identification-protein-interacting-partners-using-tandem-affinity

Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification

A critical and often limiting step in understanding the function of host and viral proteins is the identification of interacting cellular or viral protein ...

Imperial College London 

Parallele chemische und phylogenetische Untersuchung eine marine Cyanobacterium aus Panama f&uuml;hrte zur Isolierung von zwei neuen PKS-NRP-abgeleitete Verbindungen, Viridamides A und B. Ihre Strukturen wurden durch NMR und Masse spektroskopische Methoden und die absoluten Konfigurationen, die von Marfeys-Methode und chirale HPLC-Analyse zugewiesen bestimmt. Neben sechs standard, N-methyliert amino und hydroxy S&auml;uren enthielt diese Metaboliten der strukturell neuartigen 5-Methoxydec-9-Ynoic-S&auml;ure-Gruppe und eine ungew&ouml;hnliche Prolin Methyl Ester Endstation. Diese Cyanobacterium war morphologisch als Oscillatoria Nigro-Viridis und seiner 16S rDNA Sequenz wird hier zum ersten Mal gemeldet. Phylogenetische Analyse dieser Sequenzdaten hat O. Nigro-Viridis Stamm OSC3L, verwandt mit zwei anderen marinen Cyanobakterien Gattungen Trichodesmium und Blennothrix werden identifiziert. Viridamide A zeigte Antitrypanosomal-Aktivit&auml;t mit einer IC50 1.1 MicroM und Antileishmanial T&auml;tigkeit mit einer IC50 1,5 MicroM.

Viridamides A und B, Lipodepsipeptides mit Antiprotozoal Aktivit&auml;t von der marine Cyanobacterium Oscillatoria Nigro-Viridis.

Parallela indagine chimica e filogenetica di un cyanobacterium marino da Panama ha condotto all&#39;isolamento di due nuovi PKS-PNR composti derivati, viridamides A e B. Loro strutture sono state determinate da NMR e metodi spettroscopici di massa e le configurazioni assolute assegnate dal metodo di Marfey e analisi HPLC chirale. Oltre ai sei standard, N-metilato amino e idrossi acidi, questi metaboliti contenevano lo strutturalmente romanzo moiety acido 5-methoxydec-9-ynoic e un insolito prolina metil estere capolinea. Morfologicamente, questo cyanobacterium &egrave; stato identificato come Oscillatoria nigro-viridis, e la sua sequenza di rDNA 16S &egrave; segnalato qui per la prima volta. Analisi filogenetica di questi dati di sequenza ha identificato il ceppo o. nigro-viridis OSC3L a essere strettamente a due altri generi cianobatterica marini, Trichodesmium e Blennothrix. Viridamide A ha mostrato attivit&agrave; antitrypanosomal con una CL50 di 1,1 microM e antileishmanial l&#39;attivit&agrave; con una CL50 di 1,5 microM.

Viridamides A e B, lipodepsipeptides con attivit&agrave; antiprotozoi dal cyanobacterium marino Oscillatoria nigro-viridis.

Enqu&ecirc;te parall&egrave;le de produits chimique et phylog&eacute;n&eacute;tique d&#39;une cyanobact&eacute;rie marine du Panama a conduit &agrave; l&#39;isolement de deux nouveaux compos&eacute;s d&eacute;riv&eacute;s du PKS-PNR, viridamides A et B. Leurs structures ont &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;es par RMN et m&eacute;thodes de spectroscopie de masse et les configurations absolues attribu&eacute;es par la m&eacute;thode de Marfey et de l&#39;analyse HPLC chirale. Outre six standards, N-m&eacute;thyl&eacute; amin&eacute;s et hydroxyl&eacute;s acides, ces m&eacute;tabolites contenaient la roman structurellement portion acide 5-methoxydec-9-yno&iuml;que et un terminus d&#39;ester de m&eacute;thyle proline inhabituelle. Morphologiquement, cette cyanobact&eacute;rie a &eacute;t&eacute; identifi&eacute;e comme Oscillatoria nigro-viridis, et sa s&eacute;quence de l&#39;ADNr 16 s est rapport&eacute;e ici pour la premi&egrave;re fois. Analyse phylog&eacute;n&eacute;tique de ces donn&eacute;es de s&eacute;quence a identifi&eacute; la souche o. nigro-viridis OSC3L &eacute;troitement li&eacute; &agrave; deux autres marins genres cyanobact&eacute;ries, Trichodesmium et Blennothrix. Viridamide A une activit&eacute; d&#39;antitrypanosomal avec une IC50 de 1.1 activit&eacute; microM et antileishmanial avec une IC50 de 1,5 microM.

Viridamides A et B, lipodepsipeptides avec une activit&eacute; antiprotozoaire de la cyanobact&eacute;rie marine Oscillatoria nigro-viridis.

&#x5DF4;&#x62FF;&#x9A6C;&#x6D77;&#x6D0B;&#x84DD;&#x85FB;&#x5E76;&#x884C;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684; PK &#x6B21;&#x751F;&#x884D;&#x751F;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;viridamides A &#x548C; B&#x3002;&#x5176;&#x7ED3;&#x6784;&#x662F;&#x7531;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x548C;&#x8D28;&#x8C31;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x7531; Marfey &#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x624B;&#x6027;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5206;&#x6790;&#x5206;&#x914D;&#x7684;&#x7EDD;&#x5BF9;&#x914D;&#x7F6E;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x516D;&#x4E2A;&#x6807;&#x51C6;&#x3001; N-&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x548C;&#x7F9F;&#x57FA;&#x9178;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x6240;&#x8F7D;&#x7ED3;&#x6784;&#x65B0;&#x9896; 5-methoxydec-9-ynoic &#x9178;&#x548C;&#x975E;&#x540C;&#x5BFB;&#x5E38;&#x7684;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x7532;&#x57FA;&#x916F;&#x603B;&#x7AD9;&#x3002;&#x5F62;&#x6001;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x6B64;&#x84DD;&#x85FB;&#x88AB;&#x8BA4;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x98A4; nigro-&#x7EFF;&#x8272;&#xFF0C;&#x548C;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x9053;&#x5176; 16S rDNA &#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5E8F;&#x5217;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86; O.nigro &#x7EFF;&#x8272;&#x5E94;&#x53D8; OSC3L &#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5176;&#x4ED6;&#x6D77;&#x6D0B;&#x84DD;&#x85FB;&#x5C5E;&#xFF0C;&#x7EA2;&#x6D77;&#x675F;&#x6BDB;&#x85FB;&#x548C; Blennothrix&#x3002;Viridamide A &#x8868;&#x660E; IC50 1.1 microM &#x548C; antileishmanial &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E0E; IC50 &#x7684; 1.5 microM antitrypanosomal &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

Viridamides A &#x548C; B&#xFF0C;lipodepsipeptides &#x4E0E; antiprotozoal &#x6D3B;&#x52A8;&#x4ECE;&#x6D77;&#x6D0B;&#x84DD;&#x85FB;&#x98A4; nigro &#x7EFF;&#x8272;&#x3002;

Parallel chemical and phylogenetic investigation of a marine cyanobacterium from Panama led to the isolation of two new PKS-NRPS-derived compounds, viridamides A and B. Their structures were determined by NMR and mass spectroscopic methods, and the absolute configurations assigned by Marfey's method and chiral HPLC analysis. In addition to six standard, N-methylated amino and hydroxy acids, these metabolites contained the structurally novel 5-methoxydec-9-ynoic acid moiety and an unusual proline methyl ester terminus. Morphologically, this cyanobacterium was identified as Oscillatoria nigro-viridis, and its 16S rDNA sequence is reported here for the first time. Phylogenetic analysis of these sequence data has identified O. nigro-viridis strain OSC3L to be closely related to two other marine cyanobacterial genera, Trichodesmium and Blennothrix. Viridamide A showed antitrypanosomal activity with an IC50 of 1.1 microM and antileishmanial activity with an IC50 of 1.5 microM.

Viridamides A and B, lipodepsipeptides with antiprotozoal activity from the marine cyanobacterium Oscillatoria nigro-viridis.

&#x4E26;&#x5217;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7CFB;&#x7D71;&#x5B66;&#x7684;&#x8ABF;&#x67FB;&#x6D77;&#x6D0B;&#x85CD;&#x85FB;&#x30D1;&#x30CA;&#x30DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E; 2 &#x3064;&#x65B0;&#x3057;&#x3044; PKS NRPS &#x6D3E;&#x751F;&#x7269;&#x3001;viridamides A &#x3068; B &#x306E;&#x5B64;&#x7ACB;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x305D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F; NMR &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3084; Marfey &#x6CD5;&#x3068;&#x30AD;&#x30E9;&#x30EB; HPLC &#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7D76;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x69CB;&#x6210;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306B;&#x516D;&#x3064;&#x3001;n-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x6A19;&#x6E96;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x9178;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x65B0;&#x5947;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x306E; 5 methoxydec 9 ynoic &#x9178;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3; &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x306E;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x672B;&#x7AEF;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;, &#x3053;&#x306E;&#x3089;&#x3093;&#x85FB;&#x30E6;&#x30EC;&#x30E2;&#x5C5E;&#x611B;&#x5531;-&#x30CD;&#x30B6;&#x30B5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x306E; 16S rDNA &#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x89E3;&#x6790; O. &#x611B;&#x5531;&#x30CD;&#x30B6;&#x30B5;&#x3072;&#x305A;&#x307F; 2 &#x4ED6;&#x6D77;&#x6D0B;&#x30B7;&#x30A2;&#x30CE; &#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x5C5E;&#x306B;&#x3001;Trichodesmium &#x3068; Blennothrix &#x304C;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B; OSC3L &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Viridamide A&#x3001;1.1 microM &#x30FB; &#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E; IC50 &#x306F; 1.5 microM &#x306E; IC50 &#x3068;&#x306E;&#x6297;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Viridamides A &#x3068; B&#x3001;lipodepsipeptides &#x6D77;&#x6D0B;&#x85CD;&#x85FB;&#x30E6;&#x30EC;&#x30E2;&#x5C5E;&#x611B;&#x5531;&#x30CD;&#x30B6;&#x30B5;&#x304B;&#x3089;&#x6297;&#x539F;&#x866B;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3002;

&#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; PKS NRPS &#xC720;&#xB798; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;, viridamides A&#xC640; B&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD30C;&#xB098;&#xB9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xC591; cyanobacterium&#xC758; &#xBCD1;&#xB82C; &#xD654;&#xD559;&#xACFC; phylogenetic &#xC870;&#xC0AC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; NMR &#xBC0F; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84; &#xAD11; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xC640; Marfey&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xACFC; &#xD0A4; &#xB784; HPLC &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD560;&#xB2F9; &#xB41C; &#xC808;&#xB300; &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. 6 &#xAC1C; &#xD45C;&#xC900;, N &#xAC20; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC640; hydroxy &#xC0B0;, &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; metabolites &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC18C;&#xC124; 5-methoxydec-9-ynoic acid moiety &#xBC0F; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xBA54; &#xD2F8; &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xC885;&#xC810; &#xD3EC;&#xD568;. &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;,&#xC774; cyanobacterium&#xB294; Oscillatoria nigro-&#xD480;, &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; 16S rDNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB370;&#xC774;&#xD130; phylogenetic &#xBD84;&#xC11D; &#xC624; nigro &#xD480; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB450; &#xD574;&#xC591; cyanobacterial &#xC7A5;&#xAD70;, Trichodesmium &#xBC0F; Blennothrix &#xAD00;&#xB828; osc3l&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. Viridamide A 1.5 Microm&#xC758; ic50&#xC640; 1.1 Microm&#xACFC; antileishmanial &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; IC50 antitrypanosomal &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;.

Viridamides A&#xC640; B, &#xD574;&#xC591; cyanobacterium Oscillatoria nigro &#xD480;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xB3D9; antiprotozoal lipodepsipeptides.

La investigaci&oacute;n qu&iacute;mica y filogen&eacute;tica paralela de una cianobacteria Marina de Panam&aacute; llev&oacute; al aislamiento de dos nuevos derivados de PKS-PNR compuestos, viridamides A y B. Sus estructuras se determinaron mediante RMN y m&eacute;todos espectrosc&oacute;picos de masa y las configuraciones absolutas asignadas por el m&eacute;todo de Marfey y el an&aacute;lisis HPLC quiral. Adem&aacute;s de seis est&aacute;ndar, N-metilados amino&aacute;cidos e hidroxis &aacute;cidos, estos metabolitos contienen la mol&eacute;cula de &aacute;cido 5-methoxydec-9-ynoic novela estructural y una terminal de &eacute;ster met&iacute;lico de prolina inusual. Morfol&oacute;gicamente, esta cianobacteria fue identificado como Oscillatoria nigro-viridis, y su secuencia del rDNA 16S se divulga aqu&iacute; por primera vez. El an&aacute;lisis filogen&eacute;tico de estos datos de la secuencia ha identificado o. nigro-viridis cepa OSC3L a estar estrechamente relacionada con otras marinas cianobacterias g&eacute;neros, Trichodesmium y Blennothrix. Viridamide A demostr&oacute; actividad inmunomoduladora con un IC50 de 1.1 actividad microM y costosas con una IC50 de 1.5 microM.

Viridamides A y B, lipodepsipeptides con actividad de antiprotozoario de la cianobacteria Marina Oscillatoria nigro-viridis.

Un nuovo derivato indanone (1) e due nuovi diterpenoidi (2 e 3), insieme a tre noti flavonoidi, sono state isolate da un estratto etanolico delle foglie di Croton steenkampianus. La struttura di 2 &egrave; stato risolto da singolo-cristallo analisi di diffrazione dei raggi x, mentre quelli di 1 e 3 sono stati stabiliti principalmente dai metodi di spettroscopiche NMR 1D e 2D. I composti isolati sono stati testati per la loro attivit&agrave; antiplasmodial e citotossicit&agrave;. Dosaggi di Antiplasmodial contro i ceppi clorochino-sensibile (D10 e D6) e i ceppi clorochino-resistenti del Plasmodium falciparum (Dd2 e W2) ha mostrato che mescola 2 dato moderata attivit&agrave; a 9,1-15,8 &mu;M, mentre nessuno dei composti erano citotossica contro cellule Vero.

Diterpeni bioattivi e altri costituenti del Croton steenkampianus.

&#x65B0; indanone &#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53; (1) &#x3068; 2 &#x3064;&#x306E;&#x65B0;&#x30B8;&#x30C6;&#x30EB;&#x30DA;&#x30F3; (2 &#x3068; 3)&#x3001;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B; 3 &#x3064;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30DC;&#x30CE;&#x30A4;&#x30C9;&#x306F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E; steenkampianus &#x306E;&#x8449;&#x306E;&#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x62BD;&#x51FA;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x3068; 3 &#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E3B;&#x306B; 1 D &#x304A;&#x3088;&#x3073; 2 D NMR &#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; 2 &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x5358;&#x7D50;&#x6676; x &#x7DDA;&#x56DE;&#x6298;&#x5206;&#x6790;&#x3001;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E; antiplasmodial &#x6D3B;&#x52D5;&#x53CA;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Antiplasmodial &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; chloroquine &#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x7CFB;&#x7D71; &#xFF08;D10 &#x3068; D6&#xFF09; &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30AD;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x83CC;&#x682A; (Dd2 &#x3068; W2) &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x3069;&#x308C;&#x3082; Vero &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x9593;&#x5316;&#x5408;&#x7269; 2 &#x304C; 9.1 15.8 &mu; M &#x3067;&#x306E;&#x4E2D;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x751F;&#x7406;&#x6D3B;&#x6027;&#x30B8;&#x30C6;&#x30EB;&#x30DA;&#x30F3;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E; steenkampianus&#x3002;

Ein neues Indanone-Derivat (1) und zwei neue Diterpenoids (2 und 3), zusammen mit drei bekannten Flavonoide, wurden von einem Ethanolextrakt der Bl&auml;tter der Croton Steenkampianus isoliert. Die Struktur der 2 wurde durch Einzel-Kristall R&ouml;ntgenbeugung Analyse, gel&ouml;st, die von 1 und 3 haupts&auml;chlich von 1D und 2D NMR spektroskopische Methoden eingef&uuml;hrt wurden. Die isolierten Verbindungen wurden f&uuml;r ihre Antiplasmodial T&auml;tigkeit und Zytotoxizit&auml;t gepr&uuml;ft. Antiplasmodial Assays gegen Chloroquin-anf&auml;lligen Sorten (D10 und D6) und die Chloroquin-resistente St&auml;mme (Dd2 und W2) von Plasmodium Falciparum zeigte, dass zusammengesetzte 2 moderate Aktivit&auml;ten bei 9.1-15.8 &mu;M, gab, w&auml;hrend keiner der Verbindungen zytotoxisch gegen Vero-Zellen waren.

Bioaktive Diterpene und andere Bestandteile der Croton Steenkampianus.

&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x831A;&#x916E;&#x884D;&#x751F;&#x7269; (1) &#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x65B0;&#x5316;&#x5408;&#x7269; &#xFF08;2 &#x548C; 3&#xFF09;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x9EC4;&#x916E;&#x7C7B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x88AB;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x5DF4;&#x8C46; steenkampianus &#x53F6;&#x4E59;&#x9187;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x4E2D;&#x3002;&#x800C; 1 &#x548C; 3 &#x7684;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684; 1d &#x548C; 2D &#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x5149;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x5355;&#x6676; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x884D;&#x5C04;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x88AB;&#x89E3;&#x51B3; 2 &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684; antiplasmodial &#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;Antiplasmodial &#x6D4B;&#x5B9A;&#x5BF9;&#x6C2F;&#x55B9;&#x654F;&#x611F;&#x682A; (D10 &#x548C; D6) &#x53CA;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6C2F;&#x55B9;&#x6297;&#x836F;&#x6027;&#x83CC;&#x682A; &#xFF08;Dd2 &#x548C; W2&#xFF09; &#x8868;&#x660E;&#x590D;&#x5408; 2 &#x7ED9;&#x9002;&#x5EA6;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5728; 9.1-15.8 &mu; M&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6CA1;&#x6709;&#x5BF9; Vero &#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3002;

&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4E8C;&#x841C;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x6210;&#x5206;&#x7684;&#x5DF4;&#x8C46; steenkampianus&#x3002;

A new indanone derivative (1) and two new diterpenoids (2 and 3), together with three known flavonoids, have been isolated from an ethanol extract of the leaves of Croton steenkampianus. The structure of 2 was solved by single-crystal X-ray diffraction analysis, whereas those of 1 and 3 were established mainly by 1D and 2D NMR spectroscopic methods. The isolated compounds were tested for their antiplasmodial activity and cytotoxicity. Antiplasmodial assays against chloroquine-susceptible strains (D10 and D6) and the chloroquine-resistant strains (Dd2 and W2) of Plasmodium falciparum showed that compound 2 gave moderate activities at 9.1-15.8 Î¼M, while none of the compounds were cytotoxic against Vero cells.

Bioactive diterpenes and other constituents of Croton steenkampianus.

Un nouveau d&eacute;riv&eacute; de l&#39;indanone (1) et deux diterp&eacute;no&iuml;des nouvelles (2 et 3), ainsi que trois flavono&iuml;des connus, ont &eacute;t&eacute; isol&eacute;s de l&#39;extrait &agrave; l&#39;&eacute;thanol des feuilles de Croton steenkampianus. La structure de 2 a &eacute;t&eacute; r&eacute;solue par analyse de la diffraction des rayons x, un cristal unique alors que celles de 1 et 3 ont &eacute;t&eacute; &eacute;tablies principalement par les m&eacute;thodes de spectroscopie RMN 1D et 2D. Les compos&eacute;s isol&eacute;s ont &eacute;t&eacute; test&eacute;s pour leur activit&eacute; antiplasmodiale et la cytotoxicit&eacute;. Dosages antiplasmodique contre les souches sensibles &agrave; la chloroquine (D10 et D6) et les souches r&eacute;sistantes &agrave; la chloroquine (Dd2 et W2) de Plasmodium falciparum ont montr&eacute; que le compos&eacute; 2 donnait activit&eacute;s mod&eacute;r&eacute;es 9.1-15,8 &mu;m, alors qu&#39;aucun des compos&eacute;s &eacute;taient cytotoxique contre les cellules Vero.

Diterp&egrave;nes bioactifs et autres constituants du Croton steenkampianus.

&#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; indanone &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4; (1) &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; diterpenoids (2, 3), 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xD50C; &#xB77C; &#xBCF4;&#xB178; &#xC774;&#xB4DC;, &#xD568;&#xAED8; &#xBC14;&#xD034; steenkampianus&#xC758; &#xC78E;&#xC758; &#xC5D0;&#xD0C4;&#xC62C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 2&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; 1&#xACFC; 3&#xC758; 1d &#xBC0F; 2D NMR &#xBD84; &#xAD11; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC124;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xB2E8;&#xC77C;-&#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; x-&#xC120; &#xD68C;&#xC808; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; antiplasmodial &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD074;&#xB85C;&#xB85C;&#xD038; &#xCDE8;&#xC57D; &#xC885;&#xC790; (d 10&#xACFC; d 6)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Antiplasmodial &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; Plasmodium falciparum &#xD074;&#xB85C;&#xB85C;&#xD038; &#xB0B4;&#xC131; &#xBCC0;&#xC885; (Dd2 &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; W2) &#xB3D9;&#xC548; &#xC544;&#xBB34;&#xB3C4; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; cytotoxic Vero &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF5;&#xD569; 2&#xC758; 9.1 15.8 &mu; M&#xC5D0;&#xC11C; &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC900;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;.

&#xC0DD;&#xB9AC; &#xD65C;&#xC131; diterpenes&#xC640; &#xBC14;&#xD034; steenkampianus&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC131;&#xBD84;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Un nuevo derivado de indanone (1) y dos clerodan nuevas (2 y 3), junto con tres flavonoides conocidos, se han aislado de un extracto de etanol de las hojas de Croton steenkampianus. La estructura de 2 se resolvi&oacute; monocristal an&aacute;lisis de difracci&oacute;n de rayos x, mientras que las de 1 y 3 se establecieron principalmente por m&eacute;todos espectrosc&oacute;picos de 1D y 2D NMR. Los compuestos aislados fueron probados por su actividad antiplasmodial y citotoxicidad. Ensayos de Antiplasmodial contra las cepas sensibles a cloroquina (D10 y D6) y las cepas resistentes a la cloroquina (Dd2 y W2) de Plasmodium falciparum mostraron que el compuesto 2 dio a moderada actividades en 9.1-15,8 &mu;M, mientras que ninguno de los compuestos citot&oacute;xico contra c&eacute;lulas Vero.

Diterpenos bioactivos y otros componentes de Croton steenkampianus.

&#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x5185;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x8BB8;&#x591A;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x5730;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9633;&#x6027;&#x6401;&#x6D45; RNA &#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5E76;&#x89C4;&#x8303;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; RNA &#x590D;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;&#x6838;&#x4EC1;&#x7D20;&#xFF0C;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x6838;&#x4EC1;&#x6216;&#x8005;&#x7A7F;&#x68AD;&#x5728;&#x6EE1;&#x5E03;&#x78F7;&#xFF0C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C;&#x52A8;&#x7269;&#x533B;&#x9662;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2; (&#x71C3;&#x6599;) &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; 3&#39; &#x975E;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x533A;&#x57DF; &#xFF08;&#x5F02;&#x5E38;&#xFF09;&#x3002;&#x6838;&#x4EC1;&#x7D20;&#x8FD8;&#x80FD;&#x5F62;&#x6210;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x91CD;&#x7EC4;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B;&#x75C5;&#x6BD2; NS6 &#x548C;-7 (NS6/7&#xFF09;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ECE;&#x732B;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2; &#xFF08;p76 &#x6216; NS6/7&#xFF09; &#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECE;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x732B;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0A; copurified&#x3002;&#x5728;&#x71C3;&#x6599;&#x7535;&#x6C60;&#x6C7D;&#x8F66;&#x611F;&#x67D3; &#xFF1B; &#x671F;&#x95F4;&#x4E0D;&#x4FEE;&#x6539;&#x6838;&#x4EC1;&#x7D20; RNA &#x6C34;&#x5E73;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x6709;&#x4EBA;&#x770B;&#x89C1;&#x6838;&#x4EC1;&#x7D20; relocalize &#x4ECE;&#x6838;&#x4EC1;&#x63D0;&#x53CA;&#x6838;&#x6D46;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5B83;&#x5728; colocalizes &#x4E0E;&#x732B;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2; NS6/7 &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6838;&#x5468;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6838;&#x4EC1;&#x7D20;&#x6297;&#x4F53;&#x5F97;&#x4EE5;&#x6C89;&#x6DC0;&#x6307;&#x793A;&#x76F4;&#x63A5;&#x6216;&#x95F4;&#x63A5;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x6838;&#x4EC1;&#x7D20;&#x4E0E;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x671F;&#x95F4;&#x4ECE;&#x732B;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2; RNA&#x3002;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA (siRNA)-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x6838;&#x4EC1;&#x7D20;&#x5BFC;&#x81F4; CrFK &#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4EA7;&#x91CF;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x6838;&#x4EC1;&#x7D20;&#x662F;&#x4E0E;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x548C; NS6/7 &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5E76;&#x662F;&#x732B;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x6240;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x6838;&#x4EC1;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;

&#x6838;&#x4EC1;&#x7D20;&#x4EA4;&#x4E92;&#x732B;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2; 3&#39; &#x975E;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x533A;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x805A;&#x5408;&#x9176; NS6 &#x548C; NS7 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3001; &#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Cellular proteins play many important roles during the life cycle of all viruses. Specifically, host cell nucleic acid-binding proteins interact with viral components of positive-stranded RNA viruses and regulate viral translation, as well as RNA replication. Here, we report that nucleolin, a ubiquitous multifunctional nucleolar shuttling phosphoprotein, interacts with the Norwalk virus and feline calicivirus (FCV) genomic 3' untranslated regions (UTRs). Nucleolin can also form a complex in vitro with recombinant Norwalk virus NS6 and -7 (NS6/7) and can be copurified with the analogous protein from feline calicivirus (p76 or NS6/7) from infected feline kidney cells. Nucleolin RNA levels or protein were not modified during FCV infection; however, as a consequence of the infection, nucleolin was seen to relocalize from the nucleoli to the nucleoplasm, as well as to the perinuclear area where it colocalizes with the feline calicivirus NS6/7 protein. In addition, antibodies to nucleolin were able to precipitate viral RNA from feline calicivirus-infected cells, indicating a direct or indirect association of nucleolin with the viral RNA during virus replication. Small interfering RNA (siRNA)-mediated knockdown of nucleolin resulted in a reduction of the cytopathic effect and virus yield in CrFK cells. Taken together, these results demonstrate that nucleolin is a nucleolar component that interacts with viral RNA and NS6/7 and is required for feline calicivirus replication.

Nucleolin interacts with the feline calicivirus 3' untranslated region and the protease-polymerase NS6 and NS7 proteins, playing a role in virus replication.

Les prot&#xE9;ines cellulaires jouent plusieurs r&#xF4;les importants au cours du cycle de vie de tous les virus. Sp&#xE9;cifiquement, l&#x26;#39;acide nucl&#xE9;ique des cellules h&#xF4;tes prot&#xE9;ines de liaison interagissent avec des composants viraux de virus &#xE0; ARN &#xE0; brin positif, et r&#xE9;guler la traduction virale, ainsi que la r&#xE9;plication d&#x26;#39;ARN. Ici, nous d&#xE9;clarons que la nucl&#xE9;oline, une phosphoprot&#xE9;ine nucl&#xE9;olaire omnipr&#xE9;sente multifonctionnel navette, interagit avec le virus de Norwalk et f&#xE9;line calicivirus (FCV) g&#xE9;nomique 3 &#x26;#39;des r&#xE9;gions non traduites (UTR). Nucl&#xE9;oline peuvent &#xE9;galement former un complexe in vitro avec recombinante du virus Norwalk NS6 et -7 (NS6 / 7) et peut &#xEA;tre copurified avec la prot&#xE9;ine analogue de calicivirus f&#xE9;lin (p76 ou NS6 / 7) &#xE0; partir de cellules infect&#xE9;es par rein f&#xE9;lin. Nucl&#xE9;oline niveaux d&#x26;#39;ARN ou les prot&#xE9;ines n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; modifi&#xE9;s lors de l&#x26;#39;infection FCV, mais comme une cons&#xE9;quence de l&#x26;#39;infection, la nucl&#xE9;oline a &#xE9;t&#xE9; vu &#xE0; relocaliser de la nucl&#xE9;oles &#xE0; l&#x26;#39;nucl&#xE9;oplasme, ainsi que dans la r&#xE9;gion p&#xE9;rinucl&#xE9;aire o&#xF9; elle co-localise avec le calicivirus f&#xE9;lin NS6 / 7 prot&#xE9;ine. En outre, des anticorps &#xE0; la nucl&#xE9;oline sont en mesure de pr&#xE9;cipiter l&#x26;#39;ARN viral de f&#xE9;lin calicivirus cellules infect&#xE9;es, indiquant une liaison directe ou indirecte de la nucl&#xE9;oline &#xE0; l&#x26;#39;ARN viral lors de la r&#xE9;plication du virus. Les petits ARN interf&#xE9;rents (siRNA) &#xE0; m&#xE9;diation knockdown de la nucl&#xE9;oline a entra&#xEE;n&#xE9; une r&#xE9;duction de l&#x26;#39;effet cytopathique et le rendement virus dans les cellules CrFK. Pris ensemble, ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que la nucl&#xE9;oline est une composante nucl&#xE9;olaire qui interagit avec l&#x26;#39;ARN viral et NS6 / 7 et est n&#xE9;cessaire &#xE0; la r&#xE9;plication calicivirus f&#xE9;lin.

Nucl&#xE9;oline interagit avec la r&#xE9;gion non traduite en 3 calicivirus f&#xE9;lin &#xBB;et les NS6 et NS7 prot&#xE9;ase-polym&#xE9;rase prot&#xE9;ines, jouant un r&#xF4;le dans la r&#xE9;plication du virus

Zellul&auml;re Proteine spielen viele wichtige Rollen w&auml;hrend des Lebenszyklus aller Viren. Insbesondere Host Zelle Nukleins&auml;ure-bindene Proteine interagieren mit viralen Komponenten der positiv-Stranded RNA-Viren und virale &Uuml;bersetzung sowie RNA-Replikation zu regulieren. Hier berichten wir, dass die Nucleolin, eine allgegenw&auml;rtige multifunktionale nukleol&auml;res pendelnden Phosphoprotein, interagiert mit den Norwalk Virus und Feline Calicivirus (FCV) genomischen 3&#39; nicht &uuml;bersetzte Regionen (UTRs). Nucleolin kann auch bilden einen Komplex, der in-vitro mit rekombinantem Norwalkvirus NS6 und-7 (NS6/7) und kann mit dem Analog Protein von feline Calicivirus (p76 oder NS6/7) von infizierten Katze Nierenzellen copurified werden. Nucleolin-RNA-Level oder Protein wurden nicht ge&auml;ndert, w&auml;hrend der FCV-Infektion; jedoch wurde als Folge der Infektion, Nucleolin, relocalize aus der Kernk&ouml;rperchen das Karyoplasma sowie die perinukle&auml;re-Bereich, wo es mit das feline Calicivirus NS6/7 Protein colocalizes, gesehen. Dar&uuml;ber hinaus konnten Antik&ouml;rper gegen Nucleolin viralen RNA aus feline Calicivirus-infizierten Zellen, die angibt, eine direkte oder indirekte Assoziation der Nucleolin mit der viralen RNA w&auml;hrend der Replikation des Virus auszuf&auml;llen. Small interfering RNA (SiRNA)-vermittelten Niederschlag des Nucleolin f&uuml;hrte zu einer Verminderung des zytopathischen Effekt und Virus Ertrags in CrFK Zellen. Zusammengenommen zeigen diese Ergebnisse, dass Nucleolin ein nukleol&auml;res Komponente ist, die interagiert mit viralen RNA und NS6/7 und f&uuml;r feline Calicivirus-Replikation erforderlich.

Nucleolin interagiert mit das feline Calicivirus 3&#39; Untranslatierter Bereich und der Proteine NS6 und NS7 Protease-Polymerase bei der Replikation des Virus eine Rolle spielen.

Le proteine cellulari giocano molti ruoli importanti durante il ciclo di vita di tutti i virus. In particolare, host cell nucleic acid-binding proteins interagire con componenti virali di virus a RNA filamento positivo e regolare traduzione virali, come pure la replica di RNA. Qui, segnaliamo che nucleolin, un&#39;onnipresente fosfoproteina spola nucleolar multifunzionale, interagisce con il Norwalk virus e feline calicivirus (FCV) genomic 3&#39; non tradotta regioni (UTRs). Nucleolin pu&ograve; anche formare un complesso in vitro con recombinant virus Norwalk NS6 e -7 (NS6/7) e pu&ograve; essere copurified con la proteina analoga da calicivirus felino (p76 o NS6/7) da cellule infette renale felina. Livelli Nucleolin RNA o proteine non sono state modificate durante l&#39;infezione FCV; Tuttavia, come conseguenza dell&#39;infezione, nucleolin &egrave; stato visto a relocalize dai nucleoli il nucleoplasma, cos&igrave; come la zona perinucleare dove esso colocalizza con il calicivirus felino NS6/7 proteine. Inoltre, gli anticorpi a nucleolin erano in grado di precipitare il RNA virale da cellule infettate da calicivirus feline, che indica un&#39;associazione diretta o indiretta di nucleolin con il RNA virale durante la replicazione del virus. Small interfering RNA (siRNA)-mediata atterramento di nucleolin ha provocato una riduzione del rendimento virus ed effetto citopatico nelle cellule CrFK. Presi insieme, questi risultati dimostrano che nucleolin &egrave; un componente nucleolare che interagisce con il RNA virale e NS6/7 ed &egrave; necessario per la replica di calicivirus felino.

Nucleolin interagisce con il calicivirus felino 3&#39; untranslated region e la proteasi-polimerasi NS6 e NS7 proteine, giocando un ruolo nella replicazione del virus.

&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x4E2D;&#x306B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x9396;RNA&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;RNA&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5F80;&#x5FA9;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30CE;&#x30FC;&#x30A6;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3068;&#x30CD;&#x30B3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;FCV&#xFF09;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;3 &#x26;#39;&#x975E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x9818;&#x57DF;&#xFF08;UTR&#xFF09;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30CE;&#x30FC;&#x30A6;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3068;&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;NS6&#x304A;&#x3088;&#x3073;-7&#xFF08;NS6 / 7&#xFF09;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30CD;&#x30B3;&#x306E;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30CD;&#x30B3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;P76&#x307E;&#x305F;&#x306F;NS6 / 7&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3;RNA&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;FCV&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x304B;&#x3089;&#x6838;&#x8CEA;&#x3078;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30CD;&#x30B3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;NS6 / 7&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x6838;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;relocalize&#x304C;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;RNA&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x30CD;&#x30B3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;RNA&#x3092;&#x6C88;&#x6BBF;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;siRNA&#xFF09;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;CRFK&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5909;&#x6027;&#x52B9;&#x679C;&#x3068;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x53CE;&#x91CF;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;RNA&#x304A;&#x3088;&#x3073;NS6 / 7&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30CD;&#x30B3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30CD;&#x30B3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;3 &#x26;#39;&#x975E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x9818;&#x57DF;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;NS6&#x3068;NS7&#x200B;&#x200B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;

&#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xD504; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; &#xB3D9;&#xC548; &#xB9CE;&#xC740; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC0B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC591;&#xC131; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC73C;&#xB85C; RNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB178; &#xC6CC;&#xD06C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; calicivirus (FCV) &#xAC8C;&#xB188; 3&#39; untranslated &#xC601;&#xC5ED; (Utr) &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xADF8; nucleolin, &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; nucleolar &#xC655;&#xBCF5; phosphoprotein &#xBCF4;&#xACE0;. Nucleolin &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB178; &#xC6CC;&#xD06C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; NS6 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;-7 (NS6/7)&#xB97C; &#xD615;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC640; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; calicivirus (p76 &#xB610;&#xB294; NS6/7)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; copurified &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Nucleolin RNA &#xC218;&#xC900;&#xC774; &#xB098; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; FCV &#xAC10;&#xC5FC;; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC218;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; nucleolin&#xB294; nucleoplasm, &#xBB3C;&#xB860; perinuclear &#xC601;&#xC5ED; &#xC5B4;&#xB514; NS6/7 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; calicivirus&#xC640; colocalizes&#xB294; nucleoli&#xC5D0;&#xC11C; relocalize&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, nucleolin&#xC5D0;&#xB294; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811; &#xB610;&#xB294; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xAD00; nucleolin&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; calicivirus&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xCE68;&#xC804; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA (siRNA)-&#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800; nucleolin&#xC758; CrFK &#xC140;&#xC5D0; cytopathic &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xB7C9;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xACB0;&#xACFC;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; nucleolin&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA&#xC640; NS6/7&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; calicivirus &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; nucleolar &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nucleolin &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; calicivirus 3&#39; &#xB9DE;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC0F; ns6&#xC640; NS7 protease &#xD6A8;&#xC18C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las prote&#xED;nas celulares juegan muchos papeles importantes durante el ciclo de vida de todos los virus. Espec&#xED;ficamente, el &#xE1;cido nucleico de la c&#xE9;lula hu&#xE9;sped prote&#xED;nas de uni&#xF3;n a interactuar con los componentes virales de hebra positiva virus de ARN viral y regular la traducci&#xF3;n, as&#xED; como la replicaci&#xF3;n del ARN. En este caso, nos informan de que nucleolina, una fosfoprote&#xED;na nucleolar ubicua multifuncional yendo y viniendo, interact&#xFA;a con el virus de Norwalk y calicivirus felino (FCV) gen&#xF3;mica 3 &#x26;#39;regiones no traducidas (UTRs). Nucleolina tambi&#xE9;n puede formar un complejo in vitro con virus recombinante de Norwalk NS6 y -7 (NS6 / 7) y se puede copurified con la prote&#xED;na an&#xE1;loga de calicivirus felino (p76 o NS6 7 /) a partir de c&#xE9;lulas infectadas por el ri&#xF1;&#xF3;n felino. Nucleolina niveles de ARN o las prote&#xED;nas no se modificaron durante la infecci&#xF3;n por FCV, sin embargo, como consecuencia de la infecci&#xF3;n, se vio que nucleolina relocalize del nucleolos al nucleoplasma, as&#xED; como a la zona perinuclear donde colocalizes con el calicivirus felino NS6 / 7 prote&#xED;na. Adem&#xE1;s, los anticuerpos a nucleolina fueron capaces de precipitar el ARN v&#xED;rico de felino c&#xE9;lulas infectadas por calicivirus, lo que indica una asociaci&#xF3;n directa o indirecta de nucleolina con el ARN viral durante la replicaci&#xF3;n del virus. Peque&#xF1;os ARN de interferencia (siRNA) mediada desmontables de nucleolina result&#xF3; en una reducci&#xF3;n del efecto citop&#xE1;tico y rendimiento de virus en las c&#xE9;lulas CRFK. Tomados en conjunto, estos resultados demuestran que nucleolina es un componente nucleolar que interact&#xFA;a con el ARN v&#xED;rico y NS6 7 / y es necesario para la replicaci&#xF3;n calicivirus felino.

Nucleolina Interact&#xFA;a con la regi&#xF3;n no traducida 3 calicivirus felino y de las prote&#xED;nas de la proteasa-polimerasa NS6 y NS7, jugando un papel en la replicaci&#xF3;n del virus

Luis Urena

Section of Virology,
Department of Medicine,
Section of Virology, Department of Medicine

Imperial College London

Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification

Luis Urena

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Section of Virology,Department of Medicine,Section of Virology, Department of Medicine

Imperial College London

Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification

Section of Virology,
Department of Medicine,
Section of Virology, Department of Medicine