<em>In vivo</em> Quantification of G Protein Coupled Receptor Interactions using Spectrally Resolved Two-photon Microscopy

The study of protein interactions in living cells is an important area of research because the information accumulated both benefits industrial ...

University of Wisconsin - Milwaukee

&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x6539;&#x5584;&#x7F3A;&#x8840;&#x4F4E;&#x704C;&#x6CE8;&#x548C; 15 &#x5206;&#x949F;&#x7684;&#x957F;&#x722A;&#x6C99;&#x9F20;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x540E;&#x964D;&#x4F4E;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3001; &#x963F;&#x52A0;&#x66F2;&#x73ED;&#x548C;&#x81EA;&#x7531;&#x57FA;&#x6E05;&#x9664;&#x5242;&#xFF0C;&#x4F9D;&#x8FBE;&#x62C9;&#x5949; (MCI-186) &#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x963F;&#x52A0;&#x66F2;&#x73ED;&#x6216;&#x4F9D;&#x8FBE;&#x62C9;&#x5949;&#x72EC;&#x81EA;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x7F3A;&#x8840;&#x7684;&#x8111;&#x8840;&#x6D41;&#x91CF;&#x548C;&#x8870;&#x51CF;&#x540E;&#x518D;&#x704C;&#x6CE8;&#x7684;&#x8111;&#x6C34;&#x80BF;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x7EC4;&#x5408;&#x589E;&#x52A0;&#x6210;&#x6D3B;&#x7387; (P &lt; 0.05 &#x7684;&#x58C1;&#x7089; Cox) &#x548C;&#x4FDD;&#x62A4;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x635F;&#x4F24;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x8868;&#x660E;&#x6297;&#x51DD;&#x5242;&#x548C;&#x81EA;&#x7531;&#x57FA;&#x6E05;&#x9664;&#x5242;&#x76F8;&#x4E92;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x6765;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x8840;&#x6027;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x7EC4;&#x5408;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6539;&#x5584;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x540E;&#x7684;&#x6210;&#x679C;&#x3002;

&#x7EC4;&#x5408;&#x963F;&#x52A0;&#x66F2;&#x73ED;&#x548C;&#x4F9D;&#x8FBE;&#x62C9;&#x5949;&#x5728;&#x6C99;&#x571F;&#x9F20;&#x9020;&#x6210;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5242;&#x5BF9; 15 &#x5206;&#x949F;&#x7684;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

We investigated whether or not a combination of the selective thrombin inhibitor, argatroban, and the free radical scavenger, edaravone (MCI-186), ameliorates postischemic hypoperfusion and decreases mortality after 15 min of forebrain ischemia in the gerbil. Argatroban or edaravone alone significantly increased postischemic cerebral blood flow and attenuated brain edema after reperfusion. However, only the combination increased the survival ratio (P<0.05 by Mantel-Cox) and protected the damage of neuronal cells. The present study indicates that anticoagulants and free radical scavengers reciprocally function to inhibit the progression of ischemic cell damage and that a combination of these types of drugs will help to improve the outcomes after cerebral ischemia.

Combined argatroban and edaravone caused additive neuroprotection against 15 min of forebrain ischemia in gerbils.

On &#xE9;tudi&#xE9; si oui ou non une combinaison de l&#x26;#39;inhibiteur s&#xE9;lectif thrombine, l&#x26;#39;argatroban, et le capteur de radicaux libres, edaravone (MCI-186), am&#xE9;liore une hypoperfusion post-isch&#xE9;mique et diminue la mortalit&#xE9; apr&#xE8;s 15 min de l&#x26;#39;isch&#xE9;mie du cerveau ant&#xE9;rieur chez la gerbille. Argatroban ou edaravone seule augmentation significative du d&#xE9;bit sanguin c&#xE9;r&#xE9;bral post-isch&#xE9;mique et l&#x26;#39;oed&#xE8;me c&#xE9;r&#xE9;bral att&#xE9;nu&#xE9; apr&#xE8;s la reperfusion. Toutefois, seule la combinaison augment&#xE9; le taux de survie (P &#x26;lt;0,05 par Mantel-Cox) et prot&#xE9;g&#xE9; l&#x26;#39;endommagement des cellules neuronales. La pr&#xE9;sente &#xE9;tude indique que les anticoagulants et les pi&#xE9;geurs de radicaux libres r&#xE9;ciproquement fonctionner pour inhiber la progression des l&#xE9;sions cellulaires isch&#xE9;miques et que la combinaison de ces types de m&#xE9;dicaments contribuera &#xE0; am&#xE9;liorer les r&#xE9;sultats apr&#xE8;s une isch&#xE9;mie c&#xE9;r&#xE9;brale.

Combin&#xE9; argatroban et Edaravone caus&#xE9;s neuroprotection Additif contre 15 min d&#x26;#39;isch&#xE9;mie du cerveau ant&#xE9;rieur chez des gerbilles

Kombinierte Argatroban und edaravone verursacht Additiv Neuroprotektion gegen 15 min von Vorderhirn-Isch&#xE4;mie bei Gerbils.

Abbiamo valutato se o non una combinazione degli scavenger di radicali liberi, edaravone (MCI-186), l&#39;inibitore selettivo della trombina e argatroban migliora postischemic hypoperfusion e diminuisce la mortalit&agrave; dopo 15 min di ischemia proencefalo nel gerbillo. Argatroban o edaravone da solo in modo significativo aumento del flusso sanguigno cerebrale postischemic e attenuato edema cerebrale dopo riperfusione. Tuttavia, solo la combinazione aumentato il rapporto di sopravvivenza (P &lt; 0.05 di Mantel-Cox) e protetto il danneggiamento delle cellule neuronali. Il presente studio indica che anticoagulanti e antiradicali liberi funzionano reciprocamente per inibire la progressione del danno ischemico cellulare e che una combinazione di questi tipi di farmaci contribuir&agrave; a migliorare i risultati dopo ischemia cerebrale.

Edaravone e argatroban combinato causato neuroprotezione additivo contro 15 min di ischemia proencefalo di gerbilli.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x865A;&#x8840;&#x5F8C;&#x306E;&#x8840;&#x6D41;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30CA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x306E;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x306E;15&#x5206;&#x5F8C;&#x306B;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x3092;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D0;&#x30F3;&#x3001;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B8;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3001;&#x30A8;&#x30C0;&#x30E9;&#x30DC;&#x30F3;&#xFF08;MCI-186&#xFF09;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D0;&#x30F3;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x30A8;&#x30C0;&#x30E9;&#x30DC;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x518D;&#x704C;&#x6D41;&#x5F8C;&#x306E;&#x865A;&#x8840;&#x5F8C;&#x306E;&#x8133;&#x8840;&#x6D41;&#x3068;&#x6E1B;&#x8870;&#x8133;&#x6D6E;&#x816B;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#xFF08;&#x30DE;&#x30F3;&#x30C6;&#x30EB;&#xB7;&#x30B3;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;P &#x26;lt;0.05&#xFF09;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x6297;&#x51DD;&#x56FA;&#x5264;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B8;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x865A;&#x8840;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3001;&#x85AC;&#x7269;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x5F8C;&#x306E;&#x8EE2;&#x5E30;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D0;&#x30F3;&#x3068;&#x30A8;&#x30C0;&#x30E9;&#x30DC;&#x30F3;&#x306F;&#x30B9;&#x30CA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x306E;&#x524D;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x306E;15&#x5206;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5264;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;, argatroban, edaravone (MCI-186), &#xC790;&#xC720; &#xB798; &#xB514; &#xCE7C; &#xC2A4;&#xCE90;&#xBE48;&#xC800; postischemic hypoperfusion ameliorates&#xC640; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0; &#xAC1C; &#xD5C8; &#xD608;&#xC758; 15 &#xBD84; &#xD6C4; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC5EC;&#xBD80; &#xC870;&#xC0AC;. Argatroban &#xB610;&#xB294; edaravone &#xD63C;&#xC790; &#xD06C;&#xAC8C; postischemic &#xB300;&#xB1CC; &#xD608; &#xB958; &#xB7C9; &#xC99D;&#xAC00; reperfusion &#xD6C4; &#xB1CC; &#xBD80; &#xC885; &#xAC10;&#xC1E0;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;&#xB9CC; &#xC870;&#xD569; &#xC0DD;&#xC874; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294;, (P &lt; &#xBCBD;&#xB09C;&#xB85C; &#xCF55;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; 0.05) &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC190;&#xC0C1;&#xC744; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; anticoagulants &#xBC0F; &#xC790;&#xC720; &#xB798; &#xB514; &#xCE7C; &#xCCAD;&#xC18C;&#xBD80; &#xC2DC;&#xD504; &#xD5C8; &#xD608; &#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xB300;&#xB1CC; &#xAD6D; &#xC18C; &#xBE48; &#xD608; &#xD6C4; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACB0;&#xD569; &#xB41C; argatroban &#xBC0F; edaravone &#xAC1C; &#xD5C8; &#xD608;&#xC758; 15 &#xBD84;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCCA8;&#xAC00;&#xC81C; neuroprotection gerbils&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hemos investigado si o no una combinaci&#xF3;n de inhibidor selectivo de la trombina, argatroban, y el captador de radicales libres, edaravone (MCI-186), mejora la hipoperfusi&#xF3;n post-isqu&#xE9;mica y disminuye la mortalidad despu&#xE9;s de 15 minutos de isquemia del cerebro anterior en el jerbo. Argatroban o edaravone solo aument&#xF3; significativamente el flujo sangu&#xED;neo cerebral post-isqu&#xE9;mica y edema cerebral atenuada despu&#xE9;s de la reperfusi&#xF3;n. Sin embargo, s&#xF3;lo la combinaci&#xF3;n de aumento de la proporci&#xF3;n de supervivencia (p &#x26;lt;0,05 en la de Mantel-Cox) y protegidos del da&#xF1;o de las c&#xE9;lulas neuronales. El presente estudio indica que los anticoagulantes y eliminadores de radicales libres rec&#xED;procamente funcionar para inhibir la progresi&#xF3;n del da&#xF1;o celular isqu&#xE9;mico y que una combinaci&#xF3;n de estos tipos de medicamentos ayudar&#xE1; a mejorar los resultados despu&#xE9;s de la isquemia cerebral.

Combinado argatroban y Edaravone causados &#x200B;&#x200B;Neuroprotecci&#xF3;n aditivo contra 15 minutos de isquemia cerebral anterior en jerbos

&#x4EBA;&#x5DE5;&#x8033;&#x8717;&#x8840;&#x7BA1;&#x7EB9;&#x4EA7;&#x751F;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x6DB2;&#x548C;&#x751F;&#x6210; endocochlear &#x76F4;&#x6D41;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x542C;&#x89C9;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x8FB9;&#x9645;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6784;&#x6210;&#x7EB9;&#xFF0C;&#x51E0;&#x79CD;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E4B;&#x4E00;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C; (TEM) &#x79F0;&#x4E3A; &#39;&#x9ED1;&#x7262;&#39; &#x5176;&#x5916;&#x89C2;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0A;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x6F84;&#x6E05;&#x662F;&#x5426;&#x8FD9;&#x901A;&#x5E38;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x6697;&#x5916;&#x89C2;&#39; &#x662F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5F81;&#xFF0C;&#x5982;&#x63A8;&#x6D4B;&#x5728;&#x6587;&#x5B66;&#x6216;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x9879;&#x76EE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4F53;&#x5185;&#x56FA;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C3D;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11;&#x7F3A;&#x8840;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x635F;&#x5BB3;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x4E0B;&#x4E0E;&#x6C27;&#x5408;&#x8840;&#x6301;&#x7EED;&#x4F53;&#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x6C99;&#x9F20;&#x8033;&#x8717;&#x8840;&#x7BA1;&#x7EB9;&#x5316;&#x5B66;&#x56FA;&#x5B9A;&#x56FA;&#x8272;&#x5242;&#x5916;, &#x6DCB;&#x5DF4;&#x704C;&#x6CE8;&#x548C;&#x8840;&#x7BA1;&#x7EB9;&#x7528;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x3002;&#x4E0E;&#x8FC7;&#x53BB;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E4C;&#x4E91;&#xFF0C;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x548C;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x96F6;&#x90E8;&#x4EF6;&#x4EA7;&#x4E1A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF09; &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x6CA1;&#x6709;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x5B66;&#x610F;&#x4E49;&#x3002;&#x6765;&#x6BD4;&#x8F83;&#xFF0C;&#x6C99;&#x571F;&#x9F20;&#x88AB;&#x5141;&#x8BB8;&#x8FDB;&#x884C; 3 &#x5206;&#x949F;&#x7684;&#x7F3A;&#x8840;&#x540E;&#x88AB;&#x65A9;&#x9996;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8FB9;&#x9645;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x9ED1;&#x5916;&#x89C2;&#39;&#xFF0C;&#x5982;&#x524D;&#x6240;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x548C;&#x5176;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x662F;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684; 1.7 &#x500D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x5386; 3 &#x5206;&#x949F;&#x7684;&#x7F3A;&#x8840;&#x7684;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x5F97;&#x5230;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x627F;&#x8BA4;&#x7684; &#39;&#x9ED1;&#x7262;&#39; &#x5916;&#x89C2;&#x7684;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7EC6;&#x80DE;&#x540E;&#x5E38;&#x89C4;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x53CD;&#x6620;&#x4E86;&#x7531;&#x4E8E;&#x7F3A;&#x8840;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x56FA;&#x5B9A;&#x534F;&#x8BAE;&#x907F;&#x514D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x635F;&#x4F24;&#x3002;

&#x6025;&#x6027;&#x7F3A;&#x8840;&#x5BFC;&#x81F4;&#x96F6;&#x90E8;&#x4EF6;&#x4EA7;&#x4E1A;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; &#39;&#x9ED1;&#x7262;&#39; &#x53D8;&#x5316;&#x4E2D;&#x957F;&#x722A;&#x6C99;&#x9F20;&#x8033;&#x8717;&#x3002;

The cochlear stria vascularis produces the endolymph and generates the endocochlear DC potential, two indispensable ingredients of an auditory transduction process. The marginal cell, one of the several cell types constituting the stria vascularis, is called 'the dark cell' on the basis of its appearance by transmission electron microscopy (TEM). To clarify whether this commonly observed 'dark appearance' is a normal characteristic of marginal cells, as conjectured in the literature, or an experimental artifact, we developed an in vivo fixation method for minimizing ischemic tissue damages. While under sustained systemic circulation with oxygenated blood, the stria vascularis of gerbils was chemically fixed by perilymphatic perfusion with a fixative, and the stria vascularis was observed by TEM. In contrast to a number of previous reports, the cytoplasm of marginal cells was not dark, and quantitative analysis showed that the difference between the cytoplasmic electron density of marginal cells and that of intermediate cells (another type of strial cells) was not statistically significant. For comparison, the gerbils were allowed to undergo 3 min of ischemia following decapitation. Under these conditions, marginal cells showed typical 'dark appearance', as reported previously, and their cytoplasmic electron density was 1.7 times higher than that of the intermediate cells. In addition, the volume of mitochondria in marginal cells undergoing 3 min of ischemia was higher than that fixed in vivo. We therefore conclude that the widely recognized 'dark cell' appearance of marginal cells following conventional fixation procedures reflects cell injury due to ischemia, which is inherent in the standard fixation procedures, but can be avoided by our fixation protocol here introduced.

Acute ischemia causes 'dark cell' change of strial marginal cells in gerbil cochlea.

La vasculaire cochl&#xE9;aire strie produit l&#x26;#39;endolymphe et g&#xE9;n&#xE8;re le potentiel DC endocochl&#xE9;aire, deux ingr&#xE9;dients indispensables d&#x26;#39;un processus de transduction auditive. La cellule marginale, l&#x26;#39;un des types de cellules constituant plusieurs de la strie vasculaire, est appel&#xE9; &#xAB;la cellule sombre&#xBB; sur la base de son apparence en microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; transmission (TEM). Pour pr&#xE9;ciser si cette commun&#xE9;ment observ&#xE9;s &#x26;#39;aspect sombre &#xBB;est une caract&#xE9;ristique normale de cellules marginales, comme conjectur&#xE9; dans la litt&#xE9;rature, ou un artefact exp&#xE9;rimental, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une m&#xE9;thode de fixation in vivo pour minimiser les dommages des tissus isch&#xE9;miques. Alors qu&#x26;#39;en vertu de la circulation syst&#xE9;mique soutenue avec du sang oxyg&#xE9;n&#xE9;, la strie vasculaire de gerbilles a &#xE9;t&#xE9; chimiquement fix&#xE9;s par perfusion p&#xE9;rilymphatique avec un fixateur, et la strie vasculaire a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e par MET. Contrairement &#xE0; un certain nombre de pr&#xE9;c&#xE9;dents rapports, le cytoplasme des cellules marginales n&#x26;#39;&#xE9;tait pas sombre, et l&#x26;#39;analyse quantitative a montr&#xE9; que la diff&#xE9;rence entre la densit&#xE9; d&#x26;#39;&#xE9;lectrons cytoplasmique des cellules marginales et que des cellules interm&#xE9;diaires (un autre type de cellules strial) n&#x26;#39;&#xE9;tait pas statistiquement significative. A titre de comparaison, les gerbilles ont &#xE9;t&#xE9; autoris&#xE9;s &#xE0; subir 3 min de la d&#xE9;capitation suivant l&#x26;#39;isch&#xE9;mie. Dans ces conditions, les cellules marginales montr&#xE9; typique sombre apparence &#xBB;, comme indiqu&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment, et leur densit&#xE9; d&#x26;#39;&#xE9;lectrons cytoplasmique &#xE9;tait 1,7 fois plus &#xE9;lev&#xE9; que celui des cellules interm&#xE9;diaires. En outre, le volume des mitochondries dans les cellules marginales subissant 3 min d&#x26;#39;isch&#xE9;mie &#xE9;tait plus &#xE9;lev&#xE9; que celui fix&#xE9; in vivo. Nous concluons donc que l&#x26;#39;apparence de la largement reconnu &#xAB;cellule sombre&#xBB; des cellules marginales en suivant les proc&#xE9;dures de fixation classiques refl&#xE8;te une l&#xE9;sion cellulaire due &#xE0; une isch&#xE9;mie, qui est inh&#xE9;rente aux proc&#xE9;dures de fixation standard, mais peut &#xEA;tre &#xE9;vit&#xE9;e par notre protocole de fixation introduit ici.

Des cellules sombres &#x26;quot;Causes isch&#xE9;mie aigu&#xEB; Changement de strial cellules marginales en Gerbil Cochl&#xE9;e

Akute Isch&#xE4;mie verursacht &#x26;quot;dunklen Zelle des Wechsels der strieaufnehmer marginalen Zellen in W&#xFC;stenrennmaus Cochlea.

La cocleare stria vascularis produce il endolymph e genera il endocochlear DC potenziali, due ingredienti indispensabili di un processo di trasduzione uditiva. La cellula marginale, tra i diversi tipi di cellule che costituiscono la stria vascularis, viene chiamata &#39;la cella oscura&#39; sulla base del suo aspetto da microscopia elettronica della trasmissione (TEM). Per chiarire se questo comunemente osservato &#39;aspetto oscuro&#39; &egrave; una caratteristica normale delle cellule marginali, come ipotizzato nella letteratura, o un artefatto sperimentale, abbiamo sviluppato un metodo di fissazione in vivo per minimizzare i danni del tessuto ischemico. Mentre in circolazione sistemica sostenuta con sangue ossigenato, la stria vascularis di gerbilli chimicamente &egrave; stato fissato dalla perfusione perilinfatica con un fissativo e la stria vascularis fu osservato da TEM. In contrasto con un numero di precedenti relazioni, il citoplasma delle cellule marginali non era buio, e analisi quantitativa ha mostrato che la differenza tra la densit&agrave; dell&#39;elettrone citoplasmatica delle cellule marginali e quella delle cellule intermedie (un altro tipo di cellule realizzate) non era statisticamente significativa. Per confronto, i gerbilli furono autorizzati a sottoporsi a 3 min di ischemia dopo la decapitazione. In queste condizioni, cellule marginali ha mostrato il tipico &#39;aspetto scuro&#39;, come riportato in precedenza, e loro densit&agrave; dell&#39;elettrone citoplasmatica era 1,7 volte superiore a quella delle cellule intermedie. Inoltre, il volume dei mitocondri nelle cellule marginali in fase 3 min di ischemia &egrave; stato superiore a quello fissato in vivo. Pertanto, possiamo concludere che l&#39;aspetto ampiamente riconosciuto &#39;oscura cella&#39; di cellule marginali seguendo le procedure di fissaggio convenzionale riflette la lesione delle cellule a causa di ischemia, che &egrave; inerente le procedure di fissaggio standard, ma pu&ograve; essere evitato dal nostro protocollo di fissazione qui introdotto.

Ischemia acuta provoca &#39;oscura cella&#39; modifica delle cellule marginali realizzate nella coclea gerbillo.

&#x8778;&#x725B;&#x306E;&#x7DDA;&#x6761;&#x306E;vascularis&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x8778;&#x725B;&#x5185;&#x76F4;&#x6D41;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3001;&#x8074;&#x899A;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x6210;&#x5206;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x7DDA;&#x6761;&#x306E;vascularis&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x304C;&#x3001;&#x900F;&#x904E;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;TEM&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5916;&#x89B3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; &#x26;quot;&#x30C0;&#x30FC;&#x30AF;&#x7D30;&#x80DE;&#x26;quot;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x89B3;&#x5BDF; &#x26;quot;&#x6697;&#x3044;&#x5916;&#x89B3;&#x26;quot;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6587;&#x732E;&#x306B;&#x63A8;&#x6E2C;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x865A;&#x8840;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9178;&#x7D20;&#x3092;&#x8840;&#x6DB2;&#x3068;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x5168;&#x8EAB;&#x5FAA;&#x74B0;&#x4E0B;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x9593;&#x3001;&#x30B9;&#x30CA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x306E;&#x7DDA;&#x6761;&#x306E;vascularis&#x306F;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x5916;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x704C;&#x6D41;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x7DDA;&#x6761;&#x306E;vascularis&#x3092;TEM&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x6570;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306F;&#x6697;&#x304F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E2D;&#x9593;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;strial&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5225;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#xFF09;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x306E;&#x5DEE;&#x306F;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30B9;&#x30CA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x306F;&#x3001;&#x65AD;&#x982D;&#x5F8C;&#x306B;&#x865A;&#x8840;&#x306E;3&#x5206;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A; &#x26;quot;&#x6697;&#x3044;&#x5916;&#x89B3;&#x3092; &#x26;#39;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;1.7&#x500D;&#x9AD8;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x865A;&#x8840;&#x306E;3&#x5206;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x4F53;&#x7A4D;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9AD8;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x624B;&#x9806;&#x306B;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5E83;&#x304F;&#x8A8D;&#x77E5;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; &#x26;quot;&#x6697;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5916;&#x89B3;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x56FA;&#x5B9A;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x865A;&#x8840;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x200B;&#x200B;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30B9;&#x30CA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x8778;&#x725B;&#x5185;Strial&#x30DE;&#x30FC;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6025;&#x6027;&#x865A;&#x8840;&#x304C;&#x539F;&#x56E0; &#x26;quot;&#x6697;&#x3044;&#x30BB;&#x30EB; &#x26;#39;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;

&#xC778;&#xACF5; &#xC640;&#xC6B0;&#xAC00; vascularis&#xB97C; endolymph &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC0DD;&#xC131; endocochlear DC &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778;, &#xCCAD;&#xAC01; &#xC804;&#xB2EC; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD544;&#xC218; &#xC7AC;&#xB8CC;. &#xD754; vascularis &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xD558;&#xB098; &#xD55C;&#xACC4; &#xC140; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (TEM)&#xC73C;&#xB85C; &#39;&#xC758; &#xBAA8;&#xC2B5;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9D9;&#xC740; &#xC140;&#39; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBB38;&#xD559;, &#xB610;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xC544;&#xD2F0;&#xD329;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xCD94;&#xCE21;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#39;&#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4; &#xBAA8;&#xC2B5;&#39;&#xC740; &#xD55C;&#xACC4; &#xC140;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xBA85;&#xD655;&#xD788;, &#xD5C8; &#xD608; &#xC131; &#xC870;&#xC9C1; &#xD53C;&#xD574;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; in vivo &#xACE0;&#xC815; &#xBC29;&#xBC95; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC0B0;&#xC18C;&#xB97C; &#xD608;&#xC561;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC21C;&#xD658;, &#xC544;&#xB798; gerbils &#xD754; vascularis perilymphatic &#xAD00;&#xB958;&#xB97C; &#xC815;&#xCC29; &#xC561;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xC5EC; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACE0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xD754; vascularis TEM&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC758; &#xC218;, &#xB2EC;&#xB9AC; &#xD55C;&#xACC4; &#xC140;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC6E0; &#xD558;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xC911;&#xAC04; &#xC140; (strial &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;)&#xC758; &#xD55C;&#xACC4; &#xC140;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC804;&#xC790; &#xBC00;&#xB3C4; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC758;&#xBBF8;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xC704;&#xD574;, gerbils&#xB294; &#xC798;&#xB9B0; &#xB2E4;&#xC74C; &#xAD6D; &#xC18C; &#xBE48; &#xD608;&#xC758; 3 &#xBD84;&#xC744; &#xBC1B;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD55C;&#xACC4; &#xC140; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; &#xC804;&#xD615;&#xC801;&#xC778; &#39;&#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4; &#xBAA8;&#xC2B5;&#39;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC804;&#xC790; &#xBC00;&#xB3C4; &#xC911;&#xAC04; &#xC140; &#xBCF4;&#xB2E4; 1.7 &#xBC30; &#xB354; &#xB192;&#xC740;. &#xB610;&#xD55C;, &#xAD6D; &#xC18C; &#xBE48; &#xD608;&#xC758; 3 &#xBD84; &#xBC1B;&#xACE0; &#xD55C;&#xACC4; &#xC140;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC758; &#xBCFC;&#xB968; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xC815; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB192;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xACE0;&#xC815; &#xC808;&#xCC28; &#xD55C;&#xACC4; &#xC140; &#xB110;&#xB9AC; &#xC778;&#xC2DD; &#xB41C; &#39;&#xB2E4;&#xD06C; &#xC140;&#39; &#xBAA8;&#xC591;&#xC744; &#xBC18;&#xC601; &#xD45C;&#xC900; &#xC815;&#xCC29; &#xC808;&#xCC28;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACE0;&#xC815; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD53C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAD6D; &#xC18C; &#xBE48; &#xD608;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD574; &#xACB0;&#xB860;.

&#xAE09;&#xC131; &#xD5C8; &#xD608; gerbil &#xB2EC;&#xD33D;&#xC774; &#xAD00;&#xC5D0; strial &#xD55C;&#xACC4; &#xC140;&#xC758; &#39;&#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4; &#xC140;&#39; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294;.

La estr&#xED;a vascular coclear produce la endolinfa y genera el potencial de CC endococlear, dos ingredientes indispensables de un proceso de transducci&#xF3;n auditiva. La c&#xE9;lula marginal, uno de los varios tipos de c&#xE9;lulas que constituyen la estr&#xED;a vascular, se denomina &#x26;quot;la celda oscura &#x26;#39;sobre la base de su apariencia por microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de transmisi&#xF3;n (TEM). Para aclarar si esto se observa com&#xFA;nmente &#x26;quot;aspecto oscuro&#x26;quot; es una caracter&#xED;stica normal de las c&#xE9;lulas marginales, como se conjetur&#xF3; en la literatura, o un artefacto experimental, hemos desarrollado un m&#xE9;todo de fijaci&#xF3;n in vivo para minimizar los da&#xF1;os isqu&#xE9;micos tejidos. Mientras que en la circulaci&#xF3;n sist&#xE9;mica sostenida con sangre oxigenada, la estr&#xED;a vascular de los jerbos se fija qu&#xED;micamente por perfusi&#xF3;n perilinf&#xE1;tica con un fijador, y la estr&#xED;a vascular fue observada por TEM. En contraste con un n&#xFA;mero de informes anteriores, el citoplasma de las c&#xE9;lulas marginales no era oscura, y el an&#xE1;lisis cuantitativo mostr&#xF3; que la diferencia entre la densidad de electrones citopl&#xE1;smica de las c&#xE9;lulas marginales y la de las c&#xE9;lulas intermedias (otro tipo de c&#xE9;lulas strial) no fue estad&#xED;sticamente significativa. Por comparaci&#xF3;n, los gerbos se permiti&#xF3; que someterse a 3 min de decapitaci&#xF3;n isquemia siguiente. Bajo estas condiciones, las c&#xE9;lulas marginales mostr&#xF3; t&#xED;pico &#x26;quot;oscuro apariencia &#x26;#39;, como se inform&#xF3; anteriormente, y su densidad de electrones citopl&#xE1;smica era 1,7 veces mayor que la de las c&#xE9;lulas intermedias. Adem&#xE1;s, el volumen de las mitocondrias en las c&#xE9;lulas marginales sometidos a 3 min de isquemia fue mayor que el fijado en vivo. Por lo tanto, la conclusi&#xF3;n de que la apariencia de la ampliamente reconocida &#x26;#39;celda oscura&#x26;#39; de las c&#xE9;lulas marginales siguiendo los procedimientos convencionales de fijaci&#xF3;n refleja da&#xF1;o celular debido a la isquemia, que es inherente a los procedimientos de fijaci&#xF3;n est&#xE1;ndar, pero se puede evitar la fijaci&#xF3;n de nuestro protocolo introduce aqu&#xED;.

De celda oscura &#x26;#39;Causas de isquemia aguda de cambio de las c&#xE9;lulas marginales strial en la c&#xF3;clea Gerbil

&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; (&#x97F3;&#x54C1;)-&#x57FA;&#x4E8E;&#x5BFB;&#x627E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#x86CB;&#x767D;&#x4EBA;&#x53E3; &#xFF08;alpha(T)) &#x4E2D;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5EFA;&#x7B51;&#x7FA4;&#x5F62;&#x6210;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x53CA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x6570; (n)&#x3002;&#x8BE5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5173;&#x4E8E;&#x81F4;&#x654F;&#x627F;&#x5151;&#x4EBA;&#x6392;&#x653E;&#x548C;&#x6350;&#x52A9;&#x8005; de-quenching (&#x7531;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x5206;&#x5B50;&#xFF09;&#xFF0C;&#x52A0;&#x5168;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5FAE;&#x5206;&#x8367;&#x5149;&#x7B7E;&#x540D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x91CF;&#x5316;&#x4F53;/&#x53D7;&#x4F53;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x9650;&#x5236;&#x975E;&#x5E38;&#x9002;&#x5408;&#x4F53;&#x5185;&#x5FAE;&#x89C2;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x7528;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7814;&#x7A76;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x3001; &#x9752;&#x8272;&#x3001; &#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x6807;&#x7B7E;&#x4E0A;&#x7684;&#x4E0D;&#x80B2; 2 &alpha; &#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; (Ste2p) (GFP&#x3001; CFP &#x548C; YFP &#x5206;&#x522B;&#xFF09;&#xFF0C;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x7406;&#x8BBA;&#x6A21;&#x578B;&#x88AB;&#x63D0;&#x51FA;&#x6709;&#x5173;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x79CD;&#x7FA4; &#xFF08;&#x660E;&#x663E;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#x3001; E(app)) &#x8F6C;&#x4E00;&#x5355;&#x4E00;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;/&#x627F;&#x5151;&#x4EBA;&#x5BF9; (E&#xFF0C;&#x771F;&#x6B63;&#x7684;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;) &#x7684;&#x80FD;&#x91CF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x51B3;&#x5FC3;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;/&#x627F;&#x5151;&#x4EBA;&#x5BF9;&#xFF0C;Ste2p-CFP/Ste2p-YFP &#x548C; Ste2p-GFP/Ste2p-YFP E(app) &#x6D4B;&#x91CF; E&#x3002;&#x4ECE; E(app) &#x548C; E &#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x5927;&#x7EA6; 1 alpha(T) &#x548C; n &#x5927;&#x7EA6; 2 Ste2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; Ste2p &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x6CA1;&#x6709;&#x914D;&#x4F53;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA; alpha &#x56E0;&#x5B50;&#x4FE1;&#x606F;&#x7D20;&#x4E0D;&#x5FC5;&#x8981;&#x4E3A;&#x4E8C;&#x805A;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x5149;&#x8C31;&#x89E3;&#x6790;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;

We describe a fluorescence resonance energy transfer (FRET)-based method for finding in living cells the fraction of a protein population (alpha(T)) forming complexes, and the average number (n) of those protein molecules in each complex. The method relies both on sensitized acceptor emission and on donor de-quenching (by photobleaching of the acceptor molecules), coupled with full spectral analysis of the differential fluorescence signature, in order to quantify the donor/acceptor energy transfer. The approach and sensitivity limits are well suited for in vivo microscopic investigations. This is demonstrated using a scanning laser confocal microscope to study complex formation of the sterile 2 alpha-factor receptor protein (Ste2p), labelled with green, cyan, and yellow fluorescent proteins (GFP, CFP, and YFP respectively), in budding yeast Saccharomyces cerevisiae. A theoretical model is presented that relates the efficiency of energy transfer in protein populations (the apparent FRET efficiency, E(app)) to the energy transferred in a single donor/acceptor pair (E, the true FRET efficiency). We determined E by using a new method that relies on E(app) measurements for two donor/acceptor pairs, Ste2p-CFP/Ste2p-YFP and Ste2p-GFP/Ste2p-YFP. From E(app) and E we determined alpha(T) approximately 1 and n approximately 2 for Ste2 proteins. Since the Ste2p complexes are formed in the absence of the ligand in our experiments, we conclude that the alpha-factor pheromone is not necessary for dimerization.

Protein interaction quantified in vivo by spectrally resolved fluorescence resonance energy transfer.

On d&#xE9;crit un transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance de fluorescence (FRET) &#xE0; base de proc&#xE9;d&#xE9; de recherche d&#x26;#39;cellules vivantes dans la fraction d&#x26;#39;une population de prot&#xE9;ines (alpha (t)) des complexes de formage, et le nombre moyen (n) de ces mol&#xE9;cules prot&#xE9;iques dans chaque complexe. Proc&#xE9;d&#xE9; repose &#xE0; la fois sur &#xE9;mission de l&#x26;#39;accepteur sensibilis&#xE9;e et le donneur de-trempe (par photoblanchiment des mol&#xE9;cules accepteurs), coupl&#xE9;e &#xE0; une analyse spectrale compl&#xE8;te de la signature de fluorescence diff&#xE9;rentielle, afin de quantifier le transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie donneur / accepteur. Les limites de l&#x26;#39;approche et la sensibilit&#xE9; sont bien adapt&#xE9;s pour les enqu&#xEA;tes microscopiques in vivo. Ceci est d&#xE9;montr&#xE9; en utilisant un microscope &#xE0; balayage laser confocal &#xE0; &#xE9;tudier la formation du complexe de la st&#xE9;rile 2 prot&#xE9;ines de r&#xE9;cepteur alpha du facteur (Ste2p), &#xE9;tiquet&#xE9; avec le vert, cyan, jaune et prot&#xE9;ines fluorescentes (GFP, CFP, YFP et respectivement), en levure Saccharomyces herbe cerevisiae. Un mod&#xE8;le th&#xE9;orique est pr&#xE9;sent&#xE9; relie l&#x26;#39;efficacit&#xE9; du transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie dans les populations de prot&#xE9;ines (l&#x26;#39;apparente efficacit&#xE9; de FRET, E (app)) &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;nergie transf&#xE9;r&#xE9;e dans un seul couple donneur / accepteur (E, le vrai FRET efficacit&#xE9;). Nous avons d&#xE9;termin&#xE9; par E &#xE0; l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;une nouvelle m&#xE9;thode qui repose sur E (app) des mesures pour deux donneur / accepteur paires, Ste2p-CFP/Ste2p-YFP et Ste2p-GFP/Ste2p-YFP. De E (app) et E, nous avons d&#xE9;termin&#xE9; alpha (T) d&#x26;#39;environ 1 et n d&#x26;#39;environ 2 pour STE2 prot&#xE9;ines. Depuis les complexes Ste2p sont form&#xE9;s en l&#x26;#39;absence du ligand dans nos exp&#xE9;riences, nous concluons que la ph&#xE9;romone alpha-facteur n&#x26;#39;est pas n&#xE9;cessaire &#xE0; la dim&#xE9;risation.

Interaction prot&#xE9;ine quantifi&#xE9;e in vivo par r&#xE9;solution spectrale de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance de fluorescence

Protein-Interaktion in vivo durch spektral aufgel&#xF6;ste Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer quantifiziert.

Descriviamo un trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza (FRET)-basato su metodo per trovare nelle cellule viventi la frazione di una popolazione di proteina (alpha(T)) formando complessi e il numero medio (n) di quelle molecole proteiche in ogni complesso. Il metodo si basa sia sulle emissioni sensibilizzate accettore e donatore de-quenching (da photobleaching delle molecole del ricettore), accoppiato con analisi spettrale completa della firma del differenziale fluorescenza, al fine di quantificare il trasferimento di energia donor/acceptor. I limiti di sensibilit&agrave; e approccio sono adatti per indagini microscopiche in vivo. Questo &egrave; dimostrato utilizzando un microscopio confocale a scansione laser per studiare la formazione dei complessi della proteina del recettore alfa-fattore 2 sterile (Ste2p), etichettata con le proteine fluorescenti verde, ciano e gialle (GFP, CFP e YFP rispettivamente), nel lievito gemmante Saccharomyces cerevisiae. Un modello teorico &egrave; presentato che riguarda l&#39;efficienza di trasferimento di energia nelle popolazioni di proteina (l&#39;apparente efficienza FRET, E(app)) l&#39;energia trasferita in una coppia singola donor/acceptor (E la vera efficienza FRET). Abbiamo determinato E utilizzando un nuovo metodo che si basa su misurazioni E(app) per due coppie di donor/acceptor, Ste2p-CFP/Ste2p-YFP e Ste2p-GFP/Ste2p-YFP. Da E(app) ed E abbiamo determinato alpha(T) circa 1 e n 2 circa per Ste2 proteine. Poich&eacute; in assenza di ligando nei nostri esperimenti si formano i complessi Ste2p, possiamo concludere che il fattore-alfa feromone non &egrave; necessario per la dimerizzazione.

Interazione proteina quantificato in vivo per il trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza spettralmente risolto.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#xFF08;&#x3B1;&#xFF08;T&#xFF09;&#xFF09;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x3001;&#x5404;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x6570;&#xFF08;n&#xFF09;&#x3092;&#x6C42;&#x3081;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;/&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5FAE;&#x5206;&#x86CD;&#x5149;&#x7F72;&#x540D;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x76F8;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x611F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x767A;&#x5149;&#x3067;&#x3001;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#xB7;&#x30C7;&#xB7;&#x713C;&#x5165;&#x308C;&#xFF08;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x9000;&#x8272;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#xFF09;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3068;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E;&#x9650;&#x754C;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x751F;&#x4F53;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#x5C5E;&#x3067;&#x3001;&#x7DD1;&#x3001;&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x3001;&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;GFP&#x3001;CFP&#x3068;YFP&#xFF09;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7121;&#x83CC;&#x306E;2&#x3B1;-&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#xFF08;Ste2p&#xFF09;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x9175;&#x6BCD;&#x3002;&#x7406;&#x8AD6;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x3067;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x5316;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;/&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x5BFE;&#xFF08;E&#x3001;&#x771F;&#x306E;FRET&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#xFF09;&#x3067;&#x8EE2;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306B;&#xFF08;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x4E0A;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x3001;E&#x3092;&#xFF08;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#xFF09;FRET&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;2&#x3064;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;/&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x30DA;&#x30A2;&#x306E;E&#xFF08;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#xFF09;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3001;Ste2p-CFP/Ste2p-YFP&#x3068;Ste2p-GFP/Ste2p-YFP&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;E&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; E&#xFF08;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#xFF09;&#x3068;E&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;STE2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x3B1;&#xFF08;T&#xFF09;&#x306F;&#x7D04;1&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;n&#x306F;&#x7D04;2&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Ste2p&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x975E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3B1;-&#x56E0;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5206;&#x89E3;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x5B9A;&#x91CF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;

&#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET) &#xC124;&#xBA85;-&#xAE30;&#xBC18; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xAD6C; (&#xAC01; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xC9C0;, &#xADF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xC218; (n)&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; alpha(T)) &#xC77C;&#xBD80; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC3E;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;. &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xBAA8;&#xB450; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD558;&#xAC8C; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xBC29;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC218;&#xB77D;&#xC790;/&#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD615;&#xAD11; &#xC11C;&#xBA85;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xD569; (&#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; photobleaching)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; de-quenching. &#xC811;&#xADFC; &#xBC0F; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xCCAD;&#xB85D;&#xC0C9;, &#xB179;&#xC0C9;&#xACFC; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xC154; &#xC11C; &#xBA54; &#xB9C8;&#xB978; 2 &#xC54C;&#xD30C; &#xACC4;&#xC218; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (Ste2p)&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xB808;&#xC774;&#xC800; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC99D;&#xBA85; (GFP, CFP, &#xBC0F; YFP &#xAC01;&#xAC01;), &#xC2E0;&#xC9C4; &#xD6A8; &#xBAA8; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xAD6C; (&#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; FRET &#xD6A8;&#xC728;, &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;/&#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xC30D; (E, &#xC9C4;&#xC815;&#xD55C; FRET &#xD6A8;&#xC728;)&#xC5D0; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xB294; E(app)) &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xC774;&#xB860; &#xBAA8;&#xB378; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xACB0;&#xC815; &#xB450; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC218;&#xB77D;&#xC790;/&#xC30D;, Ste2p-CFP/Ste2p-YFP &#xBC0F; Ste2p-GFP/Ste2p-YFP E(app) &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xC790;. E(app)&#xC640; E&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; alpha(T) &#xC57D; 1&#xACFC; n 2 &#xC57D; Ste2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815;. Ste2p &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; ligand&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD615;&#xC131; &#xC774;&#xD6C4; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACB0;&#xB860;&#xC744; &#xC54C;&#xD30C; &#xACC4;&#xC218; &#xD398;&#xB85C;&#xBAAC; dimerization&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xACC4;&#xB7C9; spectrally &#xD574;&#xACB0;&#xB41C; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;.

Se describe una transferencia de energ&#xED;a resonante de fluorescencia (FRET)-basada m&#xE9;todo para encontrar en las c&#xE9;lulas vivas de la fracci&#xF3;n de una poblaci&#xF3;n de prote&#xED;nas (alfa (T)) complejos de conformaci&#xF3;n, y el n&#xFA;mero medio (n) de las mol&#xE9;culas de prote&#xED;na en cada complejo. El m&#xE9;todo se basa tanto en la emisi&#xF3;n de aceptor sensibilizado y en donante de-enfriamiento (por photobleaching de las mol&#xE9;culas aceptoras), junto con un completo an&#xE1;lisis espectral de la firma diferencial de fluorescencia, con el fin de cuantificar la transferencia de energ&#xED;a donante / receptor. Los l&#xED;mites de aproximaci&#xF3;n y la sensibilidad est&#xE1;n bien adaptados para in vivo investigaciones microsc&#xF3;picas. Esto se demuestra mediante un microscopio de escaneo l&#xE1;ser confocal para estudiar la formaci&#xF3;n del complejo de la prote&#xED;na del receptor est&#xE9;ril 2 del factor alfa (Ste2p), con la etiqueta verde, cian y amarillo prote&#xED;nas fluorescentes (GFP, CFP, y YFP, respectivamente), en la levadura Saccharomyces en ciernes cerevisiae. Un modelo te&#xF3;rico que se presenta se refiere la eficiencia de la transferencia de energ&#xED;a en las poblaciones de prote&#xED;na (la aparente FRET eficiencia, E (ap)) a la energ&#xED;a transferida en una sola donante / aceptor de par (E, el verdadero FRET eficiencia). Se determin&#xF3; E usando un nuevo m&#xE9;todo que se basa en la aplicaci&#xF3;n (E) las mediciones de dos donantes / aceptor de pares, y Ste2p-CFP/Ste2p-YFP Ste2p-GFP/Ste2p-YFP. Desde E (APP) y E se determin&#xF3; alfa (T) de aproximadamente 1 y n de aproximadamente 2 por Ste2 prote&#xED;nas. Dado que los complejos Ste2p se forman en la ausencia del ligando en nuestros experimentos, se concluye que la feromona del factor alfa no es necesario para la dimerizaci&#xF3;n.

Interacci&#xF3;n de la prote&#xED;na cuantificada en Vivo por espectralmente Resuelta Transferencia energ&#xED;a de resonancia fluorescente

&#x751F;&#x7269;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x503A;&#x5238;&#x80FD;&#x91CF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7D27;&#x5BC6;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x677E;&#x5F1B;&#x53CD;&#x5E94;&#x5750;&#x6807;&#x6CBF;&#x7684;&#x672A;&#x77E5;&#x6027;&#x8D28;&#xFF0C;&#x65E0;&#x6CD5;&#x76F4;&#x63A5;&#x786E;&#x5B9A;&#x503A;&#x5238;&#x80FD;&#x91CF;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x529F;&#x80FD;&#x6709;&#x5173;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728;&#x6D77;&#x85FB;&#x7CD6;&#x773C;&#x955C;&#x4E2D;&#x5D4C;&#x5165;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x51FA;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x677E;&#x5F1B;&#x77ED;&#x65F6;&#x95F4;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x51BB;&#x7ED3;&#xFF0C;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x5149;&#x70ED;&#x6CE2;&#x8C31;&#x5B66; photolabile &#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x503A;&#x5238;&#x80FD;&#x91CF;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x4F8B;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5149;&#x89E3;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x7FA7;&#x57FA;-&#x808C;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D; (MbCO) &#x5728;&#x5BA4;&#x6E29;&#x7684;&#x6D77;&#x85FB;&#x7CD6;&#x73BB;&#x7483;&#x77E9;&#x9635;&#x4E2D;&#x7684;&#x77AC;&#x6001;&#x5438;&#x6536; &#xFF08;&#x6216;&#x6CF5;&#x63A2;&#x9488;&#xFF09; &#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x77AC;&#x6001;&#x70ED;&#x76F8;&#x5149;&#x6805;&#x5149;&#x8C31;&#x6D4B;&#x5B9A; CO &#x91CD;&#x7EC4;&#x52A8;&#x6001;&#x548C;&#x5206;&#x522B;&#x76F8;&#x5173;&#x80FD;&#x91CF;&#x5B66;&#x3002;&#x521D;&#x59CB; balls &#x6253;&#x7834;&#x7684;&#x503A;&#x5238;&#x548C;&#x503A;&#x5238;&#x6539;&#x9769;&#x540E;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x80FD;&#x91CF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#xFF0C;&#x65F6;&#x95F4;&#x523B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x6BD4;&#x91CD;&#x8981;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x677E;&#x5F1B;&#xFF0C;&#x66F4;&#x5FEB;&#x5730;&#x786E;&#x5B9A;&#x94C1;&#x94B4;&#x503A;&#x5238;&#x80FD;&#x6E90;&#x4F5C;&#x4E3A; 34 + /-4 &#x5343;&#x5361;/&#x6469;&#x5C14;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x503A;&#x5238;&#x80FD;&#x91CF;&#x8FDC;&#x8FDC;&#x5927;&#x4E8E;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x5F15; (25 &#x5343;&#x5361;/&#x6469;&#x5C14;&#xFF09; &#x95F4;&#x63A5;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x597D;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7406;&#x8BBA;&#x9884;&#x6D4B; (35 &#x5343;&#x5361;/&#x6469;&#x5C14;&#xFF09; &#xFF08;Rovira&#xFF0C;C.&#xFF1B;Parrinello&#xFF0C;M.int.J.&#x91CF;&#x5B50;&#x5316;&#x5DE5;&#x5382; 2000 &#x5E74; 80&#x3001; 1172&#x5E74;)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E0E;&#x7406;&#x8BBA;&#x5B66;&#x4E60;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7ED3;&#x6784;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x503A;&#x5238;&#x80FD;&#x91CF;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5730;&#x70B9;&#xFF0C;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x53C8;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x5C4F;&#x969C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x8FC7;&#x6E21;&#x72B6;&#x6001;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5143;&#x7D20;&#x3002;

Fe CO &#x952E;&#x80FD;&#x7684;&#x5916;&#x5DEE;&#x68C0;&#x6D4B;&#x77AC;&#x6001;&#x70ED;&#x9636;&#x6BB5;&#x5149;&#x6805;&#x5149;&#x8C31;&#x7684;&#x808C;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;

The bond energies at active sites of proteins are intimately coupled to the structure-function relationship in biological systems. Due to the unknown nature of the protein relaxation along a reaction coordinate, it has not been possible to directly determine bond energies relevant to protein function. By embedding proteins in trehalose glasses, it is possible to freeze out protein relaxation on short time scales and determine the bond energies of photolabile ligands using photothermal spectroscopies. As a prototypical example, the photodissociation dynamics and energetics of carboxy-myoglobin (MbCO) in a trehalose glass matrix at room temperature were studied by transient absorption (or pump-probe) and transient thermal phase grating spectroscopy to determine the CO recombination dynamics and associated energetics, respectively. Both the initial energetics of the bond breaking and the energy released upon bond reformation could be used, on a time scale faster than significant protein relaxation, to determine the Fe-CO bond energy as 34 +/- 4 kcal/mol. This bond energy is significantly larger than that typically cited (25 kcal/mol) on the basis of indirect measurements but is in good agreement with recent theoretical predictions (35 kcal/mol) (Rovira, C.; Parrinello, M. Int. J. Quantum Chem. 2000, 80, 1172). This result in combination with the theoretical study suggests that protein structure plays a significant role in the bond energies at active sites which in turn provides a tuning element of the effective barrier heights independent to the transition state region.

Determination of the Fe-CO bond energy in myoglobin using heterodyne-detected transient thermal phase grating spectroscopy.

Les &#xE9;nergies de liaison sur les sites actifs des prot&#xE9;ines sont intimement reli&#xE9;e &#xE0; la relation structure-fonction dans les syst&#xE8;mes biologiques. En raison de la nature inconnue de la relaxation des prot&#xE9;ines le long d&#x26;#39;une coordonn&#xE9;e de r&#xE9;action, il n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; possible de d&#xE9;terminer directement les &#xE9;nergies de liaison pertinents pour la fonction des prot&#xE9;ines. En int&#xE9;grant des prot&#xE9;ines dans les verres de tr&#xE9;halose, il est possible de geler la relaxation des prot&#xE9;ines sur des &#xE9;chelles de temps courtes et de d&#xE9;terminer les &#xE9;nergies de liaison des ligands photolabiles en utilisant les spectroscopies photothermiques. Comme un exemple prototypique, la dynamique de photodissociation et de l&#x26;#39;&#xE9;nerg&#xE9;tique de carboxy-myoglobine (AMB) dans une matrice de verre tr&#xE9;halose &#xE0; la temp&#xE9;rature ambiante ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;s par absorption transitoire (ou pompe-sonde) et transitoires spectroscopie thermique r&#xE9;seau de phase afin de d&#xE9;terminer la dynamique de recombinaison de CO et associ&#xE9;s &#xE9;nerg&#xE9;tique, respectivement. Les deux les &#xE9;nergies initiales de la rupture de la liaison et l&#x26;#39;&#xE9;nergie lib&#xE9;r&#xE9;e lors de caution r&#xE9;forme pourrait &#xEA;tre utilis&#xE9;, sur une &#xE9;chelle de temps plus rapide que la relaxation significatif de prot&#xE9;ine, afin de d&#xE9;terminer l&#x26;#39;&#xE9;nergie de liaison Fe-CO que 34 + / - 4 kcal / mol. Cette &#xE9;nergie de liaison est sensiblement plus grande que celle g&#xE9;n&#xE9;ralement cit&#xE9;e (25 kcal / mol) sur la base de mesures indirectes, mais est en bon accord avec les pr&#xE9;dictions th&#xE9;oriques r&#xE9;centes (35 kcal / mol) (Rovira, C.; Parrinello, M. Int J. . Quantum Chem. 2000, 80, 1172). Ce r&#xE9;sultat, en combinaison avec l&#x26;#39;&#xE9;tude th&#xE9;orique sugg&#xE8;re que la structure des prot&#xE9;ines joue un r&#xF4;le important dans les &#xE9;nergies de liaison sur les sites actifs qui &#xE0; son tour fournit un &#xE9;l&#xE9;ment d&#x26;#39;accord sur les hauteurs de barri&#xE8;re efficaces et ind&#xE9;pendants de la r&#xE9;gion l&#x26;#39;&#xE9;tat de transition.

D&#xE9;termination de l&#x26;#39;&#xE9;nergie de liaison Fe-CO dans la myoglobine aide h&#xE9;t&#xE9;rodyne d&#xE9;tect&#xE9; transitoire spectroscopie thermique r&#xE9;seau de phase

Die Bond-Energien in aktiven Zentren von Proteinen sind eng gekoppelt der Struktur-Funktions-Beziehung in biologischen Systemen. Aufgrund der unbekannten Art der Protein-Lockerung entlang einer Reaktion Koordinate war es nicht m&ouml;glich, Bond Energien f&uuml;r Proteinfunktion direkt zu bestimmen. Durch die Einbettung von Proteinen in Trehalose Brille, ist es m&ouml;glich, freeze out Protein Entspannung auf kurzen Zeitskalen und bestimmen die Bond-Energien Photolabile Liganden mit fotothermischen SPEKTROSKOPIEN. Als prototypisches Beispiel die Photolyse Dynamik und Energetik der Carboxy-Myoglobin (MbCO) in einer Trehalose-Glas-Matrix bei Raumtemperatur wurden durch transiente Absorption (oder Pump-Probe) studierte und transiente W&auml;rmeanalyse phase Gitter-Spektroskopie, um zu bestimmen, die CO-Rekombination-Dynamik und Energetik, beziehungsweise verbunden. Sowohl die erste Energetik der Anleihe zu brechen und die Energieabgabe auf Bond Reformation konnte auf einer Zeitskala schneller als bedeutende Protein Entspannung, verwendet werden, die Fe-CO-Bindungsenergie als 34 +/-4 kcal/Mol bestimmt. Diese Bindungsenergie ist bedeutend gr&ouml;&szlig;er als die in der Regel (25 kcal/Mol) auf der Grundlage der indirekten Messungen zitiert aber in guter &Uuml;bereinstimmung mit den letzten theoretischen Vorhersagen (35 kcal/Mol) (Rovira, c.; Parrinello, M. int J. Quantum Chem. 2000, 80, 1172). Dieses Ergebnis in Kombination mit der theoretischen Studie legt nahe, dass die Proteinstruktur spielt eine bedeutende Rolle in den Bond-Energien bei aktiven Zentren, was wiederum eine tuning-Element der effektive Barriere H&ouml;hen unabh&auml;ngig um die &Uuml;bergangsregion Zustand.

Bestimmung von der Fe-CO-Bindungsenergie in Myoglobin mit heterodyne entdeckten transiente thermische Phase Gitter Spektroskopie.

Le energie di legame a siti attivi delle proteine sono intimamente Unite al rapporto struttura-funzione nei sistemi biologici. A causa della natura sconosciuta del rilassamento della proteina lungo una coordinata di reazione, non &egrave; possibile determinare direttamente le energie di legame pertinenti alla funzione della proteina. Incorporando le proteine in vetri di trealosio, &egrave; possibile congelare fuori relax proteina su scale temporali brevi e determinare le energie di legame dei ligandi photolabile mediante Spettroscopie fototermica. Come un esempio di prototipo, la fotolisi dinamica ed energetica di carboxy-mioglobina (MbCO) in una matrice di vetro trealosio a temperatura ambiente sono stati studiati da assorbimento transiente (o pompa-sonda) e transitori termici fase grigliato spettroscopia per determinare le dinamiche di ricombinazione CO e associati energetica, rispettivamente. Sia l&#39;iniziale energetica dei bond di rottura e l&#39;energia rilasciata su riforma bond potrebbe essere utilizzato, su una scala di tempo pi&ugrave; veloce di rilassamento significativo della proteina, per determinare l&#39;energia di legame Fe-CO come 34 + /-4 kcal/mol. Questa energia di legame &egrave; significativamente pi&ugrave; grande di quello che in genere citati (25 kcal/mol) in base a misurazioni indirette ma &egrave; in buon accordo con le previsioni teoriche recenti (35 kcal/mol) (Rovira, C.; Parrinello, M. int J. Quantum Chem 2000, 80, 1172). Questo risultato in combinazione con lo studio teorico suggerisce che la struttura della proteina gioca un ruolo significativo nelle energie di legame a siti attivi che a sua volta fornisce un elemento di sintonia delle altezze efficace barriera indipendenti nella regione dello stato di transizione.

Determinazione dell&#39;energia di legame Fe-CO nella mioglobina usando la spettroscopia grigliato fase termica transitoria dell&#39;eterodina-rilevato.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306F;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x53CD;&#x5FDC;&#x5EA7;&#x6A19;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7DE9;&#x548C;&#x306E;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x4E0A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x76F4;&#x63A5;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30EC;&#x30CF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x4E2D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x77ED;&#x3044;&#x6642;&#x9593;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7DE9;&#x548C;&#x3092;&#x51CD;&#x7D50;&#x3057;&#x3001;&#x5149;&#x71B1;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5149;&#x89E3;&#x96E2;&#x6027;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x4F8B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5BA4;&#x6E29;&#x3067;&#x30C8;&#x30EC;&#x30CF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x4E2D;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7; - &#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#xFF08;MBCO&#xFF09;&#x306E;&#x5149;&#x89E3;&#x96E2;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8AD6;&#x306F;&#x3001;CO&#x518D;&#x7D50;&#x5408;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x904E;&#x6E21;&#x5438;&#x53CE;&#xFF08;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#xB7;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#xFF09;&#x3068;&#x975E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x71B1;&#x4F4D;&#x76F8;&#x683C;&#x5B50;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7814;&#x7A76;&#x3057;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8AD6;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3002;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x7834;&#x308C;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x6539;&#x9769;&#x306B;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8AD6;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;34&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x9244;-CO&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x901F;&#x304F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7DE9;&#x548C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x6642;&#x9593;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;+ /  -  4 kcal / mol&#x3067;&#x3002;&#x30D1;&#x30EA;&#x30CD;&#x30ED;&#x3001;M.&#x306E;Int J;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#xFF08;25 kcal / mol&#x306E;&#x5F15;&#x7528;&#xFF09;&#x304C;&#x3001;&#xFF08;&#x30ED;&#x30D3;&#x30E9;&#x3001;C.&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x7684;&#x4E88;&#x6E2C;&#xFF08;35 kcal / mol&#x3067;&#xFF09;&#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x3002;&#x91CF;&#x5B50;&#x5316;&#x5B66;2000&#x3001;80&#x3001;1172&#xFF09;&#x3002;&#x7406;&#x8AD6;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x9077;&#x79FB;&#x72B6;&#x614B;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x969C;&#x58C1;&#x9AD8;&#x3055;&#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30F3;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x904E;&#x6E21;&#x71B1;&#x4F4D;&#x76F8;&#x683C;&#x5B50;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Fe-CO&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBCF8;&#xB4DC; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC18D;&#xC18D;&#xB4E4;&#xC774; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;-&#xAE30;&#xB2A5; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294;. &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBC18;&#xC751; &#xC88C;&#xD45C;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD734;&#xC2DD; &#xD2B9;&#xC131;&#xC0C1; &#xADF8;&#xAC83; &#xBCF8;&#xB4DC; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC9C1;&#xC811; &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B8; &#xB808; &#xD560; &#xB85C;&#xC2A4; &#xC548;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9E7;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD734;&#xC2DD; &#xB3D9;&#xACB0; &#xBC0F; photothermal spectroscopies&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; photolabile ligands&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xBD88;&#xAC00;&#xB2A5;. &#xC6D0;&#xD615; &#xC608; photodissociation &#xC5ED;&#xD559; &#xBC0F; carboxy-&#xC801;&#xD608;&#xAD6C; (MbCO) &#xC2E4; &#xC628;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8; &#xB808; &#xD560; &#xB85C;&#xC2A4; &#xC720;&#xB9AC; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xB108; &#xC9C0;&#xB860; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD761;&#xC218; (&#xB610;&#xB294; &#xD38C;&#xD504;-&#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;) &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xACFC;&#xB3C4; &#xC5F4; &#xACA9;&#xC790; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; CO &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC5ED;&#xD559; &#xACB0;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; &#xAC01;&#xAC01;&#xC5D0; &#xB108; &#xC9C0;&#xB860;, &#xC5F0;&#xACB0;. &#xC18D;&#xBCF4; &#xBCF8;&#xB4DC;&#xC640; &#xBCF8;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xD601;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBC1C;&#xD45C; &#xD558;&#xB294; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; &#xB108; &#xC9C0;&#xB860; &#xBAA8;&#xB450; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC2DC;&#xAC04; &#xADDC;&#xBAA8;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD734;&#xC2DD; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xBE68;&#xB9AC; 34 + 4 kcal/mol&#xB85C; &#xC11C; Fe-&#xCF5C;&#xB85C;&#xB77C;&#xB3C4; &#xBCF8;&#xB4DC; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;. &#xC774; &#xACB0;&#xD569; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB294; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC811; &#xCE21;&#xC815; &#xAE30;&#xC900; (25 kcal/mol)&#xB97C; &#xC5B8;&#xAE09; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC774;&#xB860;&#xC801;&#xC778; &#xC608;&#xCE21; (35 kcal/mol)&#xC640; &#xC88B;&#xC740; &#xACC4;&#xC57D;&#xC5D0; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xD070; (Rovira, C.; Parrinello, M. int. J. &#xC591;&#xC790; &#xD654;&#xD559; 2000, 80, 1172). &#xC774;&#xB860;&#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xACB0;&#xACFC;&#xAC00; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xC804;&#xD658; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC7A5;&#xBCBD; &#xB192;&#xC774;&#xC758; &#xD29C;&#xB2DD; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD558;&#xBBC0;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF8;&#xB4DC; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;.

Heterodyne &#xAC10;&#xC9C0; &#xACFC;&#xB3C4; &#xC5F4; &#xC704;&#xC0C1; &#xACA9;&#xC790; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xC758; &#xCCA0; &#xACF5;&#xB3D9; &#xCC44;&#xAD8C; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xC758; &#xACB0;&#xC815;.

Las energ&#xED;as de enlace en los sitios activos de las prote&#xED;nas est&#xE1;n &#xED;ntimamente acoplado a la relaci&#xF3;n estructura-funci&#xF3;n en los sistemas biol&#xF3;gicos. Debido a la naturaleza desconocida de la prote&#xED;na de relajaci&#xF3;n a lo largo de una coordenada de reacci&#xF3;n, no ha sido posible determinar directamente energ&#xED;as de enlace correspondientes a la funci&#xF3;n proteica. Al incorporar prote&#xED;nas en gafas trehalosa, es posible congelar a cabo relajaci&#xF3;n prote&#xED;na en escalas de tiempo cortos y determinar las energ&#xED;as de enlace de ligandos fotol&#xE1;biles utilizando espectroscop&#xED;a fotot&#xE9;rmicos. Como un ejemplo protot&#xED;pico, la din&#xE1;mica fotodisociaci&#xF3;n y energ&#xE9;tica del carboxi-mioglobina (MbCO) en una matriz de vidrio trehalosa a temperatura ambiente fueron estudiados por absorci&#xF3;n transitoria (o bomba-sonda) y espectroscop&#xED;a transitoria t&#xE9;rmica fase rejilla para determinar la din&#xE1;mica de recombinaci&#xF3;n de CO y asociado energ&#xE9;tica, respectivamente. Ambos la energ&#xE9;tica iniciales de la ruptura de enlaces y la energ&#xED;a liberada en uni&#xF3;n reformaci&#xF3;n podr&#xED;a ser utilizado, en una escala de tiempo m&#xE1;s r&#xE1;pido que la relajaci&#xF3;n significativa de las prote&#xED;nas, para determinar la energ&#xED;a de enlace Fe-CO como 34 + / - 4 kcal / mol. Esta energ&#xED;a de enlace es significativamente mayor que el citado general (25 kcal / mol) sobre la base de mediciones indirectas, pero est&#xE1; en buen acuerdo con las predicciones te&#xF3;ricas recientes (35 kcal / mol) (Rovira, C.; Parrinello, M. Int J. . Quantum Chem.. de 2000, 80, 1172). Este resultado, en combinaci&#xF3;n con el estudio te&#xF3;rico sugiere que la estructura de prote&#xED;na juega un papel importante en las energ&#xED;as de enlace en los sitios activos que a su vez proporciona un elemento de ajuste de las alturas de barrera eficaces independientes a la regi&#xF3;n del estado de transici&#xF3;n.

Determinaci&#xF3;n de la energ&#xED;a de enlace Fe-CO en el uso de mioglobina-heterodino detectado transitoria fase t&#xE9;rmica Espectroscopia Rejas

&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x5927;&#x5E08;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x5149;&#x805A;&#x5408;&#x82CF; 8 &#x8D1F;&#x6027;&#x5149;&#x523B;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5728;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x5E38;&#x7528;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (TPM) &#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x3002;&#x8BBE;&#x5907;&#x5927;&#x5E08;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6D88;&#x6781;&#x6551;&#x6D4E;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x53D1;&#x7684; su-8 &#x542F;&#x52A8;&#x4EA4;&#x8054;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x6FC0;&#x5149;&#x675F;&#x7126;&#x70B9;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x6750;&#x6599;&#xFF0C;&#xFF08;&#x6309;&#x9884;&#x671F;&#xFF09;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x5B83;&#x8FD8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6392;&#x653E;&#x7684;&#x53EF;&#x89C1;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x6392;&#x653E; su-8 &#x672F;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x53D1;&#x7684;&#x663E;&#x793A;&#x5927;&#x5C0F;&#x4E0E;&#x805A;&#x5408;&#x5BF9;&#x8C61;&#x63A5;&#x89E6; &#xFF1B; &#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x5F3A;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x8FD9;&#x5141;&#x8BB8;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x4E3B;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x8FDB;&#x884C;&#x5B9E;&#x65F6;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7684;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8367;&#x5149;&#x68C0;&#x6D4B;&#x671F;&#x95F4;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x805A;&#x5408;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x88C5;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x5176;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6355;&#x83B7;&#x5355;&#x4E2A;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5927;&#x5E08;&#x4E66;&#x5199;&#x4E86;&#x540C;&#x4E00; tpm &#x6620;&#x50CF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

&#x5B9E;&#x65F6;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x5149;&#x805A;&#x5408;&#x5728;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5668;&#x4EF6;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

We report an improved method for production of microfluidic device masters using two-photon photopolymerization of SU-8 negative photoresist, which relies on a two-photon microscope (TPM) commonly used in imaging of biological samples. The device masters serve as negative relief structures for polydimethylsiloxane-based microfluidic devices. We observed that not only did the two-photon excitation of the SU-8 photoresist initiate crosslinking of the material in the region of the focus of the near-infrared laser beam (as expected) but it also resulted in emission of fluorescence in the visible range. The detected emission of SU-8 photoresist undergoing two-photon excitation displayed a strong correlation with the size of the polymerized objects produced during the exposure; this allowed the progress of the microfluidic master production process to be monitored in real-time. We demonstrate the use of the fluorescence detection during two-photon photopolymerization in the production of microfluidic devices, which were designed to trap individual yeast cells to be imaged with the same TPM used for microfluidic master writing.

Real-time monitoring of two-photon photopolymerization for use in fabrication of microfluidic devices.

Nous rapportons une m&#xE9;thode am&#xE9;lior&#xE9;e pour la production de ma&#xEE;tres dispositif microfluidique en utilisant deux photons photopolym&#xE9;risation de SU-8 r&#xE9;sine photosensible n&#xE9;gative, qui s&#x26;#39;appuie sur un microscope &#xE0; deux photons (TPM), commun&#xE9;ment utilis&#xE9;s dans l&#x26;#39;imagerie d&#x26;#39;&#xE9;chantillons biologiques. Les ma&#xEE;tres de p&#xE9;riph&#xE9;riques servent de structures de secours n&#xE9;gatives pour le polydim&#xE9;thylsiloxane &#xE0; base de dispositifs microfluidiques. On observe que non seulement l&#x26;#39;excitation &#xE0; deux photons de SU-8 photor&#xE9;sist amorcer la r&#xE9;ticulation de la mati&#xE8;re dans la r&#xE9;gion du foyer du faisceau laser dans le proche infrarouge (comme pr&#xE9;vu) mais &#xE9;galement entra&#xEE;n&#xE9; l&#x26;#39;&#xE9;mission de fluorescence dans le visible large. L&#x26;#39;&#xE9;mission d&#xE9;tect&#xE9;e de r&#xE9;sine photosensible SU-8 en cours excitation &#xE0; deux photons affich&#xE9; une forte corr&#xE9;lation avec la taille des objets polym&#xE9;ris&#xE9;es produites lors de l&#x26;#39;exposition, ce qui a permis les progr&#xE8;s du processus de production ma&#xEE;tre microfluidique &#xE0; surveiller en temps r&#xE9;el. On d&#xE9;montrer l&#x26;#39;utilisation de la d&#xE9;tection de fluorescence &#xE0; deux photons pendant photopolym&#xE9;risation pour la production de dispositifs microfluides, qui ont &#xE9;t&#xE9; con&#xE7;us pour pi&#xE9;ger des cellules de levure individuelles &#xE0; imager avec le m&#xEA;me TPM utilis&#xE9;s pour l&#x26;#39;&#xE9;criture ma&#xEE;tre microfluidique.

Surveillance en temps r&#xE9;el de deux photons photopolym&#xE9;risation pour une utilisation dans la fabrication de dispositifs microfluidiques

Wir berichten &uuml;ber eine verbesserte Methode zur Herstellung der Microfluidic Ger&auml;t Meister mit zwei-Photonen-Photopolymerisation von SU-8 negative Fotolack, die auf einem zwei-Photonen-Mikroskop (TPM) h&auml;ufig verwendet in der Bildgebung von biologischen Proben angewiesen ist. Die Ger&auml;t Herren dienen als negative Relief-Strukturen f&uuml;r mikrofluidische Polydimethylsiloxan-basierte Ger&auml;te. Wir beobachteten, dass nicht nur die zwei-Photonen-Erregung des SU-8-Fotolack Vernetzung des Materials in der Region im Mittelpunkt der Nah-Infrarot-Laserstrahl initiieren hat (wie erwartet), aber es f&uuml;hrte auch zu Emission von Fluoreszenz im sichtbaren Bereich. Die erkannte Emission von SU-8 Fotolack unterzogen zwei-Photonen-Erregung angezeigt eine starke Korrelation mit der Gr&ouml;&szlig;e der polymerisierten Objekte produziert w&auml;hrend der Belichtung; Dies erm&ouml;glichte den Fortschritt des Produktionsprozesses mikrofluidische Meister in Echtzeit &uuml;berwacht werden. Wir zeigen die Verwendung der Fluoreszenzdetektion w&auml;hrend zwei-Photonen-Photopolymerisation bei der Herstellung von Microfluidic Vorrichtungen, die entworfen wurden, um einzelne Hefezellen, die mit dem gleichen TPM verwendet Meister Autorenpreis mikrofluidische abgebildet werden auffangen.

Echtzeit&uuml;berwachung des zwei-Photonen-Photopolymerisation f&uuml;r den Einsatz in der Fertigung der Microfluidic Vorrichtungen.

Riportiamo un metodo migliore per la produzione dei maestri dispositivo microfluidico utilizzando due-fotone fotopolimerizzazione del photoresist negativo SU-8, che si basa su un microscopio del due-fotone (TPM) comunemente utilizzato nell&#39;imaging dei campioni biologici. I maestri del dispositivo servono come strutture di rilievo negativo per dispositivi microfluidici basati su polidimetilsilossano. Abbiamo osservato che non solo ha fatto l&#39;eccitazione del due-fotone del photoresist SU-8 avviare reticolazione del materiale nella regione della messa a fuoco del raggio laser infrarosso vicino (come previsto) ma ha anche provocato nell&#39;emissione di fluorescenza nella gamma visibile. Le emissioni rilevate di photoresist SU-8 in fase di eccitazione del due-fotone visualizzata una forte correlazione con la dimensione degli oggetti polimerizzati prodotte durante l&#39;esposizione; Questo ha permesso l&#39;avanzamento del processo di produzione master microfluidica essere monitorate in tempo reale. Noi di dimostrare l&#39;uso della rilevazione a fluorescenza durante la fotopolimerizzazione del due-fotone nella produzione di dispositivi microfluidici, che sono stati progettati per intrappolare le cellule di lievito individuali per essere imaged con il TPM stesso utilizzato per la microfluidica master scrittura.

Monitoraggio in tempo reale del due-fotone fotopolimerizzazione per uso nella fabbricazione di dispositivi microfluidici.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;TPM&#xFF09;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;SU-8&#x30CD;&#x30AC;&#x578B;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;2&#x5149;&#x5B50;&#x5149;&#x91CD;&#x5408;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6539;&#x826F;&#x6CD5;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B7;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x30EC;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D5;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;SU-8&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x52B1;&#x8D77;&#x8FD1;&#x8D64;&#x5916;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0;&#xFF08;&#x4E88;&#x60F3;&#x3069;&#x304A;&#x308A;&#xFF09;&#x306E;&#x7126;&#x70B9;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x306E;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x67B6;&#x6A4B;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x76EE;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3002;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x52B1;&#x8D77;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;SU-8&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x9732;&#x5149;&#x6642;&#x306B;&#x751F;&#x6210;&#x91CD;&#x5408;&#x30AA;&#x30D6;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068;&#x5F37;&#x3044;&#x76F8;&#x95A2;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x88FD;&#x9020;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x72B6;&#x6CC1;&#x304C;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x66F8;&#x304D;&#x8FBC;&#x307F;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x3058;TPM&#x3067;&#x64AE;&#x50CF;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x5149;&#x91CD;&#x5408;&#x6642;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x4F5C;&#x88FD;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x5149;&#x91CD;&#x5408;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xBBF8;&#xC138; &#xC7A5;&#xCE58; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; 2 &#xAD11;&#xC790; photopolymerization&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC2DC;&#xB8CC;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (TPM)&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; SU-8 &#xB124;&#xAC70;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB808;&#xC9C0;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xBC29;&#xBC95;. &#xC7A5;&#xCE58; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; polydimethylsiloxane &#xAE30;&#xBC18; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xD638; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; SU 8 &#xB808;&#xC9C0;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC758; 2 &#xAD11;&#xC790; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC2DC;&#xC791; &#xADFC; &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xBE54; &#xCD08;&#xC810;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xB8CC;&#xC758; &#xAC00;&#xAD50; (&#xC608;&#xC0C1; &#xB300;&#xB85C;) &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xB208;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC774;&#xB294; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xAD11; &#xBC29;&#xCD9C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. SU 8 &#xAC10;&#xAD11; &#xC81C; 2 &#xAD11;&#xC790; &#xC5EC;&#xAE30;&#xB97C; &#xACAA;&#xACE0; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB41C; &#xBC29;&#xCD9C; &#xB178;&#xCD9C;; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xB294; polymerized &#xAC1C;&#xCCB4;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; &#xAC15;&#xD55C; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC774;&#xB97C; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xD560; &#xC218; &#xBBF8;&#xC138; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xACF5;&#xC815;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD568;&#xC815;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC19;&#xC740; tpm &#xBBF8;&#xC138; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xC4F0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBBF8;&#xC138; &#xC18C;&#xC790;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xAD11;&#xC790; photopolymerization &#xC911; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBBF8;&#xC138; &#xC18C;&#xC790;&#xC758; &#xC81C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB450; &#xAD11;&#xC790; photopolymerization&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;.

Se presenta un m&#xE9;todo mejorado para la producci&#xF3;n de los maestros dispositivo de microfluidos con dos fotones fotopolimerizaci&#xF3;n de SU-8 fotorresistencia negativa, que se basa en un microscopio de dos fotones (TPM) de uso com&#xFA;n en las im&#xE1;genes de muestras biol&#xF3;gicas. Los maestros de dispositivos sirven como estructuras de alivio negativas para polidimetilsiloxano basados &#x200B;&#x200B;en dispositivos de microfluidos. Hemos observado que no s&#xF3;lo la excitaci&#xF3;n de dos fotones de la SU-8 fotorresistente iniciar la reticulaci&#xF3;n del material en la regi&#xF3;n del foco del haz de l&#xE1;ser infrarrojo cercano (como se esperaba), pero tambi&#xE9;n dio lugar a la emisi&#xF3;n de fluorescencia en el visible rango. La emisi&#xF3;n detectada de SU-8 fotorresistente experimentando dos fotones de excitaci&#xF3;n muestra una fuerte correlaci&#xF3;n con el tama&#xF1;o de los objetos polimerizados producidos durante la exposici&#xF3;n, lo que permiti&#xF3; el progreso del proceso de producci&#xF3;n de microfluidos maestro a ser monitoreado en tiempo real. Se demuestra el uso de la detecci&#xF3;n por fluorescencia de dos fotones durante la fotopolimerizaci&#xF3;n en la producci&#xF3;n de dispositivos de microfluidos, que fueron dise&#xF1;adas para atrapar las c&#xE9;lulas individuales de levadura para obtener im&#xE1;genes con el TPM mismo que se utiliza para la escritura maestra de microfluidos.

Monitorizaci&#xF3;n en tiempo real de los dos fotones fotopolimerizaci&#xF3;n para su uso en la fabricaci&#xF3;n de dispositivos de microflu&#xED;dica

&#x7406;&#x8BBA;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x6E38;&#x79BB;&#x5355;&#x4F53;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x548C;&#x540C;&#x6E90;&#x5BE1;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x5927;&#x5C0F;&#x5747;&#x5300;&#x660E;&#x663E;&#x6548;&#x7387; (F&ouml;rster) &#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x3002;&#x6A21;&#x578B;&#x8003;&#x8651;&#x5230;&#x5E10;&#x6237;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x5149;&#x6FC0;&#x53D1;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x9014;&#x5F84;&#x4ECE;&#x5355;&#x4E00;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x5411;&#x591A;&#x4E2A;&#x53D7;&#x4F17;&#x548C;&#x591A;&#x4E2A;&#x6350;&#x52A9;&#x8005; &#xFF08;&#x975E;-&#x540C;&#x65F6;&#xFF09; &#x5230;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x53D7;&#x4F17;&#x3002;&#x8FD9;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x504F;&#x79BB;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x7406;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x6709;&#x4EBA;&#x5728;&#x6587;&#x732E;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x53EA;&#x6210;&#x529F;&#x5730;&#x63A8;&#x884C;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5982;&#x7279;&#x5B9A;&#x51E0;&#x4F55;&#x5F62;&#x72B6;&#x7684;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x7406;&#x8BBA;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x76F8;&#x5DEE;&#x592A;&#x5927;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x7406;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x5176;&#x534F;&#x8BAE;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x6848;&#x4F8B;&#x3002;&#x6B64;&#x6A21;&#x5F0F;&#x56E0;&#x6B64;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x7684;&#x5355;&#x4F53;&#xFF0C;&#x97F3;&#x54C1;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x548C;&#x8FD8;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x624B;&#x6BB5;&#x786E;&#x5B9A;&#x5BE1;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x4EE5;&#x53CA;&#x76F8;&#x5173;&#x548C;&#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x5355;&#x4F53;&#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3002;

&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x540C;&#x6E90;&#x5BE1;&#x805A;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x3002;

A theoretical model is proposed for the apparent efficiency of fluorescence (FÃ¶rster) resonance energy transfer (FRET) in mixtures of free monomers and homo-oligomeric protein complexes of uniform size. The model takes into account possible pathways for transfer of optical excitations from single donors to multiple acceptors and from multiple donors (non-simultaneously) to single acceptors. This necessary departure from the standard theory has been suggested in the literature, but it has only been successfully implemented for a few particular cases, such as for particular geometries of the oligomers. The predictions of the present theoretical model differ significantly from those of the standard theory, with the exception of the case of dimers, for which agreement is observed. This model therefore provides new insights into the FRET behavior of oligomers comprising more than two monomers, and also suggests means for determining the size of oligomeric protein complexes as well as the proportion of associated and unassociated monomers.

Efficiency of resonance energy transfer in homo-oligomeric complexes of proteins.

Un mod&#xE8;le th&#xE9;orique est propos&#xE9; pour l&#x26;#39;efficacit&#xE9; apparente de la fluorescence (F&#xF6;rster) de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance (FRET) dans des m&#xE9;langes de monom&#xE8;res libres et des complexes prot&#xE9;iques homo-oligom&#xE8;res de taille uniforme. Le mod&#xE8;le prend en compte les voies possibles pour le transfert des excitations optiques des bailleurs de fonds individuels &#xE0; des accepteurs de multiples et de multiples bailleurs de fonds (non simultan&#xE9;ment) &#xE0; des accepteurs simples. Ce d&#xE9;part n&#xE9;cessaire de la th&#xE9;orie standard a &#xE9;t&#xE9; sugg&#xE9;r&#xE9; dans la litt&#xE9;rature, mais il a seulement &#xE9;t&#xE9; mis en &#x153;uvre avec succ&#xE8;s pour quelques cas particuliers, tels que pour des g&#xE9;om&#xE9;tries particuli&#xE8;res des oligom&#xE8;res. Les pr&#xE9;dictions du mod&#xE8;le th&#xE9;orique actuel diff&#xE8;rent sensiblement de celles de la th&#xE9;orie standard, &#xE0; l&#x26;#39;exception du cas de dim&#xE8;res, pour lesquels l&#x26;#39;accord est respect&#xE9;. Ce mod&#xE8;le offre donc de nouvelles perspectives sur le comportement de FRET oligom&#xE8;res comprenant plus de deux monom&#xE8;res, et sugg&#xE8;re &#xE9;galement des moyens pour d&#xE9;terminer la taille des complexes de prot&#xE9;ines oligom&#xE9;riques ainsi que la proportion de monom&#xE8;res associ&#xE9;s et non associ&#xE9;s.

Efficacit&#xE9; de la Resonance Energy Transfer dans Homo-oligom&#xE9;riques complexes de prot&#xE9;ines

Mischungen von freien Monomere und Homo-Oligomere Proteinkomplexe einheitliche Gr&ouml;&szlig;e ist ein theoretisches Modell f&uuml;r die scheinbare Effizienz (F&ouml;rster) Fluoreszenz Resonanz Energietransfer (FRET) vorgeschlagen. Das Modell ber&uuml;cksichtigt Konto m&ouml;gliche Wege f&uuml;r die &Uuml;bertragung von optischen Anregungen einzelne Spender mehrere Acceptors und mehrere Geber (nicht gleichzeitig) zu einzelnen Acceptors. Diese erforderlichen Abweichung von der standard-Theorie in der Literatur vorgeschlagen worden, aber es hat nur erfolgreich umgesetzt f&uuml;r ein paar Sonderf&auml;lle, z. B. f&uuml;r bestimmte Geometrien von der Oligomeren. Die Vorhersagen des vorliegenden theoretischen Modells unterscheiden sich erheblich von denen der standard-Theorie, mit Ausnahme der Fall der Dimere, f&uuml;r die Vereinbarung eingehalten wird. Dieses Modell bietet neue Einblicke in das FRET-Verhalten von Oligomeren bestehend aus mehr als zwei Monomere und schl&auml;gt auch Mittel f&uuml;r die Bestimmung der Gr&ouml;&szlig;e der Oligomere Proteinkomplexe sowie der Anteil der damit verbundenen und nicht dazugeh&ouml;riges Monomere.

Effizienz der Resonanz-Energie-Transfer in Homo-Oligomeren komplexen Proteine.

Un modello teorico &egrave; proposto per l&#39;apparente efficienza di fluorescenza (F&ouml;rster) resonance energy transfer (FRET) in miscele di monomeri liberi e complessi della proteina oligomerica homo di dimensione uniforme. Il modello prende in percorsi possibili conto per il trasferimento di eccitazioni ottici da singoli donatori per pi&ugrave; accettori e donatori multipli (non simultaneamente) a singoli accettori. Questa partenza necessaria dalla teoria standard &egrave; stato suggerito in letteratura, ma &egrave; solo stato correttamente implementato per alcuni casi particolari, come ad esempio per particolari geometrie degli oligomeri. Le previsioni del presente modello teorico sono notevolmente diversi da quelli della teoria standard, fatta eccezione per il caso di dimeri, per i quali l&#39;accordo &egrave; osservato. Questo modello prevede quindi nuove intuizioni sul comportamento di oligomeri composto da pi&ugrave; di due monomeri FRET e propone anche il mezzo per determinare la dimensione dei complessi della proteina oligomerica, nonch&eacute; la percentuale di monomeri associati e non associati.

Efficienza di trasferimento di energia per risonanza in homo-oligomerici complessi di proteine.

&#x7406;&#x8AD6;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x7531;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x5747;&#x4E00;&#x306A;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#xFF08;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF09;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x306E;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x4E0A;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5149;&#x306E;&#x52B1;&#x8D77;&#x3092;&#x8EE2;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#xFF08;&#x975E;&#x540C;&#x6642;&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8003;&#x616E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A19;&#x6E96;&#x7406;&#x8AD6;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x51FA;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x6587;&#x732E;&#x3067;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B8;&#x30AA;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306F;&#x3001;&#x5951;&#x7D04;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x4F8B;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x7406;&#x8AD6;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x306F;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;&#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;FRET&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x6BB5;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x5316;

&#xC774;&#xB860;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740; &#xBB34;&#xB8CC; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xC758; &#xD63C;&#xD569; &#xBC0F; &#xADE0;&#xC77C; &#xD55C; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xD638;&#xBAA8; oligomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C; (F&ouml;rster) &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET)&#xC758; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548;. &#xBAA8;&#xB378;&#xC774; &#xAC78;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAD11;&#xD559; excitation&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC640; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; (&#xBE44;-&#xB3D9;&#xC2DC;) &#xB2E8;&#xC77C; &#xC218;&#xB77D;&#xC790;. &#xD45C;&#xC900; &#xC774;&#xB860;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xCD9C;&#xBC1C;&#xC774; &#xBB38;&#xD559;, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xD604; &#xB41C; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC0AC;&#xB840;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xB97C; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xD615;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC774;&#xB860;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC608;&#xCE21; &#xADF8; &#xACC4;&#xC57D; &#xAD00;&#xCC30;&#xC740; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xB97C; &#xC81C;&#xC678; &#xD558; &#xACE0; &#xD45C;&#xC900; &#xC774;&#xB860;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB450; &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xB3D9;&#xC791;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; oligomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC218;&#xB2E8;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD638;&#xBAA8; oligomeric &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;.

Un modelo te&#xF3;rico propuesto para la eficacia aparente de fluorescencia (F&#xF6;rster) la transferencia de energ&#xED;a de resonancia (FRET) en las mezclas de mon&#xF3;meros libres y la homo-olig&#xF3;meros complejos de prote&#xED;nas de tama&#xF1;o uniforme. El modelo tiene en cuenta las posibles v&#xED;as para la transferencia de las excitaciones &#xF3;pticas de un solo donante a receptores m&#xFA;ltiples y de m&#xFA;ltiples donantes (no simult&#xE1;neamente) a aceptadores individuales. Esta salida necesaria de la teor&#xED;a est&#xE1;ndar ha sido sugerido en la literatura, pero s&#xF3;lo se ha aplicado con &#xE9;xito para unos pocos casos particulares, tales como para geometr&#xED;as particulares de los olig&#xF3;meros. Las predicciones del modelo te&#xF3;rico presente difieren significativamente de las de la teor&#xED;a est&#xE1;ndar, con la excepci&#xF3;n del caso de d&#xED;meros, para lo cual se observa acuerdo. Este modelo por lo tanto proporciona nuevos conocimientos sobre el comportamiento FRET de olig&#xF3;meros que comprenden m&#xE1;s de dos mon&#xF3;meros, y tambi&#xE9;n sugiere medios para determinar el tama&#xF1;o de los complejos de prote&#xED;nas oligom&#xE9;ricas as&#xED; como la proporci&#xF3;n de mon&#xF3;meros asociadas y no asociadas.

Eficiencia de la transferencia de energ&#xED;a de resonancia de los complejos oligom&#xE9;ricos Homo-de las prote&#xED;nas

&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x5C5E;&#x6027;&#x5DF2;&#x5728;&#x8FC7;&#x53BB;&#x4F7F;&#x7528;&#x548C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8861;&#x91CF;&#x6807;&#x51C6;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6B67;&#x89C6;&#x5065;&#x5EB7;&#x4ECE;&#x75C5;&#x53D8;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#xFF08;x &#x5149;&#x7247;&#x548C;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF09; &#x7684;&#x7535;&#x78C1;&#x5438;&#x6536;&#x3001; &#x6563;&#x5C04;&#x7684;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x706F;&#x548C;&#x7535;&#x963B;&#x662F;&#x51E0;&#x4E2A;&#x8FD9;&#x6837;&#x7684;&#x53C2;&#x6570;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5224;&#x522B;&#x5F0F;&#x7684;&#x75C5;&#x53D8; &#xFF08;&#x5982;&#x80BF;&#x7624;&#xFF09; &#x9996;&#x5148;&#x5FC5;&#x987B;&#x7CBE;&#x786E;&#x5730;&#x786E;&#x5B9A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8003;&#x8651;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x805A;&#x5408;&#xFF0C;&#x751F;&#x7269;&#x7535;&#x963B;&#x6297;&#x5C5E;&#x6027;&#x548C;&#x76EE;&#x524D;&#x8FD9;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x63D0;&#x4F9B;&#x826F;&#x597D;&#x7684;&#x7535;&#x78C1;&#x63A5;&#x53E3;&#x5411;&#x4E0B;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E3A; 0.01-30 &#x5146;&#x8D6B;&#x8303;&#x56F4;&#x4E2D;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x53EF;&#x91CD;&#x6784;&#x7535;&#x6781;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;&#x6570;&#x5B57;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x5404;&#x79CD;&#x7535;&#x78C1;&#x573A;&#x914D;&#x7F6E;&#x8981;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x6240;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8F7B;&#x6613;&#x66F4;&#x6539;&#x6570;&#x7EC4;&#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x3002;&#x6570;&#x7EC4;&#x4E3A;&#x4E86;&#x56DB;&#x4E2A;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E24;&#x4E2A;&#x70B9;&#x7684;&#x963B;&#x6297;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x63A5;&#x53E3;&#x548C;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x6210;&#x50CF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7535;&#x6C14;&#x963B;&#x6297;&#x3002;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x53EF;&#x5C06;&#x6269;&#x5C55;&#x5230;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x548C;&#x89C4;&#x6A21;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x5C3A;&#x5BF8;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x7535;&#x6C14;&#x6027;&#x80FD;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x4E3A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x963B;&#x6297;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x53EF;&#x91CD;&#x6784;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x6267;&#x884C;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;

Various tissue properties have been used in the past and present as metrics which can serve to discriminate healthy from diseased tissue. Electromagnetic absorption (of x-rays and optical signals), scattering of near-infrared light, and electrical impedance are a few such parameters. In order to serve as discriminants for diseased (e.g., neoplastic) tissue, the characteristics of these tissues must first be precisely determined. In this paper, we consider the electrical impedance properties of tissues and cell aggregates, and present the design of a reconfigurable electrode array which is capable of providing a well-defined electromagnetic interface to the tissue under study, for characterization in the 0.01-30 MHz range. The configuration of array elements may be easily changed under digital control, allowing for various electromagnetic field configurations to be applied to the tissue under study. The array is designed to interface to four-point as well as two-point impedance instrumentation, and may be used for two-dimensional bioimaging systems based on electrical impedances. The design may be scaled to higher frequencies and smaller dimensions, allowing for studies of electrical properties at the cellular level.

Implementation of a fast reconfigurable array for tissue impedance characterization.

Les propri&#xE9;t&#xE9;s des tissus diff&#xE9;rents ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s dans les mesures pass&#xE9;es et pr&#xE9;sentes comme pouvant servir &#xE0; discriminer saine &#xE0; partir de tissus malades. L&#x26;#39;absorption &#xE9;lectromagn&#xE9;tique (des rayons X et les signaux optiques), la dispersion des lumi&#xE8;re proche infrarouge, et l&#x26;#39;imp&#xE9;dance &#xE9;lectrique sont quelques param&#xE8;tres tels. Afin de servir de discriminants pour malades (par exemple, n&#xE9;oplasique) les tissus, les caract&#xE9;ristiques de ces tissus doivent d&#x26;#39;abord &#xEA;tre d&#xE9;termin&#xE9;e avec pr&#xE9;cision. Dans ce papier, nous consid&#xE9;rons les propri&#xE9;t&#xE9;s d&#x26;#39;imp&#xE9;dance &#xE9;lectrique des tissus et des agr&#xE9;gats de cellules, et de pr&#xE9;senter la conception d&#x26;#39;un r&#xE9;seau d&#x26;#39;&#xE9;lectrodes reconfigurable qui est capable de fournir une interface &#xE9;lectromagn&#xE9;tique bien d&#xE9;fini pour le tissu &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tude, pour une caract&#xE9;risation au MHz 0,01 &#xE0; 30 large. La configuration d&#x26;#39;&#xE9;l&#xE9;ments de r&#xE9;seau peuvent &#xEA;tre facilement modifi&#xE9;e sous la commande num&#xE9;rique, pour diff&#xE9;rentes configurations permettant de champ &#xE9;lectromagn&#xE9;tique &#xE0; &#xEA;tre appliqu&#xE9;e au tissu &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tude. La matrice est con&#xE7;u pour s&#x26;#39;interfacer &#xE0; quatre points, ainsi que l&#x26;#39;instrumentation imp&#xE9;dance &#xE0; deux points, et peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour des syst&#xE8;mes &#xE0; deux dimensions bioimaging sur la base de imp&#xE9;dances &#xE9;lectriques. La conception peut &#xEA;tre adapt&#xE9; &#xE0; des fr&#xE9;quences plus &#xE9;lev&#xE9;es et des dimensions r&#xE9;duites, permettant des &#xE9;tudes de propri&#xE9;t&#xE9;s &#xE9;lectriques au niveau cellulaire.

La mise en &#x153;uvre d&#x26;#39;un tableau rapide reconfigurable pour la caract&#xE9;risation tissulaire Imp&#xE9;dance

Verschiedene Gewebe-Eigenschaften in der Vergangenheit verwendet wurden und als Metrik, die dienen kann, zu unterscheiden von erkranktes Gewebe gesund zu pr&auml;sentieren. Elektromagnetische Absorption (von R&ouml;ntgenstrahlen und optische Signale), Streuung der Nah-Infrarot-Licht und elektrische Impedanz sind ein paar solcher Parameter. Um dienen als Diskriminanten f&uuml;r kranke (z. B. neoplastischen) Gewebe, die Merkmale der diese Gewebe muss zun&auml;chst genau bestimmt werden. In diesem Papier wir betrachten die elektrische Impedanz-Eigenschaften der Gewebe und Zelle Aggregate und pr&auml;sentieren den Entwurf eines rekonfigurierbaren Elektrode-Arrays, der seine klar definierte elektromagnetischen Oberfl&auml;che des Gewebes unter Studie zur Charakterisierung im Bereich 0,01-30 MHz f&auml;hig ist. Die Konfiguration der Arrayelemente kann unter Digitalsteuerung, zulassend verschiedenen elektromagnetischen Feld-Konfigurationen, die auf das Gewebe unter Studie angewendet werden leicht ge&auml;ndert werden. Das Array soll an vier Punkten sowie zwei-Punkt-Impedanz Instrumentierung anschlie&szlig;en und f&uuml;r zweidimensionale Bioimaging-Systeme basierend auf elektrischen Impedanzen herangezogen werden. Das Design kann zu h&ouml;heren Frequenzen und kleineren Abmessungen, zulassend Studien &uuml;ber elektrische Eigenschaften auf zellul&auml;rer Ebene skaliert werden.

Durchf&uuml;hrung einer schnell rekonfigurierbare Array f&uuml;r Gewebe Impedanz Charakterisierung.

Varie propriet&agrave; del tessuto sono stati utilizzati in passato e presente come metriche che possono servire a discriminare sano dal tessuto malato. Assorbimento elettromagnetico (di segnali ottici e raggi x), la dispersione della luce vicino infrarosso e impedenza elettrica sono pochi tali parametri. Al fine di servire come discriminanti per malati (ad es., neoplastiche) tessuto, le caratteristiche di questi tessuti in primo luogo deve essere precisamente determinato. In questa carta, prendere in considerazione le propriet&agrave; elettriche impedenza dei tessuti e delle cellule aggregati e presentare il disegno di un array riconfigurabile elettrodo che &egrave; in grado di fornire una ben definita interfaccia elettromagnetica al tessuto in fase di studio, per la caratterizzazione nell&#39;intervallo 0.01-30 MHz. La configurazione di elementi della matrice pu&ograve; essere cambiata facilmente sotto controllo digitale, che permette varie configurazioni di campo elettromagnetico essere applicato al tessuto in fase di studio. La matrice &egrave; progettata per interfacciarsi con strumentazione di impedenza del quattro-punto, cos&igrave; come i due punti e pu&ograve; essere utilizzata per i sistemi bidimensionali Bioimmagini basati su impedenze elettriche. Il design pu&ograve; essere scalato a frequenze pi&ugrave; alte e pi&ugrave; piccole dimensioni, permettendo di studi delle propriet&agrave; elettriche a livello cellulare.

Implementazione di una matrice a veloce riconfigurabile per la caratterizzazione dell&#39;impedenza dei tessuti.

&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x5909;&#x7D44;&#x7E54;&#x304B;&#x3089;&#x5065;&#x5EB7;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x904E;&#x53BB;&#x3068;&#x73FE;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x96FB;&#x78C1;&#x6CE2;&#x5438;&#x53CE;&#xFF08;X&#x7DDA;&#x3068;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#xFF09;&#x3001;&#x8FD1;&#x8D64;&#x5916;&#x5149;&#x306E;&#x6563;&#x4E71;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x75C5;&#x6C17;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#xFF09;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x5224;&#x5225;&#x5F0F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305A;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;0.01&#x304B;&#x3089;30 MHz&#x3067;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x8003;&#x616E;&#x3057;&#x3001;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x96FB;&#x78C1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x96FB;&#x6975;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3002;&#x914D;&#x5217;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x304C;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x96FB;&#x78C1;&#x754C;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30C7;&#x30B8;&#x30BF;&#x30EB;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;4&#x3064;&#x306E;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x70B9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A08;&#x6E2C;&#x306B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;2&#x3064;&#x306E;&#x6B21;&#x5143;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x9AD8;&#x3044;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5BF8;&#x6CD5;&#x306B;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC784;&#xD53C;&#xB358;&#xC2A4; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBE60;&#xB978; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBC30;&#xC5F4; &#xAD6C;&#xD604; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Varias propiedades del tejido se han utilizado en las m&#xE9;tricas pasados &#x200B;&#x200B;y presentes como que pueden servir para discriminar sano de tejido enfermo. La absorci&#xF3;n electromagn&#xE9;tica (de rayos X y las se&#xF1;ales &#xF3;pticas), la dispersi&#xF3;n de la luz del infrarrojo cercano, y la impedancia el&#xE9;ctrica son unos pocos par&#xE1;metros tales. Con el fin de servir como discriminantes para enfermos (por ejemplo, neopl&#xE1;sica) del tejido, las caracter&#xED;sticas de estos tejidos primero debe ser determinada con precisi&#xF3;n. En este trabajo, consideramos que las propiedades de la impedancia el&#xE9;ctrica de los tejidos y los agregados de c&#xE9;lulas, y presentar el dise&#xF1;o de un conjunto de electrodos reconfigurable que es capaz de proporcionar una interfaz electromagn&#xE9;tica bien definida para el tejido en estudio, para la caracterizaci&#xF3;n de la banda de 0,01 a 30 rango. La configuraci&#xF3;n de elementos de la matriz puede ser cambiado f&#xE1;cilmente bajo el control digital, lo que permite varias configuraciones del campo electromagn&#xE9;tico que debe aplicarse al tejido bajo estudio. La matriz est&#xE1; dise&#xF1;ada para interfaz de cuatro puntos, as&#xED; como instrumentaci&#xF3;n impedancia de dos puntos, y puede ser utilizada para los sistemas bioim&#xE1;genes dos dimensiones sobre la base de impedancias el&#xE9;ctricas. El dise&#xF1;o puede hacerse a escala en las frecuencias m&#xE1;s altas y m&#xE1;s peque&#xF1;as dimensiones, lo que permite para los estudios de las propiedades el&#xE9;ctricas a nivel celular.

La aplicaci&#xF3;n de una matriz reconfigurable r&#xE1;pido para la caracterizaci&#xF3;n de tejidos de impedancia

&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x6839;&#x636E;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4E0E;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3001; &#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x4F30;&#x8BA1;&#x7684;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x5F62;&#x6210; M(2) &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x6837;&#x80C6;&#x78B1;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6210;&#x5BF9;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5355;&#x4E00;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x548C;&#x5355;&#x4E2A;&#x627F;&#x5151;&#x4EBA; (E) &#x548C;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x7684;&#x6307;&#x5B9A;&#x5927;&#x5C0F; (n) &#x5185;&#x660E;&#x663E;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;M(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x662F; N &#x603B;&#x7AD9;&#x5230;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x7EFF;&#x8272;&#x6216;&#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x53D1;&#x5C04;&#x5149;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5149;&#x8C31;&#x53CD;&#x5377;&#x79EF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x660E;&#x663E;&#x63D0;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x589E;&#x5F3A;&#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149; protein-M(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x5BF9;&#x589E;&#x5F3A;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149; protein-M(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x6BD4;&#x7387;&#x7684;&#x6350;&#x52A9; dequenching &#x548C;&#x654F;&#x627F;&#x5151;&#x4EBA;&#x6392;&#x653E;&#x91CF;&#x7684;&#x4F30;&#x8BA1;&#x3002;&#x6570;&#x636E;&#x88AB;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E3A;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x7EC4;&#x5408;&#x548C;&#x627F;&#x5151;&#x5185;&#x6307;&#x5B9A;&#x7684;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x83B7;&#x5F97; E &#x7684;&#x62DF;&#x5408;&#x7684;&#x503C;&#xFF0C;&#x5982;&#x4E0B;&#x6240;&#x793A;&#xFF1A; n = 2&#xFF0C;+ /-0.019 &#xFF1B; 0.495n = 4&#xFF0C;+ /-0.010 &#xFF1B; 0.202n = 6&#xFF0C;+ /-0.006 &#xFF1B; 0.128n = 8&#xFF0C;+ /-0.005 0.093&#x3002;&#x6210;&#x5BF9;&#x7684;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#x786E;&#x5B9A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF; 0.20-0.24&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x7684; M(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x6536;&#x76CA;&#x7387;&#x5BE1;&#x805A;&#x5927;&#x5C0F;&#x6839;&#x636E;&#x8367;&#x5149;&#x5C5E;&#x6027;&#x4EC5;&#x663E;&#x5F0F;&#x4F30;&#x8BA1;&#x3002;&#x5176;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x89E3;&#x51B3; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x662F;&#x5426;&#x5B58;&#x5728;&#x4E3A;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x6216;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x6709;&#x804C;&#x80FD;&#x90E8;&#x95E8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x548C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9884;&#x671F;&#x8FD9;&#x7C7B;&#x4FE1;&#x606F;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7406;&#x89E3;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

M2 &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6240;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x5BE1;&#x805A;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;

Fluorescence resonance energy transfer (FRET), measured by fluorescence intensity-based microscopy and fluorescence lifetime imaging, has been used to estimate the size of oligomers formed by the M(2) muscarinic cholinergic receptor. The approach is based on the relationship between the apparent FRET efficiency within an oligomer of specified size (n) and the pairwise FRET efficiency between a single donor and a single acceptor (E). The M(2) receptor was fused at the N terminus to enhanced green or yellow fluorescent protein and expressed in Chinese hamster ovary cells. Emission spectra were analyzed by spectral deconvolution, and apparent efficiencies were estimated by donor-dequenching and acceptor-sensitized emission at different ratios of enhanced yellow fluorescent protein-M(2) receptor to enhanced green fluorescent protein-M(2) receptor. The data were interpreted in terms of a model that considers all combinations of donor and acceptor within a specified oligomer to obtain fitted values of E as follows: n = 2, 0.495 +/- 0.019; n = 4, 0.202 +/- 0.010; n = 6, 0.128 +/- 0.006; n = 8, 0.093 +/- 0.005. The pairwise FRET efficiency determined independently by fluorescence lifetime imaging was 0.20-0.24, identifying the M(2) receptor as a tetramer. The strategy described here yields an explicit estimate of oligomeric size on the basis of fluorescence properties alone. Its broader application could resolve the general question of whether G protein-coupled receptors exist as dimers or larger oligomers. The size of an oligomer has functional implications, and such information can be expected to contribute to an understanding of the signaling process.

Oligomeric size of the m2 muscarinic receptor in live cells as determined by quantitative fluorescence resonance energy transfer.

Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET), mesur&#xE9;e par fluorescence bas&#xE9;e sur l&#x26;#39;intensit&#xE9; de microscopie et d&#x26;#39;imagerie de vie de fluorescence, a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;e pour estimer la taille d&#x26;#39;oligom&#xE8;res form&#xE9;s par le M (2) des r&#xE9;cepteurs cholinergiques muscariniques. L&#x26;#39;approche est bas&#xE9;e sur la relation entre l&#x26;#39;apparente efficacit&#xE9; au sein de FRET un oligom&#xE8;re de taille sp&#xE9;cifi&#xE9;e (n) et la paire FRET entre l&#x26;#39;efficacit&#xE9; d&#x26;#39;un seul donneur et un accepteur unique (E). Le M (2) du r&#xE9;cepteur a &#xE9;t&#xE9; fusionn&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N de la prot&#xE9;ine fluorescente verte am&#xE9;lior&#xE9;e ou jaune et exprim&#xE9;e en cellules ovariennes de hamster chinois. Les spectres d&#x26;#39;&#xE9;mission ont &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;es par d&#xE9;convolution spectrale, et l&#x26;#39;efficacit&#xE9; apparentes ont &#xE9;t&#xE9; estim&#xE9;es par donneur et accepteur-dequenching-sensibilis&#xE9;e &#xE9;mission &#xE0; diff&#xE9;rents rapports de renforcement jaune fluorescent prot&#xE9;ine-M (2) r&#xE9;cepteur de prot&#xE9;ine fluorescente verte am&#xE9;lior&#xE9;e-M (2) r&#xE9;cepteur. Les donn&#xE9;es ont &#xE9;t&#xE9; interpr&#xE9;t&#xE9;es en termes d&#x26;#39;un mod&#xE8;le qui tient compte de toutes les combinaisons de donneur et accepteur dans un oligom&#xE8;re sp&#xE9;cifi&#xE9; pour obtenir les valeurs ajust&#xE9;es de E comme suit: n = 2, 0.495 + / - 0,019; n = 4, 0,202 + / - 0,010; n = 6, 0,128 + / - 0,006; n = 8, 0,093 + / - 0,005. Le paires FRET efficacit&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;e de mani&#xE8;re ind&#xE9;pendante par imagerie de vie de fluorescence est 0.20 &#xE0; 0,24, l&#x26;#39;identification du M (2) r&#xE9;cepteur comme un t&#xE9;tram&#xE8;re. La strat&#xE9;gie d&#xE9;crite ici donne une estimation explicite de la taille oligom&#xE8;re sur la base de propri&#xE9;t&#xE9;s de fluorescence &#xE0; eux seuls. Son application plus large pourrait r&#xE9;soudre la question g&#xE9;n&#xE9;rale de savoir si G r&#xE9;cepteurs coupl&#xE9;s aux prot&#xE9;ines existent sous forme de dim&#xE8;res ou oligom&#xE8;res plus grands. La taille d&#x26;#39;un oligom&#xE8;re a des implications fonctionnelles, et de telles informations peuvent &#xEA;tre tenus de contribuer &#xE0; une meilleure compr&#xE9;hension du processus de signalisation.

Taille oligom&#xE9;rique du r&#xE9;cepteur muscarinique M2 dans les cellules vivantes tel que d&#xE9;termin&#xE9; par le transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance quantitative fluorescence

Fluoreszenz Resonanz Energie transfer (FRET), gemessen an Intensit&auml;t-basierte Fluoreszenzmikroskopie und Fluoreszenz-Lebensdauer-Bildgebung, wurde benutzt, um Oligomere gebildet durch den m Muskarinischer cholinergische Rezeptor durchf&uuml;hrende. Der Ansatz basiert auf der Beziehung zwischen der scheinbaren FRET-Effizienz innerhalb einer Oligomer angegebenen Gr&ouml;&szlig;e (n) und die paarweise FRET-Effizienz zwischen einem einzelnen Spender und ein einzelnes Akzeptor (E). Der m-Rezeptor wurde im N-Terminus zu verst&auml;rkten gr&uuml;nen oder gelben fluoreszierenden Proteins verschmolzen und in chinesischen Hamsterzellen Eierstock ausgedr&uuml;ckt. Emissionsspektrum von spektralen Entwindung analysiert wurden und scheinbare Effizienz von Spender-dequenching und Akzeptor-sensibilisiert Emission bei unterschiedlichen Verh&auml;ltnisse verbesserte gelb fluoreszierende protein-M(2) Rezeptor an verbesserten gr&uuml;n fluoreszierende protein-M(2) Rezeptor gesch&auml;tzt wurden. Die Daten wurden im Hinblick auf ein Modell, das alle Kombinationen des Spenders und Akzeptor innerhalb einer angegebenen Oligomer ausgestattete Werte von E wie folgt zu erhalten h&auml;lt interpretiert: n = 2, 0.495 +/-0,019; n = 4, 0.202 +/-0.010; n = 6, 0.128 +/-0,006; n = 8, 0.093 +/-0,005. Die paarweise FRET-Effizienz bestimmt unabh&auml;ngig von Fluoreszenz-Lebensdauer-Bildgebung-war-0.20-0.24, Ermittlung des m-Rezeptors als ein Tetramer. Die hier beschriebene Strategie ergibt eine explizite Sch&auml;tzung der Oligomere Gr&ouml;&szlig;e auf der Grundlage der Fluoreszenz Eigenschaften allein. Seine breitere Anwendung konnte die allgemeine Frage der Existenz von G-Protein-gekoppelte Rezeptoren als Dimere oder gr&ouml;&szlig;eren Oligomere aufl&ouml;sen. Funktionale wirkt sich die Gr&ouml;&szlig;e des ein Oligomer, und solche Informationen erwartet werden kann zu einer Verst&auml;ndigung die signalisierende Prozess beitragen.

Oligomere Gr&ouml;&szlig;e m2 Muskarinischer Rezeptors in lebenden Zellen festgelegt durch quantitative Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer.

Energia di risonanza di fluorescenza transfer (FRET), misurata da microscopia di fluorescenza basati su intensit&agrave; e fluorescenza lifetime imaging, &egrave; stato utilizzato per stimare le dimensioni di oligomeri formata dal recettore colinergico muscarinico M(2). L&#39;approccio &egrave; basato sul rapporto tra l&#39;apparente efficienza FRET entro un oligomero di dimensione specificata (n) e l&#39;efficienza FRET coppie tra un singolo donatore e un accettore singola (E). Il recettore M(2) &egrave; stato fuso al capolinea N di avanzata proteina fluorescente verde o giallo ed espresso in cellule di ovaio di criceto cinese. Spettri di emissione sono stati analizzati da spettrale deconvoluzione, e apparente efficienza sono stato stimato mediante emissione di dequenching donatore e accettore-sensibilizzato a differenti rapporti di enhanced giallo fluorescente protein-M(2) recettore recettore avanzato protein-M(2) verde fluorescente. I dati sono stati interpretati in termini di un modello che considera tutte le combinazioni del donatore e accettore all&#39;interno di un oligomero specificato per ottenere valori muniti di E come segue: n = 2, 0.495 + 0.019; n = 4, 0.202 + /-0.010; n = 6, 0.128 + /-0.006; n = 8, 0.093 + /-0.005. L&#39;efficienza FRET pairwise determinato indipendentemente da formazione immagine di corso della vita di fluorescenza era 0,20-0,24, identificando il recettore M(2) come un tetramero. La strategia descritta qui produce una stima esplicita di oligomerici dimensione in base alle propriet&agrave; di fluorescenza da solo. Sua applicazione pi&ugrave; ampio potrebbe risolvere la questione generale se recettori accoppiati a proteine G esistano come dimeri o oligomeri pi&ugrave; grandi. La dimensione di un oligomero ha implicazioni funzionali, e tali informazioni possono essere previsto a contribuire alla comprensione del processo di segnalazione.

Dimensione oligomerica del recettore muscarinico m2 in cellule vive, come determinato dal trasferimento di energia per risonanza fluorescenza quantitativa.

&#x5F37;&#x5EA6;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x3001;M&#xFF08;2&#xFF09;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3092;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306A;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#xFF08;n&#xFF09;&#x3068;&#x4E00;&#x5BFE;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5185;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x5358;&#xFF08;E&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;FRET&#x52B9;&#x7387;FRET&#x306E;&#x3002; M&#xFF08;2&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DD1;&#x3084;&#x9EC4;&#x8272;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x767A;&#x5149;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x30C7;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x3068;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-M&#xFF08;2&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-M&#xFF08;2&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6BD4;&#x3067;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;dequenching&#x611F;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;E&#x306E;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x5024;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5185;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x8003;&#x616E;&#x3057;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x89B3;&#x70B9;&#x3067;&#x89E3;&#x91C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#xFF1A;n = 2&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;0.495 + /  -  0.019&#x3001;n = 4&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;0.202 + /  -  0.010; N = 6&#x3001;0.128 + /  -  0.006&#x3001;N = 8&#x3001;0.093 + /  -  0.005&#x3002;&#x30DA;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;M&#xFF08;2&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;0.20&#x304B;&#x3089;0.24&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;FRET&#x304C;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x86CD;&#x5149;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x660E;&#x793A;&#x7684;&#x306A;&#x898B;&#x7A4D;&#x308A;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x8CEA;&#x554F;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x610F;&#x5473;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x60C5;&#x5831;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x671F;&#x5F85;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;M2&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;

&#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; (&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;), &#xD615;&#xAD11; &#xAC15;&#xB3C4; &#xAE30;&#xBC18; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE21;&#xC815;, &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; M(2) muscarinic cholinergic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xC608;&#xCE21; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xD06C;&#xAE30; (n)&#xC758; oligomer &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xACFC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC640; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; (E) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC5C6;&#xC74C;&#xC744; FRET &#xD6A8;&#xC728;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. M(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xB610;&#xB294; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC735;&#xD569; &#xD558; &#xACE0; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xD604;. &#xBC29;&#xCD9C; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC740; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; deconvolution &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xADF8;&#xB9B0; &#xD615;&#xAD11; protein-M(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; protein-M(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBE44;&#xC728;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; dequenching&#xC640; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; sensitized &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC608;&#xC0C1; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC774; E&#xC758; &#xC7A5;&#xCC29; &#xB418;&#xC5B4; &#xAC12;&#xC744; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC9C0;&#xC815;&#xB41C; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB0B4; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xACE0;&#xB824; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD574;&#xC11D;: n = 2, 0.495 0.019; + n = 4, &plusmn; 0.010; 0.202 n = 6, + 0.006; 0.128 n = 8, 0.093 0.005 +. &#xC778;&#xB371;&#xC2A4;&#xB3C4; FRET &#xD6A8;&#xC728; &#xD655;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; 0.20 0.24, M(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; tetramer&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD63C;&#xC790; &#xD615;&#xAD11; &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0; &#xADFC;&#xAC70; &#xD558; &#xC5EC; oligomeric &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xBA85;&#xC2DC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xC0C1; &#xC218;&#xC775;&#xB960;&#xC740; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xB41C; &#xC804;&#xB7B5;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC5EC;&#xBD80; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; &#xB610;&#xB294; &#xB354; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC744; &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC758;&#xBBF8; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC815;&#xBCF4; &#xC2E0;&#xD638; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xC0C1; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC591;&#xC801; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC5D0; m2 muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; oligomeric.

Resonancia de fluorescencia de transferencia de energ&#xED;a (FRET), medida por fluorescencia basada en la intensidad de la microscop&#xED;a de fluorescencia y de imagen de por vida, se ha utilizado para estimar el tama&#xF1;o de los olig&#xF3;meros formados por la M (2) receptores colin&#xE9;rgicos muscar&#xED;nicos. El m&#xE9;todo se basa en la relaci&#xF3;n entre la aparente FRET eficiencia dentro de un olig&#xF3;mero de tama&#xF1;o especificado (n) y la eficiencia FRET pares entre un donante y un aceptor &#xFA;nica (E). La M (2) del receptor se funden en el extremo N de la prote&#xED;na verde fluorescente mejorada o amarillo y se expresa en c&#xE9;lulas de ovario de h&#xE1;mster chino. Emisi&#xF3;n espectros fueron analizados por deconvoluci&#xF3;n espectral, y eficiencias aparentes se calcularon por donante-aceptor dequenching y emisi&#xF3;n sensibilizado a diferentes proporciones de mayor amarillo fluorescente prote&#xED;na-M (2) del receptor para mejorar la prote&#xED;na fluorescente verde-M (2) del receptor. Los datos fueron interpretados en t&#xE9;rminos de un modelo que considera todas las combinaciones de donador y aceptor dentro de un olig&#xF3;mero especificada para obtener valores ajustados de E como sigue: n = 2, 0,495 + / - 0,019, n = 4, 0,202 + / - 0,010; n = 6, 0,128 + / - 0,006, n = 8, 0,093 + / - 0,005. El pares FRET eficiencia determina de forma independiente por formaci&#xF3;n de im&#xE1;genes vida de fluorescencia fue 0.20-0.24, la identificaci&#xF3;n de la M (2) del receptor como un tetr&#xE1;mero. La estrategia descrita aqu&#xED; da una estimaci&#xF3;n expl&#xED;cita de tama&#xF1;o oligom&#xE9;rica sobre la base de las propiedades de fluorescencia por s&#xED; solos. Su aplicaci&#xF3;n m&#xE1;s amplia podr&#xED;a resolver la cuesti&#xF3;n general de si el G receptores acoplados a prote&#xED;nas existen como d&#xED;meros o m&#xE1;s olig&#xF3;meros. El tama&#xF1;o de un olig&#xF3;mero tiene implicaciones funcionales, y esa informaci&#xF3;n se puede esperar que contribuyen a una comprensi&#xF3;n del proceso de se&#xF1;alizaci&#xF3;n.

Tama&#xF1;o oligom&#xE9;rica del receptor muscar&#xED;nico M2 en c&#xE9;lulas vivas como cuantitativa determinada por transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente

&#x5F53;&#x524D;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6446;&#x8131;&#x4E86;&#x51E0;&#x5341;&#x5E74;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x5BBD;&#x89C6;&#x573A;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C; spectrofluorometers &#x6765;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8367;&#x5149;&#x4ECE;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x6216;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x6D4B;&#x91CF;&#x662F;&#x5E73;&#x5747;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#x4E86;&#x5927;&#x91CF;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x6D17;&#x51FA;&#x7684;&#x5173;&#x4E8E;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x91C7;&#x7528;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x539F;&#x5219;&#x53EF;&#x80FD;&#x53EA;&#x6709;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x4FBF;&#x5229;&#x91CF;&#x5316;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x505A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6F5C;&#x529B;&#x5145;&#x5206;&#x5B9E;&#x73B0;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5149;&#x8C31;-&#x6216;&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x8981;&#x5229;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x65B0;&#x673A;&#x4F1A;&#x5206;&#x5B50;&#x5F71;&#x50CF;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x7406;&#x8BBA;&#x6A21;&#x578B;&#x548C;&#x6570;&#x636E;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8499;&#x7279;&#x5361;&#x7F57;&#x6A21;&#x62DF;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x97F3;&#x54C1;&#x7684;&#x5747;&#x5300;&#x548C;&#x975E;&#x5747;&#x5300;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x57FA;&#x4E8E;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#x5206;&#x5E03;&#x5206;&#x6790;&#x5448;&#x73B0;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x4EE5;&#x5E73;&#x5747;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x5141;&#x8BB8;&#x9002;&#x5F53;&#x9274;&#x5B9A;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x70E6;&#x607C;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF0C;&#x5206;&#x5B50;&#x62E5;&#x6324;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5B83;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6A21;&#x62DF;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x62DF;&#x5408;&#x7684;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#x5206;&#x5E03;&#x4FE1;&#x606F;&#x63D0;&#x53D6;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

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Current methods for analysis of data from studies of protein-protein interactions using fluorescence resonance energy transfer (FRET) emerged from several decades of research using wide-field microscopes and spectrofluorometers to measure fluorescence from individual cells or cell populations. Inherent to most measurements is an averaging of the distributions of FRET efficiencies over large populations of protein complexes, which washes out information regarding the stoichiometry and structure of protein complexes. Although the introduction of laser-scanning microscopes in principle could facilitate quantification of the distributions of FRET efficiencies in live cells, only comparatively recently did this potential fully materialize, through development of spectral- or lifetime-based approaches. To exploit this new opportunity in molecular imaging, it is necessary to further develop theoretical models and methods of data analysis. Using Monte Carlo simulations, we investigated FRET in homogenous and inhomogeneous spatial distributions of molecules. Our results indicate that an analysis based on distributions of FRET efficiencies presents significant advantages over the average-based approach, which include allowing for proper identification of biologically relevant FRET. This study provides insights into the effect of molecular crowding on FRET, and it offers a basis for information extraction from distributions of FRET efficiencies using simulations-based data fitting.

Comparison between whole distribution- and average-based approaches to the determination of fluorescence resonance energy transfer efficiency in ensembles of proteins in living cells.

Les m&#xE9;thodes actuelles d&#x26;#39;analyse des donn&#xE9;es provenant d&#x26;#39;&#xE9;tudes de interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine utilisant la fluorescence de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance (FRET) a &#xE9;merg&#xE9; de plusieurs d&#xE9;cennies de recherche en utilisant l&#x26;#39;&#xE9;chelle microscopes &#xE0; champ et Spectrofluorim&#xE8;tres pour mesurer la fluorescence des cellules individuelles ou des populations cellulaires. Inh&#xE9;rent &#xE0; la plupart des mesures est une moyenne des distributions de rendements de plus de FRET de grandes populations de complexes prot&#xE9;iques, qui baigne l&#x26;#39;information au sujet de la stoechiom&#xE9;trie et la structure des complexes prot&#xE9;iques. Bien que l&#x26;#39;introduction du laser-microscopes &#xE0; balayage, en principe, pourrait faciliter la quantification des distributions de gains en efficience dans FRET des cellules vivantes, que relativement r&#xE9;cemment que ce potentiel se concr&#xE9;tiser pleinement, &#xE0; travers le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;approches spectrales ou la dur&#xE9;e de vie bas&#xE9; sur. Pour exploiter cette nouvelle opportunit&#xE9; dans l&#x26;#39;imagerie mol&#xE9;culaire, il est n&#xE9;cessaire de continuer &#xE0; d&#xE9;velopper des mod&#xE8;les th&#xE9;oriques et des m&#xE9;thodes d&#x26;#39;analyse de donn&#xE9;es. En utilisant des simulations de Monte Carlo, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; FRET dans homog&#xE8;nes et inhomog&#xE8;nes des distributions spatiales de mol&#xE9;cules. Nos r&#xE9;sultats indiquent qu&#x26;#39;une analyse bas&#xE9;e sur les distributions de gains d&#x26;#39;efficacit&#xE9; de FRET pr&#xE9;sente des avantages significatifs sur la m&#xE9;thode de la moyenne bas&#xE9;e sur, qui comprennent la possibilit&#xE9; pour l&#x26;#39;identification correcte de biologiquement pertinente FRET. Cette &#xE9;tude fournit un aper&#xE7;u de l&#x26;#39;effet d&#x26;#39;&#xE9;viction mol&#xE9;culaire sur le FRET, et il offre une base pour l&#x26;#39;extraction d&#x26;#39;informations &#xE0; partir des distributions de FRET efficacit&#xE9; au moyen de simulations bas&#xE9;es sur des donn&#xE9;es de montage.

Comparaison entre les approches de distribution des entiers et Moyenne bas&#xE9;e &#xE0; la d&#xE9;termination de l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de transfert de fluorescence par r&#xE9;sonance de l&#x26;#39;&#xE9;nergie dans des ensembles de prot&#xE9;ines dans les cellules vivantes

Aktuelle Methoden zur Analyse von Daten aus Studien von Protein-Protein Interaktionen mit Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET) entstand aus mehreren Jahrzehnten Forschung mit weiten Feld Mikroskope und berbessert Messen Fluoreszenz von einzelnen Zellen oder Zellen-Populationen. Die meisten Messungen innewohnt eine Mittelwertbildung der Verteilungen der FRET-Effizienz &uuml;ber gro&szlig;e Bev&ouml;lkerungen von Proteinkomplexen, die Informationen &uuml;ber die St&ouml;chiometrie und Struktur von Proteinkomplexen w&auml;scht. Obwohl die Einf&uuml;hrung von Laser-scanning Mikroskope grunds&auml;tzlich erleichtern k&ouml;nnte nur vergleichsweise Quantifizierung der Verteilungen der FRET-Effizienz in lebenden Zellen, vor kurzem hat dieses Potenzial voll zustande, durch die Entwicklung von spektralen oder Lebensdauer-basierte Ans&auml;tze. Um diese neue M&ouml;glichkeit in der molekularen Bildgebung auszunutzen, ist es notwendig, theoretische Modelle und Methoden der Datenanalyse weiterzuentwickeln. Mit Monte-Carlo-Simulationen, untersuchten wir FRET in homogenen und inhomogenen r&auml;umlichen Verteilungen von Molek&uuml;len. Unsere Ergebnisse zeigen, dass eine Analyse auf der Grundlage von Verteilungen von FRET-Effizienz entscheidende Vorteile gegen&uuml;ber dem Durchschnitt basierenden Ansatz, die umfassen pr&auml;sentiert, zulassend korrekte Kennzeichnung der biologisch relevanten FRET. Diese Studie liefert Erkenntnisse &uuml;ber die Wirkung der molekularen Gedr&auml;nge am Bund und bietet eine Grundlage f&uuml;r Informationsextraktion aus Verteilungen der FRET-Effizienz mit Simulationen basierenden Daten Formst&uuml;ck.

Vergleich zwischen ganzen Verteilung und Durchschnitt-basierte Ans&auml;tze zur Bestimmung der Fluoreszenz Resonanz Transfer Energieeffizienz in Ensembles Proteine in lebenden Zellen.

Attuali metodi di analisi dei dati provenienti da studi di interazioni proteina-proteina mediante fluorescenza resonance energy transfer (FRET) &egrave; emerso da diversi decenni di ricerca utilizzando microscopi wide-field e spettrofluorimetri per misurare la fluorescenza da singole celle o popolazioni di cella. Inerente alla maggior parte delle misurazioni &egrave; una media delle distribuzioni di FRET efficienze sopra grandi popolazioni dei complessi della proteina, che lava le informazioni riguardanti la stechiometria e la struttura dei complessi della proteina. Sebbene l&#39;introduzione della scansione laser microscopi in linea di principio potrebbero facilitare la quantificazione delle distribuzioni di FRET efficienze in cellule vive, solo relativamente di recente ha fatto questo potenziale completamente materializzare, attraverso lo sviluppo di approcci spettrale o vita-based. Per sfruttare questa nuova opportunit&agrave; in imaging molecolare, &egrave; necessario sviluppare ulteriormente i modelli teorici e metodi di analisi dei dati. Mediante simulazioni Monte Carlo, abbiamo studiato FRET in omogenei e disomogeneo distribuzioni spaziali di molecole. I nostri risultati indicano che un&#39;analisi basata sulle distribuzioni di FRET efficienze presenta vantaggi significativi rispetto l&#39;approccio basato su media, che includono l&#39;autorizzazione per la corretta identificazione della FRET biologicamente rilevanti. Questo studio fornisce intuizioni l&#39;effetto dell&#39;affollamento molecolare sul tasto, e offre una base per l&#39;estrazione di informazioni da distribuzioni di FRET efficienza utilizzando il raccordo dei dati basati su simulazioni.

Confronto tra intera distribuzione media base e approcci per la determinazione dell&#39;efficienza di trasferimento del energia di risonanza di fluorescenza in insiemi di proteine in cellule viventi.

&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5E83;&#x8996;&#x91CE;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;spectrofluorometers&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x6570;&#x5341;&#x5E74;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x6D17;&#x3046;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x308B;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;FRET&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x539F;&#x5247;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x8D70;&#x67FB;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;FRET&#x304C;&#x3001;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5BFF;&#x547D;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x5177;&#x4F53;&#x5316;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AB;&#x30EB;&#x30ED;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5747;&#x8CEA;&#x3068;&#x4E0D;&#x5747;&#x8CEA;&#x306A;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x5E03;&#x3067;FRET&#x306E;&#x691C;&#x8A0E;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;FRET&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x305F;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;FRET&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x8B58;&#x5225;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x5E73;&#x5747;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;FRET&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A6;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x52B9;&#x7387;&#x5316;&#x3092;FRET&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x62BD;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3078;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3068;&#x5E73;&#x5747;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;

&#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xB113;&#xC740; &#xD544;&#xB4DC; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBC0F; spectrofluorometers&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xAD11;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xC218; &#xC2ED;&#xB144;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB4F1;&#xC7A5;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xC7AC; &#xB41C; &#xD3C9;&#xADE0; FRET &#xD6A8;&#xC728;&#xC758; &#xBC30;&#xD3EC;&#xD310;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xD070; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; stoichiometry &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xBC16;&#xC73C;&#xB85C; &#xC53B;&#xC5B4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC2A4;&#xCE94; &#xC18C;&#xAC1C; &#xC6D0;&#xCE59;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC218;&#xB9CC; &#xBE44;&#xAD50;&#xD574; &#xBCF4;&#xBA74; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC5D0; &#xBD84;&#xBC30;&#xC758; &#xBD80; &#xB7C9;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;&#xC774; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC2E4;&#xD604;, &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xB610;&#xB294; &#xC218;&#xBA85; &#xAE30;&#xBC18; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574;. &#xBD84;&#xC790; &#xD654;&#xC0C1; &#xC9C4; &#xCC30;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC545;&#xC6A9;, &#xC774;&#xB860;&#xC801;&#xC778; &#xBAA8;&#xB378; &#xBC0F; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xADE0;&#xC9C8; &#xC131; &#xBC0F; &#xD718;&#xB3C4;&#xAC00; &#xACF5;&#xAC04; &#xBD84;&#xD3EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xBAAC;&#xD14C; &#xCE74;&#xB97C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; FRET &#xD6A8;&#xC728;&#xC758; &#xBC30;&#xD3EC;&#xD310;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xAD00;&#xB828; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;&#xC758; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD3C9;&#xADE0;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC774;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;&#xC5D0; &#xD06C;&#xB864; &#xB9C1;&#xC774; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xAE30;&#xBC18; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB9DE;&#xCDA4;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; FRET &#xD6A8;&#xC728;&#xC758; &#xBC30;&#xD3EC;&#xD310;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xBCF4; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBE44;&#xAD50; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xBD84;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xD3C9;&#xADE0; &#xAE30;&#xBC18; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xD6A8;&#xC728;&#xC758; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xC811;&#xADFC; &#xD55C;&#xB2E4;.

Los m&#xE9;todos actuales de an&#xE1;lisis de datos procedentes de estudios de las interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na mediante la transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente (FRET) surgi&#xF3; de varias d&#xE9;cadas de investigaci&#xF3;n que utilizan microscopios de campo amplio y espectrofluor&#xF3;metros para medir la fluorescencia de las c&#xE9;lulas individuales o poblaciones de c&#xE9;lulas. Inherente a la mayor&#xED;a de las mediciones es un promedio de las distribuciones de FRET eficiencias m&#xE1;s grandes poblaciones de complejos de prote&#xED;nas, que se lava a cabo informaci&#xF3;n con respecto a la estequiometr&#xED;a y la estructura de los complejos de prote&#xED;nas. A pesar de la introducci&#xF3;n de sistemas de escaneo, microscopios, en principio, podr&#xED;a facilitar la cuantificaci&#xF3;n de la distribuci&#xF3;n de la eficiencia de FRET en c&#xE9;lulas vivas, s&#xF3;lo hace relativamente poco tiempo se materialicen plenamente este potencial, a trav&#xE9;s del desarrollo de enfoques espectrales-o de por vida a base de. Para aprovechar esta nueva oportunidad en la proyecci&#xF3;n de imagen molecular, es necesario desarrollar modelos te&#xF3;ricos y m&#xE9;todos de an&#xE1;lisis de datos. Usando simulaciones de Monte Carlo, se determin&#xF3; la distribuci&#xF3;n espacial de FRET homog&#xE9;neos y no homog&#xE9;neos de las mol&#xE9;culas. Nuestros resultados indican que un an&#xE1;lisis basado en la distribuci&#xF3;n de la eficiencia de FRET presenta importantes ventajas sobre el enfoque basado en promedio, que incluyen lo que permite la correcta identificaci&#xF3;n de FRET biol&#xF3;gicamente relevantes. Este estudio proporciona informaci&#xF3;n detallada sobre el efecto de la aglomeraci&#xF3;n molecular en el traste, y ofrece una base para la extracci&#xF3;n de informaci&#xF3;n de la distribuci&#xF3;n de la eficiencia de FRET mediante simulaciones basadas en datos de conexi&#xF3;n.

Comparaci&#xF3;n entre los enfoques integrales de distribuci&#xF3;n y medio basado en la determinaci&#xF3;n de la eficiencia de transferencia de energ&#xED;a de resonancia de fluorescencia en los conjuntos de prote&#xED;nas en las c&#xE9;lulas vivas

&#x4ECB;&#x7535;&#x8C31;&#x662F;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x63CF;&#x8FF0;&#x548C;&#x5206;&#x7C7B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x7535;&#x6C14;&#x6027;&#x80FD;&#x7684;&#x6750;&#x6599;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5BF9;&#x4E0E;&#x7A7A;&#x95F4;&#x53EF;&#x53D8;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x793A;&#x4F8B;&#x6267;&#x884C;&#x4ECB;&#x8D28;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#xFF0C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x63A2;&#x5934;&#x901A;&#x5E38;&#x88AB;&#x91CD;&#x65B0;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x624B;&#x52A8;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5EA6;&#x91CF;&#x503C;&#x7684;&#x793A;&#x4F8B;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x53EF;&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x7535;&#x6781;&#x9635;&#x5217;&#xFF0C;&#x800C;&#x65E0;&#x9700;&#x5B9E;&#x9645;&#x79FB;&#x52A8;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7535;&#x6781;&#x65B9;&#x4FBF;&#x7684;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8BB0;&#x5F55;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x7535;&#x5B50;&#x65B9;&#x5F0F;&#x9009;&#x62E9;&#x7535;&#x6781;&#x4E4B;&#x4E00;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5185;&#x7EBF;&#x548C;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x5916;&#x7EBF;&#x7684;&#x7535;&#x6781;&#x7684;&#x5176;&#x4F59;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x9650;&#x6210;&#x5458;&#x540D;&#x989D;&#x7684;&#x540C;&#x8F74;&#x63A2;&#x5934;&#x88AB;&#x521B;&#x5EFA;&#x7684;&#x8FD9;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x7B80;&#x5355;&#x5730;&#x9009;&#x62E9;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7535;&#x6781;&#x7EC4;&#x5408; &#xFF1B; &#x91CD;&#x65B0;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x56E0;&#x6B64;&quot;&#x65C5;&#x6E38;&quot;&#x7684;&#x540C;&#x8F74;&#x63A2;&#x5934;&#x7684;&#x540D;&#x79F0;&#x3002;&#x51E0;&#x4F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5E38;&#x6570;&#xFF0C;&#x6570;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x540C;&#x8F74;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x7684;&#x636E;&#x4F30;&#x8BA1;&#x5BF9;&#x76D0;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E0E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x7535;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x5B89;&#x88C5;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x8840;&#x6D46;&#x819C;&#x7535;&#x5BB9;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x4ECB;&#x7535;&#x6027;&#x80FD;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x60AC;&#x6D6E;&#x5728;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x7535;&#x5BFC;&#x7387;&#x662F;&#x8861;&#x91CF;&#x548C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5DF2;&#x53D1;&#x5E03;&#x7684;&#x62A5;&#x8868;&#x3002;&#x4ECB;&#x7535;&#x8C31;&#x6210;&#x50CF;&#x8FDB;&#x884C;&#x5173;&#x4E8E;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5E7B;&#x50CF;&#x5305;&#x88F9;&#x4F53;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x6D53;&#x7F29;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x60AC;&#x6D6E;&#x6DB2;&#x743C;&#x8102;&#x51DD;&#x80F6;&#x5236;&#x6210;&#x3002;&#x5E7B;&#x50CF;&#x4E0A;, &#x6267;&#x884C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x548C;&#x4ECB;&#x8D28;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x7A7A;&#x95F4;&#x6620;&#x5C04;&#x5BF9;&#x7535;&#x6781;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7535;&#x6C14;&#x6570;&#x636E;&#x6B63;&#x662F;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5E7B;&#x50CF;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5305;&#x88F9;&#x4F53;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;

&#x4E8C;&#x7EF4;&#x4ECB;&#x7535;&#x8C31;&#xFF1A; &#x5B9E;&#x65BD;&#x548C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x626B;&#x63CF;&#x7684;&#x4E0D;&#x9650;&#x6210;&#x5458;&#x540D;&#x989D;&#x540C;&#x8F74;&#x63A2;&#x5934;&#x3002;

Dielectric spectroscopy is a powerful tool for characterizing and classifying materials based on their electrical properties. In order to perform dielectric measurements on a sample with spatially varying properties, the measuring probe typically is repositioned manually on the surface of the sample for each measurement. In this paper, we present a novel technique, based on a reconfigurable multielectrode array, which facilitates the recording of measurements at various different spatial locations without physically moving the measuring electrodes. By electronically selecting one of the electrodes as the inner line and connecting the remainder of the electrodes together to form the outer line, an open-ended coaxial probe is created, which can be repositioned by simply selecting different electrode combinations; hence the name of a "traveling" coaxial probe. The geometric factor, or the cell constant, of each coaxial probe in the array was estimated from measurements on saline solutions with known electrical characteristics. In order to validate the setup for measurement of dielectric properties of biological cells, the plasma membrane capacitance and cytoplasm conductivity of yeast cells suspended in aqueous solutions were measured and compared to results from published reports. Dielectric spectroscopy imaging was carried out on tissue phantoms made of an agar gel with inclusions consisting of concentrated yeast cell suspensions. Measurements were performed on the phantoms, and the dielectric data were spatially mapped with respect to electrode location. The spatial electrical data correlated precisely with locations of yeast cell inclusions within the phantoms.

Two-dimensional dielectric spectroscopy: implementation and validation of a scanning open-ended coaxial probe.

Spectroscopie di&#xE9;lectrique est un outil puissant pour caract&#xE9;riser et classer les mat&#xE9;riaux en fonction de leurs propri&#xE9;t&#xE9;s &#xE9;lectriques. Afin d&#x26;#39;effectuer des mesures di&#xE9;lectriques d&#x26;#39;un &#xE9;chantillon avec des propri&#xE9;t&#xE9;s diff&#xE9;rentes dans l&#x26;#39;espace, la sonde de mesure est g&#xE9;n&#xE9;ralement repositionn&#xE9; manuellement sur la surface de l&#x26;#39;&#xE9;chantillon pour chaque mesure. Dans cet article, nous pr&#xE9;sentons une nouvelle technique, bas&#xE9;e sur un tableau multi&#xE9;lectrodes reconfigurable, ce qui facilite l&#x26;#39;enregistrement des mesures &#xE0; divers diff&#xE9;rents emplacements spatiaux sans d&#xE9;placer physiquement les &#xE9;lectrodes de mesure. S&#xE9;lectionner &#xE9;lectroniquement par l&#x26;#39;une des &#xE9;lectrodes que la ligne int&#xE9;rieure et la connexion du reste des &#xE9;lectrodes pour former la ligne ext&#xE9;rieure, une sonde coaxiale ouverte est cr&#xE9;&#xE9;, qui peut &#xEA;tre repositionn&#xE9; en s&#xE9;lectionnant les combinaisons d&#x26;#39;&#xE9;lectrodes diff&#xE9;rentes, d&#x26;#39;o&#xF9; le nom d&#x26;#39;un &#x26;quot;voyager&#x26;quot; sonde coaxiale. Le facteur g&#xE9;om&#xE9;trique, ou la constante de cellule, de chaque sonde coaxiale dans le tableau a &#xE9;t&#xE9; estim&#xE9;e &#xE0; partir des mesures sur des solutions salines avec des caract&#xE9;ristiques &#xE9;lectriques connues. Afin de valider la configuration pour la mesure des propri&#xE9;t&#xE9;s di&#xE9;lectriques de cellules biologiques, la capacit&#xE9; membrane plasmique et la conductivit&#xE9; cytoplasme des cellules de levure en suspension dans des solutions aqueuses ont &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;s et compar&#xE9;s aux r&#xE9;sultats des rapports publi&#xE9;s. Spectroscopie di&#xE9;lectrique d&#x26;#39;imagerie a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e sur des fant&#xF4;mes de tissu en un gel d&#x26;#39;agar avec des inclusions constitu&#xE9;es de suspensions concentr&#xE9;es de cellules de levure. Les mesures ont &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9;es sur les fant&#xF4;mes, et les donn&#xE9;es di&#xE9;lectriques ont &#xE9;t&#xE9; cartographi&#xE9;s dans l&#x26;#39;espace par rapport &#xE0; l&#x26;#39;emplacement de l&#x26;#39;&#xE9;lectrode. Les donn&#xE9;es spatiales &#xE9;lectriques corr&#xE9;l&#xE9;s pr&#xE9;cis&#xE9;ment avec des emplacements d&#x26;#39;inclusions de cellules de levure dans les fant&#xF4;mes.

Spectroscopie di&#xE9;lectrique &#xE0; deux dimensions: la mise en &#x153;uvre et la validation d&#x26;#39;un balayage &#xE0; composition non limit&#xE9;e de la sonde coaxiale

Dielektrische Spektroskopie ist ein leistungsf&auml;higes Werkzeug zur Charakterisierung und Klassifizierung von Materialien, die aufgrund ihrer elektrischen Eigenschaften. Um dielektrische Messungen an einer Probe mit r&auml;umlicher Eigenschaften durchzuf&uuml;hren, wird die Messsonde auf der Oberfl&auml;che der Probe f&uuml;r jede Messung in der Regel manuell positioniert. In diesem Beitrag pr&auml;sentieren wir eine neue Technik, basierend auf einem rekonfigurierbaren multielectrode Array, die die Aufnahme von Messungen an verschiedenen Standorten r&auml;umliche erleichtert, ohne k&ouml;rperlich bewegen die Messen-Elektroden. Elektronisch eine der Elektroden als der inneren Linie ausw&auml;hlen und verbinden den Rest der Elektroden zusammen, um die &auml;u&szlig;ere Linie bilden, wird eine unbefristete Koaxialsonde erstellt die nachtr&auml;glich umsetzbar durch einfaches Ausw&auml;hlen verschiedener Elektrode Kombinationen; daher der Name der eine &quot;Reise&quot; Koaxialsonde. Der geometrische Faktor, oder die Zelle Konstante, der jede Koaxialsonde im Array wurde von Messungen an Salzl&ouml;sungen mit bekannten elektrischen Eigenschaften gesch&auml;tzt. Damit das Setup f&uuml;r die Messung der dielektrischen Eigenschaften von biologischen Zellen, die Plasmamembran Kapazitiv und Zytoplasma validiert wurden Leitf&auml;higkeit von Hefezellen ausgesetzt, in w&auml;ssrigen L&ouml;sungen gemessen und im Vergleich zu Ergebnissen von ver&ouml;ffentlichten Berichten. Dielektrische Spektroskopie Imaging wurde auf Gewebe Phantome hergestellt aus einem Agargel mit Einschl&uuml;ssen, bestehend aus konzentriertem Hefe Zellsuspensionen durchgef&uuml;hrt. Messungen wurden durchgef&uuml;hrt, an die Phantoms und die dielektrischen Daten wurden in Bezug auf die Lage der Elektrode r&auml;umlich zugeordnet. Die r&auml;umlichen elektrischen Daten korreliert genau mit Standorten von Hefe Zelle Einschl&uuml;sse innerhalb der Phantome.

Zweidimensionale Dielektrische Spektroskopie: Implementierung und Validierung von einem Scan unbefristete Koaxialsonde.

Spettroscopia dielettrica &egrave; un potente strumento per la caratterizzazione e classificazione dei materiali in base alle loro propriet&agrave; elettriche. Al fine di effettuare le misurazioni dielettriche su un campione con propriet&agrave; spazialmente diverse, la sonda di misura in genere viene riposizionata manualmente sulla superficie del campione per ogni misurazione. In questo articolo, vi presentiamo una tecnica romanzo, basata su una matrice multielectrode riconfigurabile, che facilita la registrazione delle misurazioni alle varie posizioni spaziali differenti senza spostare fisicamente gli elettrodi di misura. Elettronicamente selezionando uno degli elettrodi come la linea interna e collegando il resto degli elettrodi insieme per formare la linea esterna, viene creata una sonda coassiale a tempo indeterminato, che pu&ograve; essere riposizionato semplicemente selezionando combinazioni differenti degli elettrodi; da qui il nome di una sonda coassiale &quot;itinerante&quot;. Il fattore geometrico, o la costante di cella, di ogni sonda coassiale nella matrice &egrave; stato stimato da misurazioni su soluzioni saline con note caratteristiche elettriche. Al fine di convalidare l&#39;installazione per la misura delle propriet&agrave; dielettriche di cellule biologiche, la capacit&agrave; della membrana plasmatica e citoplasma conducibilit&agrave; delle cellule di lievito sospesi in soluzioni acquose erano misurati e rispetto ai risultati da rapporti pubblicati. Imaging di spettroscopia dielettrica &egrave; stato effettuato su fantasmi di tessuto composto da un gel di agar con inclusioni costituito da sospensioni di cellule di lievito concentrato. Le misurazioni sono state eseguite sui fantasmi, e i dati dielettrici sono stati mappati spazialmente rispetto alla posizione degli elettrodi. I dati elettrici spaziali correlato appunto con le posizioni di inclusioni di cellule di lievito entro i fantasmi.

Spettroscopia dielettrica bidimensionale: implementazione e validazione di una scansione sonda coassiale a tempo indeterminato.

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Espectroscop&#xED;a diel&#xE9;ctrica es una poderosa herramienta para la caracterizaci&#xF3;n y clasificaci&#xF3;n de materiales en funci&#xF3;n de sus propiedades el&#xE9;ctricas. Con el fin de realizar las mediciones diel&#xE9;ctricas en una muestra con propiedades espacialmente variable, la sonda de medida t&#xED;pico es reposicionado manualmente sobre la superficie de la muestra para cada medici&#xF3;n. En este art&#xED;culo se presenta una nueva t&#xE9;cnica, basada en una amplia multielectrodo reconfigurable, lo que facilita el registro de las mediciones en diferentes localizaciones espaciales diferentes sin mover f&#xED;sicamente los electrodos de medici&#xF3;n. Por electr&#xF3;nicamente seleccionando uno de los electrodos como la l&#xED;nea interna y la conexi&#xF3;n del resto de los electrodos entre s&#xED; para formar la l&#xED;nea exterior, una sonda coaxial abierta se crea, que puede ser reposicionado simplemente seleccionando diferentes combinaciones de electrodos, de ah&#xED; el nombre de un &#x26;quot;viajando&#x26;quot; sonda coaxial. El factor geom&#xE9;trico, o la constante de celda, de cada sonda coaxial en la matriz se estim&#xF3; a partir de mediciones en soluciones salinas con conocidas caracter&#xED;sticas el&#xE9;ctricas. Con el fin de validar la configuraci&#xF3;n para la medici&#xF3;n de las propiedades diel&#xE9;ctricas de las c&#xE9;lulas biol&#xF3;gicas, la capacitancia de la membrana plasm&#xE1;tica y la conductividad citoplasma de las c&#xE9;lulas de levadura en suspensi&#xF3;n en soluciones acuosas se mide y se compara con los resultados de los informes publicados. Diel&#xE9;ctrica espectroscop&#xED;a de imagen se llev&#xF3; a cabo en fantasmas tejidos hechos de un gel de agar con inclusiones que consisten en concentrados suspensiones de c&#xE9;lulas de levadura. Las mediciones se realizaron en los fantasmas, y los datos diel&#xE9;ctricas fueron asignadas espacialmente con respecto a la localizaci&#xF3;n de los electrodos. Los datos el&#xE9;ctricos espaciales correlacionados precisamente con la ubicaci&#xF3;n de las inclusiones celulares de levadura dentro de los fantasmas.

Diel&#xE9;ctrica de dos dimensiones de Espectroscop&#xED;a: Implementaci&#xF3;n y Validaci&#xF3;n de un microscopio de barrido de composici&#xF3;n abierta de la sonda coaxial

Valerica Raicu

Department of Physics,
Department of Biological Sciences

University of Wisconsin - Milwaukee

In vivo Quantification of G Protein Coupled Receptor Interactions using Spectrally Resolved Two-photon Microscopy

Valerica Raicu

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University of Wisconsin - Milwaukee

In vivo Quantification of G Protein Coupled Receptor Interactions using Spectrally Resolved Two-photon Microscopy

Department of Physics,
Department of Biological Sciences