Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation

The number of laboratories using the free living nematode C. elegans is rapidly growing. The popularity of this biological model is attributed to a rapid ...

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

The creation of transgenic animals is widely utilized in C. elegans research including the use of GFP fusion proteins to study the regulation and ...

University of Pittsburgh

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Caenorhabditis elegans is an important model organism for modern biologic research. An essential aspect of C. elegans research is the production of transgenic animals for study. These are often generated via microinjection, but biolistic bombardment has become increasingly popular. However, many of the plasmids previously generated for use in microinjection are not readily used for bombardment due to the lack of a convenient marker. The unc-119 gene is often used as a marker since unc-119 rescue can be observed at low magnification, allowing rescued animals to be easily distinguished from the larger number of non-rescued animals. Here we report the use of homologous recombination in Escherichia coli as a method to insert a cassette containing the unc-119 gene into commonly used plasmids at the site of the ampicillin resistance gene which is simpler than other methods like subcloning. These cassettes are flanked by regions homologous to the 5' and 3' ends of the ampicillin resistance gene and contain either the unc-119 gene and the kanamycin resistance gene or a unc-119:mCherry fusion gene and the kanamycin resistance gene. The resulting plasmids may be used for biolistic bombardment to yield animals that display unc-119 rescue, and also express the recipient plasmid transgene.

Retrofitting ampicillin resistant vectors by recombination for use in generating C. elegans transgenic animals by bombardment.

Caenorhabditis elegans est un organisme mod&#xE8;le important pour la recherche biologique moderne. Un aspect essentiel de la recherche de C. elegans est la production d&#x26;#39;animaux transg&#xE9;niques pour l&#x26;#39;&#xE9;tude. Ceux-ci sont souvent g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;es par microinjection, mais bombardement biolistique est devenu de plus en plus populaire. Cependant, la plupart des plasmides g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;s pr&#xE9;c&#xE9;demment pour une utilisation dans la micro-injection ne sont pas facilement utilis&#xE9;es pour le bombardement en raison de l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;un marqueur commode. Le unc-119 du g&#xE8;ne est souvent utilis&#xE9;e comme un marqueur depuis unc-119 de sauvetage peut &#xEA;tre observ&#xE9;e &#xE0; faible grossissement, permettant animaux sauv&#xE9;s pour &#xEA;tre facilement distingu&#xE9;e de la plus grand nombre d&#x26;#39;animaux non-sauv&#xE9;s. Nous rapportons ici l&#x26;#39;utilisation de la recombinaison homologue dans Escherichia coli comme une m&#xE9;thode pour ins&#xE9;rer une cassette contenant le g&#xE8;ne unc-119 dans des plasmides couramment utilis&#xE9;s sur le site du g&#xE8;ne de r&#xE9;sistance &#xE0; l&#x26;#39;ampicilline qui est plus simple que d&#x26;#39;autres m&#xE9;thodes comme le sous-clonage. Ces cassettes sont flanqu&#xE9;es de r&#xE9;gions homologues &#xE0; des extr&#xE9;mit&#xE9;s 5 &#x26;#39;et 3&#x26;#39; du g&#xE8;ne de r&#xE9;sistance &#xE0; l&#x26;#39;ampicilline et contient soit le unc-119 du g&#xE8;ne et le g&#xE8;ne de r&#xE9;sistance &#xE0; la kanamycine ou un unc-119: g&#xE8;ne de fusion mCherry et le g&#xE8;ne de r&#xE9;sistance &#xE0; la kanamycine. Les plasmides r&#xE9;sultants peuvent &#xEA;tre utilis&#xE9;s pour le bombardement biolistique pour obtenir des animaux qui affichent unc-119 de sauvetage, et aussi exprimer le transg&#xE8;ne plasmide receveur.

R&#xE9;trofit Vecteurs r&#xE9;sistantes &#xE0; l&#x26;#39;ampicilline par recombinaison &#xE0; utiliser pour g&#xE9;n&#xE9;rer de C. elegans animaux transg&#xE9;niques par les bombardements

Caenorhabditis Elegans ist ein wichtiger Modellorganismus f&uuml;r moderne biologische Forschung. Ein wesentlicher Aspekt des C. Elegans Forschung ist die Produktion von transgenen Tieren f&uuml;r die Studie. Diese werden h&auml;ufig per Mikroinjektion erzeugt, aber biolistische Bombardement ist immer beliebter geworden. Allerdings sind viele der Plasmide, die zuvor f&uuml;r den Einsatz in Mikroinjektion generiert nicht leicht f&uuml;r Bombardement aufgrund des Mangels an eine bequeme Markierung verwendet. Das Unc-119-Gen wird h&auml;ufig als Marker verwendet, da Unc-119-Rettung bei kleiner Vergr&ouml;&szlig;erung, so dass gerettete Tiere leicht unterschieden aus der gr&ouml;&szlig;eren Anzahl von Tieren nicht gerettet werden beobachtet werden kann. Hier berichten wir die Verwendung von homologe Rekombination in Escherichia coli, als eine Methode zum Einf&uuml;gen von einer Kassette, das Unc-119-gen in allgemein am Standort im Ampicillin-Resistenz-Gen Plasmide, die einfacher als andere Methoden verwendet wie Subklonierung ist. Diese Kassetten sind flankiert von Regionen homologe zu den 5&#39; und 3&#39;-Enden der die Ampicillin-Resistenz-Gen und enthalten entweder das Unc-119-gen und das Kanamycin-Resistenz-Gen oder eine Unc-119:mCherry-gen und das Kanamycin-Resistenz-Gen. Die resultierenden Plasmide k&ouml;nnen f&uuml;r biolistische Bombardement verwendet werden, um Tiere zu erhalten, die Unc-119 Rettung anzeigen und auch der Empf&auml;nger Plasmid-Transgene Ausdr&uuml;cken.

Nachr&uuml;stung Ampicillin resistente Vektoren durch Rekombination f&uuml;r den Einsatz in C. Elegans transgene Tiere durch Beschuss zu generieren.

Caenorhabditis elegans &egrave; un importante organismo modello per la ricerca biologica moderna. Un aspetto essenziale della ricerca di c. elegans &egrave; la produzione di animali transgenici per lo studio. Queste sono spesso generate tramite microiniezione, ma tali bombardamento &egrave; diventato sempre pi&ugrave; popolare. Tuttavia, molti dei plasmidi precedentemente generati per uso in microiniezione non vengono prontamente utilizzati per bombardamento a causa della mancanza di un marcatore conveniente. Il gene unc-119 &egrave; spesso usato come un indicatore poich&eacute; unc-119 salvataggio pu&ograve; essere osservato a basso ingrandimento, permettendo che gli animali salvati essere facilmente distinto dal pi&ugrave; grande numero di animali non salvato. Qui riportiamo l&#39;uso di ricombinazione omologa in Escherichia coli come un metodo per inserire una cassetta contenente il gene unc-119 in comunemente usato plasmidi presso il sito del gene di resistenza ampicillina che &egrave; pi&ugrave; semplice rispetto ad altri metodi come subcloning. Queste cassette sono fiancheggiate da regioni omologhe all&#39;estremit&agrave; 5&#39; e 3&#39; del gene di resistenza dell&#39;ampicillina e contenere il gene unc-119 e il gene di resistenza kanamicina o un percorso unc-119:mCherry fusion gene e il gene di resistenza kanamicina. I plasmidi risultanti possono essere utilizzati per bombardamento di tali per produrre animali che visualizzano salvataggio unc-119 e anche esprimono il transgene destinatario del plasmide.

Retrofitting ampicillina resistente ai vettori di ricombinazione per uso nella generazione di animali transgenici c. elegans da bombardamento.

&#x7DDA;&#x866B;&#xFF08;Caenorhabditis elegans&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x4EE3;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; C. elegans&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5074;&#x9762;&#x306F;&#x3001;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x9283;&#x7832;&#x6483;&#x306F;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x4EBA;&#x6C17;&#x304C;&#x9AD8;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x4FBF;&#x5229;&#x306A;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7832;&#x6483;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; UNC-119&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;UNC-119&#x30EC;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x6551;&#x52A9;&#x52D5;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x6551;&#x52A9;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x6570;&#x304B;&#x3089;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x8B58;&#x5225;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x4F4E;&#x500D;&#x7387;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x4ED6;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x7C21;&#x5358;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D4;&#x30B7;&#x30EA;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306B;UNC-119&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x633F;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D4;&#x30B7;&#x30EA;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;5 &#x26;#39;&#x304A;&#x3088;&#x3073;3&#x26;#39;&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3057;&#x3001;UNC-119&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x30AB;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x307E;&#x305F;&#x306F;UNC-119&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#xFF1A;mCherry&#x878D;&#x5408;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x30AB;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x3002;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;UNC-119&#x30EC;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E5;&#x30FC;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x52D5;&#x7269;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9283;&#x7206;&#x6483;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x885D;&#x6483;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x7DDA;&#x866B;C. elegans&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x52D5;&#x7269;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x969B;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8010;&#x9707;&#x88DC;&#x5F37;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D4;&#x30B7;&#x30EA;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x7D20;&#x6750;

Caenorhabditis elegans &#xD604;&#xB300; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC774;&#xB2E4;. C. elegans &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xCE21;&#xBA74;&#xC740; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC774;&#xB4E4;&#xC740; &#xC885;&#xC885; microinjection&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; biolistic &#xD3ED;&#xACA9; &#xC810;&#xC810; &#xC778;&#xAE30; &#xB04C;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB9CE;&#xC740; microinjection&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB294; &#xC27D;&#xAC8C; &#xD3B8;&#xB9AC;&#xD55C; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xBD80;&#xC871;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3ED;&#xACA9;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Unc-119 &#xAD6C;&#xC870; &#xAD6C;&#xC870; &#xB3D9;&#xBB3C;-&#xAD6C;&#xC870; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xD070; &#xC22B;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC27D;&#xAC8C; &#xAD6C;&#xBD84;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xB0AE;&#xC740; &#xBC30;&#xC728;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xC774;&#xD6C4; unc-119 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB85C; &#xC885;&#xC885; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Subcloning &#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xAC8C;&#xB294; &#xC554; &#xD53C; &#xC2E4;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; unc-119 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0BD;&#xC785; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB3D9;&#xC885; &#xC554; &#xD53C; &#xC2E4;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 5&#39;&#xACFC; 3&#39; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xBC8C;&#xACFC; unc-119 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; kanamycin &#xC800;&#xD56D; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB610;&#xB294; unc &#xD3EC;&#xD568;-119:mCherry &#xC735;&#xD569; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; kanamycin &#xC800;&#xD56D; &#xC720;&#xC804;&#xC790;. Unc-119 &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; transgene &#xD45C;&#xD604;&#xD560; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xD56D;&#xBCF5; biolistic &#xD3ED;&#xACA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

C. elegans &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xD3ED;&#xACA9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC7AC;&#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC554; &#xD53C; &#xC2E4;&#xB9B0; &#xB0B4;&#xC131; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xAC1C;&#xC870;.

Caenorhabditis elegans es un importante organismo modelo para la investigaci&#xF3;n biol&#xF3;gica moderna. Un aspecto esencial de C. elegans investigaci&#xF3;n es la producci&#xF3;n de animales transg&#xE9;nicos para el estudio. A menudo se genera a trav&#xE9;s de la microinyecci&#xF3;n, pero el bombardeo biol&#xED;stica se ha convertido en cada vez m&#xE1;s popular. Sin embargo, muchos de los pl&#xE1;smidos anteriormente generados para su uso en la microinyecci&#xF3;n no son f&#xE1;cilmente utilizado para el bombardeo, debido a la falta de un marcador conveniente. La UNC-119 genes a menudo se utiliza como marcador ya UNC-119 de rescate se puede observar a bajo aumento, lo que permite a los animales rescatados se distingue f&#xE1;cilmente de la mayor cantidad de animales que no son rescatadas. Aqu&#xED; se presenta el uso de la recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga en E. coli como un m&#xE9;todo para insertar un cassette que contiene el gen unc-119 en pl&#xE1;smidos com&#xFA;nmente utilizados en el sitio del gen de resistencia a la ampicilina que es m&#xE1;s sencillo que otros m&#xE9;todos como subclonaci&#xF3;n. Estos cassettes est&#xE1;n flanqueadas por regiones hom&#xF3;logas a los extremos de la 5 &#x26;#39;y 3&#x26;#39; del gen de resistencia a ampicilina y contener la UNC-119 del gen y el gen de resistencia a la kanamicina o un UNC-119: gen mCherry fusi&#xF3;n y el gen de resistencia a la kanamicina. Los pl&#xE1;smidos resultantes pueden ser utilizados para el bombardeo biol&#xED;stico para producir animales que muestran UNC-119 de rescate, y tambi&#xE9;n expresar el transg&#xE9;n destinatario pl&#xE1;smido.

Reacondicionamiento de vectores resistentes a la ampicilina por la recombinaci&#xF3;n de uso en la generaci&#xF3;n de animales transg&#xE9;nicos C. elegans por el bombardeo

&#x7EF4;&#x62A4;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3001; &#x6B63;&#x786E;&#x6298;&#x53E0;&#xFF0C;&#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x662F;&#x5BF9;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x9762;&#x5BF9;&#x591A;&#x91CD;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x548C;&#x5916;&#x90E8;&#x538B;&#x529B;&#x800C;&#x7834;&#x574F;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x5F02;&#x5E38;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x6311;&#x6218;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5185;&#x90E8;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5E94;&#x529B;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x5F15;&#x8D77;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x9000;&#x5316;&#x89E6;&#x53D1;&#x5668; aip-1 &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8FD9;&#x662F;&#x5F88;&#x5173;&#x952E;&#x73AF;&#x5883;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7837;&#x548C;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684; polyglutamine &#x548C; Abeta &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x95F4;&#x9699;&#x7684;&#x7B54;&#x590D;&#x4E2D;&#x3002;aip 1 &#x884C;&#x4E3A;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; proteosome &#x548C; proteosomal &#x529F;&#x80FD;&#x589E;&#x5F3A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230;&#x5145;&#x5206;&#x611F;&#x5E94;&#x7684; aip 1 &#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x63D0;&#x65E9; 1 &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4F46;&#x91CD;&#x5927;&#x611F;&#x5E94;&#x4ECD;&#x7136;&#x6CA1;&#x6709;&#x63D0;&#x65E9; 1 &#x65F6;&#x51FA;&#x73B0;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x63D0;&#x65E9;-1 wdr-23(RNAi)&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x663E;&#x8457;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5176;&#x4ED6;&#x63D0;&#x65E9; 1 &#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4EA7;&#x751F; aip-1 &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x5347;&#x5E45;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5728; aip-1/AIRAP &#x611F;&#x5E94;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x80FD;&#x591F;&#x53CD;&#x6620;&#x591A;&#x4E2A;&#x534F;&#x540C;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;&#x5982;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x56E0;&#x5B50;&#x540C;&#x6E90;&#x4E4B;-1&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x53D1;&#x73B0;&#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x5145;&#x5206;&#x611F;&#x5E94;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53EF;&#x80FD;&#x89E6;&#x53D1; proteosome &#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6B64;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x94FE;&#x63A5;&#x591A;&#x4E2A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F6E;&#x7684; aip-1&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x5355;&#x5143;&#x5E94;&#x529B;&#x89E6;&#x53D1; aip-1 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x6240;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x63D0;&#x65E9;-1 &#x548C;&#x4E24;&#x79CD;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x63D0;&#x65E9;-1 &#x548C;-&#x72EC;&#x7ACB;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684; aip 1 &#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x4E2D;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5E94;&#x6FC0;&#x3002;

Maintenance of a stable, properly folded, and catalytically active proteome is a major challenge to organisms in the face of multiple internal and external stresses which damage proteins and lead to protein misfolding. Here we show that internal metabolic stress produced by reactive intermediates resulting from tyrosine degradation triggers the expression of the aip-1 gene, which is critical in responses to the environmental toxin arsenic and the clearance of unstable polyglutamine and Abeta proteins. aip-1 acts via binding to the proteosome and enhancing proteosomal function. We find that full induction of aip-1 depends on the oxidative-stress-responsive skn-1 transcription factor but significant induction still occurs without skn-1. Importantly, activation of skn-1 with wdr-23(RNAi), which dramatically induces the expression of other skn-1 target genes, produces a minimal increase in aip-1 expression. This suggests that the previously demonstrated specificity in aip-1/AIRAP induction could reflect the actions of multiple synergistic activators, such as the heat shock factor homolog hsf-1, which we also find is required for full induction. These may be triggered by proteosome dysfunction, as we find that this event links the multiple inducers of aip-1. Together, our results show that cell stress triggers aip-1 expression by both skn-1-dependent and -independent pathways.

skn-1-Dependent and -independent regulation of aip-1 expression following metabolic stress in Caenorhabditis elegans.

Entretien d&#x26;#39;un emploi stable, correctement pli&#xE9;s, prot&#xE9;ome, et catalytiquement actif est un d&#xE9;fi majeur pour les organismes dans le visage de multiples contraintes internes et externes qui endommagent les prot&#xE9;ines et conduire &#xE0; mauvais repliement des prot&#xE9;ines. Ici, nous montrons que le stress m&#xE9;tabolique interne produite par des interm&#xE9;diaires r&#xE9;actifs r&#xE9;sultant de la d&#xE9;gradation tyrosine d&#xE9;clenche l&#x26;#39;expression de l&#x26;#39;AIP-1 du g&#xE8;ne, ce qui est essentiel dans les r&#xE9;ponses &#xE0; l&#x26;#39;arsenic toxine environnementale et la clairance de polyglutamine instable et prot&#xE9;ines Ab&#xEA;ta. aip-1 agit par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire se lier &#xE0; la fonction et le renforcement de prot&#xE9;osome proteosomal. Nous trouvons que l&#x26;#39;induction compl&#xE8;te de l&#x26;#39;AIP-1 d&#xE9;pend de la stress oxydatif sensible skn-1 du facteur de transcription, mais une induction significative se produit toujours sans skn-1. Surtout, l&#x26;#39;activation de skn-1 avec WDR-23 (ARNi), qui induit de fa&#xE7;on spectaculaire l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;autres g&#xE8;nes cibles skn-1, produit une augmentation minime dans l&#x26;#39;AIP-1 expression. Ceci sugg&#xE8;re que la sp&#xE9;cificit&#xE9; d&#xE9;j&#xE0; d&#xE9;montr&#xE9; dans l&#x26;#39;induction de aip-1/AIRAP pourrait refl&#xE9;ter les actions de plusieurs activateurs synergiques, comme l&#x26;#39;homologue facteur de choc thermique HSF-1, qui nous trouvons aussi est n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;induction compl&#xE8;te. Ceux-ci peuvent &#xEA;tre d&#xE9;clench&#xE9;es par un dysfonctionnement prot&#xE9;osome, comme nous constatons que cet &#xE9;v&#xE9;nement relie les inducteurs multiples de l&#x26;#39;AIP-1. Ensemble, nos r&#xE9;sultats montrent que le stress cellulaire d&#xE9;clenche aip-1 &#x26;#39;expression par les deux voies skn-1-d&#xE9;pendante et ind&#xE9;pendantes.

Skn-1-d&#xE9;pendante et ind&#xE9;pendante de r&#xE8;glement des Aip-1 Expression stress m&#xE9;tabolique apr&#xE8;s chez Caenorhabditis elegans

Wartung von einer stabilen, richtig gefaltet und katalytisch aktiven Proteom ist eine gro&szlig;e Herausforderung f&uuml;r Organismen angesichts mehrere interne und externe betont die Proteine besch&auml;digen und dazu f&uuml;hren, dass Protein misfolding. Hier zeigen wir, dass metabolische Eigenspannungen durch reaktive Zwischenprodukte aus Tyrosin-Abbau-Trigger die Expression des Gens Aip-1, produziert die kritischen Reaktionen auf die Umwelt-Toxin-Arsen und des Rechnungsabschlusses unstable bei Polyglutamin und Abeta-Proteine ist. AIP-1 wirkt durch Bindung an die Proteosome und Verbesserung der Proteosomal-Funktion. Wir finden, dass die vollst&auml;ndige Induktion von Aip-1 h&auml;ngt von den oxidativen Stress-responsive Skn-1 Transkriptionsfaktor aber signifikante Induktion tritt noch ohne Skn-1. Aktivierung der Skn-1 mit wdr-23(RNAi), die drastisch den Ausdruck anderer Skn-1 Ziel-Gene induziert, produziert vor allem einen minimalen Anstieg der Aip-1 Ausdruck. Dies deutet darauf hin, dass die zuvor demonstrierte Besonderheit in Aip-1/AIRAP Induktion die Aktionen der mehrere synergistische Aktivatoren, z. B. die Hitze Schock Faktor homologes Hsf-1, widerspiegeln k&ouml;nnten die finden wir auch f&uuml;r vollst&auml;ndige Induktion ben&ouml;tigt. Dies k&ouml;nnen durch Proteosome Dysfunktion, ausgel&ouml;st werden, wie wir finden, dass dieses Ereignis mehrere Induktoren der Aip-1 links. Zusammen, zeigen unsere Ergebnisse, dass die Zelle Spannung Aip-1 Ausdruck mit Skn-1-abh&auml;ngigen sowohl -unabh&auml;ngige Wege ausl&ouml;st.

SKN-1-abh&auml;ngigen und -unabh&auml;ngige Regulierung der Aip-1 Ausdruck nach metabolischen Stress bei Caenorhabditis Elegans.

Manutenzione di un proteome stabile, correttamente piegato e cataliticamente attivo &egrave; una sfida importante per gli organismi a fronte di pi&ugrave; sollecitazioni interne ed esterne che danneggiano le proteine e conducono al misfolding proteico. Qui vi mostriamo che stress metabolico interno prodotto da prodotti intermedi reattivi derivanti da trigger degradazione tirosina l&#39;espressione del gene aip-1, che &egrave; fondamentale nelle risposte all&#39;arsenico di tossine ambientali e la liquidazione delle poliglutamine instabile e Abeta proteine. AIP-1 agisce tramite associazione alla proteosome e migliorare la funzione proteosomal. Troviamo che induzione completa di aip-1 dipende il fattore di trascrizione skn-1 ossidativo-stress-responsive ma significativa induzione si verifica ancora senza skn-1. Soprattutto, attivazione del skn-1 con wdr-23(RNAi), che drammaticamente induce l&#39;espressione di altri geni bersaglio skn-1, produce un minimo aumento nell&#39;espressione di aip-1. Questo suggerisce che la specificit&agrave; precedentemente dimostrata in aip-1/AIRAP induzione pu&ograve; riflettere le azioni di pi&ugrave; attivatori sinergici, come ad esempio il calore scosse fattore omologo hsf-1, che troviamo anche per induzione completa &egrave; necessaria. Queste possono essere scatenate da proteosome disfunzione, come troviamo che questo evento collegamenti i pi&ugrave; induttori di aip-1. Insieme, i nostri risultati mostrano che lo stress cellulare innesca aip-1 espressione di percorsi sia skn-1-dipendente e - indipendente.

regolamento SKN-1-dipendente e - indipendente di aip-1 espressione seguendo lo stress metabolico in Caenorhabditis elegans.

&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306B;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x640D;&#x50B7;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5916;&#x90E8;&#x5FDC;&#x529B;&#x306E;&#x9854;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x3078;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8AB2;&#x984C;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x304C;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3001;&#x74B0;&#x5883;&#x6BD2;&#x7D20;&#x30D2;&#x7D20;&#x3068;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306A;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3068;&#x5B89;&#x90E8;&#x7530;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;AIP-1&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; AIP-1&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x5F37;&#x5316;proteosomal&#x6A5F;&#x80FD;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;AIP-1&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x304C;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;SKN-1&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x307E;&#x3060;SKN-1&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x98DB;&#x8E8D;&#x7684;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;SKN-1&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;WDR-23&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x3092;&#x3001;&#x3068;SKN-1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;AIP-1&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;aip-1/AIRAP&#x8A98;&#x5C0E;&#x3067;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x56E0;&#x5B50;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;HSF-1&#x306F;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;AIP-1&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;SKN-1&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x308B;AIP-1&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8868;&#x793A;

&#x7DDA;&#x866B;Caenorhabditis elegans&#x306E;AIP-1&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5F8C;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;SKN-1&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x898F;&#x5236;

&#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC811;&#xD78C; &#xC548;&#xC815;&#xACFC; catalytically &#xD65C;&#xC131; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC190;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; misfolding&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC0F; &#xC678;&#xBD80; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xBA74; &#xD558;&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xB3C4;&#xC804; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB300;&#xC0AC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD658;&#xACBD; &#xB3C5; &#xC18C; &#xBE44;&#xC18C;&#xC640; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; polyglutamine Abeta &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD074;&#xB9AC;&#xC5B4;&#xB7F0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; aip-1 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC800;&#xD558; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. aip-1&#xB294; proteosome proteosomal &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC15;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC791;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744; aip-1&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xC720;&#xB3C4; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBC18;&#xC751; skn-1 &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB974;&#xC9C0;&#xB9CC; skn 1 &#xC5C6;&#xC774; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xB3C4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; skn 1 &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xC815;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;, wdr-23(rnai)&#xC640; skn-1&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; aip 1 &#xC2DD; &#xCD5C;&#xC18C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; aip-1/AIRAP &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAC80;&#xC99D; &#xB41C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xC694;&#xC778;&#xC774; &#xCCB4; hsf-1 &#xBC88;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xB294; &#xB4F1; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBC18;&#xC601; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB4E4;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00;&#xC774; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xB9C1;&#xD06C; aip-1&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; inducers &#xCC3E;&#xC744; proteosome &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC140; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; skn 1 &#xC885;&#xC18D;&#xC640;-&#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xACBD;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; aip 1 &#xC2DD;&#xC744; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

aip 1 &#xC2DD; Caenorhabditis elegans &#xB300;&#xC0AC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; skn 1 &#xC885;&#xC18D; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xADDC;&#xC81C;.

El mantenimiento de un proteoma estable, plegada correctamente, y activa catal&#xED;ticamente es un gran desaf&#xED;o para los organismos de cara a m&#xFA;ltiples presiones internas y externas que da&#xF1;an las prote&#xED;nas y dar lugar a mal plegamiento de prote&#xED;nas. Aqu&#xED; nos muestran que la tensi&#xF3;n interna metab&#xF3;lica producida por intermediarios reactivos que resultan de la degradaci&#xF3;n de la tirosina activa la expresi&#xF3;n de la AIP-1 gen, que es fundamental en las respuestas al ars&#xE9;nico, la toxina del medio ambiente y la liquidaci&#xF3;n de poliglutaminas inestable y prote&#xED;nas Abeta. AIP-1 act&#xFA;a a trav&#xE9;s de la uni&#xF3;n a la funci&#xF3;n proteosomal proteosoma y mejorar. Encontramos que la inducci&#xF3;n completa de la AIP-1 depende del estr&#xE9;s oxidativo que responde a SKN-1 factor de transcripci&#xF3;n, sino una inducci&#xF3;n significativa persiste sin SKN-1. Es importante destacar que, la activaci&#xF3;n de SKN-1 con WDR-23 (RNAi), que dr&#xE1;sticamente induce la expresi&#xF3;n de otros genes diana 1-SKN, produce un aumento m&#xED;nimo en la AIP-1 de expresi&#xF3;n. Esto sugiere que la especificidad demostrado previamente en la inducci&#xF3;n aip-1/AIRAP podr&#xED;an reflejar las acciones de m&#xFA;ltiples activadores sin&#xE9;rgicos, tales como el choque t&#xE9;rmico hom&#xF3;logo factor de HSF-1, que tambi&#xE9;n encontramos es necesaria para la inducci&#xF3;n completa. Esto puede ser provocado por una disfunci&#xF3;n del proteosoma, como nos encontramos con que este evento une a los m&#xFA;ltiples inductores de AIP-1. En conjunto, nuestros resultados muestran que el estr&#xE9;s celular desencadena AIP-1 de expresi&#xF3;n por ambas v&#xED;as de SKN-1-dependientes e independientes.

Annabel A. Ferguson

Department of Medicine,
Division of Geriatric Medicine and Pittsburgh Institute for Neurodegenerative Diseases,
Department of Medicine, Division of Geriatric Medicine and Pittsburgh Institute for Neurodegenerative Diseases

University of Pittsburgh

Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker