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Cell-based Calcium Assay for Medium to High Throughput Screening of TRP Channel Functions using FlexStation 3

The Molecular Devices' FlexStation 3 is a benchtop multi-mode microplate reader capable of automated fluorescence measurement in multi-well plates.  It is ...

The University of Texas Health Science Center at Houston

Nocardia SP. C-14-1, isol&eacute; &agrave; partir des eaux us&eacute;es de fibre acrylique, peut d&eacute;grader efficacement les succinonitrile et les alcanes &agrave; cha&icirc;ne longue. Nous rapportons ici la caract&eacute;risation d&#39;un plasmide indig&egrave;ne de pC1. La s&eacute;quence nucl&eacute;otidique globale de pC1 se composait de 5841 bp. Les cinq ORFs, codant une recombinase ADN, prot&eacute;ine de r&eacute;plication (Rep(pC1)) et trois prot&eacute;ines de fonction inconnue, ont &eacute;t&eacute; pr&eacute;vus sur le pC1. La Rep(pC1) affiche son homologie avec le Rep de Rhodococcus gros plasmide p33701, ce qui laisse supposer un type th&ecirc;ta de r&eacute;plication. Un plasmide de coli Escherichia (contenant le g&egrave;ne unique rep(pC1)) propag&eacute;s autonome faible nombre de copies &agrave; Nocardia ou Rhodococcus, sugg&eacute;rant que rep(pC1) &eacute;tait un g&egrave;ne essentiel pour la r&eacute;plication du plasmide. Le plasmide (contenant le g&egrave;ne de la rep(pC1) unique) pr&eacute;sent&eacute; comme conseils instable d&#39;h&eacute;ritage que les autres locus pC1 sont requis pour l&#39;h&eacute;r&eacute;dit&eacute; stable de plasmides. En comparaison des prot&eacute;ines Rep plasmide, nous classons les plasmides Rhodococcus ou Nocardia en quatre groupes.

R&eacute;plication et h&eacute;ritage de Nocardia plasmide pC1.

Nocardia SP. C-14-1, isoliert aus Polyacrylnitril Abwasser, k&ouml;nnen langkettige Alkane und Succinonitrile effizient beeintr&auml;chtigt werden. Hier berichten wir &uuml;ber die Charakterisierung von einem einheimischen Plasmid-pC1. Die gesamten Nukleotidsequenz von pC1 bestand aus 5841 bp. F&uuml;nf ORFs, Codierung, eine DNA Recombinase, Replikation Protein (Rep(pC1)) und drei Proteine unbekannter Funktion, wurden auf pC1 vorhergesagt. Die Rep(pC1) angezeigt ihre Homologie mit den Rep von Rhodococcus gro&szlig;e Plasmid p33701, schl&auml;gt einen Theta-Typ der Replikation. Ein Escherichia coli Plasmid (mit das einzigen rep(pC1)-Gen), die autonom in niedrige Kopienzahl in Nocardia oder Rhodococcus, vorgeschlagen, die dieser rep(pC1) war ein wesentlicher gen f&uuml;r Plasmid-Replikation weitergegeben werden. Das Plasmid (mit das einzigen rep(pC1)-Gen) dargestellt als Vererbung unstable Hinweise, dass andere pC1-Loci f&uuml;r die stabile Vererbung von Plasmiden erforderlich waren. Vergleich der Plasmid-gebundenen Rep-Proteine klassifizieren wir Rhodococcus oder Nocardia Plasmide in vier Gruppen.

Replikation und Vererbung von Nocardia Plasmid pC1.

Nocardia SP. C-14-1, isolato dalle acque di scarico fibra acrilica, pu&ograve; degradare efficacemente succinonitrile e alcani a catena lunga. Qui riportiamo la caratterizzazione di un plasmide indigeni pC1. La sequenza nucleotidica complessiva di pC1 consisteva di 5841 bp. Cinque ORFs, codifica una ricombinasi DNA, replication protein (Rep(pC1)) e tre proteine di funzione sconosciuta, sono stati previsti su pC1. Il Rep(pC1) visualizzato sua omologia con la Rep di Rhodococcus grande plasmide p33701, suggerendo un tipo theta di replica. Un plasmide coli Escherichia (contenente il gene singolo rep(pC1)) propagato autonomamente in numero basso copia in Nocardia o Rhodococcus, suggerendo che rep(pC1) era un gene essenziale per la replicazione del plasmide. Il plasmide (contenente il gene singolo rep(pC1)) presentato come accenni instabile eredit&agrave; che altri loci pC1 erano richiesti per l&#39;eredit&agrave; stabile di plasmidi. Confronto delle proteine Rep a carico del plasmide, classifichiamo Rhodococcus o Nocardia plasmidi in quattro gruppi.

Replica ed eredit&agrave; di Nocardia plasmide pC1.

&#x30CE;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B8;&#x30A2;&#x5C5E; sp. C-14-1&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x5EC3;&#x6C34;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9577;&#x9396;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B5;&#x30AF;&#x30B7;&#x30CE;&#x30CB; &#x30C8;&#x30EA;&#x30EB;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5148;&#x4F4F;&#x6C11;&#x65CF;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; pC1 &#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PC1 &#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x5869;&#x57FA; 5841 bp &#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; DNA recombinase&#x3001;&#x8907;&#x88FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 5 &#x3064; Orf (Rep(pC1)) &#x3068;&#x672A;&#x77E5;&#x95A2;&#x6570;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F; pC1 &#x4E0A;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Rep(pC1) &#x305D;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064; Rhodococcus &#x62C5;&#x5F53;&#x8005;&#x5927;&#x578B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; p33701 &theta; &#x578B;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x793A;&#x5506;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3002;(&#x5358;&#x4E00;&#x306E; rep(pC1) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x3080;) &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x81EA;&#x5F8B;&#x7684;&#x30CE;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B8;&#x30A2;&#x5C5E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E; rep(pC1) &#x793A;&#x5506; Rhodococcus &#x4F4E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x6570;&#x306B;&#x53CD;&#x6620;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D99;&#x627F;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306A;&#x30D2;&#x30F3;&#x30C8;&#x4ED6; pC1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x304C;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x7684;&#x7D99;&#x627F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x793A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; (&#x5358;&#x4E00; rep(pC1) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x3080;)&#x3002;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3067;&#x306F;&#x62C5;&#x5F53;&#x8005;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9;&#x8010;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6211;&#x3005; Rhodococcus &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30CE;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B8;&#x30A2; &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; 4 &#x3064;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x5206;&#x985E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x30CE;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B8;&#x30A2; &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; pC1 &#x306E;&#x7D99;&#x627F;&#x3002;

Nocardia sp. C-14-1, &#xC544;&#xD06C;&#xB9B4; &#xC12C;&#xC720; &#xD3D0;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB41C; &#xAE34; &#xCCB4;&#xC778; &#xC54C;&#xCE78;&#xACFC; succinonitrile&#xB97C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB77D;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD1A0;&#xCC29; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; p c 1&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. P c 1&#xC758; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC21C;&#xC11C; 5841 bp &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. DNA recombinase, &#xBCF5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBD80;&#xD638;&#xD654; &#xD558;&#xB294; 5 &#xAC1C;&#xC758; ORFs (rep(pc1))&#xC640; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD568;&#xC218;, 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; p c 1&#xC5D0; &#xC608;&#xCE21; &#xD588;&#xB2E4;. Rep(pC1) &#xD45C;&#xC2DC; Rhodococcus &#xB2F4;&#xB2F9;&#xC790; &#xD070; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; p33701&#xC640; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; homology &#xC138;&#xD0C0; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC81C;&#xC548;. &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; (&#xB2E8;&#xC77C; rep(pC1) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294;) &#xB0AE;&#xC740; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; &#xBC88;&#xD638; Nocardia &#xB610;&#xB294; Rhodococcus, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; rep(pc1)&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC790;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xD30C;. &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; (&#xB2E8;&#xC77C; rep(pC1) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294;) &#xB2E4;&#xB978; p c 1 loci plasmids&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xC18D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4; &#xC0C1;&#xC18D; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xD78C;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBD80;&#xB2F4; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xC790; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC73C;&#xB85C; Rhodococcus &#xB610;&#xB294; Nocardia &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBD84;&#xB958;.

&#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; Nocardia &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; p c 1&#xC758; &#xC0C1;&#xC18D; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x5361;&#x6C0F; C-14-1&#xFF0C;&#x9694;&#x7EDD;&#x8148;&#x7EB6;&#x5E9F;&#x6C34;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x964D;&#x4F4E;&#x957F;&#x94FE;&#x70F7;&#x70C3;&#x548C;&#x4E01;&#x4E8C;&#x8148;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x571F;&#x8457;&#x8D28;&#x7C92;&#x7535;&#x8111; 1 &#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;&#x7535;&#x8111; 1 &#x7684;&#x603B;&#x4F53;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x5305;&#x62EC; 5841 bp&#x3002;&#x4E94; ORFs&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801; DNA &#x91CD;&#x7EC4;&#x9176;&#x3001; &#x590D;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;&#x5173;&#x4E8E;&#x7535;&#x8111; 1 &#x9884;&#x8BA1; Rep(pC1)) &#x548C;&#x672A;&#x77E5;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;Rep(pC1) &#x663E;&#x793A;&#x4E0E;&#x7EA2;&#x7403;&#x83CC; Rep &#x5927;&#x8D28;&#x7C92; p33701&#xFF0C;&#x5176;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x6697;&#x793A; theta &#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x3002;&#xFF08;&#x5305;&#x542B;&#x5355;&#x4E2A; rep(pC1) &#x57FA;&#x56E0;&#xFF09; &#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x8D28;&#x7C92;&#x4E2D;&#x7EA2;&#x8272;&#x8BFA;&#x5361;&#x6C0F;&#x83CC;&#x6216;&#x7EA2;&#x7403;&#x83CC;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x8BE5; rep(pC1) &#x91CD;&#x8981;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#x590D;&#x5236;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F4E;&#x62F7;&#x8D1D;&#x6570;&#x81EA;&#x4E3B;&#x4F20;&#x64AD;&#x3002;&#x8D28;&#x7C92; &#xFF08;&#x5305;&#x542B;&#x5355;&#x4E2A; rep(pC1) &#x57FA;&#x56E0;&#xFF09; &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5176;&#x4ED6;&#x7535;&#x8111; 1 &#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7EE7;&#x627F;&#x7EE7;&#x627F;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x63D0;&#x793A;&#x63D0;&#x4EA4;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#x4E3A;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684; Rep &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7EA2;&#x7403;&#x83CC;&#x6216;&#x7EA2;&#x8272;&#x8BFA;&#x5361;&#x6C0F;&#x83CC;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#x5206;&#x7C7B;&#x5206;&#x6210;&#x56DB;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x7EC4;&#x3002;

&#x590D;&#x5236;&#x548C;&#x7EA2;&#x8272;&#x8BFA;&#x5361;&#x6C0F;&#x83CC;&#x8D28;&#x7C92;&#x7535;&#x8111; 1 &#x7EE7;&#x627F;&#x3002;

Nocardia sp. C-14-1, isolated from acrylic fiber wastewater, can degrade long-chain alkanes and succinonitrile efficiently. Here we report the characterization of an indigenous plasmid pC1. The overall nucleotide sequence of pC1 consisted of 5841 bp. The five ORFs, encoding a DNA recombinase, replication protein (Rep(pC1)) and three proteins of unknown function, were predicted on pC1. The Rep(pC1) displayed its homology with the Rep of Rhodococcus large plasmid p33701, suggesting a theta type of replication. An Escherichia coli plasmid (containing the single rep(pC1) gene) propagated autonomously in low copy number in Nocardia or Rhodococcus, suggesting that rep(pC1) was an essential gene for plasmid replication. The plasmid (containing the single rep(pC1) gene) presented as inheritance unstable hints that other pC1 loci were required for the stable inheritance of plasmids. By comparison of the plasmid-borne Rep proteins, we classify Rhodococcus or Nocardia plasmids into four groups.

Replication and inheritance of Nocardia plasmid pC1.

Nocardia SP. C-14-1, aislado de las aguas residuales de fibra acr&iacute;lica, puede degradar eficientemente succinonitrile y alcanos de cadena larga. Aqu&iacute; divulgamos la caracterizaci&oacute;n de un pl&aacute;smido ind&iacute;genas pC1. La secuencia de nucle&oacute;tido general de pC1 consisti&oacute; en 5841 bp. Los cinco ORFs, codificaci&oacute;n una Recombinasa de ADN, prote&iacute;nas de replicaci&oacute;n (Rep(pC1)) y tres prote&iacute;nas de funci&oacute;n desconocida, fueron predichas en pC1. La Rep(pC1) muestra su homolog&iacute;a con el Rep de Rhodococcus pl&aacute;smido grande p33701, lo que sugiere un tipo de theta de replicaci&oacute;n. Un pl&aacute;smido de Escherichia coli (que contiene el gen de la rep(pC1) solo) propag&oacute; aut&oacute;nomamente en n&uacute;mero de copia bajo en Nocardia o Rhodococcus, sugiriendo que REP(PC1) era un gen esencial para la replicaci&oacute;n del pl&aacute;smido. El pl&aacute;smido (que contiene el gen de la rep(pC1) solo) presentado como consejos inestable de la herencia que otros lugares geom&eacute;tricos del pC1 eran necesarias para la herencia estable de pl&aacute;smidos. Por la comparaci&oacute;n de las prote&iacute;nas Rep transmitidas por el pl&aacute;smido, clasificamos pl&aacute;smidos Rhodococcus o Nocardia en cuatro grupos.

Replicaci&oacute;n y herencia de Nocardia pl&aacute;smido pC1.

&#x94FE;&#x9709;&#x83CC; sp&#x3002; &#x7EBF;&#x5F62;&#x8D28;&#x7C92;&#x548C;&#x7EBF;&#x6027;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x901A;&#x5E38;&#x5305;&#x542B;&#x5B88;&#x6052;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x590D;&#x53D1;&#x6027;&#x5E8F;&#x5217;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x7AEF;&#x7C92;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x9F99;&#x5934;&#x548C; Tp&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x7684;&#x6C34;&#x9F99;&#x5934;&#x548C; tpg &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6240;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x7EA6;&#x675F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8D28;&#x7C92;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x7684; DNA &#x590D;&#x5236;&#x65F6;&#x7AEF;&#x7C92;&#x90FD;&#x5C06;&#x88AB;&#x5220;&#x9664;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7531; iterons &#x548C;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684; rep &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528; PCR&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; 8 17 &#x65B0;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7EBF;&#x6027;&#x94FE;&#x9709;&#x83CC;&#x83CC;&#x682A;&#x8D28;&#x7C92;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x7AEF;&#x7C92;&#x957F;&#x5EA6;&#x6C34;&#x9F99;&#x5934;&#x548C; tpg &#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x4E24;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7AEF;&#x7C92;&#x8D28;&#x7C92; pRL1 &#x548C; pRL2 &#x516B;&#x682A;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B88;&#x6052;&#x7AEF;&#x7C92;&#x5728; pFRL1 &#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x6BD2;&#x682A;&#x4E2D;&#x7684;&#x5F97;&#x5230;&#x786E;&#x8BA4;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x8D28;&#x7C92;&#x4E2D;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86;&#x591A;&#x4E2A;&#x77ED; palindromes&#x3002;PRL2 &#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x663E;&#x793A;&#x5305;&#x542B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x70B9;&#x51FB;&#x7684;&#x94FE;&#x9709;&#x83CC;&#x548C;&#x6C27;&#x5316;&#x786B;&#x786B;&#x3001; &#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x86CB;&#x767D;&#x7F16;&#x7801;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x86CB;&#x767D;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; Tpg &#x7684;&#x94FE;&#x9709;&#x83CC;&#x548C;&#x7AEF;&#x7C92;&#x672B;&#x7AEF;&#x86CB;&#x767D; pTP &#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x5178;&#x578B;&#x7684; iterons rep &#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E09;&#x4E2A;&#x8D28;&#x7C92;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x610F;&#x5916;&#x7AEF;&#x7C92;&#x590D;&#x53D1;&#x6027;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x94FE;&#x9709;&#x83CC;&#x7EBF;&#x5F62;&#x8D28;&#x7C92;&#x590D;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x3002;

&#x7AEF;&#x7C92;&#x590D;&#x53D1;&#x6027;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x94FE;&#x9709;&#x83CC;&#x7EBF;&#x5F62;&#x8D28;&#x7C92;&#x590D;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x3002;

Streptomyces sp. linear plasmids and linear chromosomes usually contain conserved terminal palindromic sequences bound by the conserved telomeric proteins Tap and Tp, encoded by the tap and tpg genes, respectively, as well as plasmid loci required for DNA replication in circular mode when the telomeres are deleted. These consist of iterons and an adjacent rep gene. By using PCR, we found that 8 of 17 newly detected linear plasmids in Streptomyces strains lack typical telomeric tap and tpg sequences. Instead, two novel telomeres in plasmids pRL1 and pRL2 from the eight strains and one conserved telomere in pFRL1 from the other strains were identified, while multiple short palindromes were also found in the plasmids. The complete nucleotide sequence of pRL2 revealed a gene encoding a protein containing two domains, resembling Tap of Streptomyces and a helicase of Thiobacillus, and an adjacent gene encoding a protein similar to Tpg of Streptomyces and a portion of the telomere terminal protein pTP of adenoviruses. No typical iterons-rep loci were found in the three plasmids. These results indicate an unexpected diversity of telomere palindromic sequences and replication genes among Streptomyces linear plasmids.

Diversity of telomere palindromic sequences and replication genes among Streptomyces linear plasmids.

Plasmides lin&eacute;aires de Streptomyces sp. et les chromosomes lin&eacute;aires contiennent habituellement les s&eacute;quences palindromiques terminales conserv&eacute;es, li&eacute;s par les prot&eacute;ines t&eacute;lom&eacute;riques conserv&eacute;es Tap et Tp, cod&eacute;es par les g&egrave;nes tap et tpg, respectivement, comme locus plasmide requis pour la r&eacute;plication de l&#39;ADN en mode circulaire lorsque les t&eacute;lom&egrave;res sont supprim&eacute;s. Il s&#39;agit d&#39;iterons et un g&egrave;ne adjacent rep. En utilisant la PCR, nous avons constat&eacute; que 8 des 17 nouveaux d&eacute;pist&eacute;s plasmides lin&eacute;aires dans les souches de Streptomyces manquent robinet t&eacute;lom&eacute;rique typique et s&eacute;quences de tpg. Au lieu de cela, les t&eacute;lom&egrave;res roman deux plasmides pRL1 et pRL2 des huit souches et un t&eacute;lom&egrave;re conserv&eacute;e dans les pFRL1 des autres souches ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es, tandis que plusieurs palindromes courts se retrouvent &eacute;galement dans les plasmides. La s&eacute;quence nucl&eacute;otidique complet de pRL2 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; un g&egrave;ne codant pour une prot&eacute;ine contenant deux domaines, ressemblant &agrave; la Tap de Streptomyces et une h&eacute;licase de Thiobacillus et un g&egrave;ne adjacent codant pour une prot&eacute;ine similaire &agrave; Tpg de Streptomyces et une partie de la pTP de prot&eacute;ine terminale t&eacute;lom&egrave;res des ad&eacute;novirus. Aucun locus typique iterons-rep ont &eacute;t&eacute; trouv&eacute;s dans les trois plasmides. Ces r&eacute;sultats indiquent une diversit&eacute; inattendue des s&eacute;quences palindromiques t&eacute;lom&egrave;re et les g&egrave;nes de la r&eacute;plication des plasmides lin&eacute;aires de Streptomyces.

Diversit&eacute; des s&eacute;quences palindromiques t&eacute;lom&egrave;re et les g&egrave;nes de la r&eacute;plication des plasmides lin&eacute;aires de Streptomyces.

Streptomyces sp. lineare Plasmide und linearen Chromosomen enthalten normalerweise konservierten terminal palindromische Sequenzen gebunden durch die konservierten Telomerisches Proteine Hahn und Tp, bzw. durch die Gene Hahn und Tpg kodiert als auch Plasmid Loci f&uuml;r DNA-Replikation im Runden-Modus erforderlich, wenn die Telomere gel&ouml;scht werden. Diese bestehen aus Iterons und einem angrenzenden Rep-gen. Mithilfe von PCR, fanden wir, dass 8 von 17 neu erkannte, dass lineare Plasmide in Streptomyces St&auml;mme typische Telomerisches Tap und Tpg-Sequenzen fehlen. Stattdessen wurden zwei neuartige Telomere in Plasmide pRL1 und pRL2 aus den acht St&auml;mmen und einem konservierten Telomer in pFRL1 aus den anderen St&auml;mmen identifiziert, w&auml;hrend mehrere kurze Palindrome auch in die Plasmide gefunden wurden. Die vollst&auml;ndige Nukleotidsequenz des pRL2 ergab ein Gen f&uuml;r ein Protein, enth&auml;lt zwei Dom&auml;nen, von Streptomyces klopfen und eine Helicase Thiobacillus, und eine angrenzende gen f&uuml;r ein Protein &auml;hnlich Tpg von Streptomyces und einen Teil der Telomer-terminal Protein-pTP von Adenoviren. In den drei Plasmide wurden keine typische Iterons-Rep-Loci gefunden. Diese Ergebnisse zeigen eine unerwartete Vielfalt an Telomer palindromische Sequenzen und Replikation Gene unter Streptomyces lineare Plasmide.

Vielfalt der Telomer palindromische Sequenzen und Replikation Gene unter Streptomyces lineare Plasmide.

Streptomyces SP. lineare plasmidi e cromosomi lineari di solito contengono conservate terminale sequenze palindromi vincolati le proteine telomeriche conservate Tap e Tp, codificate da geni tap e tpg, rispettivamente, cos&igrave; come i loci del plasmide necessarie per la replicazione del DNA in modalit&agrave; circolare quando vengono eliminati i telomeri. Questi consistono di un gene adiacente rep e iterons. Mediante PCR, abbiamo trovato che 8 dei 17 appena rilevato plasmidi lineari in ceppi di Streptomyces mancano rubinetto telomerica tipico e tpg sequenze. Invece, due telomeri romanzo in plasmidi pRL1 e pRL2 da otto ceppi e un telomero conservata nel pFRL1 da altri ceppi sono stati identificati, mentre pi&ugrave; breve palindromes sono stati trovati anche nei plasmidi. La sequenza nucleotidica completa di pRL2 ha rivelato un gene che codifica per una proteina che contiene due domini, simile a Tap di Streptomyces e un&#39;elicasi di Thiobacillus e un&#39;adiacente gene codifica per una proteina simile a Tpg di Streptomyces e una porzione del telomero terminale della proteina pTP di adenovirus. No loci iterons tipica-rep sono stati trovati nei tre plasmidi. Questi risultati indicano un&#39;inaspettata diversit&agrave; di palindromi sequenze telomeriche e geni di replica tra i plasmidi lineari Streptomyces.

Diversit&agrave; delle sequenze palindromi telomeri e geni di replica tra i plasmidi lineari Streptomyces.

&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC;&#x306E; sp &#x7DDA;&#x5F62;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068;&#x7DDA;&#x5F62;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x901A;&#x5E38;&#x4FDD;&#x5B58;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30BF;&#x30C3;&#x30D7;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BF;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068; tpg &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E; Tp &#x306F;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x56DE;&#x6587;&#x914D;&#x5217;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x304C;&#x524A;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x5186;&#x5F62;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E; DNA &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x306F;&#x3001;iterons &#x3068;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B; rep &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PCR &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;17 &#x306E; 8 &#x306F;&#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x7DDA;&#x5F62;&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2; &#x30BF;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068; tpg &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x691C;&#x51FA;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x56DE;&#x6587;&#x307E;&#x305F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2; &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; pRL1 &#x3068; 8 &#x3064;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x304B;&#x3089; pRL2 &#x30FB; pFRL1 &#x4ED6;&#x306E;&#x83CC;&#x682A;&#x7531;&#x6765;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x3001;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5869;&#x57FA;&#x914D;&#x5217; pRL2 &#x306E;&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC;&#x306E;&#x30BF;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D0;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x4F3C;&#x305F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC; Tpg &#x3068;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2; &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; pTP &#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A3;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A; iterons &#x62C5;&#x5F53;&#x8005;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x3067; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306F;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x56DE;&#x6587;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC;&#x7DDA;&#x5F62;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x56DE;&#x6587;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC;&#x7DDA;&#x5F62;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3002;

Streptomyces sp. &#xC120;&#xD615; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBC0F; &#xC120;&#xD615; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBCF4;&#xD1B5; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD68C;&#xBB38; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD0ED; &#xBC0F; Tp, tap, tpg &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xAC00; &#xAC01;&#xAC01; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; telomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xC18D;&#xC73C;&#xB85C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; loci telomeres &#xC0AD;&#xC81C; &#xB418; &#xBA74; &#xC21C;&#xD658; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; iterons&#xC640; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xC790; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. PCR&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; 17 8 &#xC0C8;&#xB85C; Streptomyces &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC120;&#xD615; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBD80;&#xC871; &#xC804;&#xD615;&#xC801;&#xC778; telomeric tap, tpg &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB300;&#xC2E0;, plasmids Prl1&#xC640; Prl2&#xC5D0;&#xC11C; 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xAE34;&#xC7A5; &#xB450; &#xC18C;&#xC124; telomeres &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; Pfrl1&#xC5D0; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; telomere &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;, &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; palindromes&#xB97C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB610;&#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;. Prl2&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC21C;&#xC11C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; Streptomyces&#xC758; &#xD0ED; Thiobacillus, helicase&#xC744; &#xB2EE;&#xC740; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Streptomyces Tpg&#xC640; adenoviruses telomere &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Ptp&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xC640; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC544;&#xB2C8; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; iterons &#xB2F4;&#xB2F9;&#xC790; loci 3 &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; telomere &#xD68C;&#xBB38; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBC0F; Streptomyces &#xC120;&#xD615; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Telomere &#xD68C;&#xBB38; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBC0F; Streptomyces &#xC120;&#xD615; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC911; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;.

Pl&aacute;smidos lineales de streptomyces SP. y cromosomas lineales generalmente contienen secuencias palindr&oacute;mico terminales conservadas que acatar las prote&iacute;nas telom&eacute;ricas conservadas Tap y Tp, codificadas por los genes tap y tpg, respectivamente, as&iacute; como lugares geom&eacute;tricos del pl&aacute;smido necesarias para la replicaci&oacute;n del ADN en modo circular cuando los tel&oacute;meros se eliminan. &Eacute;stos consisten en iterons y un gen adyacente rep. Mediante la PCR, encontramos que 8 de 17 reci&eacute;n detectado lineales pl&aacute;smidos en cepas de Streptomyces carecen de grifo telom&eacute;rica t&iacute;pico y secuencias de tpg. En su lugar, dos tel&oacute;meros novela en pl&aacute;smidos pRL1 y pRL2 de las ocho cepas y un tel&oacute;mero conservada en pFRL1 de las otras variedades fueron identificados, mientras que tambi&eacute;n se encontraron m&uacute;ltiples pal&iacute;ndromos cortos en las pl&aacute;smidos. La secuencia nucleot&iacute;dica completa del pRL2 revel&oacute; un gen que codifica una prote&iacute;na que contiene dos dominios, toque de Streptomyces y una helicasa de Thiobacillus y un adyacente gene que codifica una prote&iacute;na similar a Tpg de Streptomyces y una porci&oacute;n de la pTP de terminal de la prote&iacute;na telom&eacute;rica de adenovirus. No loci iterons t&iacute;pico-rep encontrados en las tres pl&aacute;smidos. Estos resultados indican una diversidad inesperada de secuencias palindr&oacute;mico tel&oacute;mero y genes de replicaci&oacute;n entre pl&aacute;smidos lineales de Streptomyces.

Diversidad de secuencias palindr&oacute;mico tel&oacute;mero y genes de replicaci&oacute;n entre pl&aacute;smidos lineales de Streptomyces.

&#x94FE;&#x9709;&#x83CC; lividans &#x7EBF;&#x6027;&#x8D28;&#x7C92; SLP2 &#x7684;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684; 50,410 bp (C.H.&#x9EC4;&#x3001; C.Y.&#x9648;&#x3001; H.H.&#x4ED4;&#x3001; C.&#x9648;&#x3001; Y.S.&#x6797;&#x548C;&#x9648; W.C.Mol.&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3002; 47:1563-&#x7B2C; 1576&#x5E74;&#xFF0C;2003 &#x5E74;&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x672C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#x590D;&#x5236; SLP2 &#x8F68;&#x8FF9;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x94FE;&#x9709;&#x83CC;&#x7EBF;&#x5F62;&#x8D28;&#x7C92; pSLA2 &#x548C; SCP1 &#x548C;&#x7531; iterons(SLP2) &#x548C;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684; rep(SLP2) &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x53E6;&#x5916;&#x9700;&#x8981; 47 bp &#x5E8F;&#x5217;&#x4E4B;&#x95F4; bp 581 &#x548C; 628 &#x4E0A;&#x6E38;&#x7684; iterons&#x3002;&#x66F4;&#x6362;&#x7684; iterons &#x6216; SLP2 &#x7684; pSLA2 &#x6216; SCP1 &#x7684;&#x76F8;&#x5E94;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; rep &#x57FA;&#x56E0;&#x4ECD;&#x5141;&#x8BB8;&#x4F20;&#x64AD;&#x94FE;&#x9709;&#x83CC;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x8F6C;&#x6362;&#x9891;&#x7387;&#x4F4E;&#x4E8E;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8D28;&#x7C92;&#x5206;&#x4EAB;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x673A;&#x5236; 3 &#x6570;&#x91CF;&#x7EA7;&#x3002;&#x8981;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x7EBF;&#x6027;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x989D;&#x5916;&#x7684; SLP2 &#x57FA;&#x56E0; &mdash; &mdash; mtap(SLP2)/tpg(SLP2) &#x6216; mtap (SLP2) &#x7684; SLP2 &#x4E0E; ilrA (SLP2) &mdash; &mdash; &#x662F;&#x4E00;&#x9879;&#x9700;&#x8981;&#x3002;IlrA(SLP2) &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5177;&#x4F53;&#x5230;&#x4F53;&#x5916;&#x7684; iterons(SLP2)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5A92; SLP2 &#x590D;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; (Mtap(SLP2)&#x3001; Tpg(SLP2)&#x3001; IlrA(SLP2)) &#x548C; S.lividans &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#xFF0C;&#x7AEF;&#x7C92;&#x590D;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;TpgL&#xFF0C;TapL &#x548C; TpgL&#xFF09; &#x5206;&#x522B;&#xFF0C;&#x4F46; SLP2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x672A;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; SLP2 &#x65B0;&#x5175;&#x4E3A;&#x5176;&#x7AEF;&#x7C92;&#x590D;&#x5236;&#x590D;&#x5236;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

&#x94FE;&#x9709;&#x83CC; lividans &#x7EBF;&#x6027;&#x7C92; SLP2 &#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#x548C;&#x7EBF;&#x6027;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

The nucleotide sequence of Streptomyces lividans linear plasmid SLP2 consists of 50,410 bp (C. H. Huang, C. Y. Chen, H. H. Tsai, C. Chen, Y. S. Lin, and C. W. Chen, Mol. Microbiol. 47:1563-1576, 2003). Here we report that the basic SLP2 locus for plasmid replication in circular mode resembles that of Streptomyces linear plasmids pSLA2 and SCP1 and comprises iterons(SLP2) and the adjacent rep(SLP2) gene. More efficient replication additionally required the 47-bp sequence between bp 581 and 628 upstream of the iterons. Replacement of either the iterons or the rep gene of SLP2 by the corresponding genes of pSLA2 or SCP1 still allows propagation in Streptomyces, although the transformation frequencies were 3 orders of magnitude lower than the original plasmids, suggesting that these plasmids share similar replication mechanisms. To replicate SLP2 in linear mode, additional SLP2 loci--either mtap(SLP2)/tpg(SLP2) or mtap(SLP2)/ilrA(SLP2)--were required. IlrA(SLP2) protein binds specifically to the iterons(SLP2) in vitro. Interactions were detected between these SLP2-borne replication proteins (Mtap(SLP2), Tpg(SLP2), and IlrA(SLP2)) and the telomeric replication proteins (TpgL, TapL, and TpgL) of the S. lividans chromosome, respectively, but the SLP2 proteins failed to interact. These results suggest that SLP2 recruits chromosomally encoded replication proteins for its telomere replication.

Characterization of the genetic components of Streptomyces lividans linear plasmid SLP2 for replication in circular and linear modes.

La s&eacute;quence nucl&eacute;otidique de plasmide lin&eacute;aire de Streptomyces lividans SLP2 se compose de 50 410 bp (C. H. Huang, C. Y. Chen, H. H. Tsai, C. Chen, Y. S. Lin et C. W. Chen, 47:1563 mol Microbiol.-1576, 2003). Nous rapportons ici que le locus SLP2 base pour r&eacute;plication plasmidique en mode circulaire ressemble &agrave; celle de Streptomyces plasmides lin&eacute;aires pSLA2 et SCP1 et compose de iterons(SLP2) et le g&egrave;ne rep(SLP2) adjacents. R&eacute;plication plus efficace a en outre requis la s&eacute;quence 47-bp entre bp 581 et 628 en amont de l&#39;iterons. Remplacement de soit l&#39;iterons ou le g&egrave;ne de la rep de SLP2 par les g&egrave;nes correspondants de pSLA2 ou SCP1 permet toujours propagation dans Streptomyces, bien que la fr&eacute;quence de transformation &eacute;tait de 3 ordres de grandeur plus faible que les plasmides originales, ce qui sugg&egrave;re que ces plasmides partagent des m&eacute;canismes de r&eacute;plication similaires. Pour r&eacute;pliquer SLP2 en mode lin&eacute;aire, autres loci SLP2--soit mtap(SLP2)/tpg(SLP2), soit du PAIM (SLP2) / ilrA (SLP2)--ont &eacute;t&eacute; n&eacute;cessaires. IlrA(SLP2) prot&eacute;ine se lie sp&eacute;cifiquement &agrave; la iterons(SLP2) in vitro. Des interactions ont &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;es entre ces prot&eacute;ines SLP2 origine de r&eacute;plication (Mtap(SLP2), Tpg(SLP2) et IlrA(SLP2)) et les prot&eacute;ines t&eacute;lom&eacute;riques de r&eacute;plication (TpgL, TapL et TpgL) du chromosome S. lividans, respectivement, mais le SLP2 prot&eacute;ines n&#39;a pas pu interagir. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que SLP2 recrute des prot&eacute;ines de r&eacute;plication chromosomique cod&eacute; pour sa r&eacute;plication des t&eacute;lom&egrave;res.

Caract&eacute;risation des composantes g&eacute;n&eacute;tiques du plasmide lin&eacute;aire lividans Streptomyces SLP2 pour la r&eacute;plication en mode circulaire et lin&eacute;aire.

Die Nukleotidsequenz von Streptomyces Lividans linear Plasmid SLP2 besteht aus 50.410 bp (C. H. Huang, C. Y. Chen, H. H. Tsai, C. Chen, Y. S. Lin und C. W. Chen, mg Microbiol. 47:1563-1576, 2003). Hier berichten wir, dass der grundlegende SLP2 Locus f&uuml;r Plasmid-Replikation im Runden-Modus der Streptomyces lineare Plasmide pSLA2 und SCP1 &auml;hnelt und besteht aus iterons(SLP2) und dem angrenzenden rep(SLP2)-Gen. Effiziente Replikation ben&ouml;tigt zus&auml;tzlich die 47-bp-Sequenz zwischen bp 581 und 628 stromaufw&auml;rts von der Iterons. Ersatz von entweder die Iterons oder das Rep-gen von SLP2 durch die entsprechenden Gene von pSLA2 oder SCP1 erlaubt noch Weiterleitung in Streptomyces, obwohl die Transformation-Frequenzen 3 Gr&ouml;&szlig;enordnungen niedriger als die urspr&uuml;ngliche Plasmide waren, was darauf hindeutet, dass diese Plasmide &auml;hnliche Replikationsmechanismen teilen. SLP2 im linearen Modus, zus&auml;tzliche SLP2 Loci--entweder mtap(SLP2)/tpg(SLP2) oder synthetisiert (SLP2) replizieren / IlrA (SLP2)--waren erforderlich. IlrA(SLP2) Protein bindet spezifisch an die in-vitro-iterons(SLP2). Interaktionen wurden zwischen diesen SLP2 &uuml;bertragene Replikations-Proteinen erkannt (Mtap(SLP2), Tpg(SLP2), und IlrA(SLP2)) und die Telomerisches Replikation-Proteine (TpgL, TapL und TpgL) des Chromosoms S. Lividans, bzw., aber die SLP2 Proteine interagieren konnte. Diese Ergebnisse legen nahe, dass SLP2 bei codierten Replikation Proteine f&uuml;r die Telomer-Replikation rekrutiert.

Charakterisierung der genetischen Komponenten von Streptomyces Lividans linear Plasmid SLP2 f&uuml;r die Replikation in rund- und lineare Modi.

La sequenza nucleotidica di plasmide di lineare lividans Streptomyces SLP2 consiste di 50.410 bp (C. H. Huang, Chen Y. C., H. H. Tsai, C. Chen, Lin S. Y. e C. W. Chen, PM = Microbiol. 47:1563-1576, 2003). Qui riportiamo che il locus SLP2 fondamentali per la replicazione del plasmide in modalit&agrave; circolare simile a quella di Streptomyces plasmidi lineari pSLA2 e SCP1 e comprende il gene adiacente rep(SLP2) e iterons(SLP2). Replica pi&ugrave; efficiente necessaria inoltre la sequenza di 47-bp tra bp 581 e 628 a monte della iterons. Sostituzione della iterons o il gene rep di SLP2 da geni corrispondenti di pSLA2 o SCP1 consente ancora propagazione in Streptomyces, anche se le frequenze di trasformazione erano 3 ordini di grandezza inferiore rispetto l&#39;originali plasmidi, suggerendo che questi plasmidi condividono simili meccanismi di replica. Per replicare SLP2 in modalit&agrave; lineare, ulteriori SLP2 loci - mtap(SLP2)/tpg(SLP2) o mtap (SLP2) / ilrA (SLP2) - sono stati richiesti. IlrA(SLP2) proteina si lega in modo specifico per il iterons(SLP2) in vitro. Sono state rilevate interazioni tra queste proteine replica SLP2-borne (Mtap(SLP2), Tpg(SLP2) e IlrA(SLP2)) e le proteine telomeriche replica (TpgL, TapL e TpgL) del cromosoma lividans S., rispettivamente, ma la SLP2 proteine non &egrave; riuscito a interagire. Questi risultati suggeriscono che SLP2 reclute proteine codificate cromosomicamente replica per la replica di telomeri.

Caratterizzazione delle componenti genetiche del plasmide Streptomyces lividans lineare del SLP2 per la replica in modalit&agrave; circolare e lineare.

&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC;&#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7DDA;&#x5F62;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; SLP2 &#x306E;&#x5869;&#x57FA;&#x914D;&#x5217;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059; 50,410 &#x306E; bp (C. H. &#x9EC4; C. Y. &#x9673;&#x3001;H. H. &#x30C4;&#x30A1;&#x30A4;&#x3001;C. &#x9673;&#x3001;Y. S. Lin&#x3001;C. W. &#x9673;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3002; 47:1563-1576, 2003&#xFF09;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A; SLP2 &#x8ECC;&#x8DE1;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x8907;&#x88FD;&#x5186;&#x5F62;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x7DDA;&#x5F62; pSLA2 &#x3068; scp1 &#x306E;&#x30DE;&#x30CB;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;iterons(SLP2) &#x3068;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B; rep(SLP2) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x69CB;&#x6210;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B; bp 581 &#x3068;&#x3001;iterons &#x306E;&#x4E0A;&#x6D41; 628 &#x9593; 47 bp &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x5909;&#x63DB;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5143;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9;&#x3088;&#x308A;&#x4F4E;&#x3044; 3 &#x6841;&#x304C;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B; iterons &#x307E;&#x305F;&#x306F; pSLA2 &#x307E;&#x305F;&#x306F; scp1 &#x306E;&#x30DE;&#x30CB;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; rep &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; SLP2 &#x306E;&#x307E;&#x3060;&#x4F1D;&#x642C;&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC;&#x3092;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SLP2 &#x7DDA;&#x5F62;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E; SLP2 &#x306E;&#x8ECC;&#x8DE1; &#x2015; mtap(SLP2)/tpg(SLP2) &#x307E;&#x305F;&#x306F; mtap (SLP2) &#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3092;&#x8907;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;/ilrA &#xFF08;SLP2&#xFF09; &#x2015; &#x2015; &#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3002;IlrA(SLP2) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; iterons(SLP2) &#x4F53;&#x5916;&#x306B;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; SLP2 &#x8CA0;&#x62C5;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F; (Mtap(SLP2)&#x3001;Tpg(SLP2)&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; IlrA(SLP2))&#x3001;S. &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x67D3;&#x8272;&#x306E;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x8907;&#x88FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; &#xFF08;TpgL&#x3001;TapL&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; TpgL)&#x3001;SLP2 &#x304C;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SLP2 &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x88FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x305D;&#x306E;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2; &#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC;&#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; SLP2 &#x5186;&#x5F62;&#x3068;&#x7DDA;&#x5F62;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6210;&#x5206;&#x7279;&#x6027;&#x3002;

Streptomyces lividans &#xC120;&#xD615; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; slp2&#xC758; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC21C;&#xC11C; 50,410 &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; bp (C. H. &#xD669;, C. Y. &#xCCB8;, H. H. Tsai, C. &#xCCB8;, Y. S. &#xB9B0; &#xBC0F; C. W. &#xCCB8; Mol. Microbiol. 47:1563-1576, 2003). &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC21C;&#xD658; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; SLP2 &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4; Streptomyces &#xC120;&#xD615; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; pSLA2 &#xBC0F; scp1&#xC758; &#xAD6C;&#xBB38;&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; iterons(SLP2) &#xBC0F; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; rep(SLP2) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB610;&#xD55C; bp 581 &#xACE0; 628 &#xC0C1;&#xB958;&#xB294; iterons&#xC758; &#xC0AC;&#xC774; 47 bp &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD574;&#xC57C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911; iterons&#xC758; &#xAD50;&#xCCB4; &#xB610;&#xB294; pSLA2 &#xB610;&#xB294; SCP1 &#xD574;&#xB2F9; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; slp2&#xC758; rep &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; Streptomyces &#xC77C;&#xC5D0; &#xC804;&#xD30C;&#xB97C; &#xACC4;&#xC18D; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xBCC0;&#xD658; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4; 3 &#xBC30;&#xB098; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xACF5;&#xC720; &#xD558;&#xB294; &#xC81C;&#xC548; &#xC6D0;&#xB798; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xB354; &#xB0AE;&#xC740; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC120;&#xD615; &#xBAA8;&#xB4DC;, &#xCD94;&#xAC00; SLP2 loci-mtap(SLP2)/tpg(SLP2) &#xB610;&#xB294; mtap (SLP2)&#xC5D0;&#xC11C; SLP2 &#xBCF5;&#xC81C; / ilrA (SLP2)-&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4;. IlrA(SLP2) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; iterons(SLP2) &#xD2B9;&#xD788; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; slp2&#xC744; &#xB9E4;&#xAC1C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; (Mtap(SLP2), Tpg(SLP2), &#xBC0F; IlrA(SLP2)) S. lividans &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC758; telomeric &#xBCF5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (TpgL, TapL, &#xBC0F; TpgL)&#xB294; SLP2 &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC01;&#xAC01;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; SLP2 &#xC2E0;&#xBCD1; chromosomally &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; telomere &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Streptomyces lividans &#xC120;&#xD615; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; SLP2 &#xBCF5;&#xC81C; &#xC21C;&#xD658; &#xBC0F; &#xC120;&#xD615; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xC77C; &#xBD84;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

La secuencia de nucle&oacute;tidos del pl&aacute;smido lineal de Streptomyces lividans SLP2 consiste en 50.410 bp (C. H. Huang, C. Y. Chen, H. H. Tsai, C. Chen, Y. S. Lin y C. W. Chen, PM Microbiol. 47:1563-1576, 2003). Aqu&iacute; divulgamos que el locus SLP2 b&aacute;sico para la replicaci&oacute;n del pl&aacute;smido en modo circular se asemeja al de Streptomyces pl&aacute;smidos lineal pSLA2 y SCP1 y consta de iterons(SLP2) y el gen rep(SLP2) adyacente. Replicaci&oacute;n m&aacute;s eficiente requiere adem&aacute;s la secuencia de 47-bp entre bp 581 y 628 aguas arriba de la iterons. Reemplazo de la iterons o el gen rep de SLP2 por los correspondientes genes de pSLA2 o SCP1 todav&iacute;a permite propagaci&oacute;n en Streptomyces, aunque las frecuencias de transformaci&oacute;n fueron 3 &oacute;rdenes de magnitud inferiores a las pl&aacute;smidos original, lo que sugiere que estos pl&aacute;smidos comparten mecanismos similares de replicaci&oacute;n. Para replicar el SLP2 en modo lineal, los loci SLP2 adicionales--mtap (SLP2) o mtap(SLP2)/tpg(SLP2) / ilrA (SLP2)--fueron requeridos. IlrA(SLP2) prote&iacute;na se une espec&iacute;ficamente a la iterons(SLP2) in vitro. Se detectaron interacciones entre estas prote&iacute;nas de replicaci&oacute;n transmitidas por SLP2 (Mtap(SLP2), Tpg(SLP2) y IlrA(SLP2)) y las prote&iacute;nas de replicaci&oacute;n telom&eacute;rica (TpgL, TapL y TpgL) del cromosoma S. lividans, respectivamente, pero el SLP2 prote&iacute;nas no interactuar. Estos resultados sugieren que SLP2 recluta a prote&iacute;nas de replicaci&oacute;n cromos&oacute;mico codificado para su replicaci&oacute;n tel&oacute;meros.

Caracterizaci&oacute;n de los componentes gen&eacute;ticos del pl&aacute;smido de la lineal de la lividans Streptomyces SLP2 para la replicaci&oacute;n en los modos circulares y lineales.

&#x5B89;&#x666E;&#x9709;&#x7D20;&#x662F;&#x6C28;&#x57FA;&#x7CD6;&#x82F7;&#x7C7B;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176; octodiose &#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x72EC;&#x4E00;&#x65E0;&#x4E8C;&#x7684;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x6216;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x52A0;&#x6CD5;&#x7684;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x6216;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x5230;&#x94FE;&#x9709;&#x83CC; tenebrabrius UD2 &#x53D1;&#x9175;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x5B89;&#x666E;&#x9709;&#x7D20;&#x5BF9;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x83CC;&#x4E1D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x8BE5;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x4E0D;&#x5927;&#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; &#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x53EF;&#x80FD;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x5B89;&#x666E;&#x9709;&#x7D20;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x3002;[2-13 C] &#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x5582;&#x7684; &#xFF08;25%&#x6D53;&#x7F29;) &#x9709;&#x7D20;&#x7684; 13 C-NMR &#x5206;&#x6790;&#x5177;&#x4F53;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x7EB3;&#x5165;&#x552F;&#x4E00;&#x7684; N CH3 &#x53D6;&#x4EE3;&#x57FA;&#x5B89;&#x666E;&#x9709;&#x7D20;&#x5BF9; C7&#39; &#x7684; octodiose &#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230; S-&#x817A;&#x82F7;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x6D53;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x52A0;&#x4E0A;&#x7684;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x5E76;&#x884C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x800C; methione &#x5728;&#x53D1;&#x9175;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x4E2D;&#x7684;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x9709;&#x7D20;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x7532;&#x57FA;&#x6350;&#x52A9;&#x529F;&#x80FD;&#x62DF;&#x53C2;&#x4E0E;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4F46;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x672C;&#x8EAB;&#x62DF;&#x6291;&#x5236;&#x7532;&#x57FA;&#x548C;&#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x96F7;&#x5E15;&#x9709;&#x7D20;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;[2-13 C&#x3001; 15N] 15N &#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x5149;&#x8C31;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x6807;&#x8BB0;&#x9709;&#x7D20;&#x8868;&#x793A;&#x8BE5;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x4E5F;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9650;&#x5236;&#x524D;&#x4F53;&#x6D3E;&#x9063;&#x5230;&#x5B89;&#x666E;&#x9709;&#x7D20;-NH2 &#x53D6;&#x4EE3;&#x3002;

C7 &#x7532;&#x57FA;&#x53D6;&#x4EE3;&#x57FA;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x8D77;&#x6E90; &#39;-N octodiose &#x5B89;&#x666E;&#x9709;&#x7D20;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x3002;

Apramycin is unique in the aminoglycoside family due to its octodiose moiety. However, either the biosynthesis process or the precursors involved are largely unknown. Addition of glycine, as well as serine or threonine, to the Streptomyces tenebrabrius UD2 fermentation medium substantially increases the production of apramycin with little effect on the growth of mycelia, indicating that glycine and/or serine might be involved in the biosynthesis of apramycin. The 13C-NMR analysis of [2-13C] glycine-fed (25% enrichment) apramycin showed that glycine specifically and efficiently incorporated into the only N-CH3 substituent of apramycin on the C7' of the octodiose moiety. We noticed that the in vivo concentration of S-adenosyl methionine increased in parallel with the addition of glycine, while the addition of methione in the fermentation medium significantly decreased the productivity of apramycin. Therefore, the methyl donor function of glycine is proposed to be involved in the methionine cycle but methionine itself was proposed to inhibit the methylation and methyl transfer processes a previously reported for the case of rapamycin. The 15N NMR spectra of [2-13C,15N]serine labeled apramycin indicated that serine may also act as a limiting precursor contributing to the -NH2 substituents of apramycin.

Glycine origin of the methyl substituent on C7'-N of octodiose for the biosynthesis of apramycin.

Apramycine est unique dans la famille des aminosides en raison de sa portion d&#39;octodiose. Toutefois, le processus de biosynth&egrave;se ou les pr&eacute;curseurs impliqu&eacute;es sont largement inconnus. Addition de glycine, ainsi que la s&eacute;rine ou thr&eacute;onine, sur le milieu de fermentation de Streptomyces tenebrabrius UD2 augmente consid&eacute;rablement la production d&#39;apramycine avec peu d&#39;effet sur la croissance du myc&eacute;lium, indiquant que la glycine et/ou la s&eacute;rine peut-&ecirc;tre &ecirc;tre impliqu&eacute; dans la biosynth&egrave;se de l&#39;apramycine. L&#39;analyse RMN du 13C d&#39;apramycine nourris glycine (enrichissement de 25 %) [2-13C] a montr&eacute; que la glycine plus pr&eacute;cis&eacute;ment et efficacement incorpor&eacute; dans le seul substituant N-CH3 d&#39;apramycine sur le C7&#39; de la portion octodiose. Nous avons remarqu&eacute; que la concentration in vivo de la S-ad&eacute;nosyl m&eacute;thionine a augment&eacute; en parall&egrave;le avec l&#39;ajout de la glycine, tandis que l&#39;ajout de la m&eacute;thionine dans le milieu de fermentation diminue significativement la productivit&eacute; de l&#39;apramycine. Par cons&eacute;quent, la fonction de donneur de m&eacute;thyle de glycine est propos&eacute;e d&#39;&ecirc;tre impliqu&eacute;s dans le cycle de la m&eacute;thionine mais m&eacute;thionine lui-m&ecirc;me a &eacute;t&eacute; propos&eacute; pour inhiber la m&eacute;thylation et transfert de m&eacute;thyle traite un rapport&eacute;es ant&eacute;rieurement pour le cas de la rapamycine. Les spectres de RMN du 15N de [2-13C, 15N] s&eacute;rine &eacute;tiquet&eacute; apramycine indiqu&eacute; cette s&eacute;rine peut aussi agir comme une limitation pr&eacute;curseurs contribuant aux substituants - NH2 de l&#39;apramycine.

Origine de la glycine du substituant m&eacute;thyle sur C7&#39;-N d&#39;octodiose pour la biosynth&egrave;se de l&#39;apramycine.

Apramycin ist einzigartig in der Aminoglykoside-Familie aufgrund seiner Octodiose Teil. Jedoch sind die Biosynthese-Prozess oder die Vorl&auml;ufer Beteiligten weitgehend unbekannt. Zusatz von Glycin, sowie Serin oder Threonin, dem Streptomyces Tenebrabrius UD2 G&auml;rung Medium wesentlich erh&ouml;ht die Produktion von Apramycin mit wenig Einfluss auf das Wachstum von Mycel, angibt, dass Glycin oder Serin die Biosynthese von Apramycin beteiligt sein k&ouml;nnte. Die 13 C-NMR-Analyse der [2-13C] Glycin gef&uuml;ttert (25 % Anreicherung) Apramycin zeigte, dass Glycin speziell und effizient integriert die einzige N-CH3-Substituenten des Apramycin auf dem C7&#39; von der Octodiose-Gruppe. Wir festgestellt, dass die in-vivo-Konzentration von S-Adenosyl-Methionin parallel mit dem Zusatz von Glycin, stieg w&auml;hrend der Zusatz von Methione Mittel-und G&auml;rung deutlich die Produktivit&auml;t der Apramycin sank. Daher die Methyl-Spender-Funktion von Glycin wird vorgeschlagen, die Methionin-Zyklus beteiligt sein sondern Methionin selbst wurde vorgeschlagen, dass die Methylierung hemmen und Methyl-Transfer verarbeitet eine bereits berichtet, f&uuml;r den Fall der angiomiolipomas. Die 15N-NMR-Spektren des [2-13C, 15N] Serin beschriftet Apramycin angegeben, dass Serin kann auch als eine begrenzende Vorl&auml;ufer Beitrag handeln, die - NH2-Substituenten des Apramycin.

Glycin Ursprung der Methyl-Substituenten auf C7&#39;-N der Octodiose f&uuml;r die Biosynthese von Apramycin.

Apramicina &egrave; unico in famiglia a causa della sua octodiose moiety aminoglicoside. Tuttavia, il processo di biosintesi o i precursori coinvolti sono in gran parte sconosciuti. Aggiunta di glicina, come pure serina o treonina, al mezzo di fermentazione di Streptomyces tenebrabrius UD2 sostanzialmente aumenta la produzione di apramicina con poco effetto sulla crescita del micelio, che indica che la glicina o serina possa essere coinvolti nella biosintesi di apramicina. Analisi 13 C-NMR di apramicina glicina-fed (25% arricchimento) [2-13 C] ha dimostrato che la glicina specificamente e incorporata in modo efficiente il solo N-CH3 sostituente di apramicina su C7&#39; del gruppo octodiose. Abbiamo notato che la concentrazione in vivo di S-adenosil metionina aumentato in parallelo con l&#39;aggiunta di glicina, mentre l&#39;aggiunta di metionina nel mezzo di fermentazione &egrave; diminuito in modo significativo la produttivit&agrave; di apramicina. Pertanto, la funzione di donatore di metile di glicina &egrave; proposto per essere coinvolti nel ciclo di metionina ma metionina si era proposto di inibire la metilazione e trasferimento di metile elabora un precedentemente riportato per il caso di rapamicina. Gli spettri NMR 15N [2-13 c, 15N] serina etichettato apramicina indicato che serina pu&ograve; anche agire come un precursore limitante che contribuiscono ai sostituenti - NH2 di apramicina.

Origine di glicina del sostituente metilico su C7&#39;-N di octodiose per la biosintesi di apramicina.

&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x305D;&#x306E; octodiose &#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30C9;&#x7CFB;&#x5BB6;&#x65CF;&#x5185;&#x3067;&#x4E00;&#x610F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x304C;&#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3084;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x653E;&#x7DDA;&#x83CC; tenebrabrius UD2 &#x767A;&#x9175;&#x4E2D;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306F;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x83CC;&#x7CF8;&#x306E;&#x751F;&#x80B2;&#x306B;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;[2-13 C] &#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x4F9B;&#x7D66; &#xFF08;25 &#xFF05; &#x6FC3;&#x7E2E;) &#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x306E; 13 C NMR &#x89E3;&#x6790;&#x305D;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3001;C7 &#x4E0A;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E; N CH3 &#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x57FA;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080; &#39; octodiose &#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x9175;&#x4E2D;&#x306E; methione &#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x6027;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x304C;&#x4E26;&#x5217;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3067;&#x306E; s-&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30EB;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E; in vivo &#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x6C17;&#x3065;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3; &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x95A2;&#x6570;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x81EA;&#x4F53;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x3001;, &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x8EE2;&#x9001;&#x3092;&#x65E2;&#x5831;&#x30E9;&#x30D1;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x51E6;&#x7406;.15N NMR &#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; [15N 2 13 c] &#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x305D;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3082;&#x884C;&#x52D5;&#x5236;&#x9650;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066; NH2 &#x7F6E;&#x63DB;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x306B;&#x3002;

C7 &#x306B;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x7F6E;&#x63DB;&#x57FA;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8D77;&#x6E90; &#39;-octodiose &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E; N&#x3002;

Apramycin&#xC758; octodiose moiety&#xB294; aminoglycoside &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC77C; &#xD558;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xACFC;&#xC815; &#xB610;&#xB294; &#xC804;&#xC870; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0;, &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xB610;&#xB294; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC;, Streptomyces tenebrabrius UD2 &#xBC1C;&#xD6A8; &#xC911;&#xAC04;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC0AC;&#xCCB4;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC640; apramycin&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; apramycin&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. [2-13 C] &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xBA39;&#xC774; (25% &#xB18D;&#xCD95;) apramycin 13 C NMR &#xBD84;&#xC11D; &#xADF8; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0;&#xC744; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xACE0;&#xB294; c7&#xC5D0; apramycin&#xC758; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; N-CH3 substituent&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569; &#39; octodiose moiety&#xC758;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBC1C;&#xD6A8; &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0; methione &#xCD94;&#xAC00; &#xD06C;&#xAC8C; apramycin&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC131; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; S adenosyl &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC;&#xC758; in vivo &#xB18D;&#xB3C4; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0;, &#xCD94;&#xAC00; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC00; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0;&#xC758; &#xBA54; &#xD2F8; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC790;&#xCCB4; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; &#xBC0F; &#xBA54; &#xD2F8; &#xC804;&#xC1A1; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; rapamycin&#xC758; &#xC0AC;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACE0;. [2-13 C, 15N] 15N NMR &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; apramycin &#xB77C;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC81C;&#xD55C; &#xC804;&#xC870; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD589;&#xC704;&#xB85C; &#xB610;&#xD55C; apramycin&#xC758;-NH2 &#xCE58;&#xD658; &#xD558;.

C7&#xC5D0; &#xBA54; &#xD2F8; substituent&#xC758; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xAE30;&#xC6D0; &#39;-apramycin&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; octodiose&#xC758; N.

Apramycin es &uacute;nico en la familia de los aminogluc&oacute;sidos debido a su mol&eacute;cula de octodiose. Sin embargo, el proceso de bios&iacute;ntesis o los precursores que son en gran parte desconocidos. Adici&oacute;n de glicina, as&iacute; como la serina o treonina, al medio de fermentaci&oacute;n de Streptomyces tenebrabrius UD2 aumenta considerablemente la producci&oacute;n de apramycin con poco efecto sobre el crecimiento de micelios, indicando eso glicina y serina involucrarnos en la bios&iacute;ntesis de apramycin. El an&aacute;lisis de 13C-NMR de apramycin de glicina-aliment&oacute; (enriquecimiento de 25%) [2-13C] demostr&oacute; eso glicina espec&iacute;ficamente y eficientemente incorporados en el &uacute;nico sustituto de N-CH3 de apramycin en el C7&#39; de la mol&eacute;cula de octodiose. Nos dimos cuenta de que la concentraci&oacute;n en vivo de S-adenosil metionina aument&oacute; en paralelo con la adici&oacute;n de glicina, mientras que la adici&oacute;n de methione en el medio de fermentaci&oacute;n disminuy&oacute; significativamente la productividad de apramycin. Por lo tanto, la funci&oacute;n de donantes de metilo de la glicina se propone participar en el ciclo de la metionina pero metionina s&iacute; mismo fue propuesto para inhibir la metilaci&oacute;n y transferencia de metilo procesa un previamente reportado para el caso de la rapamicina. Los espectros de RMN de 15N de [2-13C, 15N] serina etiquetado apramycin indicado eso serina puede actuar tambi&eacute;n como un precursor limitante que contribuye a los - NH2 sustitutos de apramycin.

Origen de la glicina del sustituto met&iacute;lico en C7&#39;-N de octodiose para la bios&iacute;ntesis de apramycin.

&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x4ECE;&#x80DE;&#x5185;&#x5546;&#x5E97;&#x8868;&#x793A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x662F;&#x53D7; 1,4,5-&#x808C;&#x9187; (InsP(3))&#x3001; &#x5FAA;&#x73AF; ADP &#x6838;&#x7CD6;&#x548C;&#x70DF;&#x9178;&#x817A;&#x560C;&#x5464;&#x4E8C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x78F7;&#x9178; &#xFF08;NAADP&#xFF09;&#x3002;InsP(3) &#x548C;&#x5FAA;&#x73AF; ADP &#x6838;&#x7CD6;&#x7531; InsP(3) &#x548C;&#x5170;&#x5C3C;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;&#x58A8;&#x897F;&#x54E5; (3) Rs &#x548C; RyRs&#xFF09; &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7ECF;&#x4ECE;&#x808C;&#x6D46;&#x7F51;/&#x5185;&#x8D28;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x5546;&#x5E97;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x4E0E;&#x6B64;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;NAADP &#x548C; NAADP &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x6240;&#x9488;&#x5BF9;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x5546;&#x5E97;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x4ECD;&#x7136;&#x5F15;&#x8D77;&#x4E89;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6709;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E; NAADP &#x52A8;&#x5458;&#x4E0E;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x9178;&#x6027;&#x8F66;&#x53A2;&#x4ECE;&#x7ECF;&#x3002;&#x4E0B;&#x9762;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E24;&#x5B54;&#x6E20;&#x9053; &#xFF08;TPCs&#xFF09; &#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B; &#xFF08;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; TPCN1&#xFF09; &#x7684; TPC1 &#x548C; TPC3 &#x9E21;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684; NAADP &#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#xFF08;TPCN3&#xFF09; &#x6B63;&#x5728;&#x5BF9; endosomal &#x819C;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B; TPC2 (TPCN2) &#x65F6;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x819C;&#x4E0A;&#x3002;&#x5BCC;&#x542B; TPC2 &#x7684;&#x819C;&#x663E;&#x793A;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B; NAADP &#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x548C; TPC2 &#x662F; NAADP &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5B58;&#x50A8;&#x968F;&#x540E;&#x653E;&#x5927;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x7531;&#x58A8;&#x897F;&#x54E5; (3) Rs.&#x56DE;&#x5E94; NAADP Ca(2+) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x88AB;&#x5E9F;&#x9664;&#x7834;&#x574F;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x8D28;&#x5B50;&#x68AF;&#x5EA6;&#x548C;&#x70E7;&#x8680; TPC2 &#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EA;&#x51CF;&#x6BD2;&#x7531;&#x6D88;&#x8017;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x7ECF;&#x5546;&#x5E97;&#x6216;&#x963B;&#x6B62;&#x58A8;&#x897F;&#x54E5; (3) Rs&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;TPCs &#x5F62;&#x6210;&#x4ECE;&#x9178;&#x6027;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x89E6;&#x53D1;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x808C;&#x6D46;&#x7F51;/&#x5185;&#x8D28;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x91CA;&#x653E;&#x7ECF;&#x7684; NAADP &#x53D7;&#x4F53;&#x3002;TPCs &#x56E0;&#x6B64;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x63A8;&#x8FDB;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684; NAADP &#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;

NAADP &#x52A8;&#x5458;&#x9499;&#x4ECE;&#x9178;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x4E24;&#x5B54;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;

Ca(2+) mobilization from intracellular stores represents an important cell signalling process that is regulated, in mammalian cells, by inositol-1,4,5-trisphosphate (InsP(3)), cyclic ADP ribose and nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate (NAADP). InsP(3) and cyclic ADP ribose cause the release of Ca(2+) from sarcoplasmic/endoplasmic reticulum stores by the activation of InsP(3) and ryanodine receptors (InsP(3)Rs and RyRs). In contrast, the nature of the intracellular stores targeted by NAADP and the molecular identity of the NAADP receptors remain controversial, although evidence indicates that NAADP mobilizes Ca(2+) from lysosome-related acidic compartments. Here we show that two-pore channels (TPCs) comprise a family of NAADP receptors, with human TPC1 (also known as TPCN1) and chicken TPC3 (TPCN3) being expressed on endosomal membranes, and human TPC2 (TPCN2) on lysosomal membranes when expressed in HEK293 cells. Membranes enriched with TPC2 show high affinity NAADP binding, and TPC2 underpins NAADP-induced Ca(2+) release from lysosome-related stores that is subsequently amplified by Ca(2+)-induced Ca(2+) release by InsP(3)Rs. Responses to NAADP were abolished by disrupting the lysosomal proton gradient and by ablating TPC2 expression, but were only attenuated by depleting endoplasmic reticulum Ca(2+) stores or by blocking InsP(3)Rs. Thus, TPCs form NAADP receptors that release Ca(2+) from acidic organelles, which can trigger further Ca(2+) signals via sarcoplasmic/endoplasmic reticulum. TPCs therefore provide new insights into the regulation and organization of Ca(2+) signals in animal cells, and will advance our understanding of the physiological role of NAADP.

NAADP mobilizes calcium from acidic organelles through two-pore channels.

Ca (2 +) la mobilisation des r&#xE9;serves intracellulaires repr&#xE9;sente une cellule importante processus de signalisation qui est r&#xE9;glement&#xE9;e, dans les cellules de mammif&#xE8;res, par l&#x26;#39;inositol-1 ,4,5-triphosphate (InsP (3)), le ribose cyclique ADP et nicotinique dinucl&#xE9;otide phosphate acide ad&#xE9;nine ( NAADP). InsP (3) et cyclique ADP ribose provoquer la lib&#xE9;ration de Ca (2 +) dans les magasins du r&#xE9;ticulum sarcoplasmique / endoplasmique par l&#x26;#39;activation de InsP (3) et r&#xE9;cepteurs de la ryanodine (INSP (3) R et RyRs). En revanche, la nature des r&#xE9;serves intracellulaires cibl&#xE9;s par NAADP et l&#x26;#39;identit&#xE9; mol&#xE9;culaire des r&#xE9;cepteurs NAADP restent controvers&#xE9;es, m&#xEA;me si la preuve indique que NAADP mobilise Ca (2 +) &#xE0; partir de lysosome li&#xE9;s compartiments acides. Ici, nous montrons que les deux canaux de pores (VAP) constituent une famille de r&#xE9;cepteurs NAADP, avec TPC1 humaine (&#xE9;galement connu sous le nom TPCN1) et le poulet TPC3 (TPCN3) &#xE9;tant exprim&#xE9;s sur les membranes des endosomes, et l&#x26;#39;homme TPC2 (TPCN2) sur les membranes lysosomales lorsqu&#x26;#39;elle est exprim&#xE9;e dans des cellules HEK293. Membranes enrichi avec TPC2 spectacle de haute affinit&#xE9; de liaison NAADP, et sous-tend TPC2 NAADP-induite par le Ca (2 +) sortie de lysosome li&#xE9;s magasins qui est ensuite amplifi&#xE9; par Ca (2 +)-induite par le Ca (2 +) communiqu&#xE9; par l&#x26;#39;INSP (3) Rs. Les r&#xE9;ponses &#xE0; NAADP ont &#xE9;t&#xE9; abolis en perturbant le gradient de protons lysosomale et par l&#x26;#39;ablation TPC2 expression, mais &#xE9;taient seulement att&#xE9;nu&#xE9;e par appauvrissant r&#xE9;ticulum endoplasmique Ca (2 +) ou en bloquant les magasins InsP (3) Rs. Ainsi, VAP, former des r&#xE9;cepteurs NAADP que la lib&#xE9;ration de Ca (2 +) &#xE0; partir organites acides, ce qui peut d&#xE9;clencher d&#x26;#39;autres Ca (2 +) des signaux via le r&#xE9;ticulum sarcoplasmique / endoplasmique. VAP donc fournir de nouveaux aper&#xE7;us sur la r&#xE9;glementation et l&#x26;#39;organisation de Ca (2 +) des signaux dans les cellules animales, et fera progresser notre compr&#xE9;hension du r&#xF4;le physiologique de NAADP.

NAADP mobilise le calcium des organites acides Gr&#xE2;ce &#xE0; deux canaux de pores

Ca(2+) Mobilisierung von den intrazellul&auml;ren speichern stellt eine wichtige Zelle Signalisierung Prozess, der in den S&auml;ugetier-Zellen durch Inosit-1,4,5-Trisphosphate (InsP(3)), cyclische ADP-Ribose und Nikotins&auml;ure-adenin-dinucleotid-phosphat (NAADP). geregelt ist InsP(3) und zyklische ADP-Ribose bewirken die Freisetzung von Ca(2+) von sarcoplasmic/endoplasmic Reticulum-Shops durch die Aktivierung von InsP(3) und Ryanodin-Rezeptoren (InsP (3) Rs und RyRs). Im Gegensatz dazu die Natur der intrazellul&auml;ren Speicher von NAADP und die molekulare Identit&auml;t der NAADP Rezeptoren ausgerichtet bleiben umstritten, obwohl Erkenntnisse zeigen, dass NAADP Ca(2+) aus sauren F&auml;cher Lysosom-bezogene mobilisiert. Hier zeigen wir, dass zwei-Pore-Kan&auml;le (TPCs) eine Familie von NAADP Rezeptoren, mit menschlichen TPC1 bilden (auch bekannt als TPCN1) und Huhn TPC3 (TPCN3) ausgedr&uuml;ckt in Endosomen Membranen und menschlichen TPC2 (TPCN2) auf lysosomal Membranen in HEK293 Zellen ausgedr&uuml;ckt. Angereichert mit TPC2 Membranen zeigen hohe Affinit&auml;t NAADP Bindung und TPC2 untermauert NAADP induziert Ca(2+) Entlassung aus dem Lysosom-&auml;hnliche Gesch&auml;fte, die sp&auml;ter noch verst&auml;rkt wird durch Ca(2+)-induzierte Ca(2+) Freisetzung von InsP (3) Rs. Antworten zu NAADP wurden abgeschafft, durch St&ouml;rung des lysosomalen Proton-Farbverlaufs und Abtragen TPC2 Ausdruck, doch wurden nur abgeschw&auml;cht durch abbauende Endoplasmatisches Reticulum Ca(2+) L&auml;den oder Blockierung InsP (3) Rs. Auf diese Weise bilden TPCs NAADP-Rezeptoren, die Entlassung Ca(2+) aus sauren Organellen, die weitere Ca(2+) Signale &uuml;ber sarcoplasmic/endoplasmic Reticulum ausl&ouml;sen k&ouml;nnen. TPCs werden daher erlauben neue Einblicke in die Regulierung und Organisation von Ca(2+) Signalen in tierischen Zellen, und unser Verst&auml;ndnis der physiologischen Rolle des NAADP.

NAADP mobilisiert Kalzium aus sauren Organellen durch zwei-Pore-Kan&auml;le.

CA(2+) mobilizzazione dai depositi intracellulari rappresenta una cellula importante segnalazione processo regolata, in cellule di mammifero, inositolo-1.4.5-trifosfato (InsP(3)), ribosio di ADP ciclico e acido nicotinico adenina dinucleotide fosfato (Battistoni). InsP(3) e ciclico ribosio di ADP che causano il rilascio di Ca(2+) dai depositi del reticolo sarcoplasmatico/endoplasmic l&#39;attivazione dei recettori InsP(3) e rianodinico (Rs InsP (3) e RyRs). Al contrario, la natura dei negozi intracellulare bersagliato da Battistoni e l&#39;identit&agrave; molecolare dei recettori Battistoni rimangono controversi, anche se l&#39;evidenza indica che Battistoni mobilita Ca(2+) dal lisosoma relativi scomparti acide. Qui vi mostriamo che poro due canali (TPCs) costituiscono una famiglia di recettori Battistoni, con TPC1 umano (noto anche come TPCN1) e pollo TPC3 (TPCN3) espressi sulla membrana endosomal e TPC2 umana (TPCN2) su membrane lisosomiali quando espresso nelle cellule HEK293. Membrane arricchite con TPC2 Visualizza associazione Battistoni ad alta affinit&agrave;, e TPC2 sottende release Ca(2+) Battistoni-indotta dal lisosoma relativi negozi che viene successivamente amplificato da Ca(2+)-Ca(2+)-induced release di InsP (3) Rs. Responses to Battistoni furono aboliti interrompendo il gradiente protonico lisosomiale e di ablazione TPC2 espressione, ma erano solo attenuato dall&#39;esaurimento del reticolo endoplasmatico Ca(2+) negozi o bloccando Rs InsP (3). TPCs formano cos&igrave;, recettori Battistoni che rilasciano Ca(2+) da organelli acidi, che possono innescare ulteriori segnali di Ca(2+) via del reticolo sarcoplasmatico/endoplasmic. TPCs pertanto fornire nuove intuizioni il regolamento e l&#39;organizzazione dei segnali Ca(2+) in cellule animali e far&agrave; avanzare la nostra comprensione del ruolo fisiologico di Battistoni.

BATTISTONI mobilita calcio da organelli acidi attraverso il poro due canali.

&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;-1,4,5  - &#x4E09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;INSP&#xFF08;3&#xFF09;&#xFF09;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;ADP&#x30EA;&#x30DC;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3067;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;NAADP&#xFF09;&#x3002; INSP&#xFF08;3&#xFF09;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;ADP&#x30EA;&#x30DC;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;INSP&#xFF08;3&#xFF09;&#x3068;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;INSP&#xFF08;3&#xFF09;Rs&#x3068;RyRs&#xFF09;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;/&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;Ca&#x653E;&#x51FA;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3002;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x305D;&#x306E;NAADP&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x9178;&#x6027;&#x306E;&#x533A;&#x753B;&#x304B;&#x3089;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3092;&#x52D5;&#x54E1;&#x3057;&#x3066;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;NAADP&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5E97;&#x8217;&#x3084;NAADP&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x8B70;&#x8AD6;&#x306E;&#x4F59;&#x5730;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x4E8C;&#x7D30;&#x5B54;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;TPCS&#xFF09;&#x306F;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x819C;&#x4E0A;&#x306B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;TPC1&#xFF08;&#x307E;&#x305F;TPCN1&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#xFF09;&#x3068;&#x30C1;&#x30AD;&#x30F3;TPC3&#xFF08;TPCN3&#xFF09;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x819C;&#x4E0A;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;TPC2&#xFF08;TPCN2&#xFF09;&#x3067;&#x3001;NAADP&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;HEK293&#x7D30;&#x80DE;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C1;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;INSP&#x306B;&#x3088;&#x308B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x8A98;&#x767A;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#xFF08;3&#xFF09;&#x3067;&#x5897;&#x5E45;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x5E97;&#x304B;&#x3089;TPC2&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;NAADP&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x5BCC;&#x3080;&#x819C;&#x3001;TPC2&#x652F;&#x3048;&#x308B;NAADP&#x8A98;&#x767A;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30F3;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002; NAADP&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x52FE;&#x914D;&#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3068;TPC2&#x5F0F;&#x3092;&#x5207;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5EC3;&#x6B62;&#x304C;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x5E97;&#x8217;&#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;INSP&#xFF08;3&#xFF09;R&#x3092;&#x906E;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x307F;&#x6E1B;&#x8870;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;TPC&#x306F;&#x7B4B;/&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x3092;&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;&#x3055;&#x3089;&#x306B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x9178;&#x6027;&#x30AA;&#x30EB;&#x30AC;&#x30CD;&#x30E9;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;NAADP&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TPC&#x306F;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3068;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;NAADP&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x9032;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

NAADP 2&#x3064;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x9178;&#x6027;&#x30AA;&#x30EB;&#x30AC;&#x30CD;&#x30E9;&#x304B;&#x3089;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x52D5;&#x54E1;

&#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC0C1;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0; &#xB300;&#xD45C;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC774;&#xB178; &#xC2DC; &#xD1A8;-1,4,5-trisphosphate (InsP(3)), &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; ADP ribose &#xBC0F; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC0B0; &#xC0B0; &#xC544;&#xB370;&#xB2CC; &#xB514;&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC778;&#xC0B0; (NAADP). InsP(3) &#xC21C;&#xD658; ADP ribose InsP(3) &#xBC0F; ryanodine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (InsP (3) Rs&#xC640; RyRs)&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; sarcoplasmic endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xC0C1;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; ca(2+)&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB9E4;&#xC7A5; NAADP&#xC640; NAADP &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC131;&#xACA9; &#xC720;&#xC9C0; &#xC99D;&#xAC70; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xC9C0;&#xB9CC; NAADP Ca(2+) &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880; &#xAD00;&#xB828; &#xC0B0; &#xC131; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC6D0; &#xB17C;&#xB780;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; 2 &#xAE30; &#xACF5; &#xCC44;&#xB110; (TPCs) &#xC778;&#xAC04; TPC1 (TPCN1 &#xB77C;&#xACE0;&#xB3C4; &#xD568;)&#xC640; &#xCE58;&#xD0A8; tpc3&#xC640; NAADP &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD328;&#xBC00;&#xB9AC;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC; (TPCN3) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; TPC2 endosomal &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB418; &#xACE0; (TPCN2) &#xB54C; HEK293 &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; lysosomal &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;. TPC2 &#xB18D;&#xCD95; &#xB9C9; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; NAADP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; TPC2 underpins &#xC99D;&#xD3ED; &#xD6C4; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880; &#xAD00;&#xB828; &#xC0C1;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; NAADP&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; InsP (3) Rs. &#xC751;&#xB2F5; NAADP&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Ca(2+) Ca(2+) &#xC720;&#xB3C4; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; lysosomal &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xB97C; &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xC5EC; &#xACE0; ablating TPC2 &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; Ca(2+) &#xC810;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC5C6;&#xC560;&#xACE0; &#xB610;&#xB294; InsP (3) Rs&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xC1E0;&#xB9CC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, TPCs &#xCD94;&#xAC00; sarcoplasmic endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ca(2+) &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC0B0; &#xC131; organelles&#xC5D0;&#xC11C; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; NAADP &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; TPCs &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xBC0F; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; ca(2+)&#xC758; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; NAADP&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xBBF8;&#xB9AC; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

NAADP 2-&#xAE30; &#xACF5; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0B0; &#xC131; organelles&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298; &#xB3D9;&#xC6D0;.

Ca (2 +) movilizaci&#xF3;n de dep&#xF3;sitos intracelulares representa una importante c&#xE9;lula de se&#xF1;alizaci&#xF3;n proceso que se regula, en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero, por inositol-1 ,4,5-trifosfato (InsP (3)), ribosa c&#xED;clica de ADP y fosfato &#xE1;cido nicot&#xED;nico adenina dinucle&#xF3;tido ( NAADP). InsP (3) y ADP ribosa c&#xED;clica causar la liberaci&#xF3;n de Ca (2 +) en tiendas de ret&#xED;culo sarcoplasm&#xE1;tico / endoplasm&#xE1;tico por la activaci&#xF3;n de InsP (3) y los receptores de rianodina (INSP (3) R y RyRs). En contraste, la naturaleza de los dep&#xF3;sitos intracelulares dirigidos por NAADP y la identidad molecular de los receptores NAADP siendo controvertido, aunque la evidencia indica que NAADP moviliza Ca (2 +) de lisosoma relacionados con compartimentos &#xE1;cidas. Aqu&#xED; nos muestran que dos canales de poro (TPCs) comprenden una familia de receptores NAADP, con TPC1 humano (tambi&#xE9;n conocido como TPCN1) y pollo TPC3 (TPCN3) se expresan en las membranas endosomal, y humanos TPC2 (TPCN2) en las membranas lisos&#xF3;micas cuando se expresa en c&#xE9;lulas HEK293. Las membranas enriquecidas con TPC2 espect&#xE1;culo de alta afinidad de uni&#xF3;n NAADP y TPC2 sustenta NAADP inducida por Ca (2 +) la liberaci&#xF3;n de lisosomas relacionados con las tiendas que posteriormente se amplifican por Ca (2 +) inducida por Ca (2 +) la liberaci&#xF3;n por el INSP (3) Rs. Las respuestas a NAADP fueron suprimidas por interrumpir el gradiente de protones lisosomal y por ablaci&#xF3;n TPC2 expresi&#xF3;n, pero eran s&#xF3;lo atenuada por agotamiento endopl&#xE1;smico Ca ret&#xED;culo (2 +) tiendas o mediante el bloqueo de InsP (3) Rs. Por lo tanto, formar receptores NAADP cursos de pol&#xED;tica comercial que la liberaci&#xF3;n de Ca (2 +) de org&#xE1;nulos &#xE1;cidos, lo que puede dar lugar a m&#xE1;s de Ca (2 +) a trav&#xE9;s de se&#xF1;ales de ret&#xED;culo sarcopl&#xE1;smico / endopl&#xE1;smico. Cursos de pol&#xED;tica comercial por lo tanto, proporcionar nuevos conocimientos sobre la regulaci&#xF3;n y ordenaci&#xF3;n de Ca (2 +) las se&#xF1;ales en las c&#xE9;lulas animales, y avanzar en nuestra comprensi&#xF3;n de la funci&#xF3;n fisiol&#xF3;gica de NAADP.

NAADP moviliza el calcio de &#xE1;cidos org&#xE1;nulos a trav&#xE9;s de dos canales de los poros

&#x77AC;&#x65F6;&#x53D7;&#x4F53;&#x6F5C;&#x5728; A1 &#xFF08;TRPA1) &#x5F62;&#x6210;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x5377;&#x5165;&#x6025;&#x6027;&#x708E;&#x6027;&#x75BC;&#x75DB;&#x548C;&#x75DB;&#x3002;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x5171;&#x4EF7;&#x4FEE;&#x9970;&#x6216;&#x5E38;&#x89C4;&#x53EF;&#x9006;&#x914D;&#x4F53;-&#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6D89;&#x53CA; TRPA1 &#x914D;&#x4F53;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x67D0;&#x4E9B;&#x4EB2;&#x7684;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5171;&#x4EF7;&#x4FEE;&#x9970;&#x4E00;&#x76F4;&#x88AB;&#x89C6;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x53C2;&#x4E0E; TRPA1 &#x5BF9;&#x5176;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E9B;&#x975E;&#x753E;&#x4F53;&#x7C7B;&#x6297;&#x708E;&#x836F; &#xFF08;&#x975E;&#x753E;&#x4F53;&#x7C7B;&#x6D88;&#x708E;&#x836F;) &#x662F;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A; nonelectrophilic &#x975E;&#x753E;&#x4F53;&#x7C7B;&#x6D88;&#x708E;&#x836F;&#x5BF9; TRPA1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x7ECF;&#x6D4B;&#x91CF;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E00;&#x7EC4;&#x9009;&#x5B9A;&#x7684;&#x975E;&#x753E;&#x4F53;&#x7C7B;&#x6D88;&#x708E;&#x836F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5145;&#x5F53; TRPA1 &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x3002;Extracellularly &#x5E94;&#x7528;&#x706D;&#x3001; niflumic&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7532;&#x82AC;&#x90A3;&#x9178;&#x6C1F;&#x6BD4;&#x6D1B;&#x82AC;&#x3001; &#x916E;&#x57FA;&#x5E03;&#x6D1B;&#x82AC;&#x3001; &#x53CC;&#x6C2F;&#x82AC;&#x9178;&#x3001; &#x5432;&#x54DA;&#x7F8E;&#x8F9B;&#xFF0C;&#x8FC5;&#x901F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5927;&#x9F20; TRPA1 &#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B; TRPA1 &#x6B65;&#x4E4B;&#x9065; WI-38 &#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x975E;&#x753E;&#x4F53;&#x7C7B;&#x6297;&#x708E;&#x836F;&#x7269;&#x914D;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4EBA;&#x7C7B; TRPA1 inducibly &#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53CD;&#x5E94;&#x90FD;&#x4E0D;&#x5B58;&#x5728;&#x975E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x540C;&#x548C;&#x7236;&#x6BCD;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5BF9; fenamate &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F; TRPA1 &#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x3001; AP 18&#x3001; HC-030031 &#x548C;&#x948C;&#x7EA2;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x7684;&#x3002;&#x5728; subsaturating &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;fenamate &#x975E;&#x753E;&#x4F53;&#x7C7B;&#x6D88;&#x708E;&#x836F;&#x4E5F;&#x60A3;&#x75C5; TRPA1 &#x70EF;&#x4E19;&#x57FA;&#x5F02;&#x786B;&#x6C30;&#x9178;&#x916F;&#x3001; &#x8089;&#x6842;&#x919B;&#xFF0C;&#x548C;&#x51B7;&#xFF0C;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x534F;&#x540C;&#x589E;&#x6548;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x719F;&#x77E5; TRPA1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5668;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x9664;&#x51E0;&#x4E2A;&#x70ED;&#x654F; TRP &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E; TRPA1 &#x706D;&#x9178;&#x6291;&#x5236; TRPV1&#x3001; TRPV3&#x3001; &#x548C; TRPM8 &#x56E0;&#x4E3A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;fenamate &#x975E;&#x753E;&#x4F53;&#x6297;&#x708E;&#x836F;&#x662F;&#x4E00;&#x7C7B;&#x65B0;&#x578B;&#x7684; TRPA1 &#x70C8;&#x6027;&#x548C;&#x53EF;&#x9006;&#x76F4;&#x63A5;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x3002;TRPA1 &#x523A;&#x6FC0;&#x975E;&#x753E;&#x4F53;&#x7C7B;&#x6D88;&#x708E;&#x836F;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8BE5;&#x7EC4;&#x5E94;&#x4E3A;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E0E; TRPA1 &#x6E20;&#x9053;&#x4E0A;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x914D;&#x4F53;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; TRPA1 &#x6E20;&#x9053;&#x7531; fenamate &#x975E;&#x753E;&#x4F53;&#x7C7B;&#x6297;&#x708E;&#x836F;&#x3002;

Transient receptor potential A1 (TRPA1) forms nonselective cation channels implicated in acute inflammatory pain and nociception. The mechanism of ligand activation of TRPA1 may involve either covalent modification of cysteine residues or conventional reversible ligand-receptor interactions. For certain electrophilic prostaglandins, covalent modification has been considered as the main mechanism involved in their stimulatory effect on TRPA1. Because some nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are structural analogs of prostaglandins, we examined several nonelectrophilic NSAIDs on TRPA1 activation using electrophysiological techniques and intracellular Ca(2+) measurements and found that a selected group of NSAIDs can act as TRPA1 agonists. Extracellularly applied flufenamic, niflumic, and mefenamic acid, as well as flurbiprofen, ketoprofen, diclofenac, and indomethacin, rapidly activated rat TRPA1 expressed in Xenopus oocytes and human TRPA1 endogenously expressed in WI-38 fibroblasts. Similarly, the NSAID ligands activated human TRPA1 inducibly expressed in HEK293 cells, but the responses were absent in uninduced and parental HEK293 cells. The response to fenamate agonists was blocked by TRPA1 antagonists, AP-18, HC-030031, and ruthenium red. At subsaturating concentrations, the fenamate NSAIDs also potentiate the activation of TRPA1 by allyl isothiocyanate, cinnamaldehyde, and cold, demonstrating positive synergistic interactions with other well-characterized TRPA1 activators. Importantly, among several thermosensitive TRP channels, the stimulatory effect is specific to TRPA1 because flufenamic acid inhibited TRPV1, TRPV3, and TRPM8. We conclude that fenamate NSAIDs are a novel class of potent and reversible direct agonists of TRPA1. This selective group of TRPA1-stimulating NSAIDs should provide a structural basis for developing novel ligands that noncovalently interact with TRPA1 channels.

Activation of TRPA1 channels by fenamate nonsteroidal anti-inflammatory drugs.

Transient receptor potential A1 (TRPA1) forme canaux cationiques non s&#xE9;lectifs impliqu&#xE9;s dans la douleur inflammatoire aigu&#xEB; et de la nociception. Le m&#xE9;canisme d&#x26;#39;activation ligand de TRPA1 peut impliquer soit la modification covalente des r&#xE9;sidus cyst&#xE9;ine ou conventionnelles r&#xE9;versibles interactions ligand-r&#xE9;cepteur. Pour certaines prostaglandines &#xE9;lectrophiles, modification covalente a &#xE9;t&#xE9; consid&#xE9;r&#xE9; comme le principal m&#xE9;canisme impliqu&#xE9; dans leur effet stimulant sur TRPA1. Parce que certains anti-inflammatoires non st&#xE9;ro&#xEF;diens (AINS) sont des analogues structuraux des prostaglandines, nous avons examin&#xE9; plusieurs AINS nonelectrophilic sur TRPA1 activation en utilisant des techniques &#xE9;lectrophysiologiques et intracellulaire de Ca (2 +) des mesures et a constat&#xE9; que un groupe choisi d&#x26;#39;AINS peuvent agir comme agonistes TRPA1. Extracellulaire appliqu&#xE9;e acide fluf&#xE9;namique, niflumique et m&#xE9;f&#xE9;namique, ainsi que le flurbiprof&#xE8;ne, le k&#xE9;toprof&#xE8;ne, le diclof&#xE9;nac, l&#x26;#39;indom&#xE9;thacine et, de rat rapidement activ&#xE9; TRPA1 exprim&#xE9; dans des ovocytes de Xenopus et TRPA1 humaine endog&#xE8;ne exprim&#xE9;e en WI-38 fibroblastes. De m&#xEA;me, les ligands AINS activ&#xE9; TRPA1 humaine inductible exprim&#xE9;e dans les cellules HEK293, mais les r&#xE9;ponses &#xE9;taient absents dans non induites et des parents des cellules HEK293. La r&#xE9;ponse &#xE0; des agonistes f&#xE9;namates a &#xE9;t&#xE9; bloqu&#xE9; par des antagonistes TRPA1, AP-18, HC-030 031, et le rouge de ruth&#xE9;nium. &#xC0; des concentrations subsaturating, les AINS f&#xE9;namates &#xE9;galement potentialiser l&#x26;#39;activation du TRPA1 par l&#x26;#39;isothiocyanate d&#x26;#39;allyle, le cinnamald&#xE9;hyde, et le froid, ce qui d&#xE9;montre positifs des interactions synergiques avec d&#x26;#39;autres bien caract&#xE9;ris&#xE9;s TRPA1 activateurs. Il est important, parmi plusieurs canaux TRP thermosensibles, l&#x26;#39;effet stimulant est sp&#xE9;cifique &#xE0; TRPA1 parce que l&#x26;#39;acide fluf&#xE9;namique inhib&#xE9;e TRPV1, TRPV3, et TRPM8. Nous concluons que les AINS sont f&#xE9;namates une nouvelle classe de puissants et r&#xE9;versible des agonistes directs de TRPA1. Ce groupe s&#xE9;lectif de TRPA1-stimulantes AINS devraient fournir une base structurelle pour le d&#xE9;veloppement de nouveaux ligands de fa&#xE7;on non covalente qui interagissent avec les canaux TRPA1.

L&#x26;#39;activation de canaux TRPA1 par f&#xE9;namates non st&#xE9;ro&#xEF;diens anti-inflammatoires non st&#xE9;ro&#xEF;diens

Transienten Rezeptor potenzielle A1 (TRPA1) bildet unselektiv kation Kan&auml;le in Akute entz&uuml;ndliche Schmerzen und Nociception verwickelt. Der Mechanismus der Ligand Aktivierung des TRPA1 kann entweder kovalente Modifikation der Cystein-R&uuml;ckst&auml;nde oder konventionelle reversible Ligand-Rezeptor-Interaktionen bedeuten. F&uuml;r bestimmte Elektrophile Prostaglandine wurde kovalente Modifikation als Hauptmechanismus ihre stimulierende Wirkung auf TRPA1 beteiligt angesehen. Da einige nicht-steroidale entz&uuml;ndungshemmende Medikamente (NSAIDs) strukturelle Analoga von Prostaglandinen sind, wir mehrere Nonelectrophilic NSAR auf TRPA1 Aktivierung elektrophysiologische Techniken und intrazellul&auml;re Ca(2+) Messungen untersucht und festgestellt, dass eine ausgew&auml;hlte Gruppe von NSAR als TRPA1-Agonisten eingesetzt werden kann. Extracellularly angewendet, Flufenamic, Niflumic, Mefenamins&auml;ure, sowie Flurbiprofen, Ketoprofen, Diclofenac und Indometacin, schnell aktiviert Ratte, die TRPA1 Xenopus Oocytes und menschlichen TRPA1 endogen in WI-38 Fibroblasten ausgedr&uuml;ckt ausgedr&uuml;ckt. Ebenso die NSAR-Liganden aktiviert menschlichen TRPA1 inducibly in HEK293 Zellen ausgedr&uuml;ckt, aber die Antworten waren abwesend in uninduced und elterliche HEK293 Zellen. Die Antwort auf Agonisten Fenamate wurde von TRPA1 Antagonisten, AP-18, HC-030031 und Ruthenium rot blockiert. Bei subsaturating Konzentrationen, die Fenamate NSAR auch potenzieren die Aktivierung von TRPA1 Allylisothiocyanat Zimtaldehyd und kalt, zeigen positive synergistische Wechselwirkungen mit anderen gut charakterisierten TRPA1-Aktivatoren. Wichtig ist, ist unter mehreren Thermosensitive-TRP-Kan&auml;le, die stimulierende Wirkung spezifisch f&uuml;r TRPA1, da Flufenamic S&auml;ure TRPV1, TRPV3 und TRPM8 gehemmt. Wir schlie&szlig;en daraus, dass Fenamate NSAR sind eine neuartige Klasse von potente und reversibel direkte Agonisten von TRPA1. Diese selektive Gruppe von TRPA1-stimulierenden NSAR sollte bieten eine strukturelle Grundlage f&uuml;r die Entwicklung von neuartiger Ligands, die noncovalently mit TRPA1 Kan&auml;len interagieren.

Aktivierung von TRPA1 Channels von Fenamate nichtsteroidale Antiphlogistika.

Transient receptor potenziale A1 (TRPA1) forma canali non selettivi cazione implicati nel dolore infiammatorio acuto e nocicezione. Il meccanismo di attivazione ligando di TRPA1 pu&ograve; comportare modificazione covalente di residui di cisteina o interazioni ligando-recettore reversibile convenzionali. Per certe prostaglandine elettrofila, modifica covalente &egrave; stato considerato come il principale meccanismo coinvolto nel loro effetto stimolatorio su TRPA1. Perch&eacute; alcuni farmaci anti-infiammatori non steroidei (FANS) sono analoghi strutturali di prostaglandine, abbiamo esaminato diversi fans nonelectrophilic TRPA1 attivazione utilizzando tecniche elettrofisiologiche e misurazioni Ca(2+) intracellulare e ha trovato che un gruppo selezionato di fans pu&ograve; agire come agonisti TRPA1. Extracellularly applicato flufenamic, niflumic e l&#39;acido mefenamico, nonch&eacute; flurbiprofene, ketoprofene, diclofenac e indometacina, ratto rapidamente attivato TRPA1 espressi in ovociti di Xenopus e TRPA1 umana endogena espressi nei fibroblasti WI-38. Analogamente, i ligandi fans attivata umana TRPA1 inducibly espresso nelle cellule HEK293, ma le risposte erano assenti nelle cellule HEK293 uninduced e dei genitori. La risposta al fenamate agonisti &egrave; stata bloccata da antagonisti, AP-18, HC-030031 TRPA1 e rutenio rosso. A concentrazioni di subsaturating, il fenamate fans potenziare anche l&#39;attivazione di TRPA1 isotiocianato di allile, aldeide cinnamica e freddo, dimostrando positive interazioni sinergiche con altri attivatori TRPA1 ben caratterizzati. Soprattutto, tra i diversi canali TRP termosensibili, l&#39;effetto stimolatorio &egrave; specifico di TRPA1 perch&eacute; flufenamic acido inibito TRPV3 TRPV1 e TRPM8. Concludiamo che fenamate fans sono una nuova classe di potenti e reversibile agonisti diretti di TRPA1. Questo gruppo di fans TRPA1-stimolante selettivo dovrebbe fornire una base strutturale per lo sviluppo di ligandi romanzo che noncovalently interagiscano con canali TRPA1.

Attivazione dei canali TRPA1 da fenamate farmaci anti-infiammatori.

&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5668;&#x96FB;&#x4F4D;A1&#x200B;&#x200B;&#xFF08;TRPA1&#xFF09;&#x304C;&#x6025;&#x6027;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BC;&#x75DB;&#x3068;&#x4FB5;&#x5BB3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TRPA1&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; - &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6C42;&#x96FB;&#x5B50;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306F;&#x3001;TRPA1&#x306B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x975E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x6027;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x85AC;&#xFF08;NSAID&#xFF09;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x6CD5;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5024;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;TRPA1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;nonelectrophilic&#x975E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x6027;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x85AC;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x6027;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x85AC;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;TRPA1&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5916;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CA;&#x30E0;&#x30CB;&#x30D5;&#x30EB;&#x30E0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E1;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CA;&#x30E0;&#x9178;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EB;&#x30D3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x3001;&#x30B1;&#x30C8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x3001;&#x30B8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CA;&#x30AF;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30E1;&#x30BF;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5185;&#x751F;&#x7684;&#x306B;WI-38&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x30D2;&#x30C8;TRPA1&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;TRPA1&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;NSAID&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x304C;&#x8A98;&#x5C0E;&#x7684;&#x306B;HEK293&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x30D2;&#x30C8;TRPA1&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3068;&#x89AA;&#x306E;HEK293&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; fenamate&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;AP-18&#x3001;HC-030031&#x3001;&#x53CA;&#x3073;&#x30EB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x8D64;&#x3001;TRPA1&#x30A2;&#x30F3;&#x30BF;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; subsaturating&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;fenamate&#x306E;&#x975E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x6027;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x85AC;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x3088;&#x304F;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;TRPA1&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x6B63;&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A4;&#x30BD;&#x30C1;&#x30AA;&#x30B7;&#x30A2;&#x30CD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30CA;&#x30E0;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5BD2;&#x3055;&#x306B;TRPA1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30D5;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CA;&#x30E0;&#x9178;&#x306F;TRPV1&#x3001;TRPV3&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;TRPM8&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x611F;&#x71B1;TRP&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;TRPA1&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;fenamate&#x306E;&#x975E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x6027;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x85AC;&#x306F;&#x3001;TRPA1&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x304B;&#x3064;&#x53EF;&#x9006;&#x76F4;&#x63A5;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TRPA1&#x523A;&#x6FC0;NSAID&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;TRPA1&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Fenamate&#x975E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x6027;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x85AC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;TRPA1&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;

&#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; A1 (TRPA1) &#xAE09;&#xC131; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xD1B5;&#xC99D;&#xACFC; nociception &#xC5F0;&#xB8E8; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Trpa1&#xC758; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xACF5;&#xC720; &#xC218;&#xC815; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xAC00;&#xC5ED; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Electrophilic prostaglandins &#xD2B9;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACF5;&#xC720; &#xC218;&#xC815; &#xACE0;&#xB824; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &#xC8FC;&#xC694; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; trpa1&#xC5D0; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; stimulatory &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;. &#xC77C;&#xBD80; &#xBE44; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xC131; &#xD56D; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC57D;&#xBB3C; (Nsaid&#xB294;) prostaglandins&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4; &#xC774;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC; TRPA1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; electrophysiological &#xAE30;&#xBC95; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xC5D0; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; nonelectrophilic Nsaid &#xBC0F; Nsaid&#xC758; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xADF8;&#xB8F9; TRPA1 agonists&#xB85C; &#xC5ED;&#xD560; &#xD560; &#xC218; &#xBC1C;&#xACAC;. Extracellularly flufenamic, niflumic, mefenamic &#xC0B0; &#xC131;, &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; flurbiprofen, ketoprofen, &#xC788;&#xB2E4;&#xBA74;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; indomethacin, &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xC950; TRPA1 Xenopus oocytes &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; endogenously &#xBB34;&#xC120; 38 &#xAC8C;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; TRPA1 &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xC801;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, NSAID ligands &#xC778;&#xAC04;&#xC758; TRPA1 inducibly HEK293 &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC751;&#xB2F5; &#xD588;&#xB2E4; &#xACB0; &#xC11D; uninduced &#xD558; &#xACE0; &#xBD80;&#xBAA8;&#xC758; HEK293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;. Fenamate agonists &#xC751;&#xB2F5; TRPA1 &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;, AP-18, HC-030031, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBD89;&#xC740; &#xB8E8; &#xD14C; &#xB284;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB18D;&#xB3C4; subsaturating&#xC5D0;&#xC11C; fenamate Nsaid&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC54C;&#xB9B4; isothiocyanate, cinnamaldehyde, &#xBC0F; &#xAC10;&#xAE30;, &#xB2E4;&#xB978; well-characterized TRPA1 &#xD65C;&#xC131; &#xC81C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; TRPA1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC57D;&#xD6A8;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC5F4;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; TRP &#xCC44;&#xB110; stimulatory &#xD6A8;&#xACFC; trpa1&#xC5D0; flufenamic &#xC0B0; TRPV1, TRPV3, &#xBC0F; TRPM8 &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; fenamate Nsaid&#xB294; trpa1&#xC758; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xB418;&#xB3CC;&#xB9B4; &#xC218; &#xC9C1;&#xC811; agonists&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xACB0;&#xB860;. TRPA1 &#xC790;&#xADF9; Nsaid&#xC758; &#xC120;&#xD0DD; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC774; &#xC18C;&#xC124; ligands TRPA1 &#xCC44;&#xB110; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; noncovalently&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Fenamate &#xBE44; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xC131; &#xD56D; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; TRPA1 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

Transitoria receptor potencial A1 (TRPA1) forma los canales de cationes no selectivos implicados en el dolor inflamatorio agudo y la nocicepci&#xF3;n. El mecanismo de activaci&#xF3;n ligando de TRPA1 puede implicar modificaci&#xF3;n covalente de residuos de ciste&#xED;na o convencionales interacciones reversibles ligando-receptor. Para ciertas prostaglandinas electrof&#xED;licos, modificaci&#xF3;n covalente ha sido considerada como el principal mecanismo implicado en su efecto estimulante sobre la TRPA1. Debido a que algunos medicamentos anti-inflamatorios no esteroideos (AINE) son an&#xE1;logos estructurales de prostaglandinas, se examinaron varios AINE nonelectrophilic de TRPA1 activaci&#xF3;n mediante t&#xE9;cnicas electrofisiol&#xF3;gicas y de Ca intracelular (2 +) las mediciones y se encontr&#xF3; que un selecto grupo de los AINE pueden actuar como agonistas TRPA1. Extracelularmente aplicado &#xE1;cido flufen&#xE1;mico, nifl&#xFA;mico, y mefen&#xE1;mico, as&#xED; como flurbiprofeno, ketoprofeno, diclofenaco, indometacina y, rata r&#xE1;pidamente activado TRPA1 expresado en oocitos de Xenopus y TRPA1 humana end&#xF3;gena expresada en WI-38 fibroblastos. Del mismo modo, los ligandos de AINE activado TRPA1 inducibly humana se expresa en las c&#xE9;lulas HEK293, pero las respuestas no inducidas estaban ausentes en los padres y las c&#xE9;lulas HEK293. La respuesta a los agonistas fenamate fue bloqueada por los antagonistas de TRPA1, AP-18, HC-030031, y el rojo de rutenio. A concentraciones subsaturantes, los AINE fenamate que tambi&#xE9;n potencian la activaci&#xF3;n de TRPA1 por el isotiocianato de alilo, cinamaldeh&#xED;do, y el fr&#xED;o, lo que demuestra positivas interacciones sin&#xE9;rgicas con otros bien caracterizados TRPA1 activadores. Es importante destacar que, entre varios canales TRP termosensibles, el efecto estimulante es espec&#xED;fico de TRPA1 porque el &#xE1;cido flufen&#xE1;mico inhibido TRPV1, TRPV3, y TRPM8. Llegamos a la conclusi&#xF3;n de que los AINE son fenamate una nueva clase de agonistas directos potentes y reversibles de TRPA1. Este selecto grupo de TRPA1 estimulantes de AINE debe proporcionar una base estructural para el desarrollo de nuevos ligandos que no covalentemente interact&#xFA;an con los canales TRPA1.

La activaci&#xF3;n de los canales TRPA1 Fenamate por f&#xE1;rmacos antiinflamatorios no esteroides drogas

Se detectaron dos pl&aacute;smidos lineales, pNSL1 y pNSL1, de Rhodocuccus SP. NS1.

[Clonaci&oacute;n, secuenciaci&oacute;n y la identificaci&oacute;n del origen de replicaci&oacute;n del pl&aacute;smido lineal de Rhodococcus pNSL1].

&#x4E24;&#x79CD;&#x7EBF;&#x5F62;&#x8D28;&#x7C92;&#xFF0C;pNSL1 &#x548C; pNSL1&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x4ECE; Rhodocuccus sp NS1&#x3002;&#x3002;

[&#x514B;&#x9686;&#x3001; &#x6D4B;&#x5E8F;&#x548C;&#x8BC6;&#x522B;&#x7EA2;&#x7403;&#x83CC;&#x7EBF;&#x6027;&#x8D28;&#x7C92; pNSL1 &#x590D;&#x5236;&#x6765;&#x6E90;]&#x3002;

Two linear plasmids, pNSL1 and pNSL1, were detected from Rhodocuccus sp. NS1.

[Cloning, sequencing and identification of replication origin of Rhodococcus linear plasmid pNSL1].

Deux plasmides lin&eacute;aires, pNSL1 et pNSL1, ont &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;s &agrave; Rhodocuccus SP. NS1.

[Clonage, s&eacute;quen&ccedil;age et l&#39;identification de l&#39;origine de r&eacute;plication de Rhodococcus plasmide lin&eacute;aire pNSL1].

Zwei lineare Plasmide, pNSL1 und pNSL1, wurden von Rhodocuccus SP. NS1 entdeckt.

[Klonierung, Sequenzierung und Replikation Herkunft von Rhodococcus linear Plasmid pNSL1].

Due plasmidi lineari, pNSL1 e pNSL1, sono stati rilevati da Rhodocuccus SP. NS1.

[Clonazione, sequenziamento e l&#39;identificazione dell&#39;origine di replicazione di Rhodococcus plasmide lineare pNSL1].

PNSL1 &#x3068; pNSL1&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; Rhodocuccus sp NS1 &#x304B;&#x3089;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

[&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Rhodococcus &#x7DDA;&#x5F62;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; pNSL1 &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;]&#x3002;

&#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC120;&#xD615; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;, Pnsl1&#xC640; pNSL1, sp. Rhodocuccus n s 1&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

[&#xBCF5;&#xC81C;, &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xBC0F; Rhodococcus &#xC120;&#xD615; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; Pnsl1&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC6D0;&#xBCF8; &#xC2DD;&#xBCC4;].

&#x7531;&#x54EA;&#x4E9B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x817A;&#x82F7;&#x4E8C;&#x78F7;&#x9178;&#x6838;&#x7CD6; (cADPR) &#x548C;&#x70DF;&#x9178;&#x817A;&#x560C;&#x5464;&#x4E8C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x78F7;&#x9178; &#xFF08;NAADP&#xFF09; &#x8C03;&#x52A8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x5546;&#x5E97;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x3002;CADPR &#x89C4;&#x8303;&#x5170;&#x5C3C;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53; (RyRs) &#x76F4;&#x63A5;&#x539F;&#x672C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x6216;&#x95F4;&#x63A5;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7ECF;&#x5438;&#x6536;&#x5230;&#x8428;&#x5C14;/&#x5185;&#x8D28;&#x7684;&#x5185;&#x8D28;&#x8428;&#x5C14;/&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; Ca(2+) &#x4E09;&#x80C3;&#x503C;&#x5F97;&#x5546;&#x69B7;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; NAADP &#x901A;&#x8FC7;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E24;&#x5B54;&#x57DF;&#x6E20;&#x9053; &#xFF08;TPCs&#xFF09; &#x52A8;&#x5458; endolysosomal &#x7ECF;&#x5546;&#x5E97;&#xFF0C;&#x5176;&#x4ED6;&#x5EFA;&#x8BAE; NAADP &#x76F4;&#x63A5;&#x6FC0;&#x6D3B; RyRs&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8BF1;&#x53D1; cADPR &#x548C; NAADP &#x4E3A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x53BB; TPC1&#x3001; TPC2&#x3001; RyR1 &#x6216; RyR3 &#x7684;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5438;&#x7BA1;&#x4ECE;&#x80DE;&#x5185;&#x900F;&#x6790;&#x3002;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D53;&#x5EA6;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D8;&#x5316;&#x5F15;&#x53D1;&#x4E86; cADPR &#x5728;&#x4EFB;&#x4E00;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE; (&#x5373;&#x6CA1;&#x6709; RyRs) &#x6216;&#x7A33;&#x5B9A;&#x53BB; TPC1 &#x548C; TPC2&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5F15;&#x53D1;&#x4E86; cADPR RyR1 &#x548C; RyR3 &#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8;&#x3002;&#x7ECF;&#x77AC;&#x6001;&#x5E9F;&#x9664;&#x4E86; bafilomycin thapsigargin &#x548C; RyRs &#x7684; dantrolene &#x5757;&#x540E;&#x8017;&#x5C3D;&#x7684;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x5E97;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x9075;&#x5FAA;&#x9178;&#x6027;&#x7ECF;&#x5546;&#x5E97;&#x7684;&#x67AF;&#x7AED;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;NAADP &#x672A;&#x80FD;&#x5524;&#x8D77;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x793A; RyR1 &#x6216; RyR3&#xFF0C;&#x7ECF;&#x77ED;&#x6682;&#x4F46;&#x5B83;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x9C81;&#x68D2;&#x7ECF;&#x6682;&#x6001;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5916;&#x57DF; TPC1 &#x6216; TPC2 &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728;&#x963B;&#x6B62;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x67AF;&#x7AED;&#x7684;&#x9178;&#x6027;&#x5546;&#x5E97;&#x7684; bafilomycin &#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;cADPR &#x901A;&#x8FC7;&#x6FC0;&#x6D3B; RyRs &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; TPCs &#x800C; NAADP &#x6FC0;&#x6D3B; TPCs &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; RyRs &#x89E6;&#x53D1;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;

&#x73AF;&#x817A;&#x82F7;&#x4E8C;&#x78F7;&#x9178;&#x6838;&#x7CD6;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5170;&#x5C3C;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x800C; NAADP &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E24;&#x5B54;&#x57DF;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;

The mechanism by which cyclic adenosine diphosphate ribose (cADPR) and nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate (NAADP) mobilize intracellular Ca(2+) stores remains controversial. It is open to question whether cADPR regulates ryanodine receptors (RyRs) directly, as originally proposed, or indirectly by promoting Ca(2+) uptake into the sarco/endoplasmic reticulum by sarco/endoplasmic reticulum Ca(2+)-ATPases. Conversely, although we have proposed that NAADP mobilizes endolysosomal Ca(2+) stores by activating two-pore domain channels (TPCs), others suggest that NAADP directly activates RyRs. We therefore assessed Ca(2+) signals evoked by intracellular dialysis from a patch pipette of cADPR and NAADP into HEK293 cells that stably overexpress either TPC1, TPC2, RyR1, or RyR3. No change in intracellular Ca(2+) concentration was triggered by cADPR in either wild-type HEK293 cells (which are devoid of RyRs) or in cells that stably overexpress TPC1 and TPC2, respectively. By contrast, a marked Ca(2+) transient was triggered by cADPR in HEK293 cells that stably expressed RyR1 and RyR3. The Ca(2+) transient was abolished following depletion of endoplasmic reticulum stores by thapsigargin and block of RyRs by dantrolene but not following depletion of acidic Ca(2+) stores by bafilomycin. By contrast, NAADP failed to evoke a Ca(2+) transient in HEK293 cells that expressed RyR1 or RyR3, but it induced robust Ca(2+) transients in cells that stably overexpressed TPC1 or TPC2 and in a manner that was blocked following depletion of acidic stores by bafilomycin. We conclude that cADPR triggers Ca(2+) release by activating RyRs but not TPCs, whereas NAADP activates TPCs but not RyRs.

Cyclic adenosine diphosphate ribose activates ryanodine receptors, whereas NAADP activates two-pore domain channels.

Le m&#xE9;canisme par lequel l&#x26;#39;ad&#xE9;nosine diphosphate ribose cyclique (ADPRc) et nicotinique dinucl&#xE9;otide phosphate acide ad&#xE9;nine (NAADP) mobiliser concentration intracellulaire de Ca (2 +) magasins reste controvers&#xE9;e. Il est ouvert &#xE0; la question de savoir si ADPRc r&#xE9;glemente r&#xE9;cepteurs de la ryanodine (RyRs) directement, comme initialement propos&#xE9;, ou indirectement par la promotion de Ca (2 +) absorption dans le r&#xE9;ticulum sarco / endoplasmique par sarco / endoplasmique Ca (2 +)-ATPases. A l&#x26;#39;inverse, bien que nous avons propos&#xE9; que NAADP mobilise endolysosomal Ca (2 +) magasins en activant les canaux de domaine de deux pores (VAP), d&#x26;#39;autres sugg&#xE8;rent que NAADP active directement RyRs. Nous avons donc &#xE9;valu&#xE9; Ca (2 +) des signaux &#xE9;voqu&#xE9;s par dialyse intracellulaire &#xE0; partir d&#x26;#39;une pipette de patch de ADPRc et NAADP dans les cellules HEK293 qui surexpriment de fa&#xE7;on stable, soit TPC1, TPC2, RyR1, ou RyR3. N changement de concentration intracellulaire de Ca (2 +) a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;clench&#xE9;e par la concentration en cADPR soit HEK293 cellules de type sauvage (qui sont d&#xE9;pourvus de RyRs) ou dans des cellules qui surexpriment mani&#xE8;re stable et TPC1 TPC2, respectivement. En revanche, une nette Ca (2 +) transitoire a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;clench&#xE9;e par ADPRc dans les cellules HEK293 que de fa&#xE7;on stable exprim&#xE9;es RyR1 et RyR3. Le Ca (2 +) transitoire a &#xE9;t&#xE9; abolie suite &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;puisement des magasins du r&#xE9;ticulum endoplasmique par la thapsigargine et le bloc de RyRs par le dantrol&#xE8;ne, mais pas suite &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;puisement des acides Ca (2 +) par les magasins bafilomycine. En revanche, NAADP pas &#xE0; &#xE9;voquer un Ca (2 +) transitoire dans des cellules HEK293 qui expriment RyR1 ou RyR3, mais il induit robuste Ca (2 +) transitoires dans les cellules qui stablement surexprim&#xE9;s ou TPC1 TPC2 et d&#x26;#39;une mani&#xE8;re qui a &#xE9;t&#xE9; bloqu&#xE9; suite &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;puisement de magasins acides par bafilomycine. Nous concluons que ADPRc d&#xE9;clencheurs Ca (2 +) communiqu&#xE9; par RyRs activation mais pas VAP, tandis que VAP active les NAADP mais pas RyRs.

Ad&#xE9;nosine diphosphate ribose cyclique active les r&#xE9;cepteurs de ryanodine, consid&#xE9;rant que NAADP active les canaux de domaine &#xE0; deux pores

Der Mechanismus, durch welche zyklische Adenosin Diphosphat Ribose (cADPR) und Nikotins&auml;ure-adenin-dinucleotid phosphat (NAADP) mobilisieren intrazellul&auml;re Ca(2+) Shops, bleibt umstritten. Es ist fraglich, ob cADPR Ryanodin-Rezeptoren (RyRs) direkt, wie urspr&uuml;nglich vorgeschlagen, oder indirekt durch die F&ouml;rderung von Ca(2+) Aufnahme in die Sarco/endoplasmic Reticulum von Sarco/endoplasmic Reticulum Ca(2+)-ATPasen regelt. Umgekehrt, obwohl wir vorgeschlagen haben, NAADP Endolysosomal Ca(2+) L&auml;den mobilisiert durch Aktivierung von zwei-Pore-Dom&auml;ne Kan&auml;le (TPCs), andere empfehlen NAADP direkt RyRs aktiviert. Wir beurteilen daher Ca(2+) Signale, hervorgerufen durch intrazellul&auml;re Dialyse aus einer Pipette Patch von cADPR und NAADP in HEK293 Zellen, die entweder TPC1, TPC2, RyR1 oder RyR3 stabil &uuml;berexprimiert. Keine &Auml;nderung in der intrazellul&auml;ren Ca(2+) Konzentration wurde durch cADPR in beiden Wildtyp HEK293 Zellen (die RyRs) oder in Zellen, die stabil, TPC1 und TPC2, bzw. &uuml;berexprimiert ausgel&ouml;st. Im Gegensatz dazu war eine deutliche Ca(2+) Transient von cADPR in HEK293 Zellen ausgel&ouml;st, die stabil RyR1 und RyR3 ausgedr&uuml;ckt. Am Ca(2+)-Transienten wurde nach Ersch&ouml;pfung der Endoplasmatisches Reticulum L&auml;den bei Thapsigargin und dem Block der RyRs von Dantrolen aber nicht nach Ersch&ouml;pfung der sauren Ca(2+)-Shops von Bafilomycin abgeschafft. Dagegen NAADP konnte ein Ca(2+) Transient in HEK293 Zellen zu evozieren, die RyR1 oder RyR3, ausgedr&uuml;ckt aber es induzierte robuste Ca(2+)-Transienten in Zellen, die TPC1 oder TPC2 stabil Pleuramesotheliom und in gewissem Sinne das blockierte folgende Dezimierung der sauren Shops nach Bafilomycin war. Wir schlie&szlig;en, dass cADPR Ca(2+) Version l&ouml;st durch die Aktivierung der RyRs aber nicht TPCs, w&auml;hrend NAADP TPCs aber nicht RyRs aktiviert.

Zyklische Adenosin Diphosphat Ribose aktiviert Ryanodin-Rezeptoren, wohingegen NAADP zwei-Pore-Dom&auml;ne Kan&auml;le aktiviert.

Il meccanismo da cui ciclico adenosina difosfato ribosio (cADPR) e acido nicotinico adenina-dinucleotide-fosfato (Battistoni) mobilitare intracellulare Ca(2+) negozi rimane controverso. &Egrave; aperta alla domanda se cADPR regola rianodinico recettori (RyRs) direttamente, come inizialmente proposto o indirettamente attraverso la promozione di assorbimento di Ca(2+) nel reticolo sarco/endoplasmic da reticolo sarco/endoplasmic Ca(2+)-ATPasi. Al contrario, anche se abbiamo proposto che Battistoni mobilita endolisosomiale Ca(2+) negozi attivando canali due poro dominio (TPCs), altri suggeriscono che Battistoni attivano direttamente RyRs. Abbiamo quindi valutato Ca(2+) segnali evocati da dialisi intracellulare da una pipetta di patch di cADPR e Battistoni in cellule HEK293 che iperesprimono stabile TPC1, TPC2, RyR1 o RyR3. Nessun cambiamento nella concentrazione intracellulare di Ca(2+) &egrave; stato innescato da cADPR in entrambe le cellule HEK293 wild-type (che sono privi di RyRs) o in cellule che iperesprimono stabile TPC1 e TPC2, rispettivamente. Al contrario, un marcata Ca(2+) transitorio &egrave; stato innescato da cADPR nelle cellule HEK293 che stabilmente espressa RyR1 e RyR3. Il transitorio Ca(2+) fu abolito dopo deplezione del reticolo endoplasmatico negozi da thapsigargin e blocco di RyRs di dantrolene ma non segue la deplezione di acidi Ca(2+) negozi di bafilomycin. Al contrario, BATTISTONI non &egrave; riuscito a evocare un transitorio di Ca(2+) nelle cellule HEK293 che espresso RyR1 o RyR3, ma essa indotta robusti Ca(2+) transitori in cellule che stabilmente overexpressed TPC1 o TPC2 e in un modo che &egrave; stato bloccato seguenti deplezione dei depositi acidi da bafilomycin. Concludiamo che cADPR innesca il rilascio Ca(2+) attivando RyRs ma non TPCs, mentre Battistoni attiva TPCs ma non RyRs.

Ciclico adenosina difosfato ribosio attiva rianodinico recettori, mentre Battistoni attiva i canali del dominio due-poro.

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NAADP&#x306F;TPCS&#x306A;&#x304F;RyRs&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;RyRs&#x306A;&#x304F;TPCS&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;cADPR&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

NAADP&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x74B0;&#x72B6;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E8C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30EA;&#x30DC;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;

&#xC5B4;&#xB5A4; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; diphosphate ribose (cADPR) &#xBC0F; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC0B0; &#xC0B0; &#xC544;&#xB370;&#xB2CC; &#xB514;&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC778;&#xC0B0; (NAADP) &#xB3D9;&#xC6D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xB17C;&#xB780;&#xC774; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. CADPR sarco/endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; Ca(2+) Atpases&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; sarco/endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0; Ca(2+) &#xAE00;&#xADC0;&#xB97C; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD558; &#xC5EC; ryanodine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (RyRs) &#xC9C1;&#xC811;, &#xC6D0;&#xB798; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5EC;&#xBD80; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC5F4;&#xB9B4;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, NAADP 2 &#xAE30; &#xACF5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xCC44;&#xB110; (TPCs)&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; endolysosomal Ca(2+) &#xB9E4;&#xC7A5;&#xC744; &#xB3D9;&#xC6D0; &#xC81C;&#xC548; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBE44;&#xB85D; &#xB2E4;&#xB978; NAADP &#xC9C1;&#xC811; Ryrs&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xC2DC;&#xAE30; &#xBC14;&#xB78D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; TPC1, TPC2, RyR1, &#xB610;&#xB294; RyR3 overexpress HEK293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; Cadpr&#xC640; NAADP&#xC758; &#xD328;&#xCE58; &#xD53C; &#xD3AB;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD22C; &#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC16;&#xB294; Ca(2+) &#xC2E0;&#xD638; &#xD3C9;&#xAC00;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xAC00; &#xC5B4;&#xB290; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; HEK293 &#xC138;&#xD3EC; (RyRs &#xC5C6;&#xB294;) &#xB610;&#xB294; &#xC140;&#xC744; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC01;&#xAC01; tpc1&#xC640; TPC2, overexpress Cadpr&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; cADPR RyR1 &#xBC0F; Ryr3&#xC744; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294; HEK293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; bafilomycin, thapsigargin &#xBC0F; dantrolene&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Ryrs&#xC758; &#xBE14;&#xB85D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xC0C1;&#xC810;&#xC758; &#xC18C;&#xBAA8; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC0B0; &#xC131; Ca(2+) &#xC0C1;&#xC810;&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; &#xB530;&#xB974;&#xC9C0; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, NAADP RyR1 &#xB610;&#xB294; RyR3, &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294; HEK293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xC5F0;&#xC0C1; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC548;&#xC815;&#xC801; overexpressed TPC1 &#xB610;&#xB294; TPC2 &#xC140;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; bafilomycin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0B0; &#xC131; &#xC0C1;&#xC810;&#xC758; &#xCC28;&#xB2E8;&#xB41C; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC18C;&#xBAA8; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; cADPR NAADP TPCs &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; Ryrs&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; RyRs &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; Tpcs&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xACB0;&#xB860;.

NAADP 2-&#xAE30; &#xACF5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; diphosphate ribose ryanodine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El mecanismo por el cual difosfato ribosa adenosina c&#xED;clico (cADPR) y el fosfato &#xE1;cido nicot&#xED;nico adenina dinucle&#xF3;tido (NAADP) movilizar intracelular de Ca (2 +) tiendas sigue siendo controvertido. Est&#xE1; abierto a la pregunta de si cADPR regula los receptores de rianodina (RyRs) directamente, como se propuso originalmente, o indirectamente mediante la promoci&#xF3;n de Ca (2 +) la absorci&#xF3;n en el ret&#xED;culo sarco / endopl&#xE1;smico por sarco / endopl&#xE1;smico ret&#xED;culo Ca (2 +)-ATPasas. Por el contrario, a pesar de que han propuesto que NAADP endolisos&#xF3;mica moviliza Ca (2 +) mediante la activaci&#xF3;n de las tiendas de dos canales de los poros de dominio (cursos de pol&#xED;tica comercial), otros sugieren que NAADP activa directamente RyRs. Por lo tanto, evalu&#xF3; Ca (2 +) las se&#xF1;ales provocadas por la di&#xE1;lisis intracelular de una pipeta y el parche de cADPR NAADP en HEK293 c&#xE9;lulas que sobreexpresan de forma estable ya sea TPC1, TPC2, RyR1 o RyR3. No hay cambios en intracelular de Ca (2 +) la concentraci&#xF3;n fue provocada por cADPR en cualquiera de tipo salvaje c&#xE9;lulas HEK293 (que carecen de RyRs) o en c&#xE9;lulas que sobreexpresan de forma estable y TPC1 TPC2, respectivamente. Por el contrario, una marcada Ca (2 +) transitoria fue provocada por cADPR en HEK293 c&#xE9;lulas que expresan de forma estable y RyR1 RyR3. El Ca (2 +) transitoria fue abolida despu&#xE9;s de agotamiento de las reservas por el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico thapsigargin y el bloque de RyRs de dantroleno, pero no tras el agotamiento de los &#xE1;cidos Ca (2 +) tiendas de bafilomicina. Por el contrario, NAADP no evocar un Ca (2 +) transitoria en c&#xE9;lulas HEK293 que expresaban RyR1 o RyR3, pero robusto inducida Ca (2 +) transitorios en c&#xE9;lulas que sobreexpresan establemente TPC1 o TPC2 y de una manera que se bloque&#xF3; tras el agotamiento tiendas de &#xE1;cidos mediante bafilomicina. Llegamos a la conclusi&#xF3;n de que cADPR desencadenantes Ca (2 +) por la liberaci&#xF3;n RyRs la activaci&#xF3;n de cursos de pol&#xED;tica comercial, pero no, mientras que los cursos de pol&#xED;tica comercial activa NAADP pero no RyRs.

La ribosa c&#xED;clica difosfato de adenosina activa los receptores de rianodina, Considerando NAADP Activa de dos canales de los poros de dominio

&#x77AC;&#x65F6;&#x53D7;&#x4F53;&#x6F5C;&#x5728;&#x89C4;&#x8303; (TRPC) &#x9891;&#x9053;&#x662F; Ca(2+) &#x900F;&#x6D89;&#x5ACC;&#x53C2;&#x4E0E;&#x591A;&#x79CD;&#x751F;&#x7406;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x6536;&#x7F29;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x6709;&#x529B;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x5242; TRPC &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9650;&#x5236;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x5206;&#x5DE5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x4E0E;&#x8868;&#x5F81; ML204 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x9896;&#x3001; &#x5F3A;&#x5927;&#x3001; &#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684; TRPC4 &#x901A;&#x9053;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;305,000 &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5206;&#x5B50;&#x5E93;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x8D44;&#x6599;&#x5E93;&#x7684;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x8367;&#x5149;&#x5C4F;&#x5E55;&#x7531; &mu; &#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x963B;&#x6B62;&#x80DE;&#x5185;&#x7ECF;&#x5D1B;&#x8D77;&#x4E2D;&#x7684;&#x9F20;&#x6807; TRPC4&beta; &#x523A;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;ML204 &#x6291;&#x5236; IC(50) &#x503C;&#x4E3A; 0.96 &mu; m TRPC4&beta; &#x4ECB;&#x5BFC;&#x80DE;&#x7ECF;&#x4E0A;&#x5347;&#x548C;&#x5C55;&#x51FA; 19-fold &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x8026;&#x5408; TRPC6 &#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53CD;&#x5BF9;&#x4E86;&#x3002;&#x5728;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5939;&#x5F55;&#x97F3;&#xFF0C;ML204 &#x963B;&#x6B62; TRPC4&beta; &#x7535;&#x6D41;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x901A;&#x8FC7; &mu; &#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;&#x523A;&#x6FC0;&#x6216;&#x80DE;&#x5185;&#x900F;&#x6790;&#x7684;&#x9E1F;&#x82F7; 5&#39;-3-O-(&#x786B;&#x4EE3;) &#x4E09;&#x78F7;&#x9178; &#xFF08;GTP&gamma;S&#xFF09;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0E; TRPC4 ML204 &#x76F4;&#x63A5;&#x4E92;&#x52A8;&#x6E20;&#x9053;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5E72;&#x6270;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x6CA1;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5757;&#x7684; 10-20 &mu; m ML204 TRPV1&#x3001; TRPV3&#x3001; TRPA1&#xFF0C;&#x548C; TRPM8&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; KCNQ2 &#x548C;&#x672C;&#x673A;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x94A0;&#x3001; &#x94BE;&#x548C;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x5728;&#x79BB;&#x4F53;&#x7684;&#x8C5A;&#x9F20;&#x56DE;&#x80A0;&#x808C; ML204 &#x963B;&#x6B62;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x7535;&#x6D41;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x6D74;&#x4E2D;&#x80C6;&#x78B1;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x6216;&#x80DE;&#x5185;&#x8F93;&#x6DB2;&#x7684; GTP&gamma;S&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5176;&#x5BF9;&#x672C;&#x673A; TRPC4 &#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x6548;&#x529B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;ML204 &#x8868;&#x793A;&#x6781;&#x597D;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684; TRPC4 &#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x9488;&#x5BF9; TRPC4 &#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

ML204&#xFF0C;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x8C03;&#x8282;&#x672C;&#x673A; TRPC4/C5 &#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x70C8;&#x6027;&#x62EE;&#x6297;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Transient receptor potential canonical (TRPC) channels are Ca(2+)-permeable nonselective cation channels implicated in diverse physiological functions, including smooth muscle contractility and synaptic transmission. However, lack of potent selective pharmacological inhibitors for TRPC channels has limited delineation of the roles of these channels in physiological systems. Here we report the identification and characterization of ML204 as a novel, potent, and selective TRPC4 channel inhibitor. A high throughput fluorescent screen of 305,000 compounds of the Molecular Libraries Small Molecule Repository was performed for inhibitors that blocked intracellular Ca(2+) rise in response to stimulation of mouse TRPC4Î² by Î¼-opioid receptors. ML204 inhibited TRPC4Î²-mediated intracellular Ca(2+) rise with an IC(50) value of 0.96 Î¼m and exhibited 19-fold selectivity against muscarinic receptor-coupled TRPC6 channel activation. In whole-cell patch clamp recordings, ML204 blocked TRPC4Î² currents activated through either Î¼-opioid receptor stimulation or intracellular dialysis of guanosine 5'-3-O-(thio)triphosphate (GTPÎ³S), suggesting a direct interaction of ML204 with TRPC4 channels rather than any interference with the signal transduction pathways. Selectivity studies showed no appreciable block by 10-20 Î¼m ML204 of TRPV1, TRPV3, TRPA1, and TRPM8, as well as KCNQ2 and native voltage-gated sodium, potassium, and calcium channels in mouse dorsal root ganglion neurons. In isolated guinea pig ileal myocytes, ML204 blocked muscarinic cation currents activated by bath application of carbachol or intracellular infusion of GTPÎ³S, demonstrating its effectiveness on native TRPC4 currents. Therefore, ML204 represents an excellent novel tool for investigation of TRPC4 channel function and may facilitate the development of therapeutics targeted to TRPC4.

Identification of ML204, a novel potent antagonist that selectively modulates native TRPC4/C5 ion channels.

Transient receptor potentiels canoniques (TRPC) cha&icirc;nes sont perm&eacute;ables &agrave; le Ca(2+) cation non s&eacute;lectifs impliqu&eacute;s dans diverses fonctions physiologiques, y compris la contractilit&eacute; du muscle lisse et la transmission synaptique. Cependant, manque de puissants inhibiteurs pharmacologiques s&eacute;lectives pour les canaux TRPC a limit&eacute; la d&eacute;limitation des r&ocirc;les de ces canaux dans les syst&egrave;mes physiologiques. Nous rapportons ici l&#39;identification et la caract&eacute;risation des ML204 comme un inhibiteur des canaux TRPC4 nouvelle, puissant et s&eacute;lectif. Un &eacute;cran fluorescent &agrave; haute capacit&eacute; de 305 000 compos&eacute;s du r&eacute;f&eacute;rentiel mol&eacute;culaire mol&eacute;cule de petites biblioth&egrave;ques a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute; pour les inhibiteurs qui bloquait intracellulaire Ca(2+) augmente en r&eacute;action &agrave; la stimulation des souris TRPC4&beta; de r&eacute;cepteurs opio&iuml;des &mu;. ML204 inhibe la m&eacute;diation TRPC4&beta; intracellulaire Ca(2+) mont&eacute;e avec une valeur d&#39;IC (50) de 0,96 &mu;m et expos&eacute; vu s&eacute;lectivit&eacute; contre l&#39;activation de canal TRPC6 coupl&eacute;e r&eacute;cepteurs muscarinique. Dans les enregistrements de whole-cell patch clamp, ML204 bloqu&eacute; TRPC4&beta; courants activ&eacute;s par la stimulation des r&eacute;cepteurs &mu;-opio&iuml;des ou dialyse intracellulaire de guanosine 5&#39; -3 - O-(thio) triphosphate (GTP&gamma;S), ce qui sugg&egrave;re une interaction directe de ML204 avec TRPC4 canaux plut&ocirc;t que toute ing&eacute;rence dans les voies de transduction de signal. &Eacute;tudes de s&eacute;lectivit&eacute; ont manifest&eacute; aucun bloc appr&eacute;ciable en 10-20 &mu;m ML204 de TRPV1, TRPV3, TRPA1 et TRPM8, ainsi que KCNQ2 et native canaux voltage-d&eacute;pendants, sodium, potassium et calcium dans les neurones des ganglions spinaux de la souris. Dans les myocytes il&eacute;al isol&eacute; de cobaye, ML204 bloqu&eacute; courants cation muscariniques activ&eacute;s par application du bain de carbachol ou infusion intracellulaire de GTP&gamma;S, ce qui d&eacute;montre son efficacit&eacute; sur les indig&egrave;nes TRPC4 courants. Par cons&eacute;quent, ML204 repr&eacute;sente un excellent outil novateur pour l&#39;investigation de la fonction du canal TRPC4 et peut faciliter le d&eacute;veloppement d&#39;agents th&eacute;rapeutiques cibl&eacute;s &agrave; TRPC4.

Identification de ML204, un roman puissant antagoniste qui module s&eacute;lectivement les canaux d&#39;ion TRPC4/C5 natifs.

Transienten Rezeptor potenzielle kanonische (TRPC) Kan&auml;le sind Ca(2+)-durchl&auml;ssigen unselektiv kation-Kan&auml;le, die vielf&auml;ltigen physiologischen Funktionen einschlie&szlig;lich Kontraktilit&auml;t der glatten Muskulatur und synaptischen &Uuml;bertragung in Verbindung gebracht. Allerdings hat die mangelnde potenter selektiver pharmakologische Inhibitoren f&uuml;r TRPC Kan&auml;le Abgrenzung der Rollen dieser Kan&auml;le in physiologischen Systeme begrenzt. Hier berichten wir die Identifizierung und Charakterisierung von ML204 als ein Roman, potenter und selektiver TRPC4-Kanal-Hemmer. Ein hohen Durchsatz fluoreszierende Bildschirm 305.000 Verbindungen um die molekulare Bibliotheken kleinen Molek&uuml;l Repository erfolgte f&uuml;r Inhibitoren, die intrazellul&auml;re Ca(2+) Anstieg der Antwort auf die Stimulation der Maus TRPC4&beta; blockiert durch &mu;-Opioid-Rezeptoren. ML204 TRPC4&beta;-vermittelte intrazellul&auml;re Ca(2+) Aufstieg mit einem IC (50) Wert von 0,96 &mu;m gehemmt und ausgestellt 19-fold Selektivit&auml;t gegen muskarinische Rezeptoren gekoppelt TRPC6 Kanal Aktivierung. Auf ganze Zellen Patch Clamp-Aufnahmen, blockiert ML204 TRPC4&beta; Str&ouml;me aktiviert durch &mu;-Opioid-Rezeptor-Stimulation oder intrazellul&auml;re Dialyse von Guanosin 5&#39; -3 - O-(Thio) Triphosphat (GTP&gamma;S), was auf eine direkte Interaktion von ML204 mit TRPC4 Kan&auml;le anstatt jeder Eingriff die Signaltransduction Bahnen. Selektivit&auml;t Studien zeigten keine nennenswerte Block um 10-20 &mu;m ML204 TRPV1, TRPV3, TRPA1, und TRPM8, sowie KCNQ2 und native Spannung-Gating, Natrium, Kalium und Kalzium-Kan&auml;le in Maus Dorsal Root Ganglion Neuronen. In isolierten Meerschweinchen Ileum Myocytes blockiert ML204 Muskarinischer kation Str&ouml;mungen durch Bad Anwendung der Carbachol oder intrazellul&auml;ren Infusion von GTP&gamma;S, Nachweis ihrer Wirksamkeit auf native TRPC4 Str&ouml;me aktiviert. ML204 dar, ein exzellentes neuartiges Werkzeug zur Untersuchung der TRPC4-Kanal-Funktion und kann erleichtern die Entwicklung von Therapeutika, die auf TRPC4 ausgerichtet.

Ermittlung von ML204, eine neuartige potenter Antagonist, die selektiv native TRPC4/C5-Ionenkan&auml;le moduliert.

Transient receptor potenziali canonici (TRPC) i canali sono Ca(2+)-permeabili canali non selettivi cazione implicati in diverse funzioni fisiologiche, tra cui contrattilit&agrave; muscolare liscia e trasmissione sinaptica. Tuttavia, mancanza di potenti inibitori selettivi farmacologici per canali TRPC ha limitato la delineazione dei ruoli di questi canali in sistemi fisiologici. Qui riportiamo l&#39;identificazione e la caratterizzazione di ML204 come un romanzo, potente e selettivo inibitore di canale TRPC4. Uno schermo fluorescente ad alto rendimento di 305.000 composti di molecolare librerie piccola molecola Repository &egrave; stato eseguito per inibitori che ha bloccato l&#39;aumento Ca(2+) intracellulare in risposta alla stimolazione del mouse TRPC4&beta; da recettori oppioidi &mu;. ML204 inibita TRPC4&beta;-mediata intracellulare Ca(2+) rise con un valore IC(50) di 0.96 &mu;m ed esposto 19-fold selettivit&agrave; contro muscarinico TRPC6 recettore accoppiato attivazione canale. Nelle registrazioni di cellule intere patch clamp, ML204 bloccato TRPC4&beta; correnti attivate attraverso la stimolazione del recettore &mu;-oppioidi o dialisi intracellulare di guanosina 5&#39; -3 - O-(thio) trifosfato (GTP&gamma;S), suggerendo un&#39;interazione diretta del ML204 con TRPC4 canali piuttosto che qualsiasi interferenza con le vie di trasduzione del segnale. Studi di selettivit&agrave; ha mostrati alcun apprezzabile blocco di 10-20 &mu;m ML204 di TRPV1, TRPV3, TRPA1 e TRPM8, nonch&eacute; KCNQ2 e nativi tensione-gated, sodio, potassio e calcio canali in neuroni di ganglio dorsale principale del mouse. In ileale miociti isolati di cavia, ML204 bloccato correnti cazione muscarinico attivate da bagno applicazione di Carbacolo o intracellulare infusione di GTP&gamma;S, dimostrando la sua efficacia su native TRPC4 correnti. Pertanto, ML204 rappresenta uno strumento eccellente romanzo di indagine della funzione del canale di TRPC4 e possono facilitare lo sviluppo di terapie mirate a TRPC4.

Identificazione di ML204, un antagonista potente romanzo che modula in modo selettivo nativi scanalature dello ione di TRPC4/C5.

&#x904E;&#x6E21;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6B63;&#x898F;&#x5316; (TRPC) &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x6027;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B; Ca(2+) &#x900F;&#x904E;&#x306E;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;TRPC &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x63CF;&#x5199;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x540C;&#x5B9A;&#x3068; ML204 &#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3001;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x3068;&#x9078;&#x629E;&#x7684; TRPC4 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x677F; 305,000 &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x30EA;&#x30DD;&#x30B8;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; TRPC4&beta; &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4E0A;&#x6607;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x308B; &mu;-&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;ML204 TRPC4&beta; &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4E0A;&#x6607; 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10-20 &mu; m TRPV1 ML204&#x3001;TRPV3&#x3001;TRPA1 &#x3068; TRPM8&#x3001;&#x3068;&#x3057;&#x3066; KCNQ2 &#x3068;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x96FB;&#x4F4D;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5F8C;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30E2;&#x30EB;&#x30E2;&#x30C3;&#x30C8;&#x6458;&#x51FA;&#x56DE;&#x8178; myocytes &#x3067; ML204 &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30D0;&#x30B9; &#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; TRPC4 &#x96FB;&#x6D41;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059; GTP&gamma;S &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x6CE8;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;ML204 &#x306F; TRPC4 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3001;TRPC4 &#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

ML204&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E; TRPC4/C5 &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x8ABF;&#x3057;&#x305F;&#x65B0;&#x898F;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x306E; id&#x3002;

&#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &#xC815;&#xC2DD; (TRPC) &#xCC44;&#xB110;&#xC740; Ca(2+) &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; &#xC218;&#xCD95; &#xBC0F; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, TRPC &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xBB18;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC124;, &#xAC15;&#xB825;&#xD55C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; TRPC4 &#xCC44;&#xB110; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; ml204&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xACE0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xC758; 305,000 &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xD615;&#xAD11; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; &mu;-opioid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; trpc4&beta;&#xC758; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xC800; &#xD574;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. ML204 TRPC4&beta; &#xC911;&#xC7AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xC0C1;&#xC2B9; 0.96 &mu; m&#xC758; IC(50) &#xAC12;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xACB0;&#xD569; TRPC6 &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 19-fold &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xB179;&#xC74C; ML204 TRPC4&beta; &#xC804;&#xB958; &mu;-opioid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC790;&#xADF9; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD22C; &#xC11D; guanosine 5&#39;-3&#xC758;-O-(thio)&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC0BC;&#xC778;&#xC0B0; (GTP&gamma;S), &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; trpc4&#xC640; ml204&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C;&#xC640; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xAC04;&#xC12D; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC2E0; &#xCC44;&#xB110;. &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xC5F0;&#xAD6C; 10-20 &mu; m TRPV1 ML204, TRPV3, TRPA1, &#xBC0F; TRPM8, &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; KCNQ2 &#xBC0F; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968;, &#xCE7C;&#xB968; &#xBC0F; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC9C0; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBE14;&#xB85D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC808;&#xC5F0;&#xB41C; &#xAE30;&#xB2C8; &#xB3FC;&#xC9C0; ileal myocytes&#xC5D0;&#xC11C; ML204 carbachol&#xC758; &#xBAA9;&#xC695; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xB610;&#xB294; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; TRPC4 &#xC804;&#xB958;&#xC5D0; &#xADF8; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; GTP&gamma;S&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC8FC;&#xC785;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; muscarinic &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC804;&#xB958; &#xCC28;&#xB2E8;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; ML204 TRPC4 &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6CC;&#xB96D;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; trpc4&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC81C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

ML204, &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; TRPC4/C5 &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xBCC0;&#xC870; &#xC18C;&#xC124; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC801;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Transitoria receptor potencial can&oacute;nica (TRPC) son permeables al Ca(2+) canales no selectivo implicados en diversas funciones fisiol&oacute;gicas, incluyendo la contractilidad del m&uacute;sculo liso y transmisi&oacute;n sin&aacute;ptica. Sin embargo, falta de potentes inhibidores selectivos de la farmacol&oacute;gicos para canales TRPC ha limitado la delineaci&oacute;n de las funciones de estos canales en sistemas fisiol&oacute;gicos. Aqu&iacute; divulgamos la identificaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n de ML204 como un novela, potente y selectivo inhibidor de canal TRPC4. Una pantalla fluorescente de alto rendimiento de 305.000 compuestos del repositorio de mol&eacute;cula peque&ntilde;a de bibliotecas Molecular fue realizada para inhibidores que bloquean el aumento de CA intracelular en respuesta a la estimulaci&oacute;n del rat&oacute;n TRPC4&beta; por los receptores &mu;-opioides. ML204 inhibe el aumento de CA intracelular mediada por TRPC4&beta; con un valor IC(50) de 0,96 &mu;m y exhibi&oacute; 19-fold selectividad contra TRPC6 de acoplamiento del receptor muscar&iacute;nico activaci&oacute;n de canal. En grabaciones de abrazadera de parche de c&eacute;lulas completas, ML204 bloqueado TRPC4&beta; corrientes activadas a trav&eacute;s de la estimulaci&oacute;n de los receptores opioides &mu; o di&aacute;lisis intracelular de la guanosina 5&#39; -3 - O-(metiltio) trifosfato (GTP&gamma;S), lo que sugiere una interacci&oacute;n directa de ML204 con TRPC4 canales en lugar de cualquier interferencia con las v&iacute;as de transducci&oacute;n de se&ntilde;al. Estudios de selectividad no demostrados ning&uacute;n bloque apreciable por 10-20 &mu;m ML204 de TRPV1, TRPV3, TRPA1 y TRPM8, as&iacute; como KCNQ2 y canales sodio, potasio y calcio voltaje-bloqueados nativos en neuronas de ganglio de ra&iacute;z dorsal de rat&oacute;n. En miocitos de &iacute;leon aislado conejillo de Indias, ML204 bloqueado corrientes cati&oacute;n muscar&iacute;nicos activadas por aplicaci&oacute;n de ba&ntilde;o de Carbacol o infusi&oacute;n intracelular de GTP&gamma;S, demostrando su eficacia en corrientes de TRPC4 nativas. Por lo tanto, ML204 representa una novedosa herramienta excelente para la investigaci&oacute;n de la funci&oacute;n de canal de TRPC4 y puede facilitar el desarrollo de terapias dirigidas a TRPC4.

Yingmin Zhu

Department of Integrative Biology and Pharmacology

The University of Texas Health Science Center at Houston

Cell-based Calcium Assay for Medium to High Throughput Screening of TRP Channel Functions using FlexStation 3