;&#x5305;&#x542B; 2.5 &#x548C; 1.7 microm &#x7C92;&#x5B50; &#xFF08;&#x540C;&#x4E00;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;) &#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5217;&#x7684;&#x6027;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4F7F;&#x7528;&#x5E38;&#x89C4;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x4F4E;&#x6B7B;&#x4F53;&#x79EF; UPLC &#x7CFB;&#x7EDF;&#x80FD;&#x529B;&#x53EF;&#x8FBE; 1000 bar &#x7684;&#x65E5;&#x5E38;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x3002;&#x8513;&#x5EF6;&#x4E50;&#x961F;&#x548C;&#x5E38;&#x89C4;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x538B;&#x529B;&#x9650;&#x5236;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x7684; sub-2-microm &#x7C92;&#x5B50;&#x5217;&#x53EF;&#x63A5;&#x53D7;&#x7684;&#x6027;&#x80FD;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x56F0;&#x96BE;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6E29;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x9700;&#x8981;&#x8F85;&#x4EE5;&#x589E;&#x52A0;&#x6D41;&#x91CF;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x5206;&#x79BB;&#x6027;&#x80FD;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7684;&#x5217;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x5347;&#x4E0D;&#x662F;&#x66FF;&#x4EE3;&#x9700;&#x8981;&#x5F88;&#x9AD8;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x538B;&#x529B;&#x3002;

&#x4F20;&#x64AD;&#x3001; &#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x64CD;&#x4F5C;&#x538B;&#x529B;&#x53CA;&#x5BF9;&#x6027;&#x80FD;&#x7684; sub-2-microm &#x591A;&#x5B54;&#x9897;&#x7C92;&#x5217;&#x6E29;&#x5EA6;&#x5E26;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x5217;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The effects of extra-column band spreading, LC system operating pressure, and separation temperature were investigated for sub-2-microm particle columns using both a conventional HPLC system as well as a UPLC system. The contributions of both volume- and time-based extra-column effects were analyzed in detail. In addition, the performance difference between columns containing 2.5 and 1.7-microm particles (same stationary phase) was studied. The performance of these columns was compared using a conventional HPLC system and a low dead volume UPLC system capable of routine operation up to 1000 bar. The system contribution to band spreading and the pressure limitations of the conventional HPLC system were found to be the main difficulties that prevented acceptable performance of the sub-2-microm particle columns. Finally, an increase in operating temperature needs to be accompanied by an increase in flow rate to prevent a loss of separation performance. Thus, at a fixed column length, an increase in temperature is not a substitute for the need for very high operating pressures.

Effects of extra-column band spreading, liquid chromatography system operating pressure, and column temperature on the performance of sub-2-microm porous particles.

Ont &eacute;tudi&eacute; les effets de la dispersion de bande extra-colonne, pression de fonctionnement syst&egrave;me LC ou temp&eacute;rature de s&eacute;paration des colonnes de particules sub-2-microm en utilisant les deux une HPLC conventionnelle syst&egrave;me ainsi qu&#39;un syst&egrave;me UPLC. Les contributions de ces deux effets extra-colonne de la base de volume et de temps ont &eacute;t&eacute; analys&eacute;es en d&eacute;tail. En outre, la performance la diff&eacute;rence entre les colonnes contenant 2,5 et 1,7-microm particules (m&ecirc;me phase stationnaire) a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e. La performance de ces colonnes a &eacute;t&eacute; compar&eacute;e &agrave; l&#39;aide d&#39;un syst&egrave;me HPLC conventionnel et un syst&egrave;me UPLC de faible volume mort capable de l&#39;op&eacute;ration de routine jusqu&#39;&agrave; 1000 bar. La contribution du syst&egrave;me &agrave; bande de diffusion et les limites de pression du syst&egrave;me HPLC classique se sont av&eacute;r&eacute; pour &ecirc;tre les principales difficult&eacute;s qui ont emp&ecirc;ch&eacute; une performance acceptable des colonnes sub-2-microm particule. Enfin, une augmentation de temp&eacute;rature de fonctionnement doit &ecirc;tre accompagn&eacute;e d&#39;une augmentation des taux d&#39;&eacute;coulement afin d&#39;&eacute;viter une perte de performance de s&eacute;paration. Ainsi, &agrave; une longueur de colonne fixes, une augmentation de temp&eacute;rature n&#39;est pas un substitut &agrave; la n&eacute;cessit&eacute; pour les pressions de service tr&egrave;s &eacute;lev&eacute;es.

Effets de la colonne extra bande &eacute;tal&eacute;e, liquid syst&egrave;me de chromatographie op&eacute;rant la pression et la temp&eacute;rature de la colonne sur la performance des sub-2-microm particules poreuses.

Die Auswirkungen der Extra-Spaltenbandes verbreiten, LC System Betriebsdruck und Trennung Temperatur wurden untersucht, f&uuml;r Sub-2-Microm Partikel Spalten verwenden beide einen konventionellen HPLC-System sowie ein UPLC-System. Die Beitr&auml;ge der beide Volumen und Zeit-basierte Extra-Spalte-Effekte wurden im Detail analysiert. Dar&uuml;ber hinaus die Leistung Unterschied zwischen Spalten mit 2.5 und 1,7-Microm Teilchen (gleiche station&auml;re Phase) wurde untersucht. Die Leistung dieser Spalten war verglichen mit einem herk&ouml;mmlichen HPLC-System und ein niedriger Totvolumen UPLC System Routineoperation bis 1000 Bar. Der System-Beitrag zur Band, die Verbreitung und die Druck-Einschr&auml;nkungen des konventionellen HPLC-Systems wurden gefunden, die Hauptschwierigkeiten, die akzeptable Leistung der Sub-2-Microm Partikel Spalten verhindert. Schlie&szlig;lich muss ein Anstieg der Betriebstemperatur durch eine Erh&ouml;hung der F&ouml;rdermenge zu einem Leistungsverlust Trennung verhindern begleitet werden. Deshalb bei einer festen Spaltenl&auml;nge, ein Anstieg der Temperatur kein Ersatz f&uuml;r die Notwendigkeit einer sehr hohen Betriebsdr&uuml;cke.

Auswirkungen der Extra-Spalte band verbreiten, fl&uuml;ssige Chromatographie-System Druck und S&auml;ulentemperatur auf die Leistung der Sub-2-Microm por&ouml;se Partikel.

Sono stati studiati gli effetti della diffusione banda extra-colonna, LC sistema operativo pressione e temperatura di separazione per le colonne delle particelle sub-2-microm utilizzando sia un HPLC convenzionale sistema cos&igrave; come un sistema UPLC. I contributi di entrambi gli effetti extra-colonna di volume e time-based sono stati analizzati in dettaglio. Inoltre, le prestazioni differenza tra colonne contenente 2,5 e 1,7-microm particelle (stessa fase stazionaria) &egrave; stato studiato. Le prestazioni di queste colonne &egrave; stata confrontata utilizzando un sistema HPLC convenzionale e un basso volume morto UPLC sistema capace di operazioni di routine fino a 1000 bar. Il contributo di sistema a banda diffondendo e i limiti di pressione del sistema HPLC convenzionale sono stati trovati per essere le principali difficolt&agrave; che ha impedito di ottenere prestazioni accettabili delle colonne delle particelle sub-2-microm. Infine, un aumento di temperatura di funzionamento deve essere accompagnata da un aumento della portata per impedire una perdita di rendimento di separazione. Cos&igrave;, a una lunghezza di colonna fissa, un aumento della temperatura non &egrave; un sostituto per la necessit&agrave; di altissime pressioni di esercizio.

Effetti di extra-colonna banda spandimento liquido cromatografia sistema operativo pressione e la temperatura di colonna sulle prestazioni delle particelle porose sub-2-microm.

&#x4F59;&#x5206;&#x306A;&#x5217;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x62E1;&#x6563; LC &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x5727;&#x529B;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x4E21;&#x65B9;&#x5F93;&#x6765; HPLC &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30B5;&#x30D6; 2 microm &#x7C92;&#x5B50;&#x5217;&#x3092;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306E;&#x6700;&#x65B0;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x4F59;&#x5206;&#x306A;&#x5217;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x306F;&#x3001;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;2.5 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5217;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068; 1.7 microm &#x7C92;&#x5B50; (&#x540C;&#x3058;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;) &#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5217;&#x306E;&#x6027;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E; HPLC &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x64CD;&#x4F5C; 1000&#x5E74;&#x30D0;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x4F4E;&#x30C7;&#x30C3;&#x30C9; &#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306E;&#x6700;&#x65B0;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x62E1;&#x6563;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x5F93;&#x6765;&#x306E; HPLC &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x5727;&#x529B;&#x9650;&#x754C;&#x3078;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x8CA2;&#x732E;&#x30B5;&#x30D6; 2 microm &#x7C92;&#x5B50;&#x5217;&#x306E;&#x8A31;&#x5BB9;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x56F0;&#x96E3;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x52D5;&#x4F5C;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x5206;&#x96E2;&#x6027;&#x80FD;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6D41;&#x91CF;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5217;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x4F5C;&#x52D5;&#x5727;&#x529B;&#x306E;&#x4EE3;&#x7528;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x4F59;&#x5206;&#x306A;&#x5217;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x30AA;&#x30DA;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x5727;&#x529B;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AB;&#x30E9;&#x30E0;&#x6E29;&#x5EA6;&#x30B5;&#x30D6; 2 microm &#x591A;&#x5B54;&#x8CEA;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x5E83;&#x304C;&#x308A;&#x3001;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xCD94;&#xAC00; &#xC5F4; &#xB300;&#xC5ED; &#xD655;&#xC0B0;, LC &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC791;&#xB3D9; &#xC555;&#xB825;, &#xBC0F; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC628;&#xB3C4; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBAA8;&#xB450; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; HPLC&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD558;&#xC704; 2 microm &#xC785;&#xC790; &#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; UPLC &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;. &#xB450; &#xBCFC;&#xB968; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xAE30;&#xBC18; &#xCD94;&#xAC00; &#xC5F4; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xACF5;&#xD5CC;&#xC740; &#xC790;&#xC138;&#xD788; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC131;&#xB2A5; 2.5&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC5F4; &#xCC28;&#xC774; 1.7 microm &#xC785;&#xC790; (&#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xACE0;&#xC815; &#xC704;&#xC0C1;)&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F4; &#xC131;&#xB2A5;&#xC740; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; HPLC &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xBC0F; &#xC8FD;&#xC740; &#xC800;&#xC6A9;&#xB7C9; UPLC &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; 1000 &#xBC14;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC77C;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC791;&#xC5C5;&#xC758; &#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAE30;&#xC5EC; &#xB300;&#xC5ED; &#xD655;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; HPLC &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC555;&#xB825; &#xD55C;&#xACC4;&#xB97C; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xD558;&#xC704; 2 microm &#xC785;&#xC790; &#xC5F4; &#xC131;&#xB2A5;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC791;&#xB3D9; &#xC628;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC131;&#xB2A5; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC720;&#xB7C9;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xB3D9;&#xBC18; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xACE0;&#xC815; &#xB41C; &#xC5F4; &#xAE38;&#xC774; &#xC628;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xC5C6;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB192;&#xC740; &#xC791;&#xB3D9; &#xC555;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCCB4;.

&#xCD94;&#xAC00; &#xC5F4; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD655;&#xC0B0;, &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC791;&#xB3D9; &#xC555;&#xB825;&#xACFC; &#xC5F4; &#xC628;&#xB3C4; &#xD558;&#xC704; 2 microm &#xB2E4;&#xACF5;&#xC131; &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xC131;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xBC34;&#xB4DC;.

Se investigaron los efectos de banda extra-columna separarse, presi&oacute;n de funcionamiento de sistema de LC y temperatura de separaci&oacute;n de columnas de part&iacute;cula sub-2 microm usando ambos un HPLC convencional sistema as&iacute; como un sistema UPLC. Las contribuciones de ambos efectos extra-columna basadas en volumen y tiempo se analizaron en detalle. Adem&aacute;s, el rendimiento de la diferencia entre columnas que contiene 2.5 y 1.7 microm part&iacute;culas (misma fase estacionaria). Los resultados de estas columnas se compararon usando un sistema HPLC convencional y un sistema UPLC de bajo volumen muerto capaz de operaci&oacute;n rutinaria hasta 1000 bar. La contribuci&oacute;n del sistema al separarse de la banda y las limitaciones de la presi&oacute;n del sistema HPLC convencional resultaron para ser las principales dificultades que imped&iacute;an un rendimiento aceptable de las columnas de la part&iacute;cula sub-2 microm. Finalmente, un aumento en la temperatura de funcionamiento debe ir acompa&ntilde;ado por un aumento en la tasa de flujo para evitar una p&eacute;rdida de rendimiento de separaci&oacute;n. As&iacute;, en una longitud de columna fija, un aumento de temperatura no es un sustituto de la necesidad de presiones de funcionamiento muy altas.

Efectos de extra-columna banda sistema de cromatograf&iacute;a l&iacute;quida que se separan, operaci&oacute;n de presi&oacute;n y temperatura de la columna sobre el comportamiento de las part&iacute;culas porosas sub-2 microm.

&#x4F7F;&#x7528;&#x6DF7;&#x5408;&#x6A21;&#x5F0F;&#x56FA;&#x76F8;&#x8403;&#x53D6;&#x548C; UltraPerformance &#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x4E32;&#x8054;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5; (UPLC-MS/MS) &#x751F;&#x7269;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5417;&#x5561;&#x3001; &#x5417;&#x5561;-3beta-&#x8461;&#x7CD6;&#x82F7;&#x9178;&#x3001; &#x5417;&#x5561;-6beta-&#x8461;&#x7CD6;&#x82F7;&#x9178;&#x3001; 6 acetylmorphine&#x3001; N-&#x6C27;&#x5316;&#xFF0C;&#x5417;&#x5561;&#x548C; 10-hydroxymorphine &#x732A;&#x8840;&#x6D46;&#x4E2D;&#x5236;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x516D;&#x4E2A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x56DB;&#x4E2A;&#x6C18;&#x5316;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x6807;&#x51C6;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x88AB;&#x4F7F;&#x7528;&#x6DF7;&#x5408;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5F3A;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x56FA;&#x76F8;&#x8403;&#x53D6; 96 &#x4E95; microElution &#x677F;&#x683C;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x88AB;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x548C;&#x6EB6;&#x5242;&#x7528;&#x4E8E;&#x5728;&#x6D17;&#x8131;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E2D;&#x6700;&#x5C0F;&#x5316; 6 acetylmorphine &#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x968F;&#x540E;&#x5728; 8 &#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x4E0A; 2.1 x 100 m m&#xFF0C;&#x4E3A;&#x4FDD;&#x7559;&#x6781;&#x6781;&#x6027;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4F7F;&#x7528;&#x7532;&#x9178;&#x548C;&#x7532;&#x9187;&#x68AF;&#x5EA6;&#x8BBE;&#x8BA1; 1.8 microm C (18) &#x5217;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x591A;&#x4E2A;&#x53CD;&#x5E94;&#x76D1;&#x6D4B;&#x79EF;&#x6781;&#x7535;&#x55B7;&#x96FE;&#x7535;&#x79BB;&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E0B;&#x4F7F;&#x7528;&#x5FEB;&#x901F;&#x626B;&#x63CF;&#x7684;&#x4E09;&#x91CD;&#x56DB;&#x6781;&#x3002;&#x6062;&#x590D;&#x88AB;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#xFF0C;73-123%&#x548C; inter-day &#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x662F;&#x4F4E;&#x4E8E; 6%&#x3002;&#x7EBF;&#x6027;&#x732A;&#x8840;&#x6D46;&#x4E2D;&#x7684;&#x6263;&#x7403;&#x524D; SPE &#x7A0B;&#x5E8F;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x76F8;&#x5173;&#x7CFB;&#x6570;&#x662F; &gt; = 0.998&#xFF0C;&#x6216;&#x504F;&#x79BB;&#x5B9E;&#x9645;&#x6D53;&#x5EA6; %&#xFF0C;&#x5C11;&#x4E8E; 15%&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5B9A;&#x91CF; (LLOQ) &#x7684;&#x4E0B;&#x9650;&#x662F; 0.1 &#x81F3; 0.25 ng/mL&#x3002;

&#x5417;&#x5561;&#x76F8;&#x5173;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F7F;&#x7528;&#x6DF7;&#x5408;&#x6A21;&#x5F0F;&#x56FA;&#x76F8;&#x8403;&#x53D6;&#x548C; UltraPerformance &#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x540C;&#x65F6;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

A bioanalytical method using mixed-mode solid phase extraction and UltraPerformance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) was developed for the analysis of morphine, morphine-3beta-glucuronide, morphine-6beta-glucuronide, 6-acetylmorphine, morphine N-oxide, and 10-hydroxymorphine in porcine plasma. All six compounds, along with four deuterated internal standards, were simultaneously extracted using mixed-mode strong cation exchange SPE in a 96-well microElution plate format. Due to analyte instability, a neutralizing solvent was used during the elution step to minimize degradation of 6-acetylmorphine. Separation was subsequently performed in 8 minutes on a 2.1 x 100 mm, 1.8 microm C(18 )column designed for retention of extremely polar compounds using a formic acid and methanol gradient. Analytes were detected by positive electrospray ionization in multiple reaction monitoring mode using a fast-scanning triple quadrupole mass spectrometer. Recovery was 73-123% depending on the analyte, and inter-day variability was less than 6%. Linearity was determined in porcine plasma by spiking the analytes prior to SPE. Correlation coefficients were >or= 0.998, and% deviation from the actual concentrations was less than 15%. The lower limit of quantitation (LLOQ) for all compounds was between 0.1 and 0.25 ng/mL.

Simultaneous analysis of morphine-related compounds in plasma using mixed-mode solid phase extraction and UltraPerformance liquid chromatography-mass spectrometry.

Une m&eacute;thode de bioanalytiques par extraction en phase solide de mode mixte et UltraPerformance liquide chromatography-spectrom&eacute;trie de masse (UPLC-MS/MS) a &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute;e pour l&#39;analyse de la morphine, la morphine-3beta-glucuronide, morphine-6b&ecirc;ta-glucuronide, 6-ac&eacute;tylmorphine, morphine N-oxyde et 10-hydroxymorphine dans le plasma de porc. Les six compos&eacute;s, ainsi que de quatre &eacute;talons internes deut&eacute;r&eacute;s ont &eacute;t&eacute; extraits simultan&eacute;ment en utilisant le mode mixte &eacute;changeuse de cations fort SPE dans un format de plaque 96 puits microElution. En raison de l&#39;instabilit&eacute; de l&#39;analyte, neutralisant solvant a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; au cours de l&#39;&eacute;tape d&#39;&eacute;lution pour minimiser la d&eacute;gradation de la 6-ac&eacute;tylmorphine. S&eacute;paration a &eacute;t&eacute; faite par la suite en 8 minutes sur un 2.1 x 100 mm, 1,8 microm C (18) colonne con&ccedil;ue pour la r&eacute;tention des compos&eacute;s tr&egrave;s polaires en utilisant un acide formique et le gradient de m&eacute;thanol. Analytes ont &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;s par ionisation &eacute;lectrospray positif dans le suivi de r&eacute;actions multiples spectrom&egrave;tre de masse de mode &agrave; l&#39;aide d&#39;un quadrip&ocirc;le triple balayage rapide. R&eacute;cup&eacute;ration &eacute;tait de 73-123 % selon l&#39;analyte et variabilit&eacute; inter-jours &eacute;tait inf&eacute;rieure &agrave; 6 %. Lin&eacute;arit&eacute; a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e en plasma de porc de l&#39;analyser avant SPE de fortification. Les coefficients de corr&eacute;lation sont &gt; ou = 0.998, et l&#39;&eacute;cart des concentrations r&eacute;elles % &eacute;tait inf&eacute;rieure &agrave; 15 %. La limite inf&eacute;rieure (PPQM) pour tous les compos&eacute;s &eacute;tait de 0,1 &agrave; 0,25 ng/mL.

Analyse simultan&eacute;e de compos&eacute;s apparent&eacute;s &agrave; la morphine dans le plasma par extraction en phase solide mode mixte et UltraPerformance liquid chromatography-mass spectrometry.

Bioanalytische Methode mit gemischten Festphasenextraktion und UltraPerformance fl&uuml;ssige Chromatographie-Tandem-Massenspektrometrie (UPLC-MS/MS) wurde f&uuml;r die Analyse von Morphin, Morphin-3beta-Glucuronid Morphin-6beta-Glucuronid, 6-Acetylmorphine, Morphin-N-oxid und 10-Hydroxymorphine in Porcines Plasma entwickelt. Alle sechs Verbindungen, zusammen mit vier deuterierte internen Standards, wurden gleichzeitig mit gemischten starke kation Exchange SPE in eine 96-Well-MicroElution-Plattenformat extrahiert. Aufgrund der Instabilit&auml;t der Analyten wurde neutralisierende L&ouml;sungsmittel w&auml;hrend der Elution Schritt zur Verschlechterung der 6-Acetylmorphine zu minimieren. Trennung erfolgte anschlie&szlig;end in 8 Minuten auf eine 2.1 x 100 mm, 1,8 Microm C (18) Spalte f&uuml;r die Aufbewahrung von extrem polare Verbindungen mit Ameisens&auml;ure und Methanol Farbverlauf. Analyten gefunden durch positive Elektrospray-Ionisation in mehreren Reaction monitoring-Modus mit einer schnell-Scan dreifache Quadrupole mass-Spektrometer. Wiederherstellung war 73-123 % abh&auml;ngig von Analyten und inter-day Variabilit&auml;t war weniger als 6 %. Linearit&auml;t wurde spiking Analyte vor der SPE in Porcines Plasma bestimmt. Korrelationskoeffizienten waren &gt; oder = 0.998, und % Abweichung von der tats&auml;chlichen Konzentration war weniger als 15 %. Die untere Grenze der Quantisierung (LLOQ) f&uuml;r alle Verbindungen war zwischen 0,1 und 0,25 ng/mL.

Simultane Analyse von Morphin-&auml;hnliche Verbindungen im Plasma mit gemischten Festphasenextraktion und UltraPerformance fl&uuml;ssige Chromatographie-Massenspektrometrie.

Un metodo bioanalytical mediante estrazione in fase solida modalit&agrave; mista e UltraPerformance liquida cromatografia-spettrometria di massa tandem (UPLC-MS/MS) &egrave; stato sviluppato per l&#39;analisi di morfina, morfina-3beta-glucuronide, morfina-6 &beta;-glucuronide, 6-acetylmorphine, morfina N-ossido e 10-hydroxymorphine nel plasma dei suini. Tutti i composti di sei, insieme a quattro deuterato standard interni, sono stati estratti contemporaneamente utilizzando la modalit&agrave; mista di scambio cationico forte SPE in un formato di piastra 96 pozzetti microElution. A causa di instabilit&agrave; dell&#39;analita, un solvente neutralizzante &egrave; stato utilizzato durante la fase di eluizione per ridurre la degradazione del 6-acetylmorphine. Separazione &egrave; stata eseguita successivamente in 8 minuti su un 2.1 x 100 mm, 1,8 microm C colonna (18) progettato per la ritenzione dei composti estremamente polari utilizzando un acido formico e metanolo gradiente. Analiti sono stati rilevati da ionizzazione elettrospray positivo nel monitoraggio della reazione pi&ugrave; modalit&agrave; utilizzando una scansione veloce triplo quadrupolo spettrometro di massa. Recupero era 73-123% a seconda dell&#39;analita, e variabilit&agrave; inter-day era inferiore al 6%. Linearit&agrave; &egrave; stata determinata nel plasma dei suini da chiodare analiti prima SPE. I coefficienti di correlazione sono state &amp;gt; o = 0.998, e % deviazione dalle concentrazioni effettive era inferiore al 15%. Il limite inferiore di quantizzazione (LLOQ) per tutti i composti era fra 0.1 e 0.25 ng/mL.

Analisi simultanea di composti correlati a morfina nel plasma mediante estrazione in fase solida modalit&agrave; mista e UltraPerformance liquida cromatografia spettrometria di massa.

&#x6DF7;&#x5728;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x56FA;&#x76F8;&#x62BD;&#x51FA;&#x3068; UltraPerformance &#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;-&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790; (&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306E;&#x6700;&#x65B0;-MS/MS) &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D2;&#x30CD;&#x3001;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D2;&#x30CD;-3 &beta;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30CB;&#x30C9;&#x3001;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D2;&#x30CD;-6 &beta;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30CB;&#x30C9;&#x3001;6 acetylmorphine&#x3001;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D2;&#x30CD; N &#x9178;&#x5316;&#x3001;10-hydroxymorphine &#x30D6;&#x30BF;&#x8840;&#x6F3F;&#x4E2D;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;4 &#x3064;&#x306E;&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x5185;&#x90E8;&#x57FA;&#x6E96;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306F;&#x6DF7;&#x5408;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x5F37;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB; SPE microElution 96-well &#x7248;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x62BD;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Analyte &#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E2D;&#x548C;&#x6EB6;&#x5A92;&#x4E2D;&#x306B;&#x6EB6;&#x51FA;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7; 6 acetylmorphine &#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x96E2;&#x5F8C; 8 &#x5206; 2.1 x 100 mm&#x3001;1.8 microm C (18) &#x5217;&#x87FB;&#x9178;&#x3084;&#x30E1;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x6975;&#x6027;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x4FDD;&#x6301;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E0A;&#x3067;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;Analytes &#x8907;&#x6570;&#x53CD;&#x5FDC;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x80AF;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9AD8;&#x901F;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x56DB;&#x91CD;&#x6975;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x8A08;&#x3002;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306F;&#x3001;&#x691C;&#x4F53;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066; 73 123 &#xFF05; &#x3055;&#x308C; inter-day &#x5909;&#x52D5; 6% &#x672A;&#x6E80;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30CB;&#x30A2;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3; &#x30D6;&#x30BF;&#x8840;&#x6F3F;&#x4E2D; SPE &#x524D; analytes &#x6253;&#x3061;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x76F8;&#x95A2;&#x4FC2;&#x6570;&#x306F;, &#x76EE;&#x3084; 0.998&#x3001;= &#x3068;&#x5B9F;&#x969B;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304B;&#x3089;&#x504F;&#x5DEE; &#xFF05; 15 &#xFF05; &#x672A;&#x6E80;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF; (LLOQ) &#x306E;&#x4E0B;&#x9650;&#x306F; 0.1 &#x304A;&#x3088;&#x3073; 0.25 ng/mL &#x306E;&#x9593;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x6DF7;&#x5728;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x56FA;&#x76F8;&#x62BD;&#x51FA;&#x3068; UltraPerformance &#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D2;&#x30CD;&#x95A2;&#x9023;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#xD63C;&#xD569; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xACE0;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xACC4; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBC0F; UltraPerformance &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xD0E0;&#xB364; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (UPLC MS/MS)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; bioanalytical &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xBAA8; &#xB974; &#xD540;, &#xBAA8; &#xB974; &#xD540;-3beta-glucuronide, &#xBAA8; &#xB974; &#xD540;-6beta-glucuronide, 6 acetylmorphine, &#xBAA8; &#xB974; &#xD540; N &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C;&#xACFC; &#xB3FC;&#xC9C0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8;&#xC5D0;&#xC11C; 10-hydroxymorphine&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 4 &#xAC1C;&#xC758; deuterated &#xB0B4;&#xBD80; &#xAE30;&#xC900; &#xD568;&#xAED8; &#xBAA8;&#xB4E0; 6 &#xAC1C;&#xC758; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; 96-&#xC798; microElution &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD63C;&#xD569; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658; SPE&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD94;&#xCD9C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xC815;&#xC774; &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC911;&#xD654; &#xC6A9; &#xB9E4; 6-acetylmorphine&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCC28;&#xC785; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xB9AC;&#xB294; 2.1 x 100 mm, &#xD3EC; &#xB984; &#xC0B0;&#xACFC; &#xBA54;&#xD0C4;&#xC62C; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xADF9;&#xC131; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; 1.8 microm C (18) &#xC5F4;&#xC5D0; 8 &#xBD84; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xC218;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Analytes&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBC18;&#xC751; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xC591;&#xC758; &#xBD84;&#xBB34; &#xC774;&#xC628;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB41C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; quadrupole&#xC744; &#xBE60;&#xB978; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xAE30;. &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB294; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; 73-123% &#xC774;&#xC5C8;&#xACE0; inter-day &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; 6%. &#xC120;&#xD615;&#xC131;&#xC740; SPE &#xC774;&#xC804; analytes &#xAE09;&#xC0C1;&#xC2B9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3FC;&#xC9C0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8;&#xC5D0; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4; &#xACC4;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4; &amp;gt; &#xB610;&#xB294; = 0.998, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC2E4;&#xC81C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; % &#xD3B8;&#xCC28;&#xB294; 15% &#xBBF8;&#xB9CC;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xB7C9; (LLOQ)&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xD55C;&#xB3C4; 0.1 &#xBC0F; 0.25 ng/mL &#xC0AC;&#xC774;.

&#xD63C;&#xD569; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xACE0;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xACC4; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBC0F; UltraPerformance &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;-&#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8;&#xC5D0; &#xBAA8; &#xB974; &#xD540; &#xAD00;&#xB828; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xBD84;&#xC11D;.

Se desarroll&oacute; un m&eacute;todo de bioanal&iacute;ticos mediante extracci&oacute;n en fase s&oacute;lida de modo mixto y UltraPerformance l&iacute;quida cromatograf&iacute;a-espectrometr&iacute;a total en t&aacute;ndem (UPLC-MS/MS) para el an&aacute;lisis de la morfina, morfina-3beta-glucur&oacute;nido, morfina-6beta-glucur&oacute;nido, 6-acetylmorphine, morfina n-&oacute;xido y 10-hydroxymorphine en plasma porcino. Todos los seis compuestos, junto con cuatro est&aacute;ndares internos deuterados, simult&aacute;neamente se obtuvieron usando el modo mixto fuerte intercambio cati&oacute;nico SPE en un formato de placa de 96 pocillos microElution. Debido a la inestabilidad del analito, un solvente neutralizante se utiliz&oacute; durante el paso de eluci&oacute;n para minimizar la degradaci&oacute;n de 6-acetylmorphine. Separaci&oacute;n fue realizada posteriormente en 8 minutos en un 2.1 x 100 mm, 1.8 microm C columna (18) dise&ntilde;ado para la retenci&oacute;n de los compuestos muy polares utilizando un &aacute;cido f&oacute;rmico y el gradiente de metanol. Analitos fueron detectados por la ionizaci&oacute;n por electrospray positivo en monitoreo de reacci&oacute;n m&uacute;ltiple modo utilizando un cuadrupolo triple escaneo r&aacute;pido espectr&oacute;metro de masas. La recuperaci&oacute;n era 73-123% dependiendo el analito, y variabilidad interd&iacute;a fue menos del 6%. Linealidad se determin&oacute; en el plasma porcino por clavar los analitos antes de SPE. Coeficientes de correlaci&oacute;n fueron &gt; = 0.998, y desviaci&oacute;n de % de las concentraciones reales fue inferior al 15%. El l&iacute;mite de cuantificaci&oacute;n (LLOQ) para todos los compuestos fue entre 0.1 y 0.25 ng/mL.

An&aacute;lisis simult&aacute;neo de compuestos relacionados con morfina en plasma mediante extracci&oacute;n en fase s&oacute;lida de modo mixto y UltraPerformance cromatograf&iacute;a l&iacute;quida-espectrometr&iacute;a.

A comprehensive retention and selectivity characterization of several hydrophilic interaction chromatography (HILIC) stationary phases was performed with 28 test probes in order to study the influence of particle type, surface chemistry, and mobile-phase pH on chromatographic retention, selectivity, and MS response. Selectivity differences were compared for columns operated at both low and high pH, while ESI-MS was used to study the effects of mobile-phase pH on signal response. Additionally, acetone was explored as a potential alternative to ACN as the weak HILIC solvent. Moderate differences in selectivity were observed on the same column operated at different pH, mostly due to acidic compounds. In addition, the MS response increased when a high pH mobile phase was used, particularly for analytes that were ionized with negative ESI-MS. Even larger selectivity differences were observed for different stationary phases evaluated with the same mobile phase. Acetone was not a suitable replacement for ACN in routine HILIC separations due to differences in selectivity and MS response. Finally, the data from this study were used to establish guidelines for rapid HILIC method development of polar compounds, which is demonstrated with a mixture of histidine dipeptides and organophosphonate nerve agent metabolites.

Influence of stationary phase chemistry and mobile-phase composition on retention, selectivity, and MS response in hydrophilic interaction chromatography.

&#x51E0;&#x4E2A;&#x4EB2;&#x6C34;&#x4F5C;&#x7528;&#x8272;&#x8C31; &#xFF08;&#x5B50;&#xFF09; &#x56FA;&#x5B9A;&#x9636;&#x6BB5;&#x5168;&#x9762;&#x4FDD;&#x7559;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8868;&#x5F81;&#x88AB;&#x6267;&#x884C; 28 &#x6D4B;&#x8BD5;&#x63A2;&#x9488;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x5BF9;&#x8272;&#x8C31;&#x4FDD;&#x7559;&#x3001; &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x548C; MS &#x53CD;&#x5E94;&#x7C92;&#x5B50;&#x7C7B;&#x578B;&#x3001; &#x8868;&#x9762;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x6D41;&#x52A8;&#x76F8; ph &#x503C;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5217;&#x7ECF;&#x8425;&#x5728;&#x4F4E;&#x548C;&#x9AD8;&#x7684; ph &#x503C;&#xFF0C;&#x800C; ESI MS &#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x6D41;&#x52A8;&#x76F8; ph &#x503C;&#x5BF9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x4F5C;&#x4E86;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x529E;&#x6CD5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5F31; HILIC &#x6EB6;&#x5242; ACN &#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x4E19;&#x916E;&#x3002;&#x64CD;&#x4F5C;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; ph &#x503C;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x5217;&#x4E0A;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x6E29;&#x548C;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;MS &#x54CD;&#x5E94;&#x589E;&#x52A0;&#x65F6;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x9AD8; ph &#x503C;&#x6D41;&#x52A8;&#x76F8;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x4EE5;&#x6D88;&#x6781;&#x7684; ESI MS &#x88AB;&#x7535;&#x79BB;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x3002;&#x4E3A;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4E0E;&#x540C;&#x4E00;&#x6D41;&#x52A8;&#x76F8;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x4E19;&#x916E;&#x4E0D;&#x662F;&#x9002;&#x5408;&#x53D6;&#x4EE3; ACN &#x5728;&#x4F8B;&#x884C; HILIC &#x5206;&#x8272;&#x7531;&#x4E8E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x548C; MS &#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x6781;&#x6027;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x4E0E;&#x7EC4;&#x6C28;&#x9178;&#x4E8C;&#x80BD;&#x548C;&#x6709;&#x673A;&#x81A6;&#x795E;&#x7ECF;&#x5242;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269; HILIC &#x6CD5;&#x5FEB;&#x901F;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x6307;&#x5BFC;&#x65B9;&#x9488;&#x3002;

&#x5BF9;&#x4FDD;&#x7559;&#x3001; &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x548C; MS &#x54CD;&#x5E94;&#x5728;&#x4EB2;&#x6C34;&#x4F5C;&#x7528;&#x8272;&#x8C31;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x5316;&#x5B66;&#x4E0E;&#x6D41;&#x52A8;&#x76F8;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Une r&#xE9;tention compl&#xE8;te et la caract&#xE9;risation de la s&#xE9;lectivit&#xE9; chromatographie d&#x26;#39;interaction hydrophile plusieurs (HILIC) phases stationnaires a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e avec 28 sondes de test afin d&#x26;#39;&#xE9;tudier l&#x26;#39;influence du type de particules, la chimie de surface, et de phase mobile de pH sur la r&#xE9;tention chromatographique, la s&#xE9;lectivit&#xE9;, et la r&#xE9;ponse MS. Diff&#xE9;rences de s&#xE9;lectivit&#xE9; ont &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9;s pour les colonnes fonctionnant &#xE0; la fois un pH faible et &#xE9;lev&#xE9;, tandis que ESI-MS a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;e pour &#xE9;tudier les effets de phase mobile de pH sur la r&#xE9;ponse du signal. En outre, l&#x26;#39;ac&#xE9;tone a &#xE9;t&#xE9; explor&#xE9;e comme une alternative potentielle &#xE0; ACN en tant que solvant faible HILIC. Diff&#xE9;rences mod&#xE9;r&#xE9;es en mati&#xE8;re de s&#xE9;lectivit&#xE9; ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s sur la m&#xEA;me colonne exploit&#xE9; &#xE0; diff&#xE9;rents pH, la plupart du temps due &#xE0; des compos&#xE9;s acides. En outre, la r&#xE9;ponse MS augment&#xE9; lorsque le pH est &#xE9;lev&#xE9; phase mobile a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;, en particulier pour les analytes qui &#xE9;taient n&#xE9;gatifs ionis&#xE9; avec ESI-MS. Diff&#xE9;rences de s&#xE9;lectivit&#xE9; encore plus importantes ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;es pour diff&#xE9;rentes phases stationnaires &#xE9;valu&#xE9;es avec la m&#xEA;me phase mobile. L&#x26;#39;ac&#xE9;tone n&#x26;#39;est pas un substitut appropri&#xE9; pour ACN en routine s&#xE9;parations HILIC en raison de diff&#xE9;rences dans la s&#xE9;lectivit&#xE9; et la r&#xE9;ponse MS. Enfin, les donn&#xE9;es de cette &#xE9;tude ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour &#xE9;tablir des lignes directrices pour le d&#xE9;veloppement de m&#xE9;thodes rapides HILIC de compos&#xE9;s polaires, qui est d&#xE9;montr&#xE9; avec un m&#xE9;lange de dipeptides histidine et des m&#xE9;tabolites organophosphonates agents neurotoxiques.

Influence de la chimie en phase stationnaire et mobile-phase de composition sur le maintien, la s&#xE9;lectivit&#xE9;, et la r&#xE9;ponse de Mme de chromatographie d&#x26;#39;interaction hydrophile

Eine umfassende Aufbewahrungs- und Selektivit&auml;t Charakterisierung von mehreren hydrophil Interaktion Chromatographie (HILIC) station&auml;re Phasen wurde mit 28-Pr&uuml;fspitzen durchgef&uuml;hrt, um den Einfluss von Partikel-Typ, Oberfl&auml;chenchemie und mobil-pH pH-Wert auf Chromatographische Aufbewahrung, Selektivit&auml;t und MS Reaktionszeit zu studieren. Selektivit&auml;t Unterschiede wurden verglichen, f&uuml;r Spalten betrieben bei sowohl hohen als auch niedrigen pH-Wert, w&auml;hrend ESI-MS verwendet wurde, um die Auswirkungen von Handy-pH pH-Wert auf Signal Antwort zu studieren. Au&szlig;erdem wurde als m&ouml;gliche Alternative zu ACN als das schwache HILIC L&ouml;sungsmittel Aceton gepr&uuml;ft. Moderate Unterschiede in der Selektivit&auml;t wurden auf die gleiche Spalte auf unterschiedlichen pH, vor allem aufgrund der sauren Verbindungen betrieben beobachtet. Dar&uuml;ber hinaus erh&ouml;ht die MS Reaktionszeit bei eine hohen pH-Wert mobilen Phase, besonders f&uuml;r Analyten verwendet wurde, die mit negativen ESI-MS ionisiert wurden. Noch gr&ouml;&szlig;ere Selektivit&auml;t Unterschiede wurden f&uuml;r verschiedene station&auml;re Phasen ausgewertet mit der gleichen mobilen Phase beobachtet. Aceton war kein geeigneter Ersatz f&uuml;r ACN in Routine HILIC Trennungen aufgrund unterschiedlicher Selektivit&auml;t und MS Reaktionszeit. Schlie&szlig;lich wurden die Daten dieser Studie zur Festlegung von Leitlinien f&uuml;r HILIC Schnellmethode Entwicklung der polare Verbindungen, die mit einer Mischung aus Histidin Dipeptide und Organophosphonate Nerve Agent Metaboliten nachgewiesen wird.

Einfluss der station&auml;ren Phase Chemie und mobil-Phasen-Zusammensetzung auf Aufbewahrung, Selektivit&auml;t und MS Reaktionszeit in hydrophile Interaktion Chromatographie.

Una caratterizzazione completa ritenzione e selettivit&agrave; delle diverse fasi di cromatografia (HILIC) interazione idrofilo stazionaria &egrave; stata eseguita con 28 sonde di prova al fine di studiare l&#39;influenza del tipo di particella, chimica delle superfici e fase mobile pH sulla ritenzione di gascromatografiche, selettivit&agrave; e risposta MS. Differenze di selettivit&agrave; sono state confrontate per colonne operate a pH alto e basso, mentre ESI-MS &egrave; stato utilizzato per studiare gli effetti della fase mobile pH sulla risposta di segnale. Inoltre, acetone &egrave; stato esplorato come potenziale alternativa ad ACN come il solvente HILIC debole. Sono state osservate differenze moderate in selettivit&agrave; sulla stessa colonna operata a diversi pH, principalmente a causa di composti acidi. Inoltre, la risposta di MS aumentato quando &egrave; stata usata una fase mobile pH elevato, soprattutto per analiti che sono stati ionizzati con negativo ESI-MS. Per diverse fasi stazionarie valutate con la stessa fase mobile sono state osservate differenze di selettivit&agrave; ancora pi&ugrave; grande. Acetone non era un sostituto adeguato per ACN in routine HILIC separazioni a causa delle differenze nella risposta MS e selettivit&agrave;. Infine, i dati di questo studio sono stati utilizzati per stabilire linee guida per lo sviluppo di metodo HILIC rapida di composti polari, &egrave; dimostrato con una miscela di dipeptidi istidina e organophosphonate nervo agente metaboliti.

Influenza della composizione chimica e mobile-fase fase stazionaria sulla ritenzione, selettivit&agrave; e risposta MS in cromatografia di interazione idrofilo.

&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF08;HILIC&#xFF09;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x4FDD;&#x6301;&#x3068;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x5316;&#x5B66;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;&#x4FDD;&#x6301;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;MS&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x79FB;&#x52D5;&#x76F8;pH&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;28&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002; ESI-MS&#x306F;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x79FB;&#x52D5;&#x76F8;pH&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x4F4E;&#x57DF;&#x3068;&#x9AD8;pH&#x3067;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x5217;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C8;&#x30F3;&#x306F;&#x5F31;&#x3044;HILIC&#x6EB6;&#x5A92;&#x3068;&#x3057;&#x3066;ACN&#x3078;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x4EE3;&#x66FF;&#x624B;&#x6BB5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E;&#x4E2D;&#x7B49;&#x5EA6;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x539F;&#x56E0;&#x5225;&#x306E;pH&#x3067;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3057;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x5217;&#x4E0A;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9AD8;pH&#x79FB;&#x52D5;&#x76F8;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x8CA0;&#x306E;ESI-MS&#x3067;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x691C;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;MS&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x79FB;&#x52D5;&#x76F8;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C8;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3068;MS&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;HILIC&#x5206;&#x96E2;&#x306E;ACN&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;organophosphonate&#x795E;&#x7D4C;&#x5264;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x3067;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6975;&#x6027;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;HILIC&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x5316;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E0A;&#x306B;&#x79FB;&#x52D5;&#x76F8;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3001;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;MS&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;

&#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; (HILIC) &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xC885;&#xD569;&#xC801;&#xC778; &#xBCF4;&#xC874; &#xBC0F; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; 28 &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8; &#xBCF4;&#xC874;, &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4;, MS &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC785;&#xC790; &#xC720;&#xD615;, &#xD45C;&#xBA74; &#xD654;&#xD559;, &#xBC0F; &#xC774;&#xB3D9; &#xC0C1; Ph&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xCC28;&#xC774; ESI MS&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC774;&#xB3D9; &#xC0C1; Ph&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB0AE;&#xC740; &#xBC0F; &#xB192;&#xC740; &#xC0B0;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B4;&#xC601; &#xD558;&#xB294; &#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC544;&#xC138;&#xD1A4; &#xC57D;&#xD55C; HILIC &#xC6A9; &#xB9E4;&#xB85C; = &#xB274;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC548;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0D0;&#xD5D8; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xCC28;&#xC774; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xC0B0; &#xC131; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xB2E4;&#xB978; Ph&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B4;&#xC601; &#xD558; &#xACE0; &#xAC19;&#xC740; &#xC5F4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, MS &#xC751;&#xB2F5; &#xD2B9;&#xD788; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; ESI MS&#xC640; &#xC774;&#xC628;&#xD654; &#xB41C; analytes&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xC0B0;&#xB3C4; &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC744; &#xB54C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xD070; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xCC28;&#xC774; &#xB2E4;&#xB978; &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4; &#xAC19;&#xC740; &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xC138;&#xD1A4; &#xC77C;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; HILIC &#xBD84;&#xD310; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xBC0F; MS &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; ACN&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xAD50;&#xCCB4; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xBCF8;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518; dipeptides &#xBC0F; organophosphonate &#xC2E0;&#xACBD; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; metabolites&#xC758; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xBA85; &#xADF9; &#xC9C0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xBE60;&#xB978; HILIC &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C0;&#xCE68;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xBCF4;&#xC874;, &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4;, &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xC5D0;&#xC11C; MS &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4; &#xD654;&#xD559; &#xBC0F; &#xC774;&#xB3D9; &#xC0C1; &#xC870;&#xC131;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;.

Una retenci&#xF3;n integral y caracterizaci&#xF3;n selectividad de cromatograf&#xED;a de varios interacci&#xF3;n hidr&#xF3;fila (HILIC) fases estacionarias se realiz&#xF3; con 28 sondas de prueba con el fin de estudiar la influencia del tipo de part&#xED;cula, la qu&#xED;mica de superficie, y de fase m&#xF3;vil de pH sobre la retenci&#xF3;n cromatogr&#xE1;fica, selectividad, y la respuesta de MS. Las diferencias de selectividad se compararon para las columnas que trabajan a ambos valores de pH bajo y alto, mientras que ESI-MS se utiliz&#xF3; para estudiar los efectos de la fase m&#xF3;vil de pH en la respuesta de la se&#xF1;al. Adem&#xE1;s, la acetona fue explorada como una posible alternativa a la AIN que el disolvente HILIC d&#xE9;bil. Diferencias moderadas en la selectividad se observaron en la misma columna opera a diferentes pH, debido principalmente a los compuestos &#xE1;cidos. Adem&#xE1;s, la respuesta de MS aument&#xF3; cuando un pH alto fase m&#xF3;vil se utiliz&#xF3;, en particular para analitos que eran ionizada con negativo ESI-MS. Incluso m&#xE1;s grandes diferencias de selectividad se observaron para diferentes fases estacionarias evaluados con la misma fase m&#xF3;vil. La acetona no es un sustituto adecuado para ACN en la rutina de las separaciones HILIC debido a las diferencias en la selectividad y la respuesta de la EM. Por &#xFA;ltimo, los datos de este estudio fueron utilizados para establecer las directrices para el desarrollo r&#xE1;pido m&#xE9;todo de HILIC de compuestos polares, que se demuestra con una mezcla de dip&#xE9;ptidos histidina y metabolitos organofosfonato agente nervioso.

Influencia de la qu&#xED;mica en fase estacionaria y la fase m&#xF3;vil sobre la conservaci&#xF3;n de la composici&#xF3;n, la selectividad, y la respuesta de la EM en cromatograf&#xED;a de interacci&#xF3;n hidrof&#xED;lica

Kenneth J. Fountain

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Waters Corporation

Basic Principles for Purification Using Supercritical Fluid Chromatography - ADVERTISEMENT

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