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Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging

Several methods for the preparation of murine dendritic cells can be found in the literature. Here, we present a method that produces greater than 85% ...

University of California, Irvine (UCI)

&#x9AD8;&#x6548;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9700;&#x8981;&#x957F;&#x6548;&#x9499;&#x6D8C;&#x5165;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x6D3B;&#x6027;&#x9499; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x6E20;&#x9053;&#x548C; (IS) &#x4E0E;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE; (APC) &#x7A33;&#x5B9A;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x5DF2;&#x67E5;&#x660E;&#x4F34;&#x548C;&#x679C;&#x8747;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x548C;&#x5176;&#x76F8;&#x5E94;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x6E90; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x88AB;&#x5F81;&#x8058;&#x5230;&#x4E3B;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x81EA;&#x4F53;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x3002;&#x5728;&#x4F11;&#x606F;&#x6216; super-antigen &#xFF08;SEB&#xFF09; &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x65B9;&#x9762;&#x79EF;&#x7D2F;&#x4E86; STIM1 &#x548C; Orai1-&#x9884;&#x5904;&#x7406; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; SEB &#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x88AB; colocalized &#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x4E0E; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53; (TCR)&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x6EE1;&#x8F7D; EGTA T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x6210;&#x50CF;&#x5927;&#x5927;&#x900F;&#x9732;&#x9AD8; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x9644;&#x8FD1;&#x63A5;&#x53E3;&#xFF0C;Ca2 + &#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;/&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x79EF;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;Orai1 &#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x963B;&#x6B62; T &#x7EC6;&#x80DE; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5E72;&#x6D89;&#x7684; STIM1&#x3001; Orai1 &#x548C;&#x63A5;&#x89E6;&#x533A; CD3 &#x521D;&#x59CB;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x7206;&#x70B8;&#x9020;&#x6210;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; STIM1 &#x548C;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x79CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x4E0A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6; Ca2 + &#x901A;&#x8FC7;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x6D41;&#x5165;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x53CD;&#x9988;&#x56DE;&#x8DEF;&#x7684;&#x521D;&#x59CB; TCR &#x4FE1;&#x53F7;&#x770B;&#x597D; STIM1 &#x4E0A;&#x8C03;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x968F;&#x540E;&#x6297;&#x539F;&#x671F;&#x95F4;&#x9047;&#x5230;&#x3002;

Orai1 &#x548C; STIM1 &#x79FB;&#x52A8;&#x5230;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#xFF0C;&#x4E0A;&#x8C03;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

For efficient development of an immune response, T lymphocytes require long-lasting calcium influx through calcium release-activated calcium (CRAC) channels and the formation of a stable immunological synapse (IS) with the antigen-presenting cell (APC). Recent RNAi screens have identified Stim and Orai in Drosophila cells, and their corresponding mammalian homologs STIM1 and Orai1 in T cells, as essential for CRAC channel activation. Here, we show that STIM1 and Orai1 are recruited to the immunological synapse between primary human T cells and autologous dendritic cells. Both STIM1 and Orai1 accumulated in the area of contact between either resting or super-antigen (SEB)-pretreated T cells and SEB-pulsed dendritic cells, where they were colocalized with T cell receptor (TCR) and costimulatory molecules. In addition, imaging of intracellular calcium signaling in T cells loaded with EGTA revealed significantly higher Ca2+ concentration near the interface, indicating Ca2+ influx localized at the T cell/dendritic cell contact area. Expression of a dominant-negative Orai1 mutant blocked T cell Ca2+ signaling but did not interfere with the initial accumulation of STIM1, Orai1, and CD3 in the contact zone. In activated T cell blasts, mRNA expression for endogenous STIM1 and all three human homologs of Orai was up-regulated, accompanied by a marked increase in Ca2+ influx through CRAC channels. These results imply a positive feedback loop in which an initial TCR signal favors up-regulation of STIM1 and Orai proteins that would augment Ca2+ signaling during subsequent antigen encounter.

Orai1 and STIM1 move to the immunological synapse and are up-regulated during T cell activation.

Pour un d&#xE9;veloppement efficace d&#x26;#39;une r&#xE9;ponse immunitaire, les lymphocytes T n&#xE9;cessite l&#x26;#39;influx de calcium de longue dur&#xE9;e par le biais de calcium lib&#xE9;ration de calcium activ&#xE9;s (CRAC) des canaux et la formation d&#x26;#39;une synapse immunologique stable (IS) avec la cellule pr&#xE9;sentatrice d&#x26;#39;antig&#xE8;ne (APC). Derni&#xE8;res &#xE9;crans ARNi ont identifi&#xE9; Stim et Orai dans les cellules de drosophile, et leurs correspondants homologues mammif&#xE8;res STIM1 et Orai1 dans les cellules T, comme essentiels pour l&#x26;#39;activation du canal CRAC. Ici, nous montrons que STIM1 et Orai1 sont recrut&#xE9;s &#xE0; la synapse immunologique entre les lymphocytes T primaires humains et des cellules dendritiques autologues. Les deux STIM1 et Orai1 accumul&#xE9;e dans la zone de contact entre deux repos ou super-antig&#xE8;ne (SEB) pr&#xE9;trait&#xE9;s cellules T et SEB-cellules dendritiques puls&#xE9;es, o&#xF9; ils ont &#xE9;t&#xE9; colocalis&#xE9;s avec le r&#xE9;cepteur des cellules T (TCR) et les mol&#xE9;cules co-stimulatrices. En outre, l&#x26;#39;imagerie du calcium intracellulaire de signalisation dans les cellules T charg&#xE9;s de l&#x26;#39;EGTA a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; significativement plus &#xE9;lev&#xE9; Ca2 + de concentration pr&#xE8;s de l&#x26;#39;interface, indiquant Ca2 + influx localis&#xE9;e &#xE0; la cellule T / dendritique zone de contact cellulaire. Expression d&#x26;#39;un mutant dominant n&#xE9;gatif Orai1 bloqu&#xE9; cellules T Ca2 + de signalisation, mais ne pas interf&#xE9;rer avec l&#x26;#39;accumulation initiale de STIM1, Orai1, et CD3 dans la zone de contact. En activ&#xE9;s explosions des cellules T, expression de l&#x26;#39;ARNm pour STIM1 endog&#xE8;ne et tous les trois homologues de l&#x26;#39;homme des Orai &#xE9;tait r&#xE9;gul&#xE9;e &#xE0; la hausse, accompagn&#xE9;e d&#x26;#39;une augmentation marqu&#xE9;e de Ca2 + influx par les canaux CRAC. Ces r&#xE9;sultats impliquent une boucle de r&#xE9;troaction positive dans laquelle un signal initial TCR favorise la r&#xE9;gulation positive des prot&#xE9;ines STIM1 et Orai qui renforceraient Ca2 + de signalisation lors de la rencontre antig&#xE8;ne ult&#xE9;rieure.

Orai1 et STIM1 D&#xE9;placer vers la synapse immunologique et sont r&#xE9;gul&#xE9;s &#xE0; la hausse lors de l&#x26;#39;activation des lymphocytes T

F&uuml;r die effiziente Entwicklung einer Immunantwort erfordern die T-Lymphozyten langlebige Kalzium Zustrom durch Kalzium aktivierte Version Kalzium (CRAC) Kan&auml;le und die Bildung einer stabilen immunologische Synapse (IS) mit der Antigen-pr&auml;sentierenden Zelle (APC). Den letzten RNAi-Bildschirme haben Stim und Orai in Drosophila-Zellen und ihre entsprechenden S&auml;ugetier-UCP1 STIM1 und Orai1 in T-Zellen, als wesentlich f&uuml;r die CRAC Kanal Aktivierung identifiziert. Hier zeigen wir, dass STIM1 und Orai1 f&uuml;r die immunologische Synapse zwischen prim&auml;ren menschlichen T-Zellen und autologen dendritischen Zellen angeworben werden. STIM1 und Orai1 gesammelt im Bereich der Kontakt zwischen Ruhe- oder Super-antigen (SEB)-T-Zellen und SEB-gepulsten dendritischen Zellen, wo sie mit T-Zell-Rezeptor (TCR) und kostimulatorischen Molek&uuml;len colocalized waren vorbehandelt. Dar&uuml;ber hinaus ergab Bildgebung von intrazellul&auml;ren Calcium signalisieren in T-Zellen geladen mit EGTA deutlich h&ouml;herer Ca2 + Konzentration in der N&auml;he der Schnittstelle angibt, Ca2 + Zustrom an die T-Zelle/Dendritische Zelle Kontaktfl&auml;che lokalisiert. Ausdruck der Dominant-negativen Orai1 Mutanten blockiert T-Zelle Ca2 + signalisieren jedoch die erste Ansammlung von STIM1, Orai1 und CD3 in der Kontaktzone nicht st&ouml;ren. Aktivierte T-Zelle Blasten war mRNA Ausdruck f&uuml;r endogene STIM1 und alle drei menschlichen UCP1 von Orai oben-geregelt, begleitet von einem deutlichen Anstieg der Ca2 + Zustrom durch CRAC-Kan&auml;le. Diese Ergebnisse bedeuten eine positive Feedback-Schleife, in der ein Ausgangssignal von TCR bevorzugt bis-Regelung der STIM1 und Orai Proteine, die Ca2 + Signalisierung w&auml;hrend nachfolgende Antigen erg&auml;nzen w&uuml;rde zu begegnen.

Orai1 und STIM1 in der immunologischen Synapse verschieben und w&auml;hrend der T-Zell-Aktivierung sind oben-geregelt.

Per uno sviluppo efficiente di una risposta immunitaria, i linfociti T richiedono duraturo afflusso di calcio attraverso i canali di calcio calcio attivato dal rilascio (CRAC) e la formazione di una sinapsi immunologica stabile (IS) con le cellule presentanti l&#39;antigene (APC). Schermi RNAi recenti hanno identificato Stim e Orai nelle cellule di Drosophila e loro corrispondenti omologhi dei mammiferi STIM1 e Orai1 in cellule T, come essenziale per l&#39;attivazione del canale CRAC. Qui, ci mostra che STIM1 e Orai1 sono reclutati per la sinapsi immunologica tra primarie umane delle cellule T e cellule dendritiche autologhe. STIM1 sia Orai1 accumulato nella zona di contatto tra riposo o super-antigen (SEB)-pretrattati cellule T e cellule dendritiche SEB-pulsato, dove essi erano colocalized con il recettore delle cellule T (TCR) e molecole di costimolazione. Inoltre, imaging del calcio intracellulare segnalazione in cellule T caricate con EGTA ha rivelato significativamente superiore Ca2 + concentrazione vicino l&#39;interfaccia, che indica Ca2 + afflusso localizzata presso l&#39;area di contatto delle cellule dendritiche/T cell. Espressione di un mutante Orai1 dominante-negativo bloccato T cell Ca2 + segnalazione ma non ha interferito con l&#39;accumulazione iniziale di STIM1, Orai1 e CD3 nella zona di Contatta. Nelle cellule T attivate blasti, espressione del mRNA per STIM1 endogeni e tutti i tre umani omologhi di Orai era up-regolato, accompagnato da un marcato aumento nell&#39;afflusso Ca2 + attraverso i canali CRAC. Questi risultati implicano un ciclo di feedback positivo, in cui un segnale iniziale TCR favorisce la up-regulation di STIM1 e Orai proteine che vuoi aumentare Ca2 + segnalazione durante successive antigene incontro.

Orai1 e STIM1 spostare la sinapsi immunologica e sono up-regolate durante l&#39;attivazione delle cellule T.

&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x304C;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;APC&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#xFF08;IS&#xFF09;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;RNAi&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;STIM1&#x3068;Orai1&#x3092;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3068;Orai1&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x52D5;&#x54E1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; STIM1&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F11;&#x6B62;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x6297;&#x539F;&#xFF08;SEB&#xFF09;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;TCR&#xFF09;&#x3068;&#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x305F;SEB-&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3068;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x7A4D;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;Orai1&#x4E21;&#x65B9;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;EGTA&#x3092;&#x642D;&#x8F09;&#x3057;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;/&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x7A4D;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;Ca2 +&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;Ca2 +&#x306E;&#x754C;&#x9762;&#x8FD1;&#x508D;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;Orai1&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x906E;&#x65AD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x63A5;&#x89E6;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;STIM1&#x3001;Orai1&#x3068;&#x3001;CD3&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;T&#x7D30;&#x80DE;&#x82BD;&#x7403;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;STIM1&#x306E;mRNA&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x521D;&#x671F;&#x306E;TCR&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x306E;&#x906D;&#x9047;&#x306E;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x3087;&#x3046;STIM1&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x652F;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Orai1&#x3068;STIM1 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x79FB;&#x52D5;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;

&#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xCE7C;&#xC298; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; &#xCE7C;&#xC298; (CRAC) &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC624;&#xB7AB;&#xB3D9;&#xC548; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; (APC)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5; (IS)&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; RNAi &#xD654;&#xBA74; Stim&#xC640; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; homologs STIM1 &#xBC0F; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; Orai1 CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; stim1&#xC640; orai1&#xB294; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD5CC; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD734;&#xC2DD; &#xB610;&#xB294; super-antigen (SEB) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC811;&#xCD09; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C; STIM1 &#xBC0F; Orai1-pretreated T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC149; &#xD384;&#xC2A4; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TCR)&#xC640; costimulatory &#xBD84;&#xC790; colocalized &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; EGTA&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCD09; &#xBA74;&#xC801;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xADFC;&#xCC98; Ca2 + &#xC720;&#xC785; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; Orai1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; T &#xC140; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; STIM1, Orai1, CD3 &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD3ED;&#xBC1C; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC778;&#xAC04; homologs&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB0B4; STIM1 mRNA &#xC2DD;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xB300; &#xD1B5;&#xC81C; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ca2 + &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xCD08;&#xAE30; TCR &#xC2E0;&#xD638; &#xD638;&#xC758; stim1&#xC758; &#xC5C5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xBC0F; &#xD6C4;&#xC18D; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC911; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504;&#xB97C; &#xC758;&#xBBF8;.

Orai1 &#xBC0F; STIM1 &#xBA74;&#xC5ED;&#xD559; &#xB0C5; &#xC774;&#xB3D9;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC704;&#xB85C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Para el desarrollo eficiente de una respuesta inmune, los linfocitos T de larga duraci&#xF3;n requieren la entrada de calcio a trav&#xE9;s de calcio activados por la liberaci&#xF3;n de calcio (CRAC) de canales y la formaci&#xF3;n de la sinapsis inmunol&#xF3;gica estable (IS) con la c&#xE9;lula presentadora de ant&#xED;geno (APC). Recientes pantallas de RNAi han identificado Stim y ORAI en las c&#xE9;lulas de Drosophila, y sus hom&#xF3;logos correspondientes de mam&#xED;feros y STIM1 Orai1 en las c&#xE9;lulas T, como esenciales para la activaci&#xF3;n de canales CRAC. Aqu&#xED;, mostramos que STIM1 y Orai1 son reclutados a la sinapsis inmunol&#xF3;gica entre las c&#xE9;lulas T humanas primarias y c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas aut&#xF3;logas. Tanto STIM1 y Orai1 acumulado en el &#xE1;rea de contacto entre cualquiera de reposo o super ant&#xED;geno-(SEB)-pretratados c&#xE9;lulas T y de SEB-pulsado c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas, donde fueron colocalized con receptor de c&#xE9;lulas T (TCR) y mol&#xE9;culas co-estimuladoras. Adem&#xE1;s, las im&#xE1;genes de calcio intracelular de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas T cargadas con EGTA revel&#xF3; Ca2 + significativamente mayor concentraci&#xF3;n cerca de la interfase, lo que indica Ca2 + afluencia localizada en la c&#xE9;lula T / &#xE1;rea dendr&#xED;tica contacto c&#xE9;lula. Expresi&#xF3;n de un mutante dominante negativo Orai1 bloqueado c&#xE9;lulas T Ca2 + se&#xF1;alizaci&#xF3;n, pero no interfieren con la acumulaci&#xF3;n inicial de STIM1, Orai1, y CD3 en la zona de contacto. En blastos de c&#xE9;lulas T activadas, la expresi&#xF3;n del mRNA de STIM1 end&#xF3;gena y los tres hom&#xF3;logos humanos de ORAI fue hasta reguladas, acompa&#xF1;ado por un marcado aumento en influjo de Ca2 + a trav&#xE9;s de los canales CRAC. Estos resultados implican un bucle de retroalimentaci&#xF3;n positiva en la que una primera se&#xF1;al de TCR favorece la regulaci&#xF3;n de prote&#xED;nas y STIM1 ORAI que aumentan Ca2 + de se&#xF1;alizaci&#xF3;n durante el encuentro de ant&#xED;geno posterior.

Orai1 y STIM1 Mover a la sinapsis inmunol&#xF3;gica y est&#xE1;n regulados durante la activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T

&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) &#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x63D0;&#x51FA;&#x6297;&#x539F;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x5668;&#x5B98;&#x4E2D;&#x53D1;&#x8D77;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9; &#xFF08;&#x91CF;&#x5B50;&#xFF09; &#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8367;&#x5149;&#x7EB3;&#x7C73;&#x9897;&#x7C92;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x533A;&#x8BAE;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7C92;&#x5B50;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x4F20;&#x9012;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x76F4;&#x6D41;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x3001; &#x4E24;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x548C;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8FDB;&#x884C;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316; QD &#x5438;&#x6536;&#x5230; DCs &#x548C;&#x8D2A;&#x5A6A;&#x6BD4;&#x8F83; CD69 &#x8868;&#x8FBE;&#x3001; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x751F;&#x4EA7; DO11.10 &#x548C; OT II T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x54CD;&#x5E94;&#x65E0;&#x6297;&#x539F;&#x6216;&#x6297;&#x539F;&#x5171;&#x8F6D;&#x5230;&#x91CF;&#x5B50;&#x3002; CD11c(+) Dc&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x4F18;&#x5148; endocytosed &#x91CF;&#x5B50;&#xFF0C;&#x6700;&#x521D;&#x5230;&#x5C0F;&#x6C34;&#x6CE1;&#x9644;&#x8FD1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5728; 10 &#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x533A;&#x8BAE;&#x4F1A;&#x6240;&#x8F7D;&#x4E0D;&#x540C;&#x5927;&#x5C0F;&#x3001; &#x8FD0;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5206;&#x5E03;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x5185;&#x7684;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x6709;&#x6C34;&#x6CE1;&#x3002;&#x5728;&#x7A0D;&#x540E;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;endocytosed &#x91CF;&#x5B50;&#x88AB;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x5185;&#x90E8;&#x5272;&#x88C2;&#x5F00;&#x6765;&#x3002;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6210;&#x719F;&#x7684; DCs &#x51CF;&#x5C11;&#x7387;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5360;&#x7528;&#x4E86;&#x91CF;&#x5B50;&#x6240;&#x5360;&#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3002;&#x91CF;&#x5B50;&#x4F50;&#x5242;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4ED3;&#x5E93;&#xFF0C;&#x4E86; endocytosed &#x91CF;&#x5B50;&#x7684; DCs &#x5728;&#x76AE;&#x4E0B;&#x6CE8;&#x5C04;&#x540E;&#x88AB;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x5230; 400 microm &#x6DF1;&#x5185;&#x5F15;&#x6D41;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x3002;&#x6297;&#x539F;&#x5171;&#x8F6D;&#x91CF;&#x5B50;&#x88AB;&#x4F7F;&#x7528;&#x65F6;&#xFF0C;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x96C6;&#x7FA4;&#x4E0E; DCs&#x3002; &#x6297;&#x539F;&#x5171;&#x8F6D;&#x91CF;&#x5B50;&#x5177;&#x6709;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x6BD4;&#x76F8;&#x5F53;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x514D;&#x8D39;&#x6297;&#x539F;&#x8BF1;&#x5BFC; CD69 &#x8868;&#x8FBE;&#x3001; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x751F;&#x4EA7;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x91CF;&#x5B50;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x591A;&#x7528;&#x9014;&#x5E73;&#x53F0;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C;&#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x4F20;&#x9012;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x704C;&#x6CE8;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

Dendritic cells (DCs) play a key role in initiating adaptive immune response by presenting antigen to T cells in lymphoid organs. Here, we investigate the potential of quantum dots (QDs) as fluorescent nanoparticles for in vitro and in vivo imaging of DCs, and as a particle-based antigen-delivery system to enhance DC-mediated immune responses. We used confocal, two-photon, and electron microscopies to visualize QD uptake into DCs and compared CD69 expression, T cell proliferation, and IFN-gamma production by DO11.10 and OT-II T cells in vivo in response to free antigen or antigen-conjugated to QDs. CD11c(+) DCs avidly and preferentially endocytosed QDs, initially into small vesicles near the plasma membrane by an actin-dependent mechanism. Within 10 min DCs contained vesicles of varying size, motion, and brightness distributed throughout the cytoplasm. At later times, endocytosed QDs were compartmentalized inside lysosomes. LPS-induced maturation of DCs reduced the rate of endocytosis and the proportion of cells taking up QDs. Following subcutaneous injection of QDs in an adjuvant depot, DCs that had endocytosed QDs were visualized up to 400 microm deep within draining lymph nodes. When antigen-conjugated QDs were used, T cells formed stable clusters in contact with DCs. Antigen-conjugated QDs induced CD69 expression, T cell proliferation, and IFN-gamma production in vivo with greater efficiency than equivalent amounts of free antigen. These results establish QDs as a versatile platform for immunoimaging of dendritic cells and as an efficient nanoparticle-based antigen delivery system for priming an immune response.

Quantum dots for tracking dendritic cells and priming an immune response in vitro and in vivo.

Cellules dendritiques (CD) jouent un r&#xF4;le cl&#xE9; dans le d&#xE9;clenchement r&#xE9;ponse immunitaire adaptative, en pr&#xE9;sentant l&#x26;#39;antig&#xE8;ne aux lymphocytes T dans les organes lympho&#xEF;des. Ici, nous &#xE9;tudions le potentiel de points quantiques (BQs) sous forme de nanoparticules fluorescentes pour in vitro et in vivo l&#x26;#39;imagerie des PED, et en tant que base de particules d&#x26;#39;antig&#xE8;ne de livraison du syst&#xE8;me pour am&#xE9;liorer DC-r&#xE9;ponses immunitaires. Nous avons utilis&#xE9; confocale, &#xE0; deux photons, &#xE9;lectrons et microscopies de visualiser l&#x26;#39;absorption QD dans les PED et compar&#xE9; expression de CD69, la prolif&#xE9;ration des cellules T, et la production d&#x26;#39;IFN-gamma par DO11.10 et OT-II des cellules T in vivo en r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;antig&#xE8;ne libre ou de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne -conjugu&#xE9; &#xE0; bo&#xEE;tes quantiques. CD11c (+) PED, avidement, et de pr&#xE9;f&#xE9;rence endocytose QDs, d&#x26;#39;abord dans de petites v&#xE9;sicules pr&#xE8;s de la membrane plasmique par un m&#xE9;canisme d&#xE9;pendant de l&#x26;#39;actine. Dans 10 min PED contenu des v&#xE9;sicules de taille variable, de mouvement et de luminosit&#xE9; diffus&#xE9; dans tout le cytoplasme. &#xC0; certains moments plus tard, les points quantiques endocytose sont compartiment&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;rieur des lysosomes. Induite par le LPS maturation des CD r&#xE9;duit le taux de l&#x26;#39;endocytose et la proportion de cellules qui prennent place les points quantiques. Apr&#xE8;s injection sous-cutan&#xE9;e de points quantiques dans un d&#xE9;p&#xF4;t adjuvant, pays en d&#xE9;veloppement qui avaient endocytose BQs ont &#xE9;t&#xE9; visualis&#xE9;es jusqu&#x26;#39;&#xE0; 400 microm profond&#xE9;ment dans les ganglions lymphatiques. Lorsque l&#x26;#39;antig&#xE8;ne conjugu&#xE9;s BQs ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s, les cellules T formaient des grappes stables en contact avec les PED. Antig&#xE8;ne conjugu&#xE9;s QDs expression de CD69 induite, la prolif&#xE9;ration des cellules T, et la production d&#x26;#39;IFN-gamma in vivo avec une plus grande efficacit&#xE9; que des quantit&#xE9;s &#xE9;quivalentes de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne libre. Ces r&#xE9;sultats &#xE9;tablissent que les points quantiques une plate-forme polyvalente pour immunoimagerie des cellules dendritiques et comme un syst&#xE8;me efficace &#xE0; base de nanoparticules syst&#xE8;me de prestation de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne pour l&#x26;#39;amor&#xE7;age d&#x26;#39;une r&#xE9;ponse immunitaire.

Quantum Dots pour suivre les cellules dendritiques et amorcer une r&#xE9;ponse immunitaire in vitro et in vivo

Dendritische Zellen (DCs) spielen eine Schl&uuml;sselrolle bei der Einleitung von adaptive Immunantwort durch Vorlage Antigen auf T-Zellen in den lymphatischen Organen. Hier untersuchen wir das Potenzial der Quantenpunkte (QDs) als fluoreszierende Nanopartikel f&uuml;r in-vitro- und in-vivo Bildgebung des DCs und als ein Teilchen-basierte Antigen-Delivery-System um DC-vermittelte Immunantworten zu verbessern. Wir verwendeten Konfokale, zwei-Photonen, und Electron Mikroskopien QD Aufnahme in DCs zu visualisieren und verglichen CD69 Ausdruck, T-Zellproliferation und IFN-Gamma Produktion von DO11.10 und OT-II T-Zellen in vivo als Reaktion auf kostenlose Antigen oder Antigen-Konjugation mit QDs. CD11c(+) DCs eifrig und bevorzugt Endocytosed QDs, zun&auml;chst in kleinen Bl&auml;schen in der N&auml;he von der Plasmamembran durch ein Aktin-abh&auml;ngige Mechanismus. In 10 min enthalten DCs Bl&auml;schen von verschiedener Gr&ouml;&szlig;e, Bewegung und Helligkeit in das Zytoplasma verteilt. In sp&auml;teren Zeiten wurden Endocytosed QDs in Lysosomen aufgeteilt. LPS-induzierte Reifung der DCs verringert die Rate der Endozytose und der Anteil der Zellen, die Aufnahme QDs. Nach subkutanen Injektion von QDs in eine adjuvante Depot, DCs, die Endocytosed QDs hatte wurden bis tief in die Entw&auml;sserung Lymphknoten 400 Microm visualisiert. Wenn Antigen-konjugierten QDs verwendet wurden, induzierte T Zellen gebildet stabile Cluster Kontakt mit DCs. Antigen-konjugierten QDs CD69 Ausdruck, T-Zellproliferation und IFN-Gamma Produktion in-vivo mit gr&ouml;&szlig;erer Effizienz als entsprechende Mengen an freien Antigen. Diese Ergebnisse stellen QDs, als eine vielf&auml;ltige Plattform f&uuml;r Immunoimaging von dendritischen Zellen sowie eine effiziente Nanopartikel-basierte Antigen-Delivery-System f&uuml;r die Grundierung einer Immunantwort.

Quantenpunkte zum Nachverfolgen von dendritischer Zellen und Grundierung eine Immunantwort in vitro und in vivo.

Le cellule dendritiche (DCs) giocano un ruolo chiave nell&#39;avvio di risposta immunitaria adattativa di presentare l&#39;antigene alle cellule T negli organi linfoidi. Qui, si indaga il potenziale dei punti quantici (QDs) come nanoparticelle fluorescenti per l&#39;imaging in vitro e in vivo di DCs e come un sistema basato su particella antigene-consegna per migliorare la risposta immunitaria mediata da DC. Abbiamo usato confocal, due-fotone e allevamento di elettrone per visualizzare assorbimento QD in DCs e rispetto CD69 espressione, proliferazione delle cellule T e la produzione di IFN-gamma di DO11.10 e OT-II T cellule in vivo in risposta all&#39;antigene libero o coniugato antigene a QDs. CD11c(+) DCs avidamente e preferenzialmente endocytosed QDs, inizialmente in piccole vescicole vicino a membrana del plasma da un meccanismo di actina-dipendente. Entro 10 min DCs contenute le vescicole di varie dimensioni, movimento e luminosit&agrave; distribuiti in tutto il citoplasma. In tempi pi&ugrave; tardi, QDs endocytosed erano compartimenti all&#39;interno dei lisosomi. Maturazione LPS-indotta di DCs ridotto il tasso di endocitosi e la proporzione di cellule riprendendo QDs. Dopo iniezione sottocutanea di QDs in un deposito di adiuvante, DCs che aveva endocytosed QDs sono stati visualizzati fino a 400 microm profondo all&#39;interno dei linfonodi di drenaggio. Quando sono stati utilizzati QDs coniugato con l&#39;antigene, T cellule formate cluster stabili a contatto con DCs. antigene coniugato QDs indotta espressione CD69, proliferazione delle cellule T e la produzione di IFN-gamma in vivo con maggiore efficienza rispetto a quantit&agrave; equivalenti di antigene libero. Questi risultati stabiliscono QDs come una piattaforma versatile per immunoimaging delle cellule dendritiche e come un sistema di consegna efficiente basata su nanoparticelle antigene per l&#39;innesco di una risposta immunitaria.

Punti quantici per rilevamento delle cellule dendritiche e l&#39;innesco di una risposta immunitaria in vitro e in vivo.

&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;DC&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7CFB;&#x5668;&#x5B98;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x9069;&#x5FDC;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;in vivo&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x7528;&#x86CD;&#x5149;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#xFF08;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF09;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3001;&#x7C92;&#x5B50;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;DC-&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;DC&#x306B;QD&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;microscopies&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;CD69&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;DO11.10&#x3068;OT-II T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;IFN-&#x3B3;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x6A19;&#x8B58;&#x3002; CD11c&#x306F;&#xFF08;+&#xFF09;&#x306E;DC&#x306F;&#x71B1;&#x5FC3;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306B;&#x3001;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3002; 10&#x5206;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3001;&#x52D5;&#x304D;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5168;&#x4F53;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x5C0F;&#x80DE;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F8C;&#x306E;&#x6642;&#x4EE3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x306B;&#x533A;&#x753B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;LPS&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x6210;&#x719F;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3068;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x53D6;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x30C7;&#x30DD;&#x5185;&#x306E;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x76AE;&#x4E0B;&#x6CE8;&#x5C04;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3057;&#x305F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x3092;&#x6392;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x5965;&#x6DF1;&#x304F;&#x306B;400&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x307E;&#x3067;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6297;&#x539F; - &#x7D50;&#x5408;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x63A5;&#x89E6;&#x3057;&#x3066;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6297;&#x539F; - &#x7D50;&#x5408;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;CD69&#x767A;&#x73FE;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;&#x984D;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3067;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x306E;IFN-&#x3B3;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;immunoimaging&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6C4E;&#x7528;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs) &#xB9BC;&#xD504; &#xAE30;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;. Dcs&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD654;&#xC0C1; &#xC9C4; &#xCC30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790;&#xC640; &#xC785;&#xC790; &#xAE30;&#xBC18; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC804;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; DC &#xC911;&#xC7AC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC744; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC591;&#xC790; &#xC810; (QDs)&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC; confocal, &#xB450; &#xAD11;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC804;&#xC790; microscopies&#xB85C; Dc qd&#xB294; &#xAE00;&#xADC0;&#xB97C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; avidly CD69 &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;, vivo &#xC790;&#xC720; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB610;&#xB294; &#xD56D; &#xC6D0; conjugated QDs. CD11c(+) Dc&#xB85C; DO11.10 &#xBC0F; OT II T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; IFN-&#xAC10;&#xB9C8;&#xB97C; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xCC98;&#xC74C; endocytosed QDs &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xB9D0;&#xB77C;-&#xC885;&#xC18D; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;. 10 &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4; Dc &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD06C;&#xAE30;, &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xACFC; &#xBC1D;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBD84;&#xC0B0;&#xC758; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568;. &#xC774;&#xD6C4; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; endocytosed QDs &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880; &#xC548;&#xC5D0; &#xB4E4; &#xC5D0;&#xAC8C;&#xB9CC; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. Dc&#xC758; &#xC131;&#xC219; LPS &#xC720;&#xBC1C; &#xAC10;&#xC18C; endocytosis &#xBE44;&#xC728;&#xACFC; QDs &#xCC28;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;. &#xBCF4;&#xC870; &#xC11C;&#xBE44;&#xC2A4; &#xC13C;&#xD130;, endocytosed QDs &#xD588;&#xB2E4; Dc&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; Qds&#xC758; &#xD53C;&#xD558; &#xC8FC;&#xC785;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; 400 microm &#xAE4A;&#xC740; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808; &#xBC30;&#xC218; &#xC2DC;&#xAC04;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xAC01; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD56D; &#xC6D0; conjugated QDs &#xD588;&#xB2E4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; Dc. &#xD56D; &#xC6D0;-conjugated QDs &#xC811;&#xCD09; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xC131; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; CD69 &#xC2DD;, T &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBC0F; IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xC0DD;&#xC0B0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB34;&#xB8CC; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC758; &#xC0C1;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xAE08;&#xC561; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD070; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xACFC; &#xC720;&#xB3C4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; &#xAE30;&#xBC18; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC804;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xBC0F; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; immunoimaging&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC73C;&#xB85C; Qds&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xCD94;&#xC801; &#xD558; &#xACE0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C; &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xB4E4;.

Las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas (DC) juegan un papel clave en la iniciaci&#xF3;n de la respuesta inmune adaptativa mediante la presentaci&#xF3;n de ant&#xED;genos a los linfocitos T en los &#xF3;rganos linfoides. En este sentido, investigar el potencial de los puntos cu&#xE1;nticos (puntos cu&#xE1;nticos), como las nanopart&#xED;culas fluorescentes para in vitro e in vivo de im&#xE1;genes de pa&#xED;ses en desarrollo, y como una part&#xED;cula basado en ant&#xED;genos del sistema de prestaci&#xF3;n de CC para mejorar la respuesta inmune mediada. Se utiliz&#xF3; confocal, dos fotones, y microscop&#xED;as de electrones para visualizar la absorci&#xF3;n QD en los pa&#xED;ses en desarrollo y se compar&#xF3; la expresi&#xF3;n de CD69, la proliferaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T, y la producci&#xF3;n de IFN-gamma por DO11.10 y OT-II c&#xE9;lulas T in vivo en respuesta a un ant&#xED;geno libre o ant&#xED;geno -conjugado con puntos cu&#xE1;nticos. CD11c (+) Los pa&#xED;ses en desarrollo con avidez y preferentemente endocitosis puntos cu&#xE1;nticos, en un principio en peque&#xF1;as ves&#xED;culas cerca de la membrana plasm&#xE1;tica por un mecanismo dependiente de actina. Dentro de 10 minutos los pa&#xED;ses en desarrollo figuran las ves&#xED;culas de distintos tama&#xF1;os, movimiento y brillo distribuidos por todo el citoplasma. En los &#xFA;ltimos tiempos, los puntos cu&#xE1;nticos se endocytosed compartimentado interior de los lisosomas. LPS-inducida por la maduraci&#xF3;n de los pa&#xED;ses en desarrollo redujo la tasa de endocitosis y la proporci&#xF3;n de c&#xE9;lulas que ocupan los puntos cu&#xE1;nticos. Despu&#xE9;s de la inyecci&#xF3;n subcut&#xE1;nea de puntos cu&#xE1;nticos en un dep&#xF3;sito de adyuvante, los pa&#xED;ses en desarrollo que hab&#xED;an eucariota puntos cu&#xE1;nticos se visualizaron hasta 400 micras en lo profundo de ganglios linf&#xE1;ticos de drenaje. Cuando conjugados ant&#xED;geno-QDs se utiliza, las c&#xE9;lulas T formado grupos estables en contacto con los pa&#xED;ses en desarrollo. Conjugados ant&#xED;geno-cu&#xE1;nticos inducida expresi&#xF3;n de CD69, la proliferaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T, y la producci&#xF3;n de IFN-gamma in vivo con mayor eficiencia que cantidades equivalentes de ant&#xED;geno libre. Estos resultados establecen puntos cu&#xE1;nticos como una plataforma vers&#xE1;til para immunoimaging de las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas y como una eficiente basada en nanopart&#xED;culas sistema de entrega de ant&#xED;geno para cebar una respuesta inmunitaria.

Puntos Cu&#xE1;nticos de Seguimiento de las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas y de imprimaci&#xF3;n una respuesta inmune in vitro e in vivo

&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) &#x542F;&#x52A8;&#x548C;&#x4E24;&#x6781;&#x5316;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x4E0D;&#x540C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x6D3B;&#x4F53;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x771F;&#x76AE;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (DDCs) &#x548C;&#x6717;&#x683C;&#x6C49;&#x65AF;&#x7EC6;&#x80DE; (LCs) &#x5DEE;&#x5F02;&#x8C03;&#x52A8;&#x671F;&#x95F4;&#x63A5;&#x89E6;&#x5BA3;&#x4F20;&#x548C;&#x4F50;&#x5242;&#x7684;&#x5982; unmethylated CpG &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (CpG) &#x548C;&#x8BF1;&#x4F7F; T helper &#x7684; LPS &#x952E;&#x5165; 1 &#xFF08;Th1&#xFF09; &#x54CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6216;&#x8BF1;&#x4F7F; T helper &#x7684;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x952E;&#x5165; 2 &#xFF08;Th2&#xFF09; &#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5728;&#x8033;&#x8033;&#x5ED3;&#x8054;&#x7CFB;&#x5BA3;&#x4F20;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x592E;&#x4EBA;&#x6C11;&#x653F;&#x5E9C;&#xFF0C;&#x6709;&#x9650;&#x5408;&#x4F19;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x548C;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5728;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x52A8;&#x5458; DDCs&#xFF1A; &#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x548C;&#x6811;&#x7A81;&#x7684;&#x63A2;&#x7D22;&#x6027;&#x3001; &#x5B9A;&#x5411;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7BA1;&#x8FDB;&#x5165;&#x3002;&#x5728;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5728;&#x8033;&#x8033;&#x5ED3;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684; LCs &#x4ECD;&#x7136; immotile &#x4E3A;&#x671F; 48 &#x5C0F;&#x65F6;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6765;&#x81EA;&#x7F3A;&#x4E4F; DDCs &#x548C; Th1 &#x504F;&#x5149;&#x4F50;&#x5242;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x8BF1;&#x5BFC; LCs &#x5EF6;&#x8FDF;&#x7684;&#x8C03;&#x52A8;&#x540E; 48 &#x5B66;&#x65F6;&#x7684; CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE; Th1 &#x6781;&#x5316;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x800C;&#x8033;&#x514D;&#x75AB;&#x9752;&#x7750; Th2 &#x6781;&#x5316;&#xFF0C;&#x5173;&#x8054;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x76F4;&#x6D41;&#x5206;&#x5E03;&#x548C;&#x52A8;&#x6001;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5916;&#x56F4; DC &#x4E2D;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x54CD;&#x5E94;&#x4F50;&#x5242;&#x521D;&#x6B65;&#x63CF;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x610F;&#x5473;&#x7740; LC &#x52A8;&#x5458;&#x589E;&#x5F3A; Th1 &#x53CD;&#x5E94;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x89E6;&#x53D1; Th2 &#x54CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x800C;&#x8C03;&#x52A8; DDCs &#x4EC5;&#x662F;&#x8DB3;&#x591F;&#x89E6;&#x53D1; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x8D70;&#x5411; Th2 &#x53CD;&#x5E94;&#x521D;&#x59CB; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

&#x771F;&#x76AE;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CA;&#x6717;&#x683C;&#x6C49;&#x65AF;&#x7EC6;&#x80DE; Th1 &#x548C; Th2 &#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x4F50;&#x5242;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x548C;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x8C03;&#x52A8;&#x3002;

Dendritic cells (DCs) initiate and polarize adaptive immune responses toward varying functional outcomes. By means of intravital two-photon microscopy, we report that dermal dendritic cells (DDCs) and Langerhans cells (LCs) are differentially mobilized during contact sensitization and by adjuvants such as unmethylated CpG oligonucleotide (CpG) and LPS that induce T helper type 1 (Th1) responses, or papain that induces T helper type 2 (Th2) responses. In ear pinna, contact sensitization, CpG, LPS, and papain all mobilized DDCs in three distinct phases: increased motility and dendritic probing, directed migration, and entry into lymphatic vessels. During the same treatments, the adjacent LCs in ear pinna remained immotile over a 48-hr period of observation. In contrast, footpads lacked DDCs and Th1-polarizing adjuvants selectively induced a delayed mobilization of LCs after 48 hr. Th1 polarization of CD4(+) T cells was independent of the immunization site, whereas ear immunization favored Th2 polarization, correlating with site-specific DC distribution and dynamics. Our results provide an initial description of peripheral DC dynamics in response to adjuvants and imply that LC mobilization enhances a Th1 response and is not sufficient to trigger a Th2 response, whereas mobilization of DDCs alone is sufficient to trigger T-cell proliferation and to polarize initial T-cell activation toward a Th2 response.

Selective and site-specific mobilization of dermal dendritic cells and Langerhans cells by Th1- and Th2-polarizing adjuvants.

Cellules dendritiques (CD) de lancer et de polariser les r&#xE9;ponses immunitaires adaptatives vers divers r&#xE9;sultats fonctionnels. Par le biais de la microscopie &#xE0; deux photons intravitale, nous indiquent que les cellules dendritiques du derme (CDD) et les cellules de Langerhans (CL) sont mobilis&#xE9;s au cours de la sensibilisation diff&#xE9;rentielle contact et par des adjuvants tels que oligonucl&#xE9;otide CpG non m&#xE9;thyl&#xE9;s (CpG) et le LPS qui induisent le type T helper 1 ( Th1) des r&#xE9;ponses, ou la papa&#xEF;ne qui induit des lymphocytes T auxiliaires de type 2 (Th2). r&#xE9;ponses Dans l&#x26;#39;oreille pavillon de l&#x26;#39;oreille, une sensibilisation de contact, le CpG, LPS, et la papa&#xEF;ne tous les CDD mobilis&#xE9;s en trois phases distinctes: la motilit&#xE9; accrue et dendritique de sondage, la migration dirig&#xE9;e, et l&#x26;#39;entr&#xE9;e dans les vaisseaux lymphatiques. Au cours des m&#xEA;mes traitements, les CL adjacentes &#xE0; l&#x26;#39;oreille pavillon de l&#x26;#39;oreille est rest&#xE9; immobiles sur une p&#xE9;riode de 48 heures d&#x26;#39;observation. En revanche, coussinets manquait CDD et Th1-polarisants adjuvants s&#xE9;lectivement induit une mobilisation tardive des CL, apr&#xE8;s 48 heures. Th1 polarisation de CD4 (+) des cellules T est ind&#xE9;pendante du site de vaccination, alors que la vaccination oreille favorable &#xE0; la polarisation Th2, en corr&#xE9;lation avec un site sp&#xE9;cifique DC distribution et la dynamique. Nos r&#xE9;sultats fournissent une premi&#xE8;re description de la dynamique p&#xE9;riph&#xE9;rique DC en r&#xE9;ponse &#xE0; des adjuvants et impliquent que la mobilisation LC am&#xE9;liore une r&#xE9;ponse Th1 et n&#x26;#39;est pas suffisante pour d&#xE9;clencher une r&#xE9;ponse Th2, alors que la mobilisation des CDD seule est suffisante pour d&#xE9;clencher prolif&#xE9;ration des lymphocytes T et &#xE0; polariser initiale activation des cellules T vers une r&#xE9;ponse Th2.

Mobilisation s&#xE9;lective et sp&#xE9;cifique au site de cellules dendritiques du derme et des cellules de Langerhans par Th1 et Th2 polarisants adjuvants

Dendritische Zellen (DCs) initiieren und adaptive Immunantworten gegen unterschiedliche funktionale Ergebnisse zu polarisieren. Mittels intravital zwei-Photonen-Mikroskopie berichten wir, dass dermale dendritische Zellen (DCS) und Langerhans-Zellen (LCs) differentiell w&auml;hrend Kontakt Sensibilisierung und von Hilfsstoffen aufgebracht werden wie unmethylated CpG-Oligonukleotiden (CpG) und LPS, die T-Helfer veranlassen 1 (Th1) Antworten geben bzw. Papain, die T-Helfer bedingt 2 (Th2) Antworten. Kontaktieren Sie im Ohr Pinna, Sensibilisierung, CpG, LPS und Papain alle mobilisiert DCS in drei Phasen: erh&ouml;hte Motilit&auml;t und dendritischen sondieren, Regie, Migration und Inbetriebnahme der Lymphgef&auml;&szlig;e. W&auml;hrend die gleichen Behandlungen blieb das angrenzende LCs in Ohr Ohrmuschel immotilen &uuml;ber einen Zeitraum von 48 h der Beobachtung. Im Gegensatz dazu Pfoten fehlte Transceiver und Th1-Polfilter Adjuvantien induzierte selektiv eine verz&ouml;gerte Mobilisierung der LCs, nach 48 Std. Th1 Polarisierung der CD4(+) T-Zellen unabh&auml;ngig von der Immunisierung-Website war, w&auml;hrend Ohr Immunisierung Th2-Polarisation, Korrelation mit standortspezifischen DC-Verteilung und Dynamik beg&uuml;nstigt. Unsere Ergebnisse liefern eine erste Beschreibung der peripheren DC-Dynamik als Reaktion auf Hilfsstoffen und suggerieren, dass LC Mobilisierung eine Th1-Antwort verbessert und nicht ausreichend, um eine Th2-Reaktion ausl&ouml;sen, ist w&auml;hrend Mobilisierung Transceiver allein ausreichende T-Zellproliferation ausl&ouml;sen und polarisieren ersten T-Zell-Aktivierung in Richtung einer Th2-Antwort ist.

Selektive und standortspezifische Mobilisierung der dermalen dendritischen Zellen und Langerhans-Zellen von Th1 und Th2-Polfilter Adjuvantien.

Le cellule dendritiche (DCs) avviare e polarizzano risposte immunitarie verso diversi esiti funzionali. Mezzo intravital microscopia del due-fotone, segnaliamo che le cellule dendritiche cutanee (DDCs) e cellule di Langerhans (LCs) sono differenzialmente mobilitate durante il Contatta, sensibilizzazione e di coadiuvanti come unmethylated CpG oligonucleotide (CpG) e LPS che inducono T helper tipo 1 (Th1) risposte, o papaina che induce T helper tipo 2 (Th2) risposte. In pinna orecchio, contattare sensibilizzazione, CpG, LPS, e papaina tutti mobilitati DDCs in tre fasi distinte: aumento motilit&agrave; e sondare dendritiche, regia migrazione e l&#39;ingresso nei vasi linfatici. Durante il trattamento stesso, il LCs adiacenti nella pinna orecchio rimasto Immobilit&agrave; ciliare per un periodo di 48 ore di osservazione. Al contrario, footpads mancava DDCs e coadiuvanti Th1-polarizzazione indotta selettivamente una mobilizzazione ritardata di LCs dopo 48 h polarizzazione Th1 delle cellule T CD4(+) era indipendente del sito immunizzazione, mentre immunizzazione orecchio favorito polarizzazione Th2, correlando con site-specific DC distribuzione e dinamica. I nostri risultati forniscono una descrizione iniziale della periferica dinamica DC in risposta a coadiuvanti e implicano che la mobilitazione LC migliora la risposta Th1 e non &egrave; sufficiente a innescare una risposta Th2, mentre la mobilizzazione di DDCs da solo &egrave; sufficiente a innescare la proliferazione delle cellule T e di polarizzare l&#39;attivazione delle cellule T iniziale verso una risposta Th2.

Mobilizzazione selettiva e site-specific di dermico cellule dendritiche e cellule di Langerhans da coadiuvanti polarizzazione Th1 e Th2.

&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;DC&#xFF09;&#x304C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x8EE2;&#x5E30;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x9069;&#x5FDC;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x3001;&#x4E8C;&#x6975;&#x5316;&#x3002;&#x751F;&#x4F53;2&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x771F;&#x76AE;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;DDCS&#xFF09;&#x3068;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B2;&#x30EB;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;LC&#xFF09;&#x306F;&#x5DEE;&#x52D5;&#x63A5;&#x89E6;&#x611F;&#x4F5C;&#x6642;&#x3068;T&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;1&#x578B;&#xFF08;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x975E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;CpG&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;CPG&#xFF09;&#x3068;LPS&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52D5;&#x54E1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;TH1&#xFF09;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;T&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;2&#x578B;&#xFF08;TH2&#xFF09;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x904B;&#x52D5;&#x6027;&#x3068;&#x6A39;&#x72B6;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x76E3;&#x7763;&#x79FB;&#x884C;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BA1;&#x3078;&#x306E;&#x53C2;&#x5165;&#xFF1A;&#x8033;&#x4ECB;&#x3001;&#x63A5;&#x89E6;&#x611F;&#x4F5C;&#x306F;&#x3001;CpG&#x3001;LPS&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;3&#x3064;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x3092;DDC&#x3092;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x540C;&#x3058;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E2D;&#x306F;&#x3001;&#x8033;&#x4ECB;&#x5185;&#x306E;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;LC&#x306F;&#x3001;&#x89B3;&#x6E2C;&#x306E;48&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x52D5;&#x3051;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x8DB3;&#x8E60;&#x3092;&#x9078;&#x629E;48&#x6642;&#x9593;&#x5F8C;&#x306E;LC&#x306E;&#x9045;&#x5EF6;&#x52D5;&#x54E1;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;DDC&#x3092;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Th1&#x504F;&#x5149;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x8033;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;DC&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3068;&#x52D5;&#x614B;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3001;Th2&#x306E;&#x504F;&#x5149;&#x3092;&#x597D;&#x3080;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;CD4&#x306E;Th1&#x5206;&#x6975;&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x63A5;&#x7A2E;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x672B;&#x68A2;DC&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x8AAC;&#x660E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;LC&#x52D5;&#x54E1;&#x306F;Th1&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x3001;Th2&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;DDC&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x5206;&#x6975;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;Th2&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;T&#x7D30;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;

Th1&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;Th2-&#x504F;&#x5149;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x76AE;&#x819A;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B2;&#x30EB;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs) &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC131;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC801;&#xC751; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC751;&#xB2F5; &#xBD84;&#xADF9;. Intravital &#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD53C;&#xBD80; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DDCs)&#xC640; Langerhans &#xC138;&#xD3EC; (LCs)&#xB294; &#xCC28;&#xB3D9; &#xB3D9;&#xC6D0; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131; &#xC911; &#xACE0; adjuvants unmethylated oligonucleotide &#xD3EC;&#xC7A5; &#xC18C;&#xBE44;&#xC7AC; (CpG)&#xC640; T &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xC720;&#xB3C4; LPS &#xC785;&#xB825; 1 (Th1) &#xC751;&#xB2F5; &#xB610;&#xB294; T &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8;-&#xC720;&#xB3C4; papain &#xC785;&#xB825; 2 (Th2) &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADC0; pinna&#xC758; &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131;, &#xD3EC;&#xC7A5; &#xC18C;&#xBE44;&#xC7AC;, LPS, &#xBB38;&#xC758; &#xBC0F; papain &#xBAA8;&#xB4E0; 3 &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C; DDCs &#xB3D9;&#xC6D0;: &#xC99D;&#xAC00; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBC0F; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xD504;&#xB85C; &#xBE59; &#xAC10;&#xB3C5; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xACFC; &#xB9BC;&#xD504; &#xD608;&#xAD00;&#xC73C;&#xB85C; &#xC785;&#xC7A5;. &#xAC19;&#xC740; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xADC0; pinna&#xC5D0; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; LCs &#xB0A8;&#xC544; &#xAD00;&#xCC30;&#xC758; 48 &#xC2DC;&#xAC04; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; immotile. &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC62C;&#xB9AC;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624; &#xBD80;&#xC871; DDCs &#xBC0F; Th1 &#xD3B8;&#xAD11; adjuvants &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADC0; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; DC &#xC720;&#xD1B5; &#xBC0F; &#xC5ED;&#xD559;&#xACFC; Th2 &#xC591;&#xADF9; &#xD654;&#xB97C; &#xC120;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; 48 &#xC2DC;&#xAC04; CD4(+) T &#xC138;&#xD3EC; Th1 &#xC591;&#xADF9; &#xD654; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xD6C4; Lcs&#xC758; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xB41C; &#xB3D9;&#xC6D0; &#xC720;&#xBC1C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; adjuvants&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xBCC0; DC &#xC5ED;&#xD559;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC124;&#xBA85;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xBC0F; LC &#xB3D9;&#xC6D0; Th1 &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xD63C;&#xC790; Ddcs&#xC758; &#xB3D9;&#xC6D0;&#xC740; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xBC29; &#xC544; &#xC1E0;&#xC640; Th2 &#xBC18;&#xC751;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD08;&#xAE30; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBD84;&#xADF9; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBC18;&#xBA74; Th2 &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xC2E4;&#xD589; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC744; &#xC758;&#xBBF8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD53C;&#xBD80; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; Langerhans &#xC138;&#xD3EC; Th1 &#xBC0F; Th2 &#xD3B8;&#xAD11; adjuvants&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xBC0F; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; &#xB3D9;&#xC6D0;.

Las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas (DC) iniciar y polarizar la respuesta inmune adaptativa a diferentes resultados funcionales. Por medio de microscop&#xED;a intravital de dos fotones, nos informan de que las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas d&#xE9;rmicas (CDD) y c&#xE9;lulas de Langerhans (CL) es diferente para movilizarse durante la sensibilizaci&#xF3;n de contacto y adyuvantes tales como oligonucle&#xF3;tidos CpG no metilados (CpG) y LPS que inducen tipo T helper 1 ( Th1) respuestas, o la papa&#xED;na que induce T helper de tipo 2 (Th2) respuestas. En la oreja oreja, la sensibilizaci&#xF3;n de contacto, CpG, LPS, y papa&#xED;na todos los PD movilizados en tres fases distintas: aumento de la motilidad y las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas de sondeo, la migraci&#xF3;n dirigida, y la entrada en los vasos linf&#xE1;ticos. Durante los mismos tratamientos, las CL adyacentes en el o&#xED;do pabell&#xF3;n permaneci&#xF3; inm&#xF3;vil durante un per&#xED;odo de 48 horas de observaci&#xF3;n. Por el contrario, carec&#xED;a de bandoleros y de los PD de polarizaci&#xF3;n Th1-adyuvantes selectiva inducida por un retraso en la movilizaci&#xF3;n de las CL despu&#xE9;s de 48 horas. Th1 polarizaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas CD4 (+) las c&#xE9;lulas T es independiente del sitio de la vacunaci&#xF3;n, mientras que la inmunizaci&#xF3;n del o&#xED;do favoreci&#xF3; la polarizaci&#xF3;n Th2, en correlaci&#xF3;n con el sitio espec&#xED;fico de distribuci&#xF3;n de corriente continua y din&#xE1;mica. Nuestros resultados ofrecen una descripci&#xF3;n inicial de la din&#xE1;mica de CC perif&#xE9;rica en respuesta a los adyuvantes y entender que la movilizaci&#xF3;n mejora la LC una respuesta Th1 y no es suficiente para desencadenar una respuesta Th2, mientras que la movilizaci&#xF3;n de los PD es suficiente para desencadenar la proliferaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T y de polarizar inicial activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T hacia una respuesta Th2.

La movilizaci&#xF3;n selectiva y espec&#xED;fica del sitio de las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas d&#xE9;rmicas y c&#xE9;lulas de Langerhans por Th1 y Th2 polarizadas adyuvantes

&#x8C4C;&#x8C46;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20; (PSL) &#x662F;&#x4E8C;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4EA4;&#x7EC7;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;post-translationally &#x52A0;&#x5DE5;&#x7684;&#x80BD;&#x94FE; &mdash; &mdash; &beta;-&#x7247;&#x6BB5;&#x957F;&#x548C;&#x77ED;&#x7684; &alpha; &#x7247;&#x6BB5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x80CD;&#x76D0;&#x9178;&#x81F4;&#x53D8;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x800C;&#x7279;&#x70B9;&#x5C55;&#x5F00;&#x5E73;&#x8861;&#x7684;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x8425;&#x4E1A;&#x8BC1;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x72B6;&#x6001;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x5206;&#x8FA8;&#x8367;&#x5149;&#x3001; &#x78F7;&#x5149;&#x548C;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#x3002;&#x671F;&#x95F4;&#x5C55;&#x5F00;&#xFF0C;&#x7247;&#x6BB5;&#x94FE;&#x6210;&#x4E3A;&#x5206;&#x9694;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C55;&#x5F00;&#x6A21;&#x5F0F;&#x663E;&#x793A; &beta; &#x7247;&#x6BB5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5177;&#x6709;&#x7194;&#x7403;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x4E2D;&#x95F4;&#x3002;&#x5BA1;&#x67E5;&#x7531; 8-anilino-1-&#x71D0;&#x5149; (ANS) &#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x7247;&#x6BB5;&#x4E2D;&#x95F4;&#x663E;&#x793A; ~ 20 &#x6298; ANS &#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x548C; ANS &#x5BFF;&#x547D;&#x5927;&#x5E45;&#x589E;&#x52A0; (12.8 ns)&#x3002;&#x7194;&#x7403; &beta;-&#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x73AF;&#x5883;&#x5DF2;&#x4E0E;&#x9567; &#xFF08;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x5C40;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x4E24;&#x4E2A; tryptophans&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A; 53 &#x548C;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A; 152 &#x88AB;&#x6C27;&#x5316;&#x800C;&#x5176;&#x4ED6;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A; 128 &#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6539;&#x6027;&#x63A2;&#x6D4B;&#x3002;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x73AF;&#x5883;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x78F7;&#x5149;&#x7814;&#x7A76;&#x5728; 77 K&#xFF0C;&#x4F7F;&#x4E00;&#x4E2A; (0&#xFF0C;0) &#x7684;&#x4E50;&#x961F;&#x5728; 410 nm&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;PSL &#x7684;&#x5927;&#x7247;&#x6BB5;&#x94FE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x5355;&#x4F53;&#x6216;&#x5355;&#x4E2A;&#x57DF;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x5386;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E2D;&#x95F4;&#x56FD;&#xFF0C;&#x5C55;&#x5F00;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x548C;&#x6DF1;&#x5165;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x6298;&#x53E0;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x5BE1;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x3002;

&#x8C4C;&#x8C46;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x5C55;&#x5F00;&#xFF0C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x7194;&#x7403;&#x7247;&#x6BB5;&#x94FE;&#x3002;

Pea lectin (PSL) is a dimeric protein in which each subunit comprises two intertwined, post-translationally processed polypeptide chains--a long Î²-fragment and a short Î±-fragment. Using guanidine hydrochloride-induced denaturation, we have investigated and characterized the species obtained in the unfolding equilibrium of PSL by steady-state and time-resolved fluorescence, phosphorescence, and selective chemical modification. During unfolding, the fragment chains become separated, and the unfolding pattern reveals a Î²-fragment as intermediate that has the molten globule characteristics. As examined by 8-anilino-1-naphthalenesulfonate (ANS) binding, the fragment intermediate shows ~20 fold increase in ANS fluorescence, and a large increase in ANS lifetime (12.8 ns). The tryptophan environment of the molten globule Î²-fragment has been probed by selective modification with N-bromosuccinimide (NBS), which shows that two tryptophans, possibly Trp 53 and Trp 152 are oxidized while the other Trp 128 remains resistant to oxidation. The different types of tryptophan environment for the intermediate are supported by phosphorescence studies at 77 K, which gives a (0,0) band at 410 nm. These results seem to indicate that the larger fragment chain of PSL can independently behave as a monomeric or single domain protein that undergoes unfolding through intermediate state(s), and may provide important insight into the folding problem of oligomeric proteins in general and lectins in particular.

Pea lectin unfolding reveals a unique molten globule fragment chain.

Lectine des pois (PSL) est une prot&eacute;ine dim&eacute;rique dans lequel chaque sous-unit&eacute; comporte deux entrelac&eacute;s, cha&icirc;nes polypeptidiques post-traductionnellement transform&eacute;s--un &beta;-fragment long et un court fragment-&alpha;. &Agrave; l&#39;aide de d&eacute;naturation induite par le chlorhydrate de guanidine, nous avons &eacute;tudi&eacute; et caract&eacute;ris&eacute; l&#39;esp&egrave;ce obtenue dans l&#39;&eacute;quilibre qui se d&eacute;roule du PSL en stationnaire et time-resolved fluorescence, phosphorescence et modification chimique s&eacute;lective. Pendant le d&eacute;roulement, les cha&icirc;nes fragment sont s&eacute;parent, et le mod&egrave;le d&eacute;pliage r&eacute;v&egrave;le un &beta;-fragment interm&eacute;diaire qui poss&egrave;de les caract&eacute;ristiques de globule fondu. Comme examin&eacute;s par liaison 8-anilino-1-naphtal&egrave;nesulfonate (ANS), les spectacles interm&eacute;diaire fragment ~ 20 plier augmentation de fluorescence de l&#39;ANS et une grande augmentation de la dur&eacute;e de vie ANS (12,8 ns). L&#39;environnement de tryptophane du globule fondu &beta;-fragment a &eacute;t&eacute; sond&eacute; par modification s&eacute;lective avec le N-bromosuccinimide (NBS), qui montre que les deux tryptophanes, &eacute;ventuellement Trp 53 et Trp 152 sont oxyd&eacute;s tandis que les autres 128 Trp reste r&eacute;sistante &agrave; l&#39;oxydation. Les diff&eacute;rents types d&#39;environnement de tryptophane pour l&#39;interm&eacute;diaire sont pris en charge par des &eacute;tudes de phosphorescence &agrave; 77 K, ce qui donne une bande (0,0) &agrave; 410 nm. Ces r&eacute;sultats semblent indiquer que la plus grande cha&icirc;ne de fragment de PSL peut se comporter ind&eacute;pendamment comme une prot&eacute;ine monom&egrave;re ou seul domaine qui subit qui se d&eacute;roulent &agrave; travers des interm&eacute;diaires ou des &Eacute;tats et peut fournir important aper&ccedil;u des lectines pliage probl&egrave;me de prot&eacute;ines oligom&egrave;res en g&eacute;n&eacute;ral et en particulier.

Pois lectine d&eacute;pliage r&eacute;v&egrave;le une cha&icirc;ne de fragment unique globule fondu.

Erbse Lektin (PSL) ist ein dimeren Protein in dem jeder Untereinheit zwei miteinander verflochten umfasst, post-translationally verarbeitete Polypeptidketten--eine lange &beta;-Fragment und eine kurze &alpha;-Fragment. Mit Guanidin Hydrochlorid-induzierte Denaturierung, haben wir untersucht und charakterisiert die Steady-State und Zeit aufgel&ouml;st Fluoreszenz, Phosphoreszenz und selektive chemische Modifikation in der sich entfaltenden Gleichgewicht der PSL erzielten Arten. W&auml;hrend entfaltet, die Fragment-Ketten getrennt, und das sich anbahnende Muster zeigt eine &beta;-Fragment als Zwischenprodukt mit die geschmolzenen kugelbl&uuml;te Eigenschaften. Wie vom 8-Anilin-1-Naphthalenesulfonate (ANS) Bindung &uuml;berpr&uuml;ft, das Fragment Mittelstufe zeigt ~ 20 Falten Zunahme ANS Fluoreszenz und eine starke Zunahme der ANS Lebensdauer (12,8 ns). Die Tryptophan-Umgebung des geschmolzenen kugelbl&uuml;te &beta;-Fragments hat durch die gezielte Modifizierung mit N-Bromsuccinimid (NBS), durchsucht, die zeigt, dass zwei Tryptophans, evtl. Trp 53 und Trp 152 oxidiert werden, w&auml;hrend der andere Trp-128 zu Oxidation best&auml;ndig bleibt. Die verschiedenen Arten von Tryptophan-Umgebung f&uuml;r die Mittelstufe werden unterst&uuml;tzt durch Phosphoreszenz-Studium an der 77 K, die eine (0,0) Band bei 410 gibt nm. Diese Ergebnisse scheinen darauf hinzudeuten, dass die gr&ouml;&szlig;ere Fragment-Kette der PSL unabh&auml;ngig als Monomer oder einzelne Domain Protein, die Entfaltung durch zwischen-oder erf&auml;hrt Verhalten kann, und k&ouml;nnen wichtige Einblicke in die Faltung Problem Oligomere Proteine im allgemeinen und Lektine insbesondere vorsehen.

Erbse Lektin Entfaltung zeigt eine einzigartige geschmolzenen kugelbl&uuml;te Fragment-Kette.

Lectina pisello (PSL) &egrave; una dimerica proteina in cui ogni subunit&agrave; comprende due intrecciati, catene polipeptidiche traduzionali trasformati - un lungo frammento di &beta; e un breve frammento di &alpha;. Utilizzando denaturazione guanidina cloridrato-indotta, abbiamo studiato e caratterizzato la specie ottenute nell&#39;equilibrio dispiegarsi del PSL da steady-state e time-resolved di fluorescenza e fosforescenza selettiva modificazione chimica. Durante l&#39;apertura, le catene del frammento diventano separate, e il pattern unfolding rivela un &beta;-frammento come intermedio che ha le caratteristiche di globulo fuso. Come esaminato dall&#39;associazione 8-anilino-1-naphthalenesulfonate (ANS), spettacoli frammento intermedio ~ 20 fold aumento della fluorescenza di ANS e un grande aumento nel corso della vita ANS (12,8 ns). L&#39;ambiente del triptofano del globulo fuso &beta;-frammento &egrave; stato sondato modificazione selettiva con N-bromosuccinimide (NBS), che mostra che due tryptophans, possibilmente Trp 53 e Trp 152 sono ossidati mentre le altre 128 Trp rimane resistente all&#39;ossidazione. I diversi tipi di ambiente per l&#39;intermedio di triptofano sono supportati da studi di fosforescenza a 77 K, che d&agrave; una band (0,0) a 410 nm. Questi risultati sembrano indicare che la pi&ugrave; grande catena di frammento del PSL indipendentemente pu&ograve; comportarsi come una proteina monomerica o singolo dominio subisce dispiegarsi attraverso stati intermedi, che possa fornire in particolare importante spaccato il pieghevole problema delle proteine oligomerici in generale e lectine.

Pisello lectina dispiegarsi rivela una catena di globulo fuso unico frammento.

&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A6;&#x8C46;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; (PSL) &#x3067; 2 &#x3064;&#x7D61;&#x307F;&#x5408;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5404;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x69CB;&#x6210;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; post-translationally &#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x9396; &#x2015; &beta; &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30ED;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E; &alpha; &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30B8;&#x30F3;&#x5869;&#x9178;&#x5869;&#x8A98;&#x8D77;&#x5909;&#x6027;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3057;&#x3001;PSL &#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x5E73;&#x8861;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5B9A;&#x5E38;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x86CD;&#x5149;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x5149;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7A2E;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C55;&#x958B;&#x3001;&#x4E2D;&#x306B;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x96E2;&#x308C;&#x96E2;&#x308C;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x5C55;&#x958B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3; &beta; &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30E2;&#x30EB;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x4E2D;&#x9593;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;.8-&#x30A2;&#x30CB;&#x30EA;&#x30CE;-1-&#x30CA;&#x30D5;&#x30BF;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30F3;&#x9178; (ANS) &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x4E2D;&#x9593;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC; ~ 20 ANS &#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068; ANS &#x5BFF;&#x547D;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x96A0;&#x3059; (12.8 ns)&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x74B0;&#x5883;&#x30E2;&#x30EB;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB; &beta; &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E; N-&#x30D6;&#x30ED;&#x30E2;&#x30B9;&#x30AF;&#x30B7;&#x30F3;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9; (NBS) &#x4ED6;&#x306E; Trp 128 &#x8010;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593; 2 &#x3064;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x88FD;&#x9020;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F; Trp 53 &#x304A;&#x3088;&#x3073; Trp 152 &#x304C;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x74B0;&#x5883;&#x3001;&#x4E2D;&#x7D1A;&#x5411;&#x3051;&#x5404;&#x7A2E;&#x71D0;&#x5149;&#x7814;&#x7A76;&#x3067; 410 (0, 0) &#x306E;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B; 77 K &#x3067;&#x652F;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; nm&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; PSL &#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4E2D;&#x9593;&#x56FD;&#x306E;&#x6240;&#x8F44;&#x5B98;&#x5E81;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7D4C;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x3068;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x7279;&#x306B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5358;&#x4E00;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x72EC;&#x7ACB;&#x306B;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A6;&#x8C46;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x4E00;&#x610F;&#x30E2;&#x30EB;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB; &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC644;&#xB450;&#xCF69; lectin (PSL) dimeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xAC01; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC88C;&#xC6B0; &#xD558; &#xACE0;, 2 &#xAC1C;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; post-translationally &#xCC98;&#xB9AC; &#xB41C; polypeptide &#xC0AC;&#xC2AC;-&#xAE34; &beta; &#xC870;&#xAC01; &#xBC0F; &#xC9E7;&#xC740; &alpha;-&#xC870;&#xAC01;. Guanidine &#xC5FC; &#xC720;&#xBC1C; &#xBCC0;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xD574;&#xACB0; &#xD615;&#xAD11;, &#xC778;&#xAD11;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD654;&#xD559; &#xC218;&#xC815; PSL &#xD3BC;&#xCCD0;&#xC9C4; &#xD3C9;&#xD615;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC885; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC788;&#xB2E4; &#xC6B0;&#xB9AC;. &#xC804;&#xAC1C;, &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC870;&#xAC01; &#xCCB4;&#xC778; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB418; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xAC1C; &#xD328;&#xD134; &#xB179;&#xC740; globule &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC911;&#xAE09;&#xC73C;&#xB85C; &beta;-&#xC870;&#xAC01; &#xBC1D;&#xD600;. &#xC870;&#xAC01; &#xC911;&#xAC04; &#xC1FC; ~ 20 ANS &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; ANS &#xC77C;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xD070; &#xC99D;&#xAC00; &#xC811;&#xC5B4; 8-anilino-1-naphthalenesulfonate (ANS) &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC80;&#xC0AC; (12.8 ns). &#xB179;&#xC740; globule &beta;-&#xB2E8;&#xD3B8;&#xC758; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xD658;&#xACBD; N-bromosuccinimide (NBS) &#xB2E4;&#xB978; Trp 128 &#xB0A8;&#xC544; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; tryptophans, &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; Trp 53 &#xBC0F; Trp 152 &#xC0B0;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xB294; &#xC788;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC911;&#xAC04;&#xC758; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xD658;&#xACBD; 410 (0, 0) &#xBC34;&#xB4DC; &#xC81C;&#xACF5; 77 K&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD11; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; nm. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; PSL&#xC758; &#xB354; &#xD070; &#xC870;&#xAC01;&#xC744; &#xCCB4;&#xC778; &#xC911;&#xAC04; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xAC1C;&#xB97C; &#xACAA; &#xC2B5; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD2B9;&#xD788; oligomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xB294; lectins&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; monomeric &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xC9C0; &#xB3D9;&#xC791; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC83; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC644;&#xB450;&#xCF69; lectin &#xD3BC;&#xCCD0;&#xC9C4; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xB179;&#xC740; globule &#xC870;&#xAC01; &#xCCB4;&#xC778;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Lectinas de guisante (PSL) es una dim&eacute;rica prote&iacute;na en el cual cada subunidad compone de dos entrelazados, cadenas de polip&eacute;ptidos postraduccional procesados--un largo fragmento de &beta; y un &alpha;-fragmento corto. Usando la desnaturalizaci&oacute;n inducida por clorhidrato de guanidina, hemos investigado y caracterizado las especies obtenidas en el equilibrio despliegue de PSL por modificaci&oacute;n qu&iacute;mica selectiva, estacionaria y resuelta en el tiempo de la fluorescencia y fosforescencia. Durante el despliegue, se separan las cadenas del fragmento, y el patr&oacute;n de desarrollo revela un &beta;-fragmento como intermedio que tiene las caracter&iacute;sticas del gl&oacute;bulo fundido. Como examina atando 8-anilino-1-naphthalenesulfonate (ANS), muestra intermedio en el fragmento ~ 20 doble aumento de fluorescencia de la ANS y un gran aumento en la vida ANS (12,8 ns). El entorno del tript&oacute;fano del &beta;-fragmento de gl&oacute;bulo fundido se han sondeado por modificaci&oacute;n selectiva con N-bromosuccinimida (NBS), que muestra que dos tryptophans, posiblemente Trp 53 y Trp 152 se oxidan, mientras que los otros 128 Trp sigue siendo resistente a la oxidaci&oacute;n. Los diferentes tipos de ambiente de tript&oacute;fano para el intermedio son apoyados por estudios de fosforescencia en 77 K, que da una banda (0,0) a 410 nm. Estos resultados parecen indicar que la mayor cadena de fragmento de PSL independientemente puede comportarse como una prote&iacute;na monom&eacute;rica o solo dominio que experimenta el despliegue a trav&eacute;s de Estados intermedios y puede proporcionar la penetraci&oacute;n importante en el plegamiento de prote&iacute;nas oligom&eacute;ricas problema en general y lectinas en particular.

Despliegue de lectina de guisante revela una cadena de fragmento &uacute;nico gl&oacute;bulo fundido.

&#x5E26;&#x8840;&#x7BA1;&#x8482;&#x7684;&#x5668;&#x5B98;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x5B9E;&#x65F6;&#x56FE;&#x50CF;&#x9700;&#x8981;&#x56FE;&#x50CF;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x548C;&#x56FE;&#x50CF;&#x6CE8;&#x518C;&#x8FDB;&#x884C;&#x540C;&#x65F6;&#x4F18;&#x5316;&#x672A;&#x7ECF;&#x6270;&#x52A8;&#x6B63;&#x5E38;&#x751F;&#x7406;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x95EE;&#x9898;&#x5C24;&#x5176;&#x7A81;&#x51FA;&#x5728;&#x80BA;&#x91CC;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8FC7;&#x5883;&#x901F;&#x5EA6; &gt; 1 &#x6BEB;&#x7C73; s(-1) &#x548C;&#x9632;&#x6B62;&#x56FE;&#x50CF;&#x6CE8;&#x518C;&#x7684;&#x5927;&#x578B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x547C;&#x5438;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x89C6;&#x9891;&#x7387;&#xFF0C;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x80BA;&#x751F;&#x7406;&#x5B8C;&#x597D;&#x5236;&#x5907;&#x548C;&#x65E0;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x83B7;&#x5F97;&#x5FAE;&#x5206;&#x9677;&#x5370;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x80BA;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x8840;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x548C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x52A8;&#x5458;&#x548C;&#x54CD;&#x5E94;&#x62C9;&#x4F38;&#x548C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80BA;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x708E;&#x75C7;&#x6A21;&#x578B;&#x52A8;&#x6001;&#x8840;&#x7BA1;&#x6CC4;&#x6F0F;&#x3002;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x7387;&#x751F;&#x7406;&#x6D4B;&#x91CF; &gt; 1 &#x6BEB;&#x7C73; s(-1)&#xFF0C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x53EF;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x672A;&#x6765;&#x5411;&#x5176;&#x4ED6;&#x5668;&#x5B98;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x3002;

&#x7A33;&#x5B9A;&#x514D;&#x75AB;&#x76D1;&#x89C6;&#x9F20;&#x6807;&#x80BA;&#x7684;&#x5F71;&#x50CF;&#x3002;

Real-time imaging of cellular and subcellular dynamics in vascularized organs requires image resolution and image registration to be simultaneously optimized without perturbing normal physiology. This problem is particularly pronounced in the lung, in which cells may transit at speeds >1 mm s(-1) and in which normal respiration results in large-scale tissue movements that prevent image registration. Here we report video-rate, two-photon imaging of a physiologically intact preparation of the mouse lung that is stabilizing and nondisruptive. Using our method, we obtained evidence for differential trapping of T cells and neutrophils in mouse pulmonary capillaries, and observed neutrophil mobilization and dynamic vascular leak in response to stretch and inflammatory models of lung injury in mice. The system permits physiological measurement of motility rates of >1 mm s(-1), observation of detailed cellular morphology and could be applied in the future to other organs and tissues while maintaining intact physiology.

Stabilized imaging of immune surveillance in the mouse lung.

Imagerie en temps r&eacute;el de la dynamique cellulaire et subcellulaire dans les organes vascularis&eacute;s n&eacute;cessite la r&eacute;solution d&#39;image et enregistrement d&#39;images &agrave; optimiser simultan&eacute;ment sans perturber la physiologie normale. Ce probl&egrave;me est particuli&egrave;rement prononc&eacute; dans le poumon, dans lequel les cellules peuvent transiter aux vitesses &gt; s(-1) 1 mm et dont la respiration normale se traduit par des mouvements de tissu &agrave; grande &eacute;chelle qui emp&ecirc;chent l&#39;enregistrement de l&#39;image. Nous rapportons ici vid&eacute;o-taux, two-photon imaging d&#39;une pr&eacute;paration physiologiquement intacte du poumon souris qui se stabilise et sans perturbation. En utilisant notre m&eacute;thode, nous obtenu des preuves de pi&eacute;geage diff&eacute;rentielle des cellules T et de neutrophiles dans les capillaires pulmonaires de souris et observ&eacute; la mobilisation des neutrophile et une fuite vasculaire dynamique en r&eacute;ponse &agrave; l&#39;&eacute;tirement et mod&egrave;les inflammatoires des l&eacute;sions pulmonaires chez des souris. Le syst&egrave;me permet la mesure physiologique du taux de la motilit&eacute; de &gt; 1 mm s(-1), observation de d&eacute;taill&eacute; la morphologie cellulaire et pourrait s&#39;appliquer &agrave; l&#39;avenir aux autres organes et tissus tout en conservant intacte physiologie.

Stabilis&eacute;e d&#39;imagerie de surveillance du syst&egrave;me immunitaire dans le poumon de souris.

Echtzeit-Bildgebung der zellul&auml;ren und subzellul&auml;ren Dynamik in gef&auml;&szlig;reichen Organe erfordert Bildaufl&ouml;sung und Bild-Registrierung gleichzeitig optimiert werden, ohne die normale Physiologie hineingebracht. Dieses Problem ist besonders ausgepr&auml;gt in der Lunge, in denen Zellen mit Geschwindigkeiten Durchreise k&ouml;nnen &gt; 1 mm s(-1) und in die normale Atmung gro&szlig; angelegte Gewebe Bewegungen f&uuml;hrt, die Bild-Registrierung zu verhindern. Hier berichten wir Video-Rate, zwei-Photonen-Aufnahmen von einer physiologisch intakten Zubereitung der Maus-Lunge, die Stabilisierung ist und unterbrechungsfreie. Mit unserer Methode wir gewonnen Beweise f&uuml;r differenzielle Trapping von T-Zellen und Neutrophilen in Maus pulmonalen Kapillaren und neutrophil Mobilisierung und dynamische vaskul&auml;re Leck als Reaktion auf Dehnung und entz&uuml;ndliche Modelle der Respiratory Distress Syndrome bei M&auml;usen beobachtet. Das System erlaubt physiologische Messung der Motilit&auml;t Wachstumsraten &gt; 1 mm s(-1), Beobachtung von detaillierten zellul&auml;ren Morphologie und konnte in Zukunft auf andere Organe und Gewebe unter Beibehaltung intakte Physiologie angewendet werden.

Stabilisierte Bildgebung der immun-&Uuml;berwachung in der Maus-Lunge.

Imaging in tempo reale delle dinamiche cellulari e subcellulari in organi vascolarizzati richiede la risoluzione di immagine e registrazione di immagini contemporaneamente essere ottimizzate senza perturbare la normale fisiologia. Questo problema &egrave; particolarmente pronunciato nel polmone, in cui le cellule possono transitare a velocit&agrave; &amp;gt; 1 mm s(-1) e nel quale respirazione normale si traduce in movimenti di tessuto su larga scala che impediscono la registrazione di immagine. Qui riportiamo video-tasso, due-fotone imaging di preparazione fisiologicamente intatta del polmone del mouse che &egrave; stabilizzante e non distruttivo. Utilizzando il nostro metodo, abbiamo ottenuto prove per differenziale intrappolamento delle cellule T e neutrofili nei capillari polmonari del mouse e osservato neutrofili mobilizzazione e perdita dinamica vascolare in risposta a modelli infiammatorie delle lesioni polmonari nei topi e tratto. Il sistema permette la misurazione fisiologica dei tassi di motilit&agrave; di &amp;gt; 1 mm s(-1), osservazione di dettagliata morfologia cellulare e potrebbe essere applicato in futuro ad altri organi e tessuti, mantenendo intatto fisiologia.

Stabilizzato di imaging della sorveglianza immunitaria nel polmone del mouse.

&#x8840;&#x7BA1;&#x67C4;&#x4ED8;&#x304D;&#x5668;&#x5B98;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5B9F;&#x6642;&#x9593;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x753B;&#x50CF;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x753B;&#x50CF;&#x767B;&#x9332;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x901F;&#x5EA6;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C3;&#x30C8;&#x80BA;&#x3067;&#x7279;&#x306B;&#x9855;&#x8457;&#x3067;&#x3059;&#x76EE; 1 mm s(-1) &#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x547C;&#x5438;&#x753B;&#x50CF;&#x30EC;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3002;&#x30D3;&#x30C7;&#x30AA;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; 2 &#x5149;&#x5B50;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80BA;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x6D3B;&#x6027;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x6E96;&#x5099;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7121;&#x505C;&#x6B62;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80BA;&#x306E;&#x6BDB;&#x7D30;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x5F97;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x52D5;&#x54E1;&#x3068;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x80BA;&#x640D;&#x50B7;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x708E;&#x75C7;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x52D5;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x6F0F;&#x51FA;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x7387;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x8A08;&#x6E2C;&#x8A31;&#x53EF;&#x76EE; 1 mm s(-1) &#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x3057;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x7684;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;&#x81D3;&#x5668;&#x3084;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x751F;&#x7406;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x9069;&#x7528;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x514D;&#x75AB;&#x76E3;&#x8996;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80BA;&#x3067;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3002;

Vascularized &#xC7A5;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; subcellular &#xC5ED;&#xD559;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC601;&#xC0C1; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xB4F1;&#xB85D; perturbing &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC5C6;&#xC774; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB420; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB294; &#xD2B9;&#xD788; &#xC140; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD658;&#xC2B9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD3D0;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC74C; &amp;gt; 1mm s(-1) &#xBC0F; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xB4F1;&#xB85D;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC5D0;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xD638;&#xD761; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBE44;&#xB514;&#xC624;-&#xC18D;&#xB3C4;, 2 &#xAD11;&#xC790; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD3D0;&#xC758; &#xC21C;&#xC218; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC900;&#xBE44;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xD398;&#xC77C;&#xBC31; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD3D0; &#xBAA8;&#xC138; &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD2B8;&#xB798;&#xD551;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC740; &#xACE0; &#xD638; &#xB3D9;&#xC6D0; &#xBC0F; &#xB3D9;&#xC801; &#xD608;&#xAD00; &#xB204;&#xCD9C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xCE58;&#xC640; &#xC950;&#xC5D0; &#xD3D0; &#xC0C1;&#xD574;&#xC758; &#xC5FC;&#xC99D; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBE44;&#xC728;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xCE21;&#xC815; &#xD5C8;&#xC6A9; &amp;gt; 1 m m s(-1), &#xAD00;&#xCC30; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC744; &#xC0C1;&#xC138; &#xD558; &#xACE0; &#xBBF8;&#xB798;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC640; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD3D0;&#xC758; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAC10;&#xC2DC;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC548;&#xC815;.

Imagen en tiempo real de din&aacute;mica celular y subcelular en &oacute;rganos vascularizados requiere la resoluci&oacute;n de la imagen e inscripci&oacute;n de la imagen simult&aacute;neamente optimizar sin perturbar la fisiolog&iacute;a normal. Este problema es particularmente pronunciado en el pulm&oacute;n, en el que las c&eacute;lulas pueden tr&aacute;nsito a velocidades &gt; 1 mm s(-1) y en la que la respiraci&oacute;n normal da lugar a movimientos de tejido a gran escala que impiden el registro de la imagen. Aqu&iacute; divulgamos video-tarifa, dos fotones de un preparado fisiol&oacute;gicamente intacto del pulm&oacute;n del rat&oacute;n que se estabiliza la proyecci&oacute;n de imagen y no disruptiva. Con nuestro m&eacute;todo, se obtiene evidencia para la captura de diferencial de c&eacute;lulas T y los neutr&oacute;filos en los capilares pulmonares de rat&oacute;n y observ&oacute; movilizaci&oacute;n de neutr&oacute;filo y fuga vascular din&aacute;mico en respuesta al estiramiento y modelos inflamatorios de la lesi&oacute;n de pulm&oacute;n en ratones. El sistema permite la medici&oacute;n fisiol&oacute;gica de las tasas de movilidad de &gt; 1 mm s(-1), observaci&oacute;n de detallado de la morfolog&iacute;a celular y podr&iacute;a aplicarse en el futuro a otros &oacute;rganos y tejidos manteniendo intacto fisiolog&iacute;a.

Debasish Sen

Department of Physiology and Biophysics

University of California, Irvine (UCI)

Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging