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Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

Through the ectopic expression of four transcription factors, Oct4, Klf4, Sox2 and cMyc, human somatic cells can be converted to a pluripotent state, ...

Boston University School of Medicine

&#x6B8B;&#x4F59;&#x7684;&#x7EFC;&#x5408;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x540E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (iPS) &#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x5B58;&#x5728;&#x6781;&#x4E0D;&#x7406;&#x60F3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x8D39;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x62BD;&#x7A0E; polycistronic &#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x5916;&#x6E90;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x8BB0;&#x8005;&#x8367;&#x5149;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x8F7D;&#x4F53;&#x65B0;&#x9896;&#x7248;&#x672C;&#x5141;&#x8BB8;&#x76F4;&#x63A5;&#x5B9E;&#x65F6;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x77E2;&#x91CF;&#x5207;&#x9664;&#x672F;&#x5728;&#x751F;&#x6D3B; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230;&#x7F16;&#x7A0B;&#x5411;&#x91CF;&#x7684;&#x53BB;&#x9664; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x6F5C;&#x529B;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x6539;&#x5584;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x6269;&#x5145;&#x4E86;&#x5176;&#x63A5;&#x53D7;&#x4F53;&#x5916;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6D88;&#x8D39;&#x7A0E;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E0E;&#x6700;&#x5C0F;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x4F20;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7B49;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x91CC;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x83B7;&#x5F97;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5F02;&#x5E38;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982; 8&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x5728;&#x6587;&#x5316;&#x6269;&#x5F20;&#x540E;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7684;&#x4E09;&#x4F53;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E3A;&#x4EE3;&#x65E0;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x6709;&#x6548;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5F3A;&#x8C03;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x6709;&#x5229;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4ECE;&#x6D88;&#x9664;&#x7EFC;&#x5408;&#x56E0;&#x7D20;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5F3A;&#x8C03;&#x5C06;&#x9700;&#x8981;&#x8003;&#x8651;&#x5230;&#x4E3A; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x540E;&#x679C;&#x3002;

&#x5207;&#x9664;&#x7684;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x5584;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x53EF;&#x62BD;&#x7A0E;&#x77E2;&#x91CF;&#x751F;&#x6210;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x6F5C;&#x80FD;&#x3002;

The residual presence of integrated transgenes following the derivation of induced pluripotent stem (iPS) cells is highly undesirable. Here we demonstrate efficient derivation of iPS cells free of exogenous reprogramming transgenes using an excisable polycistronic lentiviral vector. A novel version of this vector containing a reporter fluorochrome allows direct visualization of vector excision in living iPS cells in real time. We find that removal of the reprogramming vector markedly improves the developmental potential of iPS cells and significantly augments their capacity to undergo directed differentiation in vitro. We further propose that methods to efficiently excise reprogramming transgenes with minimal culture passaging, such as those demonstrated here, are critical since we find that iPS cells may acquire chromosomal abnormalities, such as trisomy of chromosome 8, similar to embryonic stem cells after expansion in culture. Our findings illustrate an efficient method for the generation of transgene-free iPS cells and emphasize the potential beneficial effects that may result from elimination of integrated reprogramming factors. In addition, our results underscore the consequences of long-term culture that will need to be taken into account for the clinical application of iPS cells.

Excision of reprogramming transgenes improves the differentiation potential of iPS cells generated with a single excisable vector.

La pr&eacute;sence r&eacute;siduelle de transg&egrave;nes int&eacute;gr&eacute;e suite &agrave; l&#39;obtention de cellules souches (iPS) pluripotentes induites est hautement ind&eacute;sirable. Nous d&eacute;montrons une d&eacute;rivation efficace des cellules iPS libres de transg&egrave;nes de reprogrammation exog&egrave;ne &agrave; l&#39;aide d&#39;un vecteur lentiviral polycistronique soumis &agrave; accises. Une nouvelle version de ce vecteur contenant un fluorochrome journaliste permet directement les cellules de visualisation d&#39;excision de vecteur dans vie EPI en temps r&eacute;el. Nous trouvons que l&#39;&eacute;limination du vecteur reprogrammation am&eacute;liore sensiblement le potentiel de d&eacute;veloppement des cellules iPS et augmente consid&eacute;rablement leur capacit&eacute; &agrave; subissent une diff&eacute;renciation dirig&eacute;e in vitro. De plus, nous proposons que m&eacute;thodes pour efficacement l&#39;accise reprogrammation transg&egrave;nes avec la culture minimale de passage, tels que ceux d&eacute;montr&eacute;s ici, sont essentielles car nous trouvons que les cellules iPS pourront acqu&eacute;rir des anomalies chromosomiques, comme la trisomie du chromosome 8, semblables aux cellules souches embryonnaires apr&egrave;s expansion dans la culture. Nos r&eacute;sultats illustrent une m&eacute;thode efficace pour la g&eacute;n&eacute;ration de cellules iPS exempt de transgene et mettent l&#39;accent sur les effets b&eacute;n&eacute;fiques potentiels pouvant r&eacute;sulter de l&#39;&eacute;limination des int&eacute;gr&eacute;e des facteurs de reprogrammation. En outre, nos r&eacute;sultats mettent en &eacute;vidence les cons&eacute;quences de la culture &agrave; long terme qui devront &ecirc;tre pris en compte pour l&#39;application clinique des cellules iPS.

L&#39;excision de la reprogrammation des transg&egrave;nes am&eacute;liore le potentiel de diff&eacute;renciation des cellules iPS g&eacute;n&eacute;r&eacute; avec un unique vecteur soumis &agrave; accises.

Die verbleibende Anwesenheit von integrierten transgenen nach die Ableitung von induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS) ist h&ouml;chst unerw&uuml;nscht. Hier zeigen wir effiziente Ableitung der iPS-Zellen frei von exogenen Neuprogrammierung transgenen mithilfe eines verbrauchsteuerpflichtigen Polycistronic Lentiviralen Vektors. Eine neue Version dieses Vektors mit einem Reporter-Fluorochrom erm&ouml;glicht direkte Visualisierung der Vektor Exzision in lebenden iPS-Zellen in Echtzeit. Wir finden, dass die Beseitigung der Neuprogrammierung Vektor deutlich verbessert das entwicklungspolitischen Potenzial von iPS-Zellen und wesentlich erweitert ihre Kapazit&auml;ten zur in-vitro-gesteuerte Differenzierung zu unterziehen. Wir weiter schlagen, die Methoden, um effizient Neuprogrammierung Verbrauchsteuern transgene mit minimalen Kultur passieren lassen, wie diese demonstrierte hier sind kritisch, da wir finden, dass iPS-Zellen Chromosomenanomalien wie Trisomie des Chromosoms 8, &auml;hnlich wie embryonale Stammzellen nach Erweiterung in Kultur erwerben k&ouml;nnen. Unsere Ergebnisse zeigen eine sehr effiziente Methode zur Erzeugung von Transgen-freie iPS-Zellen und betonen die potenziellen positiven Auswirkungen, die aus der Beseitigung der Neuprogrammierung Faktoren integriert. Unsere Ergebnisse unterstreichen zus&auml;tzlich die Folgen der Langzeitkultur, die f&uuml;r die klinische Anwendung von iPS-Zellen ber&uuml;cksichtigt werden m&uuml;ssen.

Exzision der Reprogrammierung transgene verbessert das Differenzierung Potenzial von iPS-Zellen, die mit einem einzigen verbrauchsteuerpflichtiger Vektor erzeugt.

La presenza residua di transgeni integrato seguendo la derivazione di cellule staminali (iPS) pluripotenti indotte &egrave; altamente indesiderabile. Qui noi dimostrare la derivazione efficiente delle cellule iPS libera dei transgeni riprogrammazione esogeno usando un vettore lentivirale policistronico soggetti ad accisa. Una nuova versione di questo vettore contenente un fluorocromo reporter consente diretta visualizzazione dell&#39;escissione vettoriale in vita iPS cells in tempo reale. Troviamo che rimozione del vettore riprogrammazione migliora notevolmente il potenziale di sviluppo delle cellule iPS e aumenta notevolmente la capacit&agrave; di subire diretto differenziazione in vitro. Inoltre proponiamo che metodi per recidere efficientemente riprogrammazione transgeni con minima cultura seminando, come quelle dimostrate qui, sono critici poich&eacute; troviamo che le cellule iPS possono acquisire anomalie cromosomiche, come la trisomia del cromosoma 8, simili a cellule staminali embrionali dopo l&#39;espansione nella cultura. I nostri risultati illustrano un metodo efficiente per la generazione di cellule iPS transgene-libero ed enfatizzano i potenziali effetti benefici che possono derivare dall&#39;eliminazione di integrato fattori di riprogrammazione. Inoltre, i nostri risultati sottolineano le conseguenze a lungo termine cultura che dovranno essere presi in considerazione per l&#39;applicazione clinica delle cellule iPS.

L&#39;escissione della riprogrammazione transgeni migliora il potenziale di differenziazione delle cellule iPS generato con un singolo vettore soggetti ad accisa.

&#x6B21;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79; &#xFF08;iPS&#xFF09; &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5C0E;&#x51FA;&#x7D71;&#x5408; transgenes &#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x671B;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x304C;&#x7269;&#x54C1;&#x7A0E;&#x8AB2;&#x7A0E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3; &#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; transgenes &#x306E;&#x7121;&#x6599; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3092;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x7248;&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5207;&#x9664;&#x30EA;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B0; iPS &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x3002;IPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x683C;&#x6BB5;&#x306B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x3001;in vitro &#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x5F37;&#x5316;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x6211;&#x3005; &#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x5207;&#x9664;&#x306F;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3068; transgenes &#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x306A;&#x3069;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 8 &#x65E5;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x5F8C;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30DF;&#x30FC;&#x306A;&#x3069;&#x3092;&#x5165;&#x624B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x7121;&#x6599;&#x306E; transgene iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6709;&#x76CA;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5FDC;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Transgenes &#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x5207;&#x9664; 1 &#x3064;&#x304C;&#x7269;&#x54C1;&#x7A0E;&#x8AB2;&#x7A0E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x305F; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; (iPS) &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xB798;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD1B5;&#xD569; &#xB41C; transgenes&#xC758; &#xC794;&#xC5EC; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD558;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xBB34;&#xB8CC; exogenous &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; transgenes excisable polycistronic lentiviral &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD30C;&#xC0DD; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C1;&#xC811; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xC790; &#xD615;&#xAD11; &#xC0C9;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xBC84;&#xC804; &#xBCA1;&#xD130; &#xC808;&#xB2E8; &#xC0DD;&#xD65C; Ips&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xB3C5;&#xB41C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xCCB4; &#xC678;&#xB97C; &#xBC1B; &#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC99D;&#xB300; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xC18C;&#xBE44; &#xC138;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xBB38;&#xD654; passaging&#xC640; transgenes &#xADF8; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xB4F1;, &#xC5EC;&#xAE30;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; iPS &#xC138;&#xD3EC; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 8, &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD6C4; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; trisomy &#xAC19;&#xC740; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xCDE8;&#xB4DD; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; transgene &#xBB34;&#xB8CC; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xC694;&#xC18C; &#xD1B5;&#xD569;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC775;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC15;&#xC870;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC801;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xB824; &#xB418;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBB38;&#xD654;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC11;&#xC904;.

Transgenes &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC758; &#xC808;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xC77C; excisable &#xBCA1;&#xD130; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La presencia residual de transgenes integradas despu&eacute;s de la derivaci&oacute;n de c&eacute;lulas madre (iPS) pluripotentes inducidas es altamente indeseable. Aqu&iacute; demostramos eficiente derivaci&oacute;n de c&eacute;lulas iPS de transgenes reprogramaci&oacute;n ex&oacute;genos utilizando un vector lentivirales los policistr&oacute;nico. Una nueva versi&oacute;n de este vector que contiene un fluorocromo reportero permite directa visualizaci&oacute;n de supresi&oacute;n de vector en vida iPS c&eacute;lulas en tiempo real. Encontramos que la eliminaci&oacute;n del vector reprogramaci&oacute;n mejora notablemente el desarrollo potencial de las c&eacute;lulas iPS y aumenta significativamente su capacidad para experimentar la diferenciaci&oacute;n dirigida in vitro. Adem&aacute;s proponemos que m&eacute;todos para suprimir eficientemente reprogramaci&oacute;n transgenes con pases de cultura m&iacute;nima, como &eacute;sos demostrada aqu&iacute;, son fundamentales ya que nos encontramos con que las c&eacute;lulas iPS pueden adquirir anormalidades cromos&oacute;micas, como la trisom&iacute;a del cromosoma 8, similares a las c&eacute;lulas madre embrionarias despu&eacute;s de la expansi&oacute;n de la cultura. Nuestros resultados ilustran un m&eacute;todo eficiente para la generaci&oacute;n de c&eacute;lulas iPS transgen-libre y destacan los efectos beneficiosos potenciales que puedan derivarse de la eliminaci&oacute;n de integra factores de reprogramaci&oacute;n. Adem&aacute;s, nuestros resultados ponen de relieve las consecuencias de la cultura a largo plazo que deber&aacute; tenerse en cuenta para la aplicaci&oacute;n cl&iacute;nica de las c&eacute;lulas iPS.

Supresi&oacute;n de reprogramaci&oacute;n transgenes mejora el potencial de diferenciaci&oacute;n de c&eacute;lulas iPS generadas con un vector de los individual.

&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5B9E;&#x73B0;&#x540C;&#x65F6;&#x907F;&#x514D;&#x6C38;&#x4E45;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8868;&#x793A;&#x8D70;&#x5411;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7528;&#x9014;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x75BE;&#x75C5;&#x5EFA;&#x6A21;&#x6216;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7597;&#x6CD5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x5BA1;&#x9605;) &#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F53;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5145;&#x5206;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4ECD;&#x7136;&#x9700;&#x8981;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x75BE;&#x75C5;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x4ECE;&#x7EE7;&#x627F;&#x6216;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x666E;&#x904D;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5355;&#x4E00;&quot;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5361;&#x5E26;&quot;&#x8F7D;&#x4F53;&#x6765;&#x5B8C;&#x6210;&#x6B63;&#x5E38;&#x6216;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x76AE;&#x80A4;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x51E0;&#x4E4E;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5E74;&#x9F84;&#x7684;&#x4EBA;&#x83B7;&#x5F97;&#x6709;&#x6548;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x7248;&#x672C;&#x3002;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6216;&#x56DB;&#x4E2A;&#x7F16;&#x7A0B;&#x56E0;&#x7D20;&#x7EB3;&#x5165;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x5355;&#x77E2;&#x91CF;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x4F20;&#x8F93;&#x5141;&#x8BB8;&#x5305;&#x542B;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x53EF;&#x62BD;&#x7A0E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#xFF0C;&#x53BB;&#x9664;&#x751F;&#x6210;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x7EFC;&#x5408;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD0;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x7B56;&#x7565;&#x6765;&#x751F;&#x6210; &gt; 100 &#x80BA;&#x75BE;&#x75C5;&#x7279;&#x5B9A;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x884C;&#x4ECE;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x80BA;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x56CA;&#x6027;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x3001; &alpha;-1 antitrypsin &#x7F3A;&#x4E4F;&#x6709;&#x5173;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#x3001; &#x786C;&#x76AE;&#x75C5;&#x3001; &#x9570;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3001; &#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6216;&#x95F4;&#x8D28;&#x8F66;&#x53A2;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x6B64;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6709;&#x80FD;&#x529B;&#x5F3A;&#x52B2;&#x5206;&#x5316;&#x6210;&#x5185;&#x80DA;&#x6700;&#x7EC8;&#x5C42;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x524D;&#x4F53;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x4E2A;&#x53EF;&#x62BD;&#x7A0E;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5361;&#x5E26;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x65E0;&#x80BA;&#x75BE;&#x75C5;&#x7279;&#x5B9A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x3002;

The development of methods to achieve efficient reprogramming of human cells while avoiding the permanent presence of reprogramming transgenes represents a critical step toward the use of induced pluripotent stem cells (iPSC) for clinical purposes, such as disease modeling or reconstituting therapies. Although several methods exist for generating iPSC free of reprogramming transgenes from mouse cells or neonatal normal human tissues, a sufficiently efficient reprogramming system is still needed to achieve the widespread derivation of disease-specific iPSC from humans with inherited or degenerative diseases. Here, we report the use of a humanized version of a single lentiviral "stem cell cassette" vector to accomplish efficient reprogramming of normal or diseased skin fibroblasts obtained from humans of virtually any age. Simultaneous transfer of either three or four reprogramming factors into human target cells using this single vector allows derivation of human iPSC containing a single excisable viral integration that on removal generates human iPSC free of integrated transgenes. As a proof of principle, here we apply this strategy to generate >100 lung disease-specific iPSC lines from individuals with a variety of diseases affecting the epithelial, endothelial, or interstitial compartments of the lung, including cystic fibrosis, Î±-1 antitrypsin deficiency-related emphysema, scleroderma, and sickle-cell disease. Moreover, we demonstrate that human iPSC generated with this approach have the ability to robustly differentiate into definitive endoderm in vitro, the developmental precursor tissue of lung epithelia.

Generation of transgene-free lung disease-specific human induced pluripotent stem cells using a single excisable lentiviral stem cell cassette.

Le d&eacute;veloppement de m&eacute;thodes pour atteindre efficace de reprogrammation des cellules humaines tout en &eacute;vitant la pr&eacute;sence permanente de reprogrammation des transg&egrave;nes repr&eacute;sente une &eacute;tape cruciale vers l&#39;utilisation des cellules souches pluripotentes induites (iPSC) &agrave; des fins cliniques, telles que la maladie de mod&eacute;lisation ou de reconstituer des th&eacute;rapies. Bien que plusieurs m&eacute;thodes existent pour g&eacute;n&eacute;rer l&#39;iPSC libre de reprogrammation des transg&egrave;nes de cellules de souris ou de tissus humains normaux n&eacute;onatales, un syst&egrave;me suffisamment efficace de reprogrammation est encore n&eacute;cessaire pour atteindre la d&eacute;rivation g&eacute;n&eacute;ralis&eacute;e de l&#39;iPSC sp&eacute;cifiques &agrave; certaines maladies chez les humains atteints de maladies h&eacute;r&eacute;ditaires ou d&eacute;g&eacute;n&eacute;ratives. Nous rapportons ici, l&#39;utilisation d&#39;une version humanis&eacute;e d&#39;un unique vecteur lentiviral &laquo; cassette de cellules de la tige &raquo; pour accomplir une reprogrammation efficace des fibroblastes de peau normale ou malades provenant des humains de pratiquement n&#39;importe quel &acirc;ge. Transfert simultan&eacute; de trois ou quatre facteurs de reprogrammation en cellules de cible humaine &agrave; l&#39;aide de ce vecteur unique permet de d&eacute;rivation de l&#39;iPSC humain contenant une seule int&eacute;gration virale soumis &agrave; accises g&eacute;n&eacute;rant iPSC humain libre de transg&egrave;nes int&eacute;gr&eacute;s sur l&#39;enl&egrave;vement. Comme une preuve de principe, ici, nous appliquons cette strat&eacute;gie pour g&eacute;n&eacute;rer &gt; 100 lignes d&#39;iPSC sp&eacute;cifiques &agrave; une maladie pulmonaire d&#39;individus atteints de diverses maladies affectant les compartiments &eacute;pith&eacute;liales, endoth&eacute;liales ou interstitielles du poumon, y compris de la fibrose kystique, &alpha; 1 antitrypsine li&eacute;es &agrave; une carence en l&#39;emphys&egrave;me, la scl&eacute;rodermie et dr&eacute;panocytose. De plus, nous d&eacute;montrons qu&#39;iPSC humaine g&eacute;n&eacute;r&eacute;e avec cette approche ont la capacit&eacute; de diff&eacute;rencier robuste en d&eacute;finitive endoderme in vitro, le tissu pr&eacute;curseur du d&eacute;veloppement de l&#39;&eacute;pith&eacute;lium pulmonaire.

G&eacute;n&eacute;ration de poumon transg&egrave;ne libres des cellules souches sp&eacute;cifiques &agrave; certaines maladies humaines pluripotentes induites &agrave; l&#39;aide d&#39;une seule cellule de tige des g&egrave;nes soumis &agrave; accises cassette.

Die Entwicklung von Methoden zu erreichen, effiziente Reprogrammierung menschlicher Zellen ohne die st&auml;ndige Pr&auml;senz der Reprogrammierung transgene stellt einen entscheidenden Schritt in Richtung der Nutzung von induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSC) f&uuml;r klinische Zwecke, wie Krankheit, modellieren oder Rekonstituierung der Therapien. Zwar es mehrere Methoden zum Generieren von iPSC frei gibt von Neuprogrammierung transgenen Maus Zellen oder neonatale normalen menschlichen Geweben, ist ein ausreichend effizientes Neuprogrammierung System erforderlich, um die weit verbreitete Ableitung des krankheitsspezifischen iPSC von Menschen mit ererbten oder degenerativen Krankheiten zu erreichen. Hier teilen wir Ihnen die Verwendung einer humanisierten Version eines einzigen Lentivirale &quot;Vorbau Zelle Kassette&quot; Vector, effiziente Neuprogrammierung der normalen oder kranken Hautfibroblasten gewonnenen Menschen nahezu jeden Alters zu erreichen. Gleichzeitige &Uuml;bertragung entweder drei oder vier Neuprogrammierung Faktoren in human Target-Zellen, die unter Verwendung dieser einzigen Vektor erm&ouml;glicht die Ableitung der menschlichen iPSC, enth&auml;lt eine einzelne verbrauchsteuerpflichtige virale-Integration, die &uuml;ber die Entfernung frei von integrierten transgenen menschlichen iPSC generiert. Als Beweis des Prinzips, hier wenden wir diese Strategie generiert &gt; 100 Lunge krankheitsspezifische iPSC-Linien von Personen, die mit einer Vielzahl von Krankheiten, die das Epithel, Endothel oder interstitielle F&auml;cher der Lunge, einschlie&szlig;lich Mukoviszidose, &alpha;-1-antitrypsin-Mangel-bezogene-Emphysem, Sklerodermie und Sichelzellenan&auml;mie. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass menschliche iPSC generiert mit diesem Ansatz haben die F&auml;higkeit, robust in der endg&uuml;ltigen Endodermis in vitro der Entwicklungsbiologie Vorl&auml;ufer-Gewebe der Lunge Epithelien zu unterscheiden.

Generation von Transgen-freie Lunge krankheitsspezifische menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen, die mit eine einzigen verbrauchsteuerpflichtiger Lentivirale Stammzell-Kassette.

Lo sviluppo di metodi per realizzare efficienti riprogrammazione delle cellule umane, evitando la presenza permanente di riprogrammazione transgeni rappresenta un passo fondamentale verso l&#39;uso di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) per scopi clinici, quali la malattia di modellazione o ricostituire le terapie. Anche se esistono metodi diversi per la generazione di iPSC libero di riprogrammazione transgeni da mouse cellule o tessuti umani normali neonatali, un sistema di riprogrammazione sufficientemente efficiente &egrave; ancora necessario per raggiungere la derivazione diffusa delle malattie specifiche iPSC dagli esseri umani con malattie ereditarie o degenerative. Qui, segnaliamo l&#39;uso di una versione umanizzata di un singolo vettore lentivirale &quot;staminali cassetta cella&quot; per realizzare efficienti riprogrammazione dei fibroblasti della pelle normale o malati ottenuti dagli esseri umani di qualsiasi et&agrave;. Trasferimento simultaneo di tre o quattro fattori di riprogrammazione nelle cellule bersaglio umano utilizzando questo singolo vettore permette di derivazione umana iPSC contenente una singola integrazione virale soggetti ad accisa che su rimozione genera umano iPSC libero dei transgeni integrato. Come prova di principio, qui applichiamo questa strategia per generare &amp;gt; 100 linee di iPSC specifici per la malattia polmonare da individui con una variet&agrave; di malattie che colpiscono i compartimenti epiteliali, endoteliali o interstiziali del polmone, fibrosi cistica, &alpha;-1 antitripsina deficit correlati enfisema, sclerodermia e falciforme. Inoltre, abbiamo dimostrato che iPSC umani generati con questo approccio hanno la capacit&agrave; di differenziarsi robustamente in endoderma definitivo in vitro, tessuto precursore dello sviluppo degli epiteli polmonari.

Generazione del polmone privo di transgene specifici per la malattia umana indotta staminali pluripotenti usando una cassetta singola ad accisa lentivirali stem cell.

Transgenes &#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6052;&#x4E45;&#x7684;&#x306A;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x3072;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3084;&#x30BB;&#x30E9;&#x30D4;&#x30FC;&#x306E;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x75BE;&#x60A3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (iPSC) &#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x5411;&#x3051;&#x305F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;IPSC transgenes &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D44;&#x7E54;&#x304B;&#x3089;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x76F4;&#x3059;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x75BE;&#x60A3;&#x7279;&#x7570; iPSC &#x4EBA;&#x9593;&#x7D99;&#x627F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x3042;&#x3089;&#x3086;&#x308B;&#x5E74;&#x9F62;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6B63;&#x5E38;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x60A3;&#x90E8;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x66F8;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x300C;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x300D;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x5316;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x306B; 3 &#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 4 &#x3064;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x8EE2;&#x9001;&#x306F;&#x9664;&#x53BB;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593; iPSC &#x7D71;&#x5408; transgenes &#x306E;&#x7121;&#x6599;&#x751F;&#x6210;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x304C;&#x7269;&#x54C1;&#x7A0E;&#x8AB2;&#x7A0E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; iPSC &#x306E;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x539F;&#x5247;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x76EE;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3084;&#x9593;&#x8CEA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &alpha; 1 antitrypsin &#x6B20;&#x4E4F;&#x95A2;&#x9023;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x3001;&#x5F37;&#x76AE;&#x75C7;&#x3001;&#x56A2;&#x80DE;&#x6027;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x75C7;&#x3001;&#x938C;&#x72B6;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x75C5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x80BA;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x500B;&#x4EBA;&#x304B;&#x3089;&#x306E; 100 &#x306E;&#x80BA;&#x75BE;&#x60A3;&#x7279;&#x7570; iPSC &#x884C;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x3053;&#x308C;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x305D;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593; iPSC &#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x9811;&#x5065;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x80DA;&#x8449;&#x306B; in vitro &#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x7269;&#x54C1;&#x7A0E;&#x8AB2;&#x7A0E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306E;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7121;&#x6599;&#x306E; transgene &#x80BA;&#x75BE;&#x60A3;&#x7279;&#x7570;&#x3072;&#x3068;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3002;

Transgenes &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC758; &#xC601;&#xC6D0;&#xD55C; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD53C;&#xD558; &#xBA74; &#xC11C; &#xC778;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xB610;&#xB294; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB4F1;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC6A9;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSC)&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD5A5;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. IPSC &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC140; &#xB610;&#xB294; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; transgenes &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC758; &#xC790;&#xC720;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xC788;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC18D; &#xB418;&#xAC70;&#xB098; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xAD00;&#xB828; Ipsc&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB098;&#xC774;&#xC758; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC815;&#xC0C1; &#xB610;&#xB294; &#xBCD1;&#xC5D0; &#xAC78;&#xB9B0; &#xD53C;&#xBD80; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB2E8;&#xC77C; lentiviral &quot;&#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8;&quot; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; humanized &#xBC84;&#xC804;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC5D0; 3 &#xAC1C; &#xB610;&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC804;&#xC1A1; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; iPSC &#xBB34;&#xB8CC; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; transgenes&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; excisable &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xD1B5;&#xD569;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Ipsc&#xC758; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB85C; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xC804;&#xB7B5; &#xC801;&#xC6A9; &amp;gt; &#xB0AD; &#xC131; &#xC12C;&#xC720; &#xC99D;, &alpha;-1 antitrypsin &#xACB0;&#xD54D; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xC885;, scleroderma, &#xB0AB; &#xC138;&#xD3EC; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xB4F1; &#xD3D0;&#xC758; &#xC0C1;&#xD53C;, &#xB0B4; &#xD53C;, &#xB610;&#xB294; &#xAC04; &#xC9C8; &#xC131; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC1C;&#xC778; &#xC73C;&#xB85C;&#xBD80;&#xD130; 100 &#xD3D0; &#xC9C8;&#xD658; &#xAD00;&#xB828; iPSC &#xB77C;&#xC778;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Ipsc&#xC774; &#xC0DD;&#xC131; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC811;&#xADFC; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xCD5C;&#xC885; endoderm &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3D0; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC804;&#xC870; &#xC870;&#xC9C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;.

Transgene &#xBB34;&#xB8CC; &#xD3D0; &#xC9C8;&#xD658; &#xAD00;&#xB828; &#xC778;&#xAC04; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC77C; excisable lentiviral &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El desarrollo de m&eacute;todos para lograr eficiente reprogramaci&oacute;n de c&eacute;lulas humanas, evitando la presencia permanente de reprogramaci&oacute;n transgenes representa un paso crucial hacia el uso de c&eacute;lulas pluripotentes inducidas (iPSC) fines cl&iacute;nicos, tales como enfermedad de modelado o terapias de reconstituci&oacute;n. Aunque existen varios m&eacute;todos para la generaci&oacute;n de iPSC de reprogramaci&oacute;n de los transgenes de las c&eacute;lulas de rat&oacute;n o tejidos humanos normales neonatales, todav&iacute;a es necesario un sistema de reprogramaci&oacute;n suficientemente eficiente para lograr la derivaci&oacute;n generalizada de iPSC enfermedad-espec&iacute;fica de los seres humanos con enfermedades hereditarias o degenerativas. Aqu&iacute;, Divulgamos el uso de una versi&oacute;n humanizada de un vector lentivirales &quot;cassette de la c&eacute;lula de v&aacute;stago&quot; solo para lograr la reprogramaci&oacute;n eficiente de fibroblastos de la piel normal o enfermo de los seres humanos de cualquier edad. Transferencia simult&aacute;nea de tres o cuatro factores reprogramaci&oacute;n en c&eacute;lulas de human target utilizando este vector solo permite derivaci&oacute;n de iPSC humano que contiene una &uacute;nica integraci&oacute;n viral los que en el retiro genera iPSC humana libre de transgenes integrados. Como una prueba del principio, aqu&iacute; aplicamos esta estrategia para generar &gt; 100 l&iacute;neas de iPSC espec&iacute;ficos de la enfermedad pulmonar de individuos con una variedad de enfermedades que afectan a los compartimientos epiteliales, endoteliales o intersticiales del pulm&oacute;n, como la fibrosis qu&iacute;stica, enfisema de relacionados con la deficiencia de &alpha;-1-antitripsina, esclerodermia y enfermedad de c&eacute;lulas falciformes. Por otra parte, demostramos que iPSC humano generado con este enfoque tienen la capacidad de distinguir s&oacute;lidamente en definitiva endodermo in vitro, el tejido del precursor del desarrollo del epitelio pulmonar.

Generaci&oacute;n de c&eacute;lulas pluripotentes inducidas humanas de la enfermedad-espec&iacute;fica pulm&oacute;n libre de transgenes usando un cassette de c&eacute;lula madre lentivirales los.

Andreia Gianotti Sommer

Center for Regenerative Medicine (CReM)

Boston University School of Medicine

Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

Andreia Gianotti Sommer

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Center for Regenerative Medicine (CReM)

Boston University School of Medicine

Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

Center for Regenerative Medicine (CReM)