Determination of Lipid Raft Partitioning of Fluorescently-tagged Probes in Living Cells by Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS)

In the past fifteen years the notion that cell membranes are not homogenous and rely on microdomains to exert their functions has become widely accepted. ...

Hôpital de la Pitié-Salpêtrière

The novel, functionalized heteropolymolybdate [(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (1) has been synthesized and characterized by IR and (31)P NMR spectroscopy and elemental analysis. Single-crystal X-ray analysis was carried out on Rb(4)KNa[(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)].H(2)O, which crystallizes in the monoclinic system, space group P2(1)/n, with a = 10.146(2) A, b = 13.704(3) A, c = 20.577(4) A, beta = 94.88(3) degrees, and Z = 4. The title polyanion consists of a ring of five MoO(6) octahedra with four edge junctions and one corner junction. This nonplanar arrangement is stabilized by two phosphonocarboxylate groups that are bound via their phosphonate functionalities on opposite sides of the ring. As a result the two dangling arms with their terminal carboxylate groups protrude away from the molybdenum-oxo framework in diametrically opposed directions. The solid-state structure of 1 is preserved in solution on the basis of NMR. We also report on the synthesis and characterization of the isostructural derivative [(O(2)CC(2)H(4)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (2).

Polyoxomolybdates functionalized with phosphonocarboxylates.

&#x65B0;&#x9896;&#x3001; &#x529F;&#x80FD;&#x5316;&#x6742;&#x591A; [(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (1) &#x5408;&#x6210;&#x5E76;&#x5DF2;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EA2;&#x5916;&#x548C; (31) P &#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x5149;&#x8C31;&#x5B66;&#x548C;&#x5143;&#x7D20;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5355;&#x6676; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x884D;&#x5C04;&#x5206;&#x6790;&#x88AB;&#x8FDB;&#x884C; Rb(4)KNa[(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)]&#x3002;H (2) O&#xFF0C;&#x5177;&#x4F53;&#x4F53;&#x73B0;&#x5728;&#x5355;&#x659C;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7EC4; P2 1/n&#xFF0C;&#x4E0E; = 10.146(2) A&#xFF0C;b = 13.704(3) A&#xFF0C;c = 20.577(4) A&#xFF0C;beta = 94.88(3) &#x5EA6;&#x548C; Z = 4&#x3002;&#x6807;&#x9898;&#x805A;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x8FB9;&#x8DEF;&#x53E3;&#x4E0E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x89D2;&#x4EA4;&#x754C;&#x7684;&#x4E94;&#x4E2A; MoO(6) octahedra &#x73AF;&#x3002;&#x6B64;&#x975E;&#x5E73;&#x9762;&#x7684;&#x5B89;&#x6392;&#x88AB;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x916F;&#x529F;&#x80FD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E0A;&#x73AF;&#x7684;&#x53E6;&#x4E00;&#x4FA7;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A; phosphonocarboxylate &#x7EC4;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x4E24;&#x4E2A;&#x60AC;&#x7A7A;&#x6B66;&#x5668;&#x4E0E;&#x7FA7;&#x57FA;&#x5728;&#x5176;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x4F38;&#x51FA;&#x4ECE;&#x94BC;-&#x7FB0;&#x57FA;&#x6846;&#x67B6;&#x622A;&#x7136;&#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#x3002;1 &#x7684;&#x56FA;&#x6001;&#x7ED3;&#x6784;&#x4FDD;&#x7559;&#x6839;&#x636E;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x4E0E;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x5F02;&#x5730;&#x540C;&#x6784;&#x5BFC;&#x6570; [(O(2)CC(2)H(4)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (2)&#x3002;

&#x4E0E; phosphonocarboxylates &#x5B98;&#x80FD;&#x7684;&#x8FDE;&#x7ED3;&#x3002;

Le roman, fonctionnalis&eacute; heteropolymolybdate [(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (1) a &eacute;t&eacute; synth&eacute;tis&eacute; et caract&eacute;ris&eacute; par l&#39;IR et la spectroscopie de RMN du 31P (31) et analyse &eacute;l&eacute;mentaire. Analyse aux rayons x de cristaux uniques a &eacute;t&eacute; effectu&eacute; sur Rb(4)KNa[(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)].H (2) O, qui cristallise dans le syst&egrave;me monoclinique, groupe d&#39;espace P2 (1) / n, avec un = 10.146(2) A, b = 13.704(3) A, c = 20.577(4) A, b&ecirc;ta = degr&eacute;s de 94.88(3) et Z = 4. La polyanion titre se compose d&#39;un anneau de cinq octa&egrave;dres MoO(6) avec quatre jonctions de bord et une jonction d&#39;angle. Cet arrangement non planaire est stabilis&eacute; par deux groupes de phosphonocarboxylate qui sont li&eacute;s par l&#39;interm&eacute;diaire de leurs fonctionnalit&eacute;s de phosphonate sur des c&ocirc;t&eacute;s oppos&eacute;s de l&#39;anneau. Ainsi deux branches pendantes avec leurs groupes carboxylate terminal d&eacute;passent de loin le cadre de l&#39;oxo-molybd&egrave;ne dans des directions diam&eacute;tralement oppos&eacute;es. La structure &agrave; l&#39;&eacute;tat solide du 1 est conserv&eacute;e dans une solution sur la base de NMR. Nous rapportons &eacute;galement sur la synth&egrave;se et la caract&eacute;risation du d&eacute;riv&eacute; isostructuraux [(O(2)CC(2)H(4)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (2).

Polyoxomolybdates fonctionnalis&eacute;s avec phosphonocarboxylates.

Polyoxomolybdaten mit Phosphonocarboxylate funktionalisiert.

Il romanzo, funzionalizzate heteropolymolybdate [(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (1) &egrave; stato sintetizzato e caratterizzato da IR e spettroscopia NMR P (31) e analisi elementare. Raggi x del singolo-cristallo analisi &egrave; stata condotta su Rb(4)KNa[(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)].H (2) O, che cristallizza nel sistema monoclino, gruppo spazio P2 (1) / n, con a = 10.146(2) A, b = 13.704(3) A, c = 20.577(4) A, beta = 94.88(3) gradi e Z = 4. Il titolo polyanion &egrave; costituito da un anello di cinque ottaedri MoO(6) con quattro incroci di bordo e una giunzione angolo. Questa disposizione non planare &egrave; stabilizzata da due gruppi di phosphonocarboxylate che sono vincolati tramite loro funzionalit&agrave; fosfonato su lati opposti dell&#39;anello. Di conseguenza le due braccia penzoloni con i loro gruppi carbossilato terminale sporgono dal quadro molibdeno-oxo in direzioni diametralmente opposte. La struttura allo stato solido di 1 &egrave; conservata in soluzione sulla base di NMR. Segnaliamo anche sulla sintesi e la caratterizzazione del derivato isostrutturale [(O(2)CC(2)H(4)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (2).

Polyoxomolybdates funzionalizzati con phosphonocarboxylates.

&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3001;&#x5B98;&#x80FD;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EA; [(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (1) &#x304C;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C; IR &#x3068; (31) P NMR &#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3068;&#x5143;&#x7D20;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x7D50;&#x6676; x &#x7DDA;&#x89E3;&#x6790; Rb(4)KNa[(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15) &#x3067;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;]&#x3002;&#x5358;&#x659C;&#x6676;&#x7CFB;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B87;&#x5B99;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; P2 &#x7D50;&#x6676;&#x3059;&#x308B; H (2) O, (1)/n &#x3068;&#x306F; = 10.146(2) A, b 13.704(3) A =&#x3001;c = 20.577(4) A, &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; 94.88(3) &#x5EA6;&#x3068; Z = = 4&#x3002;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30EB; polyanion 5 MoO(6) &#x516B;&#x9762;&#x4F53;&#x306E; 4 &#x3064;&#x306E;&#x30A8;&#x30C3;&#x30B8;&#x63A5;&#x5408;&#x3068; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30CA;&#x30FC;&#x63A5;&#x70B9;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x975E;&#x5E73;&#x9762;&#x914D;&#x7F6E;&#x5F7C;&#x3089;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30F3;&#x9178;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E; phosphonocarboxylate &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x8155;&#x306E;&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x3068;&#x30E2;&#x30EA;&#x30D6;&#x30C7;&#x30F3;-&#x30AA;&#x30AD;&#x30BD; &#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x6B63;&#x53CD;&#x5BFE;&#x65B9;&#x5411;&#x304B;&#x3089;&#x7A81;&#x51FA;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x306E;&#x56FA;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x306F; NMR &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; isostructural &#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53; [(O(2)CC(2)H(4)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (2)&#x3002;

Phosphonocarboxylates &#x3068;&#x5B98;&#x80FD;&#x57FA;&#x5316; Polyoxomolybdates&#x3002;

&#xC18C;&#xC124;, &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; heteropolymolybdate [(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (1) &#xD569;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xC73C;&#xBA70; IR &#xBC0F; (31) P NMR &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xBC0F; &#xC6D0;&#xC18C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8; &#xACB0;&#xC815; x-&#xC120; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; rb(4)kna[(o(2)cch(2)po(3))(2)mo(5)o(15)&#xC5D0;].&#xB2E8;&#xC0AC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;, &#xACF5;&#xAC04; &#xADF8;&#xB8F9; p 2&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xD654; &#xB420; H (2) &#xC624;&#xC640; (1) / n&#xB294; 10.146(2) A = b 13.704(3) A =, c = 20.577(4) A &#xBCA0;&#xD0C0; 94.88(3)&#xB3C4;, &#xBC0F; Z = = 4. 4 &#xBA85;&#xC758; &#xBAA8;&#xC11C;&#xB9AC; &#xC811;&#xD569;&#xBD80;&#xC640; &#xD55C; &#xCF54;&#xB108; &#xC811;&#xD569; 5 MoO(6) octahedra &#xB9C1; &#xC81C;&#xBAA9; polyanion&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xD3C9;&#xBA74; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC774; &#xB9C1;&#xC758; &#xBC18;&#xB300;&#xD3B8;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; phosphonate &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; phosphonocarboxylate &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC548;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xCE74;&#xBCF5;&#xC2E4;&#xC0B0; &#xADF8;&#xB8F9; &#xB450; &#xB9E4;&#xB2EC;&#xB824; &#xD314; &#xC815;&#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xBC18;&#xB300; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAB0; &#xB9AC;&#xBE0C; &#xB374; oxo &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C; &#xBA40;&#xB9AC; &#xB0B4; &#xB2E4;. 1 &#xACE0;&#xCCB4; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; NMR&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08; &#xD558; &#xC5EC; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; isostructural &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488; [(O(2)CC(2)H(4)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (2)&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;.

Polyoxomolybdates phosphonocarboxylates&#xC640; &#xD568;&#xAED8; functionalized&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La novela, funcionalizado heteropolymolybdate [(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (1) ha sido sintetizado y caracterizado por IR y espectroscopia de RMN de P (31) y an&aacute;lisis elemental. An&aacute;lisis de rayos x de monocristal se llev&oacute; a cabo en Rb(4)KNa[(O(2)CCH(2)PO(3))(2)Mo(5)O(15)].H (2) O, que cristaliza en el sistema monocl&iacute;nico, grupo espacial P2 1/n, con un = 10.146(2) A, b = 13.704(3) A, c = 20.577(4) A, beta = 94.88(3) grados y Z = 4. El t&iacute;tulo Polyani&oacute;n consiste en un anillo de cinco octaedros MoO(6) con cuatro cruces de borde y una Uni&oacute;n de esquina. Este arreglo no plana es estabilizada por dos grupos de phosphonocarboxylate que se enlazan mediante sus funcionalidades de fosfonato en lados opuestos del anillo. Como resultado, los dos brazos colgando con sus grupos carboxilato terminal sobresalen fuera del marco de molibdeno-oxo en direcciones diametralmente opuestas. Se conserva la estructura de estado s&oacute;lida de 1 en soluci&oacute;n sobre la base de NMR. Tambi&eacute;n Divulgamos sobre la s&iacute;ntesis y caracterizaci&oacute;n del derivado isostructural [(O(2)CC(2)H(4)PO(3))(2)Mo(5)O(15)](6-) (2).

Polyoxomolybdates funcionalizados con phosphonocarboxylates.

Monoiodinated&#xFF0C;Met35-&#x6C27;&#x5316;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x6BD2;&#x7D20; 7 (MT7ox) &#x5408;&#x6210;&#xFF0C;&#x548C;&#x5176;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570;&#x514D;&#x8D39;&#x6216; N-&#x7532;&#x57FA;&#x4E1C;&#x83A8;&#x83EA;&#x78B1; (NMS)-&#x53D7;&#x4F53;&#x88AB;&#x5360;&#x9886;&#x7684; hM1 &#x76F4;&#x63A5;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5E73;&#x8861;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684; 14 &#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E86;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x503C;&#x4E0B;&#x5348;&#x548C; 0.9 nM &#x5728;&#x514D;&#x8D39;&#x6216; NMS liganded &#x53D7;&#x4F53;&#x56FD;&#x5BB6;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x6B64;&#x53D8;&#x6784;&#x6BD2;&#x7D20;&#x548C; NMS &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5F3A;&#x8D1F;&#x4F9D;&#x4ECE;&#x3002;[3 H] NMS &#x4F7F;&#x7528;&#x4E09;&#x5143;&#x590D;&#x6742;&#x6A21;&#x578B;&#x65F6;&#xFF0C;&#x6E05;&#x695A;&#x5730;&#x663E;&#x793A;&#x51FA;&#x8FD9;&#x7C7B;&#x7684;&#x4E92;&#x60E0;&#x6027;&#x8D28;&#x4E0E;&#x95F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E86;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x79BB;&#x89E3;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684; 125 &#x2170;-MT7ox &#x5404;&#x79CD; orthosteric &#x548C;&#x53D8;&#x6784;&#x5242;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6D4B;&#x91CF;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x9664;&#x4E86; MT1 &#x6BD2;&#x7D20;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x914D;&#x4F53; [NMS&#x3001; &#x963F;&#x6258;&#x54C1;&#x3001; gallamine&#x3001; &#x9A6C;&#x94B1;&#x5B50;&#x78B1;&#x3001; &#x4ED6;&#x514B;&#x6797;&#x3001; staurosporine &#x548C; (9S,10S,12R)-2,3,9,10,11-hexahydro-10-hydroxy-9-methyl-1-oxo-9,12-epoxy-1H-diindolo[1,2,3-fg:3&#39;,2&#39;,1&#39;-kl]pyrrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocine-10-carboxylic &#x9178;&#x5DF1;&#x916F; (KT5720)] allosterically &#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x6BD2;&#x7D20; 7&#x3002;125 &#x2160;-MT7ox &#x548C; [3 H] NMS &#x7684;&#x5E73;&#x8861;&#x7ED3;&#x5408;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8FDB;&#x884C;&#x63ED;&#x793A;&#x5BF9;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x800C;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570; &#xFF08;pKx &#x503C;&#xFF09; &#x8BA1;&#x7B97;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E09;&#x5143;&#x53D8;&#x6784;&#x590D;&#x6742;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5; MT7 &#x6BD2;&#x7D20;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92; hM1 &#x53D7;&#x4F53;&#x5177;&#x4F53;&#x5730;&#x70B9;&#x53D8;&#x6784;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53EF;&#x80FD;&#x90E8;&#x5206;&#x91CD;&#x53E0;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5148;&#x524D;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&quot;&#x7ECF;&#x5178;&quot;&#x6216;&quot;&#x975E;&#x5178;&#x578B;&quot;&#x53D8;&#x6784;&#x4EE3;&#x7406;&#x5E76;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x6B64;&#x65B0;&#x7684;&#x53D8;&#x6784;&#x793A;&#x8E2A;&#x5242;&#x5728;&#x5B66;&#x4E60; allosterism &#x5728;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;

&#x5BF9;&#x4F7F;&#x7528; 125 &#x2170;-Met35 &#x6C27;&#x5316;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x6BD2;&#x7D20; 7 M1 &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x53D8;&#x6784;&#x4E92;&#x52A8;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Monoiodinated, Met35-oxidized muscarinic toxin 7 (MT7ox) was synthesized, and its affinity constants for free or N-methyl scopolamine (NMS)-occupied hM1 receptor were measured directly by equilibrium and kinetic binding experiments. Identical values were obtained with the two types of assay methods, 14 pM and 0.9 nM in free or NMS-liganded receptor states, respectively, highlighting a strong negative cooperativity between this allosteric toxin and NMS. Identical results were obtained with indirect binding experiments with [3H]NMS using the ternary complex model, clearly demonstrating the reciprocal nature of this cooperativity. Furthermore, the effects of various orthosteric and allosteric agents on the dissociation kinetic of 125I-MT7ox were measured and show that, except for the MT1 toxin, all of the ligands studied [NMS, atropine, gallamine, brucine, tacrine, staurosporine, and (9S,10S,12R)-2,3,9,10,11-hexahydro-10-hydroxy-9-methyl-1-oxo-9,12-epoxy-1H-diindolo[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]pyrrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocine-10-carboxylic acid hexyl ester (KT5720)] interact allosterically with muscarinic toxin 7. Equilibrium binding experiments with 125I-MT7ox and [3H]NMS were conducted to reveal the effects of these ligands on the free receptor, and affinity constants (pKx values) were calculated using the allosteric ternary complex model. Our results suggest that MT7 toxin interacts with hM1 receptor at a specific allosteric site, which may partially overlap those identified previously for "classic" or "atypical" allosteric agents and highlight the potential of this new allosteric tracer in studying allosterism at muscarinic receptors.

Identification of various allosteric interaction sites on M1 muscarinic receptor using 125I-Met35-oxidized muscarinic toxin 7.

Monoiod&eacute;e, Met35-oxyd&eacute; de toxines muscariniques 7 (MT7ox) a &eacute;t&eacute; synth&eacute;tis&eacute; et ses constantes d&#39;affinit&eacute; pour lib&eacute;rer ou N-m&eacute;thylscopolamine (NMS)-r&eacute;cepteurs hM1 occup&eacute;s ont &eacute;t&eacute; mesur&eacute;es directement par l&#39;&eacute;quilibre et des exp&eacute;riences de cin&eacute;tique de fixation. Des valeurs identiques ont &eacute;t&eacute; obtenus avec les deux types de m&eacute;thodes de dosage, 14 h et 0,9 nM en libre ou les &Eacute;tats r&eacute;cepteurs NMS-li&eacute;s, respectivement, en soulignant une coop&eacute;rativit&eacute; n&eacute;gative forte entre cette toxine allost&eacute;rique et NEM. Des r&eacute;sultats identiques ont &eacute;t&eacute; obtenus avec des exp&eacute;riences de liaison indirecte avec la [3 H] NMS en utilisant le mod&egrave;le complex ternaire, qui d&eacute;montre clairement le caract&egrave;re r&eacute;ciproque de cette coop&eacute;ration. En outre, les effets de divers orthosteric et agents allost&eacute;riques sur la cin&eacute;tique de dissociation du 125I-MT7ox ont &eacute;t&eacute; mesur&eacute;s et montrent que, &agrave; l&#39;exception de la toxine MT1, tous les ligands &eacute;tudi&eacute;s [NEM, l&#39;atropine, gallamine, la brucine, tacrine, la staurosporine et (ester hexylique acide 9S,10S,12R)-2,3,9,10,11-hexahydro-10-hydroxy-9-methyl-1-oxo-9,12-epoxy-1H-diindolo[1,2,3-fg:3&#39;,2&#39;,1&#39;-kl]pyrrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocine-10-carboxylic (KT5720)] interagissent allost&eacute;riquement avec des toxines muscariniques 7. Des exp&eacute;riences de liaison &eacute;quilibre avec 125I-MT7ox et de la [3 H] NMS ont &eacute;t&eacute; men&eacute;es pour faire appara&icirc;tre les effets de ces ligands sur le r&eacute;cepteur libre, et les constantes d&#39;affinit&eacute; (valeurs pKx) ont &eacute;t&eacute; calcul&eacute;s en utilisant le mod&egrave;le allost&eacute;rique de complex ternaire. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la toxine MT7 interagit avec les r&eacute;cepteurs hM1 dans un site allost&eacute;rique sp&eacute;cifique, ce qui peut partiellement se chevauchent celles identifi&eacute;es pr&eacute;c&eacute;demment pour &laquo; classique &raquo; ou &laquo; atypiques &raquo; agents allost&eacute;rique et mettre en &eacute;vidence le potentiel de ce nouveau traceur allost&eacute;rique dans l&#39;&eacute;tude de l&#39;allost&eacute;rie au niveau des r&eacute;cepteurs muscariniques.

Identification des divers sites d&#39;interaction allost&eacute;rique sur les r&eacute;cepteurs muscariniques M1 &agrave; l&#39;aide de la toxine muscarinique oxyd&eacute; 125I-Met35 7.

Monoiodinated, Met35-oxidiert Muskarinischer Toxin 7 (MT7ox) wurde synthetisiert, und deren Affinit&auml;t-Konstanten f&uuml;r freie oder N-Methyl-Scopolamin (NMS)-besetzten hM1-Rezeptor direkt von Gleichgewicht und kinetische Bindung Experimenten gemessen wurden. Identische Werte wurden erzielt mit den zwei Arten von Testverfahren, 14 Uhr und 0,9 nM im Freien oder NMS-liganded Rezeptor Staaten bzw. Hervorhebung einer starken negativen Kooperativit&auml;t zwischen diese allosterischer Toxin und NMS. Identische Ergebnisse wurden mit indirekten Bindung Experimente mit [3H] NMS anhand des tern&auml;ren komplexes klar demonstriert die wechselseitige Natur dieser Kooperativit&auml;t erzielt. Dar&uuml;ber hinaus die Auswirkungen der verschiedenen Orthosteric und allosterische Agenten auf der kinetischen Dissoziation der 125I-MT7ox wurden gemessen und zeigen, dass, mit Ausnahme der MT1-Toxin, alle die Liganden studierte [NMS, Atropin, Gallamine, Brucin, Tacrine, Staurosporine und (9S,10S,12R)-2,3,9,10,11-hexahydro-10-hydroxy-9-methyl-1-oxo-9,12-epoxy-1H-diindolo[1,2,3-fg:3&#39;,2&#39;,1&#39;-kl]pyrrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocine-10-carboxylic S&auml;ure Hexyl Ester (KT5720)] mit Muskarinischer Toxin 7 phosphorylierter interagieren. Gleichgewicht Bindung Experimente mit 125I-MT7ox und [3H] NMS wurden durchgef&uuml;hrt, um die Auswirkungen dieser Liganden auf den freien Rezeptor zu offenbaren, und Affinit&auml;t Konstanten (pKx Werte) wurden mit das allosterische tern&auml;re komplexe Modell berechnet. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass dieses Toxin MT7 mit hM1-Rezeptor an einem bestimmten allosterischer Standort interagiert, die teilweise &uuml;berschneiden sich die &quot;klassischen&quot; oder &quot;atypischen&quot; allosterischer Agenten zuvor identifiziert und markieren Sie das Potenzial dieser neuen allosterischer Tracer Allosterism an muskarinische Rezeptoren zu studieren k&ouml;nnen.

Identifizierung der verschiedenen allosterischer Interaktion Seiten muskarinische M1-Rezeptor mit 125I-Met35-oxidiert Muskarinischer Toxin 7.

Monoiodinated, Met35-ossidato muscarinico tossina 7 (MT7ox) &egrave; stato sintetizzato e suoi costanti di affinit&agrave; per libero o scopolamina (NMS) di N-metil-recettore occupato hM1 sono stati misurati direttamente dall&#39;associazione cinetica esperimenti e di equilibrio. Valori identici sono stati ottenuti con i due tipi di metodi di dosaggio, 14 pM e 0,9 nM in libero o NMS-liganded del recettore Stati, rispettivamente, evidenziando una forte cooperativit&agrave; negativa tra questa tossina allosterico e NMS. Con gli esperimenti di legame indiretto con [3h] NMS utilizzando il modello complesso ternario, dimostrando chiaramente la natura di questa cooperativit&agrave; reciproca sono stati ottenuti risultati identici. Inoltre, gli effetti di vari agenti allosterici e orthosteric sulla dissociazione cinetico di 125I-MT7ox sono stati misurati e mostrano che, fatta eccezione per la tossina MT1, tutti i ligandi studiati [NMS, atropina, gallamine, Brucina, tacrina, staurosporine e (estere esilico acido 9S,10S,12R)-2,3,9,10,11-hexahydro-10-hydroxy-9-methyl-1-oxo-9,12-epoxy-1H-diindolo[1,2,3-fg:3&#39;,2&#39;,1&#39;-kl]pyrrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocine-10-carboxylic (KT5720)] interagire allosterically con tossina muscarinico 7. Sono stati condotti esperimenti associazione equilibrio con 125I-MT7ox e [3h] NMS per rivelare gli effetti di questi ligands sul recettore libero e costanti di affinit&agrave; (pKx valori) sono stati calcolati utilizzando il modello complesso ternario allosterico. I nostri risultati suggeriscono che la tossina MT7 interagisce con il recettore hM1 presso un sito allosterico specifico, che pu&ograve; parzialmente si sovrappongono a quelli identificati precedentemente per &quot;classico&quot; o &quot;atipici&quot; agenti allosterico ed evidenziare le potenzialit&agrave; di questo nuovo tracciante allosterico nello studio allosterism a recettori muscarinici.

Identificazione dei vari siti di interazione allosterica sul recettore muscarinico M1 utilizzando tossina muscarinico ossidato 125I-Met35 7.

Monoiodinated, Met35 &#x9178;&#x5316;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x6BD2;&#x7D20; 7 (MT7ox) &#x3092;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x5B9A;&#x6570;&#x3092;&#x7121;&#x6599;&#x307E;&#x305F;&#x306F; N &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B9;&#x30B3;&#x30DD;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3; (NMS)-&#x5360;&#x9818; hM1 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x76F4;&#x63A5;&#x5E73;&#x8861;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x5024;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F; 14 &#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E; 2 &#x7A2E;&#x985E;&#x3092; pM &#x3068; 0.9 nM &#x3067;&#x7121;&#x6599;&#x307E;&#x305F;&#x306F; NMS &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x5F37;&#x3044;&#x8CA0;&#x5354;&#x540C;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3068; NMS &#x306E;&#x9593;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F7F;&#x3063;&#x3066;&#x9593;&#x63A5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; [3 H] &#x4E09;&#x5143;&#x7CFB;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; NMS &#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x5354;&#x540C;&#x6027;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x7684;&#x306A;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;125 i MT7ox &#x306E;&#x30AD;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x89E3;&#x96E2;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x69D8;&#x3005; &#x306A; orthosteric &#x3068;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;MT1 &#x6BD2;&#x7D20;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x52C9;&#x5F37;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; [NMS&#x3001;&#x30A2;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D4;&#x30F3;&#x3001;&#x30AC;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x30D6;&#x30EB;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x30BF;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x30B9;&#x30BF;&#x30A6;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; &#xFF08;9S,10S,12R)-2,3,9,10,11-hexahydro-10-hydroxy-9-methyl-1-oxo-9,12-epoxy-1H-diindolo[1,2,3-fg:3&#39;,2&#39;,1&#39;-kl]pyrrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocine-10-carboxylic &#x9178;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB; &#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB; (KT5720)] &#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x6BD2;&#x7D20; 7 &#x64CD;&#x4F5C;&#x3001;&#x8868;&#x793A;.&#x5E73;&#x8861;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; [3 H] NMS &#x3068; 125 i MT7ox &#x7121;&#x6599;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x4E09;&#x5143;&#x8907;&#x5408;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x5B9A;&#x6570; (pKx &#x5024;) &#x3092;&#x6C42;&#x3081;&#x305F;&#x3002;Hm 1 &#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x4EE5;&#x524D;&#x300C;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x300D;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x300C;&#x975E;&#x5B9A;&#x578B;&#x300D;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x91CD;&#x8907;&#x3057;&#x3001;&#x56DE;&#x8EE2;&#x8EF8;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x52C9;&#x5F37;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3001;&#x305D;&#x306E; MT7 &#x6BD2;&#x7D20;&#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

125 I Met35 &#x9178;&#x5316;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x6BD2;&#x7D20; 7 &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; M1 &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5404;&#x7A2E;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3002;

Monoiodinated, Met35 &#xC0B0;&#xD654; muscarinic &#xB3C5; 7 (MT7ox)&#xB294; &#xD569;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBB34;&#xB8CC; &#xB610;&#xB294; N-&#xBA54; &#xD2F8; scopolamine (NMS)-&#xC810;&#xB839;&#xB41C; hM1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD3C9;&#xD615; &#xBC0F; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C1;&#xC811; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC12;&#xC774; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xBC29;&#xBC95;, 14&#xC758; &#xB450; &#xC885;&#xB958;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC00;&#xC838;&#xC628; &#xC624;&#xD6C4; &#xBC0F; 0.9 &#xBB34;&#xB8CC;&#xC5D0;&#xC11C; nM &#xB610;&#xB294; NMS liganded &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xAC01;&#xAC01;&#xC774; allosteric &#xB3C5; &#xC18C; &#xBC0F; NMS &#xC0AC;&#xC774; &#xAC15;&#xD55C; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; cooperativity&#xC744; &#xAC15;&#xC870;. &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC04;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; [3h] NMS &#xC0BC;&#xD56D; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294;&#xC774; cooperativity&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xD2B9;&#xC131; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5BB;&#xC740; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, 125I mt7ox&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC6B4;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; orthosteric &#xBC0F; allosteric &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xCE21;&#xC815; &#xBC0F; &#xD45C;&#xC2DC;, MT1 &#xB3C5; &#xC18C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB4E0; [NMS, &#xC544;&#xD2B8;&#xB85C; &#xD540;, gallamine, brucine, tacrine, staurosporine, &#xBC0F; (9S,10S,12R)-2,3,9,10,11-hexahydro-10-hydroxy-9-methyl-1-oxo-9,12-epoxy-1H-diindolo[1,2,3-fg:3&#39;,2&#39;,1&#39;-kl]pyrrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocine-10-carboxylic &#xC0B0; &#xC131; hexyl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; (KT5720)] &#xACF5;&#xBD80; ligands &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; allosterically muscarinic &#xB3C5; 7. 125I mt7ox&#xC640; [3h] NMS &#xD3C9;&#xD615; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBB34;&#xB8CC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; ligands&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB97C; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; (pKx &#xAC12;) allosteric &#xC0BC;&#xD56D; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; MT7 &#xB3C5; &#xC18C;&#xB294; &quot;&#xD074;&#xB798;&#xC2DD;&quot; &#xB610;&#xB294; &quot;&#xBE44;&#xC815;&#xD615;&quot; allosteric &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; allosterism &#xACF5;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC774; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; allosteric &#xCD94;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; allosteric &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; hM1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

M1 muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; 125I Met35 &#xC0B0;&#xD654; muscarinic &#xB3C5; 7&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; allosteric &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Monoiodinated, Met35-oxidado muscar&iacute;nico toxina 7 (MT7ox) fue sintetizada y sus constantes de afinidad para libre o escopolamina N-metil (NMS)-receptores ocupados hM1 fueron medidos directamente por el equilibrio y los experimentos cin&eacute;ticos vinculante. Se obtuvieron valores id&eacute;nticos con los dos tipos de m&eacute;todos de ensayo, 14 pM y 0,9 nM en libre o Estados de receptor NMS-liganded, respectivamente, destacando una fuerte cooperatividad negativa entre esta toxina alost&eacute;rica y NMS. Se obtuvieron resultados id&eacute;nticos con experimentos de enlace indirecto con [3 H] NMS mediante el modelo de complejo ternario, demostrando claramente el car&aacute;cter rec&iacute;proco de esta cooperaci&oacute;n. Adem&aacute;s, los efectos de varios orthosteric y agentes alost&eacute;ricos en la cin&eacute;tica de la disociaci&oacute;n de 125I-MT7ox fueron medidos y mostrar que, excepto la toxina MT1, todos de los ligandos estudiados [NMS, atropina, gallamine, Brucina, tacrina, estaurosporina y (&eacute;ster de hexilo &aacute;cido 9S,10S,12R)-2,3,9,10,11-hexahydro-10-hydroxy-9-methyl-1-oxo-9,12-epoxy-1H-diindolo[1,2,3-fg:3&#39;,2&#39;,1&#39;-kl]pyrrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocine-10-carboxylic (KT5720)] interactuar&aacute;n allosterically con toxina muscar&iacute;nico 7. Se realizaron experimentos de atascamiento de equilibrio con 125I-MT7ox y [3 H] NMS para revelar los efectos de estos ligandos sobre el receptor libre y constantes de afinidad (pKx valores) se calcularon mediante el modelo complejo ternario alost&eacute;rico. Nuestros resultados sugieren que la toxina MT7 interact&uacute;a con hM1 receptor en un sitio alost&eacute;rico espec&iacute;fico, que parcialmente se superponen las se&ntilde;aladas anteriormente para el &quot;cl&aacute;sico&quot; o &quot;anormal&quot; agentes alost&eacute;ricos y resaltar el potencial de este nuevo alost&eacute;rico trazador en el estudio allosterism en los receptores muscar&iacute;nicos.

Identificaci&oacute;n de varios sitios alost&eacute;ricos interacci&oacute;n receptor muscar&iacute;nico M1 con 125I-Met35-oxidado muscar&iacute;nico toxina 7.

Three-finger-fold toxins, isolated from various snake venoms, are recognized by high affinity and various specificities by different nicotinic and muscarinic acetylcholine receptors (nAChRs and mAChRs, respectively) present in peripheral, as well as central, nervous systems (Karlsson et al., 2000; Servent and MÃ©nez, 2001; Nirthanan and Gwee, 2004). The goal of our studies is (1) to identify, at the molecular level, the functional determinants involved in the various interaction profiles of nicotinic or muscarinic toxins on their respective receptors subtypes, (2) to model some of these toxin-receptor complexes using distance constraints obtained from cycle-mutant experiments, and (3) to understand how a unique scaffold (the three-finger fold) is able to support these different functional profiles and how molecular determinants have been selected during the evolution process to create these different specific properties. Finally, these structure/function analyses should be exploited to engineer non-natural peptides with new binding and functional properties useful as pharmacological tools or therapeutic agents.

How three-finger-fold toxins interact with various cholinergic receptors.

&#x4E09;&#x4E2A;&#x624B;&#x6307;&#x6298;&#x6BD2;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5404;&#x79CD;&#x86C7;&#x6BD2;&#x4E2D;&#x5206;&#x79BB;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x548C;&#x5404;&#x79CD;&#x7279;&#x6B8A;&#x6027;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230;&#x7531;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x70DF;&#x78B1;&#x548C;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x6837;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53; (nAChRs &#x548C; mAChRs&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#xFF09; &#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x5916;&#x56F4;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E2D;&#x592E;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; &#xFF08;&#x5361;&#x5C14;&#x677E; et al 2000 &#x5E74; &#xFF1B;&#x4EC6;&#x5219;&#x548C; M&eacute;nez&#xFF0C;2001 &#x5E74; &#xFF1B;Nirthanan &#x548C; Gwee&#xFF0C;2004&#x5E74;&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F; (1) &#x6807;&#x8BC6;&#xFF0C;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x70DF;&#x9178;&#x6216;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x6BD2;&#x7D20;&#x5BF9;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5404;&#x81EA;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x578B; (2) &#x5BF9;&#x4E00;&#x4E9B;&#x4F7F;&#x7528;&#x83B7;&#x5F97;&#x4ECE;&#x5468;&#x671F;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; (3) &#x7406;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x652F;&#x67B6; &#xFF08;&#x4E09;&#x4E2A;&#x624B;&#x6307;&#x6298;&#x53E0;&#xFF09; &#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x652F;&#x6301;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x548C;&#x5982;&#x4F55;&#x5206;&#x5B50;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x9650;&#x5236;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6BD2;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x5DF2;&#x9009;&#x5B9A;&#x5728;&#x6F14;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x521B;&#x5EFA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5E94;&#x8BE5;&#x5229;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x6784;/&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5E08;&#x4E0E;&#x65B0;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x975E;&#x5929;&#x7136;&#x80BD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x836F;&#x7406;&#x5DE5;&#x5177;&#x6216;&#x6CBB;&#x7597;&#x5242;&#x3002;

&#x5982;&#x4F55;&#x4E0E;&#x5404;&#x79CD;&#x80C6;&#x78B1;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x624B;&#x6307;&#x6298;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3002;

Toxines de trois-doigt-pli, isol&eacute;es de divers venins de serpents, sont reconnus par la haute affinit&eacute; et diverses sp&eacute;cificit&eacute;s de r&eacute;cepteurs de l&#39;ac&eacute;tylcholine nicotinique et muscarinique diff&eacute;rents (nAChR et mAChRs, respectivement) pr&eacute;sents dans le p&eacute;riph&eacute;rique, ainsi que central, syst&egrave;me nerveux (Karlsson et al., 2000 ; Servent et M&eacute;nez, 2001 ; Nirthanan et Suzanne, 2004). L&#39;objectif de nos &eacute;tudes est (1) d&#39;identifier, au niveau mol&eacute;culaire, les d&eacute;terminants fonctionnels impliqu&eacute;s dans les diff&eacute;rents profils d&#39;interaction des toxines nicotiniques ou muscariniques sur leurs sous-types de r&eacute;cepteurs respectifs, (2) au mod&egrave;le, certains de ces complexes du r&eacute;cepteur de la toxine &agrave; l&#39;aide des contraintes de distance obtenus &agrave; partir des exp&eacute;riences de cycle-mutant et (3) pour comprendre comment un &eacute;chafaudage unique (le pli de trois doigts) est capable de supporter ces diff&eacute;rents profils fonctionnels et les d&eacute;terminants mol&eacute;culaires de comment ont &eacute;t&eacute; s&eacute;lectionn&eacute;s au cours du processus d&#39;&eacute;volution pour cr&eacute;er ces diff&eacute;rentes propri&eacute;t&eacute;s sp&eacute;cifiques. Enfin, ces analyses de structure/fonction devraient &ecirc;tre exploit&eacute;es pour l&#39;ing&eacute;nieur peptides non naturelle avec la nouvelle liaison et propri&eacute;t&eacute;s fonctionnelles utiles comme outils pharmacologiques ou agents th&eacute;rapeutiques.

Comment trois-doigt-pli toxines interagissent avec des r&eacute;cepteurs cholinergiques.

Drei-Finger-Fold-Toxine, die von verschiedenen Schlange Venena, isoliert werden durch hohe Affinit&auml;t und verschiedenen Besonderheiten von verschiedenen nikotinische und muskarinische Acetylcholin-Rezeptoren erkannt (nAChRs und mAChRs, beziehungsweise) im peripheren als auch zentral, Nervensystem (Karlsson Et Al., 2000; Servent und M&eacute;nez, 2001; Nirthanan und Gwee, 2004). Das Ziel unserer Studien ist (1), erkennen einige dieser Toxin-Rezeptor-Komplexe mit Entfernungsbeschr&auml;nkungen vom Zyklus-Mutant-Experimente, sowie (3) zu verstehen, wie eine einzigartige Ger&uuml;st (die drei-Finger-Klappe) diese verschiedenen funktionalen Profile unterst&uuml;tzen kann und wie Molekulare Determinanten w&auml;hrend des Entwicklung Prozesses ausgew&auml;hlt wurden, um diese zu erstellen, auf molekularer Ebene, die funktionalen Determinanten, die Beteiligten in den verschiedenen Interaktion-Profilen der nikotinische oder muskarinische Toxine auf ihre jeweiligen Rezeptoren Subtypen, (2) Modell verschiedene spezifische Eigenschaften. Schlie&szlig;lich sollte diese Struktur/Funktions-Analysen genutzt werden, um nicht-nat&uuml;rliche Peptide mit neuen Bindung und funktionellen Eigenschaften n&uuml;tzlich als pharmakologische Werkzeuge oder Therapeutika Ingenieur.

Wie drei-Finger-Fold Toxine mit verschiedenen cholinerge Rezeptoren interagieren.

Tre-dito-piega le tossine, isolate dal veleno di serpente varie, sono riconosciute da alta affinit&agrave; e specificit&agrave; diverse dai recettori diversi nicotinici e muscarinici dell&#39;acetilcolina (nAChRs e mAChRs, rispettivamente) presenti nella periferica, cos&igrave; come centrale, sistema nervoso (Karlsson et al., 2000; Servent e M&eacute;nez, 2001; Nirthanan e Gwee, 2004). L&#39;obiettivo dei nostri studi &egrave; (1) per identificare, a livello molecolare, i determinanti funzionali coinvolti nei vari profili di interazione delle tossine muscarinico o nicotinico sul loro sottotipi rispettivi recettori, (2) al modello di alcuni di questi complessi tossina-recettore, utilizzando i vincoli di distanza ottenuti dagli esperimenti di ciclo-mutante e (3) per capire come un unico ponteggio (piega tre dita) &egrave; in grado di supportare questi diversi profili funzionali e molecolari come determinanti sono stati selezionati durante il processo di evoluzione per creare queste diverse propriet&agrave; specifiche. Infine, queste analisi struttura/funzione dovrebbero essere sfruttate per l&#39;ingegnere non naturale peptidi con propriet&agrave; funzionali utili e nuova associazione come strumenti farmacologici o agenti terapeutici.

Come tre-dito-piega tossine interagiscano con diversi recettori colinergici.

3-&#x6307;&#x6298;&#x308A;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3001;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30D8;&#x30D3;&#x306E;&#x6BD2;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9AD8;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; (nAChRs &#x3068; mAChRs&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;) &#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x5468;&#x8FBA;&#x6A5F;&#x5668;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x4E2D;&#x592E;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB; &#xFF08;Karlsson et al., 2000;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8; &#x30FB; &#x30E1;&#x30CD;&#x30B9; 2001&#x5E74;;Nirthanan &#x3068; Gwee&#x3001;2004&#x5E74;&#xFF09;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19; &#xFF08;1&#xFF09;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x6BD2;&#x7D20; &#xFF08;2&#xFF09; &#xFF08;3&#xFF09; &#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x8DB3;&#x5834; (3 &#x672C;&#x6307;&#x6298;&#x308A;) &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x5B9F;&#x9A13;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306E;&#x5236;&#x7D04;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6BD2;&#x7D20;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5225;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30FB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x975E;&#x5929;&#x7136;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3084;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2;&#x306B;&#x60AA;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B; 3 &#x6307;&#x6298;&#x308A;&#x6BD2;&#x7D20;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

3 &#xC190;&#xAC00;&#xB77D; &#xBC30; &#xB3C5; &#xC18C;, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC40; venoms&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; &#xB2E4;&#xB978; nicotinic &#xBC0F; muscarinic &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB192;&#xC740; &#xCE5C; &#xD654;&#xB825;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC2DD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; (nAChRs &#xBC0F; mAChRs, &#xAC01;&#xAC01;)&#xC5D0; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB85C; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (Karlsson et al., 2000; Servent &#xBC0F; M&eacute;nez, 2001; Nirthanan &#xBC0F; Gwee, 2004)&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; (1) &#xBD84;&#xC790; &#xC218;&#xC900;, nicotinic &#xB610;&#xB294; muscarinic &#xB3C5; &#xC18C; (2) &#xAC70;&#xB9AC; &#xC81C;&#xC57D; (3) &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xACE0;&#xC720; &#xBE44; &#xACC4; (&#xC138; &#xC190;&#xAC00;&#xB77D; &#xBC30;)&#xC740; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xC8FC;&#xAE30; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C5; &#xC18C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC9C4;&#xD654; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC01;&#xAC01; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD558;&#xC704;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB2E4;&#xB978; &#xD2B9;&#xC815; &#xC18D;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;/&#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xC57D;&#xB9AC; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xB610;&#xB294; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC694;&#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C; &#xB41C; &#xC0C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBE44; &#xC790;&#xC5F0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xAE30;&#xC220;&#xC790;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xC545;&#xC6A9; &#xB420; &#xD55C;&#xB2E4;.

3 &#xC190;&#xAC00;&#xB77D; &#xBC30; &#xB3C5; &#xC18C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; cholinergic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;.

Tres-dedo-fold toxinas, aisladas de varios venenos de serpiente, son reconocidas por la alta afinidad y diversas especificidades por receptores muscar&iacute;nicos y nicot&iacute;nicos de la acetilcolina diferentes (nAChRs y mAChRs, respectivamente) presentes en el perif&eacute;rico, as&iacute; como central, sistema nervioso (Karlsson et al., 2000; Servente y M&eacute;nez, 2001; Nirthanan y Gwee, 2004). El objetivo de nuestros estudios es (1) identificar, a nivel molecular, los determinantes funcionales involucrados en los diversos perfiles de interacci&oacute;n de sus subtipos de receptores respectivos, (2) al modelo de algunos de estos complejos de toxina-receptor las restricciones de distancia obtenidos de experimentos de ciclo-mutante y (3) para entender c&oacute;mo un andamio &uacute;nico (el pliegue de tres dedos) es capaz de soportar estos perfiles funcionales diferentes y los determinantes moleculares de c&oacute;mo han sido seleccionadas durante el proceso de evoluci&oacute;n para crear estas toxinas muscar&iacute;nicos o nicot&iacute;nicos diferentes propiedades espec&iacute;ficas. Finalmente, estos an&aacute;lisis de estructura/funci&oacute;n deben explotarse para Ingeniero no-naturales p&eacute;ptidos con encuadernaci&oacute;n nueva y propiedades funcionales &uacute;tiles herramientas farmacol&oacute;gicas como agentes terap&eacute;uticos.

C&oacute;mo interact&uacute;an tres-dedo-fold toxinas con varios receptores colin&eacute;rgicos.

Muscar&iacute;nico MT7 toxina es un antagonista potente y altamente selectivo del subtipo de receptor muscar&iacute;nico M(1) y act&uacute;a uni&eacute;ndose a un sitio alost&eacute;rico. Para identificar los determinantes moleculares por qu&eacute; MT7 toxina interact&uacute;a con este receptor en su libre y Estados ocupados NMS, se evalu&oacute; el efecto sobre la potencia de la toxina de la sustituci&oacute;n de alanina en equilibrio y experimentos cin&eacute;ticos de la Uni&oacute;n as&iacute; como en an&aacute;lisis funcionales. La determinaci&oacute;n de la estructura cristalogr&aacute;fica de un derivado de la MT7 (MT7-diiodoTyr51) permite la selecci&oacute;n del candidato residuos que sean accesibles y presente en ambas caras de los tres toxina lazos. Los datos de la Uni&oacute;n de equilibrio son consistentes con cooperatividad negativa entre N-methylscopolamine (NMS) y MT7 salvaje-tipo o modificado y resaltar el papel fundamental de la punta del lazo central de la toxina (Arg34, Met35 Tyr36) en su interacci&oacute;n con el receptor desocupado. Examen de la potencia de toxinas salvaje-tipo y modificadas para allosterically disminuir la tasa de disociaci&oacute;n de [3 H] NMS permitida la identificaci&oacute;n de los residuos MT7 involucrado en su interacci&oacute;n con el receptor NMS-ocupado. A diferencia de los resultados con el receptor desocupado, los residuos m&aacute;s importantes para esta interacci&oacute;n fue Tyr36 en bucle II, asistido por Trp10 en bucle I y Arg52 en bucle III. El papel fundamental de las puntas de los lazos del MT7 tambi&eacute;n fue confirmado en experimentos funcionales. La alta especificidad de la interacci&oacute;n del receptor MT7-M(1) explota varios residuos MT7 espec&iacute;ficos y revela un modo diferente de interacci&oacute;n de la toxina con la libre y ocupada por los NMS Estados del receptor.

Diversas interacciones entre MT7 toxina humano receptor muscar&iacute;nico de M1 en su libre y Estados de N-methylscopolamine-ocupado.

&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1; MT7 &#x6BD2;&#x7D20;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x548C;&#x70C8;&#x6027;&#x7684; M(1) &#x4E9A;&#x578B;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x548C;&#x884C;&#x4E3A;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x53D8;&#x6784;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x7531;&#x54EA;&#x4E2A; MT7 &#x6BD2;&#x7D20;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x5176;&#x81EA;&#x7531;&#x548C; NMS &#x5360;&#x9886;&#x56FD;&#x5BB6;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x6BD2;&#x7D20;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x66FF;&#x4EE3;&#x5F71;&#x54CD;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5E73;&#x8861;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x7B49;&#x3002;MT7-&#x5BFC;&#x6570; (MT7-diiodoTyr51&#xFF09; &#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5141;&#x8BB8;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x662F;&#x53EF;&#x8BBF;&#x95EE;&#x548C;&#x672C;&#x4E24;&#x5F20;&#x8138;&#x4E0A;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x6BD2;&#x7D20;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;&#x5E73;&#x8861;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6570;&#x636E;&#x7B26;&#x5408;&#x8D1F;&#x4F9D;&#x4ECE; N-methylscopolamine (NMS) &#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6216;&#x4FEE;&#x6539; MT7 &#x4E0E;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x6BD2;&#x7D20; (Arg34&#xFF0C;Met35 Tyr36) &#x5728;&#x7A7A;&#x7F6E;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E2D;&#x592E;&#x5FAA;&#x73AF;&#x63D0;&#x793A;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6548;&#x4EF7;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7684;&#x548C;&#x4FEE;&#x6539;&#x8FC7;&#x7684;&#x6BD2;&#x7D20; allosterically &#x964D;&#x4F4E;&#x6E38;&#x79BB;&#x7387;&#x7684; [(3) H] NMS &#x5141;&#x8BB8; MT7 &#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x8003;&#x8BD5;&#x53C2;&#x4E0E;&#x53CA;&#x5176;&#x4E0E; NMS &#x5360;&#x9886;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E0E;&#x7A7A;&#x7F6E;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0E;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F; Tyr36 &#x5728;&#x4E8C;&#x73AF;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x534F;&#x52A9;&#x901A;&#x8FC7; Trp10 &#x5728;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#x6211;&#x548C; Arg52 &#x4E09;&#x73AF;&#x8DEF;&#x3002;&#x5728;&#x673A;&#x80FD;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E5F;&#x8BC1;&#x5B9E; MT7 &#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x6280;&#x5DE7;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;MT7-M(1) &#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x9AD8;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5229;&#x7528;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A; MT7 &#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x548C;&#x63ED;&#x793A;&#x6BD2;&#x7D20;&#x4E0E;&#x81EA;&#x7531;&#x4E0E; NMS &#x5360;&#x9886;&#x56FD;&#x5BB6;&#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

MT7 &#x6BD2;&#x7D20;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1; M1 &#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x5176;&#x81EA;&#x7531;&#x548C; N methylscopolamine &#x88AB;&#x5360;&#x9886;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Muscarinic MT7 toxin is a highly selective and potent antagonist of the M(1) subtype of muscarinic receptor and acts by binding to an allosteric site. To identify the molecular determinants by which MT7 toxin interacts with this receptor in its free and NMS-occupied states, the effect on toxin potency of alanine substitution was evaluated in equilibrium and kinetic binding experiments as well as in functional assays. The determination of the crystallographic structure of an MT7-derivative (MT7-diiodoTyr51) allowed the selection of candidate residues that are accessible and present on both faces of the three toxin loops. The equilibrium binding data are consistent with negative cooperativity between N-methylscopolamine (NMS) and wild-type or modified MT7 and highlight the critical role of the tip of the central loop of the toxin (Arg34, Met35 Tyr36) in its interaction with the unoccupied receptor. Examination of the potency of wild-type and modified toxins to allosterically decrease the dissociation rate of [(3)H]NMS allowed the identification of the MT7 residues involved in its interaction with the NMS-occupied receptor. In contrast to the results with the unoccupied receptor, the most important residue for this interaction was Tyr36 in loop II, assisted by Trp10 in loop I and Arg52 in loop III. The critical role of the tips of the MT7 loops was also confirmed in functional experiments. The high specificity of the MT7-M(1) receptor interaction exploits several MT7-specific residues and reveals a different mode of interaction of the toxin with the free and NMS-occupied states of the receptor.

Different interactions between MT7 toxin and the human muscarinic M1 receptor in its free and N-methylscopolamine-occupied states.

Muscarinique MT7 toxine est un antagoniste hautement s&eacute;lectif et puissant du sous-type de r&eacute;cepteur muscarinique greff&eacute;e et agit en se liant &agrave; un site allost&eacute;rique. Pour identifier les d&eacute;terminants mol&eacute;culaires de laquelle MT7 toxine interagit avec ce r&eacute;cepteur dans son libre et occup&eacute;e par les nouveaux &Eacute;tats membres &Eacute;tats, on a &eacute;valu&eacute; l&#39;effet sur l&#39;activit&eacute; de la toxine de la substitution de l&#39;alanine en &eacute;quilibre et des exp&eacute;riences de liaison cin&eacute;tiques ainsi que dans des essais fonctionnels. La d&eacute;termination de la structure cristallographique d&#39;un MT7-d&eacute;riv&eacute; (MT7-diiodoTyr51) a permis la s&eacute;lection des candidats les r&eacute;sidus qui sont accessibles et pr&eacute;sents sur les deux faces des trois toxines boucles. Les donn&eacute;es de liaison d&#39;&eacute;quilibre concordent avec une coop&eacute;rativit&eacute; n&eacute;gative entre N-m&eacute;thylscopolamine (NMS) et MT7 type sauvage ou modifi&eacute;es et mettre en &eacute;vidence le r&ocirc;le crucial de l&#39;extr&eacute;mit&eacute; de la boucle centrale de la toxine (Arg34, Met35 Tyr36) dans son interaction avec le r&eacute;cepteur inoccup&eacute;e. Examen de l&#39;activit&eacute; des toxines sauvage et modifi&eacute;s de fa&ccedil;on allost&eacute;rique diminuer le taux de dissociation de la [3 H] NMS a permis d&#39;identifier les r&eacute;sidus MT7 impliqu&eacute; dans son interaction avec les r&eacute;cepteurs occup&eacute;s NMS. Contrairement aux r&eacute;sultats avec le r&eacute;cepteur inoccup&eacute;, le r&eacute;sidu plus important pour cette interaction a &eacute;t&eacute; Tyr36 en boucle II, assist&eacute; par Trp10 en boucle I et Arg52 en boucle III. Le r&ocirc;le essentiel des conseils des boucles MT7 a &eacute;galement &eacute;t&eacute; confirm&eacute; dans des exp&eacute;riences fonctionnelles. La grande sp&eacute;cificit&eacute; de l&#39;interaction de r&eacute;cepteur MT7-M(1) exploite plusieurs r&eacute;sidus sp&eacute;cifiques MT7 et r&eacute;v&egrave;le un autre mode d&#39;interaction de la toxine avec la libre et occup&eacute;e par les nouveaux &Eacute;tats membres &Eacute;tats du r&eacute;cepteur.

Diff&eacute;rentes interactions entre MT7 toxine et la r&eacute;cepteur du M1 muscarinique humain dans son libre et les &Eacute;tats de N-m&eacute;thylscopolamine-occup&eacute;es.

Muskarinische MT7 Toxin ist ein hoch selektive und potenter Antagonist des Subtyps Zusammenlegung des Muskarinischer-Rezeptors und wirkt durch Bindung an ein allosterischer Website. Um die molekularen Determinanten identifizieren, durch welche, die mt7 Toxin mit diesem Rezeptor in seiner freien und NMS besetzten Staaten interagiert, war die Wirkung auf Toxin Potenz der Alanin-Substitution im Gleichgewicht und kinetische Bindung Experimente ebenso wie funktionale Assays ausgewertet. Die Bestimmung der kristallographische Struktur ein MT7-Derivat (MT7-diiodoTyr51) erlaubt die Auswahl der Kandidaten R&uuml;ckst&auml;nde, die zug&auml;nglich und auf beiden Seiten der drei Toxin Schleifen vorhanden sind. Die Gleichgewicht-Bindung Daten stehen im Einklang mit negativer Kooperativit&auml;t zwischen N-Methylscopolamine (NMS) und Wildtyp oder ge&auml;nderte MT7 und H&ouml;hepunkt die entscheidende Rolle der Spitze der zentrale Schleife des Toxins (Arg34, Met35 Tyr36) in der Interaktion mit den unbesetzten-Rezeptor. Pr&uuml;fung der Potenz der Wildtyp und modifizierte Toxine phosphorylierter verringern die Dissoziation-Rate von [(3) H] NMS erlaubt die Identifizierung der MT7 R&uuml;ckst&auml;nde in ihrer Interaktion mit den NMS besetzte Rezeptor beteiligt. Im Gegensatz zu den Ergebnissen mit den unbesetzten-Rezeptor, der wichtigste R&uuml;ckstand f&uuml;r diese Interaktion war Tyr36 in Schleife II, unterst&uuml;tzt von Trp10 in Schleife ich und Arg52 in Schleife III. Funktionelle Experimente best&auml;tigte auch die entscheidende Rolle der Tipps der MT7 Schleifen. Die hohe Spezifit&auml;t der MT7-M(1)-Rezeptor-Interaktion nutzt mehrere MT7-spezifische R&uuml;ckst&auml;nde und offenbart einen anderen Modus der Interaktion des Toxins mit dem kostenlosen und NMS besetzten Staaten des Rezeptors.

Verschiedene Interaktionen zwischen MT7 Toxin und der menschlichen muskarinische M1-Rezeptor in seinem freien N-Methylscopolamine besetzten Staaten.

Muscarinico MT7 tossina &egrave; un antagonista altamente selettivo e potente del sottotipo M(1) del recettore muscarinico e agisce legandosi ad un sito allosterico. Per identificare i determinanti molecolari da cui MT7 tossina interagisce con questo recettore nel suo libero e occupato NMS Stati, &egrave; stato valutato l&#39;effetto sulla potenza della tossina di sostituzione dell&#39;alanina in equilibrio e gli esperimenti cinetici associazione come in analisi funzionale. La determinazione della struttura cristallografica di un derivato di MT7 (MT7-diiodoTyr51) ha permesso la selezione dei candidati residui che sono presenti su entrambe le facce degli anelli di tre tossina e accessibile. I dati di associazione equilibrio sono coerenti con cooperativit&agrave; negativa tra N-methylscopolamine (NMS) e wild-type o modificate MT7 ed evidenziare il ruolo fondamentale della punta del ciclo centrale della tossina (Arg34, Met35 Tyr36) nella sua interazione con il recettore non occupato. Esame della potenza delle tossine wild-type e modificate allosterically diminuire il tasso di dissociazione [3 h] NMS ha permesso l&#39;identificazione dei residui MT7 coinvolti nella sua interazione con il recettore occupato NMS. In contrasto con i risultati con il recettore non occupato, il pi&ugrave; importante residuo per questa interazione &egrave; stata Tyr36 nel ciclo II, assistito da Trp10 in ciclo I e Arg52 in ciclo III. Il ruolo critico delle punte delle anse MT7 &egrave; stato confermato anche in esperimenti funzionali. L&#39;alta specificit&agrave; dell&#39;interazione del recettore MT7-M(1) sfrutta diversi residui MT7-specifici e rivela una modalit&agrave; diversa di interazione della tossina con il libero e stati occupati NMS del recettore.

Diverse interazioni tra tossina MT7 umano del recettore muscarinico M1 nel suo libero e N-methylscopolamine-occupato gli Stati.

&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3; MT7 &#x6BD2;&#x7D20; M(1) &#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x9AD8;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x3068;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x3068; NMS &#x5360;&#x9818;&#x72B6;&#x614B;&#x3069;&#x306E; MT7 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x3066;&#x6BD2;&#x7D20;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306E;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x52B9;&#x529B;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5E73;&#x8861;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x30AD;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MT7 &#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#xFF08;MT7-diiodoTyr51) &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x5019;&#x88DC;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x3001;3 &#x3064;&#x306E;&#x6BD2;&#x7D20;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x9854;&#x4E0A;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x6B8B;&#x7559;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5E73;&#x8861;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;N-methylscopolamine &#xFF08;NMS&#xFF09; &#x3068;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5909;&#x66F4; MT7 &#x3068;&#x30CF;&#x30A4;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C8;&#x7A7A;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3067;&#x6BD2;&#x7D20; (Arg34, Met35 Tyr36) &#x306E;&#x4E2D;&#x592E;&#x74B0;&#x72B6;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x5354;&#x540C;&#x6027;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3002;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; [3 H] NMS MT7 &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x7387;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3059;&#x308B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x52B9;&#x529B;&#x8A66;&#x9A13; NMS &#x5360;&#x9818;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3002;&#x7A7A;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x5BFE;&#x7167;&#x3092;&#x306A;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x6E23;&#x306F;&#x3001;Tyr36 &#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; II &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8; Trp10 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3067;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3057;&#x3001;Arg52 &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; III&#x3002;MT7 &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30D2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MT7-M(1) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x7279;&#x7570;&#x6027; MT7 &#x56FA;&#x6709;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x60AA;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x3068; NMS &#x5360;&#x9818;&#x72B6;&#x614B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

MT7 &#x6BD2;&#x7D20;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3; M1 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x7121;&#x6599; N methylscopolamine &#x5360;&#x6709;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Muscarinic MT7 &#xB3C5; &#xC18C; muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; M(1) &#xD558;&#xC704;&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC774;&#xBA70; allosteric &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xC5EC; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC5B4;&#xB5A4; MT7 &#xC5EC; &#xB3C5;&#xC774; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBB34;&#xB8CC; &#xBC0F; NMS &#xC810;&#xB839; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xB300;&#xCCB4;&#xC758; &#xD6A8;&#xB825;&#xC740; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5; &#xD3C9;&#xD615; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB610;&#xD55C; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD3C9;&#xAC00; &#xBC1B;&#xC558;&#xB2E4;. MT7 &#xD30C;&#xC0DD; (MT7 diiodoTyr51)&#xC758; crystallographic &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815; &#xC811;&#xADFC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xACE0; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xB3C5; &#xC18C; &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xB450; &#xC5BC;&#xAD74;&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC120;&#xD0DD; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xD3C9;&#xD615; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB370;&#xC774;&#xD130; N-methylscopolamine (NMS) &#xBC0F; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB610;&#xB294; &#xC218;&#xC815; MT7 &#xBE48;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB3C5; &#xC18C; (Arg34, Met35 Tyr36)&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xB05D;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xD558;&#xC774;&#xB77C;&#xC774;&#xD2B8; &#xC0AC;&#xC774; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; cooperativity&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBC0F; &#xC218;&#xC815; &#xB3C5; &#xC18C; allosterically [(3) H] MT7 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; NMS&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xD798;&#xC758; &#xC2DC;&#xD5D8; NMS &#xC810;&#xB839; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE48;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; tyr36&#xB294; &#xB8E8;&#xD504; II, trp10&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xC5B4; arg52&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3C4;&#xC6C0; &#xB8E8;&#xD504; III. MT7 &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xB05D;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xB610;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;. MT7-M(1) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xC5EC;&#xB7EC; MT7 &#xD2B9;&#xC815; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xBB34;&#xB8CC; &#xB3C5; &#xC18C; &#xBC0F; NMS &#xC810;&#xB839; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

MT7 &#xB3C5; &#xC18C;&#xB294; &#xBB34;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; muscarinic M1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBC0F; N methylscopolamine &#xC810;&#xB839; &#xAD6D;&#xAC00; &#xAC04;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;.

L&#39;id&eacute;e que les RCPG (r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G) peut-&ecirc;tre exister comme homo - ou h&eacute;t&eacute;ro-oligom&egrave;res, bien qu&#39;encore controvers&eacute;e, est maintenant largement accept&eacute;e. N&eacute;anmoins, les r&ocirc;les fonctionnels d&#39;oligom&eacute;risation sont encore peu clairs et acqu&eacute;rir une meilleure compr&eacute;hension des m&eacute;canismes qui sous-tendent la dynamique d&#39;assemblage GPCR et, en particulier, &eacute;valuer l&#39;effet des ligands sur ce processus semble important. Nous avons choisi de concentrer notre &eacute;tude sur l&#39;effet de MT7 (toxines muscariniques 7), un ligand du peptide allost&eacute;rique hautement s&eacute;lective, sur l&#39;&eacute;tat de l&#39;oligom&eacute;risation de la hM1 (sous-type humain de r&eacute;cepteur de l&#39;ac&eacute;tylcholine muscarinique M1).

Influence de la toxine MT7 sur l&#39;&eacute;tat d&#39;oligom&eacute;risation des r&eacute;cepteurs muscariniques M1.

Die Idee, dass GPCR (G-Protein-gekoppelter Rezeptoren) als Homo oder Hetero-Oligomere vorhanden ist, obwohl noch umstritten ist, ist inzwischen weithin anerkannt. Dennoch die Funktionsrollen Oligomerisierung sind noch unklar und gr&ouml;&szlig;eren Einblick in die Mechanismen zugrunde liegt die Dynamik von GPCR-Versammlung und, insbesondere Beurteilung der Auswirkungen von Liganden bei diesem Prozess scheint wichtig. Wir w&auml;hlten unsere vorliegenden Studie &uuml;ber die Auswirkungen der MT7 zu konzentrieren (muskarinische Toxin 7), eine hochselektive allosterischer Peptid-Ligand auf Oligomerisierung Bundesland der hM1 (menschliche M1 muskarinische Acetylcholin-Rezeptor-Subtyp).

Einfluss der MT7 Toxin auf den Oligomerisierung von den muskarinische M1-Rezeptor.

L&#39;idea che GPCR (recettori accoppiati a proteine G) possono esistere come homo - o etero-oligomeri, bench&eacute; ancora controversa, ora &egrave; ampiamente accettata. Tuttavia, non sono ancora chiari i ruoli funzionali di oligomerizzazione e guadagnando una maggiore comprensione sui meccanismi sottostanti le dinamiche dell&#39;Assemblea GPCR e, in particolare, valutare l&#39;effetto dei ligandi su questo processo sembra importante. Abbiamo scelto di concentrare il nostro studio presente sull&#39;effetto di MT7 (muscarinico tossina 7), un ligand del peptide allosterico altamente selettiva, allo stato di oligomerizzazione della hM1 (umano sottotipo dei recettori muscarinici dell&#39;acetilcolina M1).

Influenza della tossina MT7 sullo stato oligomerizzazione del recettore muscarinico M1.

&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A2;&#x306F;&#x30DB;&#x30E2;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x7269;&#x8B70;&#x3092;&#x91B8;&#x3059;&#x3001;&#x4ECA;&#x5E83;&#x304F;&#x53D7;&#x3051;&#x5165;&#x308C;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046; Gpcr &#xFF08;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF09; &#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30E1;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3068; GPCR &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;MT7 &#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x9078;&#x3093;&#x3060; &#xFF08;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x6BD2;&#x7D20; 7&#xFF09;&#x3001;hM1 &#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30E1;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x9AD8;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; (&#x4EBA;&#x9593; M1 &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;)&#x3002;

M1 &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x91CD;&#x5408;&#x72B6;&#x614B; MT7 &#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;

GPCRs &#xFF08;G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF09; &#x53EF;&#x80FD;&#x5B58;&#x5728;&#x7531;&#x4E8E;&#x76F4;&#x7ACB;&#x6216;&#x6742;&#x805A;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4ECD;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x73B0;&#x5728;&#x666E;&#x904D;&#x63A5;&#x53D7;&#x7684;&#x7406;&#x5FF5;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x9F50;&#x805A;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x660E;&#x786E;&#xFF0C;&#x66F4;&#x6DF1;&#x5165;&#x4E86;&#x89E3;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x6C14;&#x76F8;&#x5316;&#x5B66;&#x8FD8;&#x539F;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x52A8;&#x6001;&#x548C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x663E;&#x5F97;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9009;&#x62E9;&#x4E86;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x91CD;&#x70B9;&#x7684; MT7 &#x5F71;&#x54CD; (&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x6BD2;&#x7D20; 7&#xFF09;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x53D8;&#x6784;&#x80BD;&#x914D;&#x4F53;&#x5BF9; hM1 &#x7684;&#x9F50;&#x805A;&#x72B6;&#x6001; &#xFF08;&#x4EBA;&#x7C7B; M1 &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x6837;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x578B;)&#x3002;

&#x5BF9; M1 &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x9F50;&#x805A;&#x72B6;&#x6001; MT7 &#x6BD2;&#x7D20;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The idea that GPCRs (G-protein-coupled receptors) may exist as homo- or hetero-oligomers, although still controversial, is now widely accepted. Nevertheless, the functional roles of oligomerization are still unclear and gaining greater insight into the mechanisms underlying the dynamics of GPCR assembly and, in particular, assessing the effect of ligands on this process seems important. We chose to focus our present study on the effect of MT7 (muscarinic toxin 7), a highly selective allosteric peptide ligand, on the oligomerization state of the hM1 (human M1 muscarinic acetylcholine receptor subtype).

Influence of MT7 toxin on the oligomerization state of the M1 muscarinic receptor.

&#xC544;&#xC774;&#xB514;&#xC5B4;&#xB294; GPCRs (G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;) &#xD638;&#xBAA8; &#xB610;&#xB294; hetero &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0;, &#xBE44;&#xB85D; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xB17C;&#xB780;&#xC740; &#xC774;&#xC81C; &#xB110;&#xB9AC; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, oligomerization&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC778;&#xB2E4; GPCR &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBC0F;, &#xD2B9;&#xD788;,&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; ligands&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB354; &#xD070; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC5BB;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. MT7 &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xAE30;&#xB85C; (muscarinic &#xB3C5; 7)&#xB294; Hm1&#xC758; oligomerization &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; allosteric &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; (&#xC778;&#xAC04;&#xC758; M1 muscarinic &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD558;&#xC704;).

M1 muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; oligomerization &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; MT7 &#xB3C5; &#xC18C;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;.

La idea que los GPCRs (receptores g-prote&iacute;na-juntados) pueden existir como homo - o heterosexual-olig&oacute;meros, aunque a&uacute;n controversial, ahora es ampliamente aceptada. Sin embargo, los roles funcionales de oligomerizaci&oacute;n a&uacute;n son inciertas y obteniendo una mayor penetraci&oacute;n en los mecanismos subyacentes de la din&aacute;mica de Asamblea GPCR y, en particular, evaluar el efecto de ligandos en este proceso parece importante. Decidimos centrar nuestro estudio sobre el efecto del MT7 (toxina muscar&iacute;nico 7), un ligando de p&eacute;ptido alost&eacute;ricos altamente selectivo, en el estado de Oligomerizaci&oacute;n de la hM1 (humano subtipo del receptor de M1 muscar&iacute;nico).

Influencia de la toxina MT7 sobre el estado de Oligomerizaci&oacute;n de receptor muscar&iacute;nico M1.

&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x7275;&#x8FDE;&#x5728;&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x75C5; (AD) &#x75C5;&#x7406;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x4E2D;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x5728;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x3001; &#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x3001; &#x6D41;&#x884C;&#x75C5;&#x5B66;&#x3001; &#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5728;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x3001; &#x5176;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x8111;&#x3001; &#x8F7D;&#x8102;&#x86CB;&#x767D; E&#x3001; &#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x86CB;&#x767D; &beta; &#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x90FD;&#x662F; AD &#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x51FA;&#x4EBA;&#x610F;&#x6599;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x4ECD;&#x7136;&#x6CA1;&#x6709;&#x7B54;&#x6848;&#x5728;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x654F;&#x611F;&#x548C;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5728;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51B3;&#x8BAE;&#x5728;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x8FD9;&#x6B21;&#x5BA1;&#x67E5;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x8981;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x548C;&#x5176;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x548C; AD &#x75C5;&#x4EBA;&#x7D22;&#x53D6;&#x7684;&#x76EE;&#x5F55;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E00;&#x4E9B;&#x65B0;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x94FE;&#x63A5;&#x9AD8;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x4E0E;&#x541E;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x7684;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x662F;&#x4E0E; AD &#x75C5;&#x7406;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x6709;&#x5173;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6269;&#x5927;&#x7684; endosomes &#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x5728; AD &#x7684;&#x5927;&#x8111;&#xFF0C;&#x96F6;&#x661F;&#x4E2A;&#x6848;&#x548C;&#x5510;&#x6C0F;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x5F62;&#x6001;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x53D8;&#x5316;&#xFF1A; &#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x5BF9;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x6269;&#x5927; endosomes&#x3002;

An increasing number of results implicating cholesterol metabolism in the pathophysiology of Alzheimer's disease (AD) suggest cholesterol as a target for treatment. Research in genetics, pathology, epidemiology, biochemistry, and cell biology, as well as in animal models, suggests that cholesterol, its transporter in the brain, apolipoprotein E, amyloid precursor protein, and amyloid-beta all interact in AD pathogenesis. Surprisingly, key questions remain unanswered due to the lack of sensitive and specific methods for assessing cholesterol levels in the brain at subcellular resolution. The aims of this review are not only to discuss the various methods for measuring cholesterol and its metabolites and to catalog results obtained from AD patients but also to discuss some new data linking high plasma membrane cholesterol with modifications of the endocytic compartments. These studies are particularly relevant to AD pathology, since enlarged endosomes are believed to be the first morphological change observed in AD brains, in both sporadic cases and Down syndrome.

Cholesterol changes in Alzheimer's disease: methods of analysis and impact on the formation of enlarged endosomes.

Un nombre croissant de r&#xE9;sultats impliquant le m&#xE9;tabolisme du cholest&#xE9;rol dans la physiopathologie de la maladie d&#x26;#39;Alzheimer (AD) sugg&#xE8;rent le taux de cholest&#xE9;rol en tant que cible pour le traitement. La recherche en g&#xE9;n&#xE9;tique, la pathologie, l&#x26;#39;&#xE9;pid&#xE9;miologie, la biochimie et la biologie cellulaire, ainsi que dans des mod&#xE8;les animaux, sugg&#xE8;re que le cholest&#xE9;rol, son transporteur dans le cerveau, l&#x26;#39;apolipoprot&#xE9;ine E, prot&#xE9;ine pr&#xE9;curseur amylo&#xEF;de, et b&#xEA;ta-amylo&#xEF;de interagissent tous dans la pathog&#xE9;nie de la MA. &#xC9;tonnamment, les questions cl&#xE9;s restent en suspens en raison de l&#x26;#39;absence de m&#xE9;thodes sensibles et sp&#xE9;cifiques pour &#xE9;valuer les niveaux de cholest&#xE9;rol dans le cerveau &#xE0; la r&#xE9;solution subcellulaire. Les objectifs de cet examen ne sont pas seulement de discuter des diff&#xE9;rentes m&#xE9;thodes pour mesurer le taux de cholest&#xE9;rol et de ses m&#xE9;tabolites et de cataloguer les r&#xE9;sultats obtenus &#xE0; partir de patients atteints de MA, mais aussi pour discuter de nouvelles donn&#xE9;es reliant taux &#xE9;lev&#xE9; de cholest&#xE9;rol membrane plasmique, avec les adaptations des compartiments d&#x26;#39;endocytose. Ces &#xE9;tudes sont particuli&#xE8;rement pertinentes pour pathologie de la MA, car &#xE9;largie endosomes sont consid&#xE9;r&#xE9;es comme le premier changement morphologique observ&#xE9; dans le cerveau AD, dans les deux cas sporadiques et le syndrome de Down.

Changements de cholest&#xE9;rol dans la maladie d&#x26;#39;Alzheimer: M&#xE9;thodes d&#x26;#39;analyse et d&#x26;#39;impact sur la formation de Grande Endosomes

Eine wachsende Zahl von Ergebnisse Nicht&uuml;bernahme Cholesterin-Stoffwechsel in der Pathophysiologie der Alzheimer-Krankheit (AD) schlagen Cholesterin als Ziel f&uuml;r die Behandlung. Forschung in der Genetik, Pathologie, Epidemiologie, Biochemie und Zellbiologie sowie in Tiermodellen, legt nahe, dass Cholesterin, seine Transporter im Gehirn, Apolipoprotein E, Amyloid-Vorl&auml;uferprotein, und Amyloid-Beta, die alle in AD-Pathogenese zu interagieren. &Uuml;berraschend, bleiben wichtige Fragen unbeantwortet aufgrund des Fehlens von sensitiven und spezifischen Methoden zur Beurteilung der Cholesterinspiegel im Gehirn bei subzellulare Aufl&ouml;sung. Die Ziele dieser &Uuml;berpr&uuml;fung sind nicht nur die verschiedenen Methoden zur Messung von Cholesterin und seine Metaboliten und Katalog-Ergebnisse aus AD-Patienten zu diskutieren, sondern auch einige neue Datenverkn&uuml;pfung hohe Plasmamembran Cholesterin mit Modifikationen der endocytic Abteilungen zu diskutieren. Diese Studien sind f&uuml;r AD-Pathologie, besonders relevant, da erweiterte Endosomen geglaubt werden, um die erste morphologische &Auml;nderung im AD Gehirne in sporadischen F&auml;llen und Down-Syndrom beobachtet werden.

Cholesterin-Ver&auml;nderungen bei Alzheimer-Krankheit: Methoden der Analyse und Auswirkungen auf die Bildung von erweiterten Endosomen.

Un crescente numero di risultati, implicando il metabolismo del colesterolo nella fisiopatologia della malattia di Alzheimer (AD) suggerisce il colesterolo come bersaglio per il trattamento. Ricerca in genetica, patologia, epidemiologia, biochimica e biologia cellulare, cos&igrave; come nei modelli animali, suggerisce che colesterolo, suo trasportatore nel cervello, apolipoproteina E, proteina precursore dell&#39;amiloide e beta-amiloide che tutti interagiscono nella patogenesi di annuncio. Sorprendentemente, chiave domande rimangono senza risposta a causa della mancanza di metodi sensibili e specifici per valutare i livelli di colesterolo nel cervello a risoluzione sottocellulari. Gli obiettivi di questa recensione sono non solo per discutere i vari metodi per misurare il colesterolo e i suoi metaboliti e a catalogo risultati ottenuti da pazienti con AD, ma anche per discutere di alcuni nuovi dati che collega colesterolo alto membrana plasmatica con modifiche dei vani endocitico. Questi studi sono particolarmente pertinenti alla patologia D.C., poich&eacute; endosomes allargata si ritiene di essere il primo cambiamento morfologico osservato nei cervelli di annuncio, in entrambi casi sporadici e sindrome di Down.

Le modifiche del colesterolo nella malattia di Alzheimer: metodi di analisi e l&#39;impatto sulla formazione del allargata endosomes.

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Un creciente n&#xFA;mero de resultados que implican el metabolismo del colesterol en la fisiopatolog&#xED;a de la enfermedad de Alzheimer (EA) sugieren el colesterol como un objetivo para el tratamiento. La investigaci&#xF3;n en gen&#xE9;tica, patolog&#xED;a, epidemiolog&#xED;a, bioqu&#xED;mica y biolog&#xED;a celular, as&#xED; como en modelos animales, sugiere que el colesterol, su transportador en el cerebro, la apolipoprote&#xED;na E, prote&#xED;na precursora de amiloide, y la beta-amiloide, interact&#xFA;an en la patogenia de la EA. Sorprendentemente, las preguntas clave siguen sin respuesta, debido a la falta de m&#xE9;todos sensibles y espec&#xED;ficos para la evaluaci&#xF3;n de los niveles de colesterol en el cerebro con una resoluci&#xF3;n subcelular. Los objetivos de esta revisi&#xF3;n no son s&#xF3;lo para discutir los distintos m&#xE9;todos para medir el colesterol y sus metabolitos y catalogar los resultados obtenidos de pacientes con EA, sino tambi&#xE9;n para discutir algunos nuevos datos que vinculan el colesterol alto membrana plasm&#xE1;tica con las modificaciones de los compartimentos endoc&#xED;tica. Estos estudios son particularmente relevantes para la patolog&#xED;a AD, ya ampliada endosomas se cree que es el primer cambio morfol&#xF3;gico observado en cerebros con la EA, tanto en casos espor&#xE1;dicos y el s&#xED;ndrome de Down.

Los cambios de colesterol en la enfermedad de Alzheimer: M&#xE9;todos de An&#xE1;lisis e impacto sobre la formaci&#xF3;n de endosomas ampliada

&#x51E0;&#x4E2A;&#x884C;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x652F;&#x6301;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x4E0E;&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x75C5;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x5F3A;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x662F;&#x5DF2;&#x77E5;&#x8C03;&#x5236;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; (APP) &#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; &#xFF0D; &beta; &#xFF0D; &#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x86CB;&#x767D; (Abeta) &#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EBF;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528; (&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;) &#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x65BD;&#x52A0;&#x5728;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x548C;&#x7EBF;&#x6027;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6; &#xFF08;-40%+ 40%&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x5206;&#x522B;&#x7532;&#x57FA;-&beta;-&#x73AF;&#x7CCA;&#x7CBE; (MBCD) &#x548C; MBCD &#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x590D;&#x6742;&#x6240;&#x81F4;)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x9010;&#x6B65;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x6545;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E0B;&#x8C03;&#x3002;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC; APP &#x5185;&#x541E;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x65E9;&#x671F; endosomes &#xFF08;dynamin2&#xFF0C;Eps15 &#x548C; Rab5)&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x4EE5;&#x5916;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E0D;&#x53D7;&#x540C;&#x6837;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x3002;Cannabinoid1 &#x548C;&#x8F6C;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x786E;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x884D;&#x751F;&#x7269; (&#x78FA;-NHS-SS-&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#xFF09; &#x5728;&#x6807;&#x7B7E;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x662F;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x53D8;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x4ECE;-40%&#x81F3; 40%&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5728; AD &#x4E2D;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x589E;&#x52A0;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x8D1F;&#x8D23;&#x589E;&#x5F3A;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;-&#x3001; dynamin2-&#x3001; Eps15 &#x548C; Rab5 &#x4F9D;&#x8D56;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x968F;&#x540E;&#x7684; Abeta &#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x3002;

&#x9AD8;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6C34;&#x5E73;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; Abeta &#x5206;&#x6CCC;&#x3002;

Several lines of evidence support a strong relationship between cholesterol and Alzheimer's disease pathogenesis. Membrane cholesterol is known to modulate amyloid precursor protein (APP) endocytosis and amyloid-beta (Abeta) secretion. Here we show in a human cell line model of endocytosis (HEK293 cells) that cholesterol exerts these effects in a dose-dependent and linear manner, over a wide range of concentrations (-40% to +40% variations of plasma membrane cholesterol induced by methyl-beta-cyclodextrin (MBCD) and MBCD-cholesterol complex respectively). We found that the gradual effect of cholesterol is inhibited by small interference RNA-mediated downregulation of clathrin. Modulation of clathrin-mediated APP endocytosis by cholesterol was further demonstrated using mutants of proteins involved in the formation of early endosomes (dynamin2, Eps15 and Rab5). Importantly we show that membrane proteins other than APP are not affected by cholesterol to the same extent. Indeed clathrin-dependent endocytosis of transferrin and cannabinoid1 receptors as well as internalization of surface proteins labelled with a biotin derivative (sulfo-NHS-SS-biotin) were not sensitive to variations of plasma membrane cholesterol from -40% to 40%. In conclusion clathrin-dependent APP endocytosis appears to be very sensitive to the levels of membrane cholesterol. These results suggest that cholesterol increase in AD could be responsible for the enhanced internalization of clathrin-, dynamin2-, Eps15- and Rab5-dependent endocytosis of APP and the ensuing overproduction of Abeta.

Clathrin-dependent APP endocytosis and Abeta secretion are highly sensitive to the level of plasma membrane cholesterol.

Plusieurs &#xE9;l&#xE9;ments de preuve de soutenir une forte relation entre le cholest&#xE9;rol et la pathogen&#xE8;se des maladies d&#x26;#39;Alzheimer. Le taux de cholest&#xE9;rol membranaire est connue pour moduler la prot&#xE9;ine pr&#xE9;curseur amylo&#xEF;de (APP) endocytose et b&#xEA;ta-amylo&#xEF;de (Abeta) s&#xE9;cr&#xE9;tion. Ici, nous montrons dans un mod&#xE8;le de lign&#xE9;e cellulaire humaine de l&#x26;#39;endocytose (cellules HEK293) que le cholest&#xE9;rol exerce ces effets de mani&#xE8;re dose-d&#xE9;pendante et lin&#xE9;aire, sur une large gamme de concentrations (-40% &#xE0; +40% des variations de taux de cholest&#xE9;rol membrane plasmique induite par m&#xE9;thyl-b&#xEA;ta-cyclodextrine (MBCD) et MBCD-cholest&#xE9;rol complexe respectivement). Nous avons constat&#xE9; que l&#x26;#39;effet progressif de cholest&#xE9;rol est inhib&#xE9;e par interf&#xE9;rence ARN m&#xE9;di&#xE9;e par la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de la clathrine petite. Modulation de l&#x26;#39;endocytose clathrine APP par le cholest&#xE9;rol a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9;e en utilisant des mutants de prot&#xE9;ines impliqu&#xE9;es dans la formation des endosomes pr&#xE9;coces (dynamin2, Eps15 et Rab5). Il est important de nous montrer que d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines membranaires de l&#x26;#39;APP ne sont pas affect&#xE9;s par le cholest&#xE9;rol dans la m&#xEA;me mesure. En effet d&#xE9;pendante de la clathrine endocytose de la transferrine et cannabinoid1 r&#xE9;cepteurs ainsi que l&#x26;#39;internalisation des prot&#xE9;ines de surface marqu&#xE9;s avec un d&#xE9;riv&#xE9; de la biotine (sulfo-NHS-SS-biotine) ne sont pas sensibles aux variations de taux de cholest&#xE9;rol membrane plasmique de -40% &#xE0; 40%. En conclusion endocytose d&#xE9;pendante de la clathrine APP semble &#xEA;tre tr&#xE8;s sensible aux niveaux de cholest&#xE9;rol membranaire. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que l&#x26;#39;augmentation du cholest&#xE9;rol dans la MA pourrait &#xEA;tre responsable de l&#x26;#39;internalisation accrue de la clathrine-, dynamin2-, Eps15 et Rab5 l&#x26;#39;endocytose d&#xE9;pendante de l&#x26;#39;APP et de la surproduction qui a suivi de l&#x26;#39;amylo&#xEF;de b&#xEA;ta.

L&#x26;#39;endocytose d&#xE9;pendante de la clathrine APP et la s&#xE9;cr&#xE9;tion Abeta sont tr&#xE8;s sensibles &#xE0; la teneur en cholest&#xE9;rol membrane plasmique

Mehrere Zeilen Beweise unterst&uuml;tzen eine starke Beziehung zwischen Cholesterin und Pathogenese der Alzheimer-Krankheit. Membran-Cholesterin ist bekannt, dass Amyloid-Vorl&auml;ufer-Protein (APP)-Endozytose und Amyloid-Beta (Abeta) Sekretion zu modulieren. Hier zeigen wir in einer menschlichen Zelle-Line-Modell der Endozytose (HEK293 Zellen), dass Cholesterin diese Effekte eine dosisabh&auml;ngige und lineare Weise, &uuml;ber einer breiten Strecke der Konzentrationen &uuml;bt (-40 % bis + 40 % Variationen der Plasmamembran Cholesterin induziert durch Methyl-Beta-Cyclodextrin (MBCD) und MBCD-Cholesterin-Komplex bzw.). Wir fanden, dass die allm&auml;hliche Einwirkung von Cholesterin durch kleiner Eingriff RNA-vermittelte Heraufregulation des Clathrin gehemmt wird. Modulation der Clathrin-vermittelte APP Endozytose von Cholesterin war zeigte ein weiteres Mal mit Mutanten-Proteine bei der Bildung der fr&uuml;hen Endosomen (dynamin2, Eps15 und Rab5). Vor allem zeigen wir, dass die Membranproteine als APP nicht von Cholesterin in gleichem Ma&szlig;e betroffen sind. In der Tat Clathrin-abh&auml;ngige Endozytose von Transferrin und cannabinoid1-Rezeptoren sowie Internalisierung der Oberfl&auml;che Proteine, gekennzeichnet mit einem Biotin-Derivat (Sulfo-NHS-SS-Biotin) waren nicht empfindlich auf Ver&auml;nderungen der Plasmamembran Cholesterin von-40 % auf 40 %. Abschlie&szlig;end erscheint Clathrin-abh&auml;ngige APP Endozytose sehr empfindlich auf die Ebenen der Membran Cholesterin. Diese Ergebnisse legen nahe, dass Cholesterin-Anstieg AD f&uuml;r die verbesserte Internalisierung der Clathrin, dynamin2, Eps15 und Rab5-abh&auml;ngige Endozytose App und die anschlie&szlig;ende &Uuml;berproduktion von Abeta verantwortlich sein k&ouml;nnte.

Clathrin-abh&auml;ngige APP Endozytose und Abeta-Sekretion sind sehr empfindlich auf das Niveau des Cholesterins Plasmamembran.

Diverse linee di evidenze supportano un forte legame tra il colesterolo e la patogenesi della malattia di Alzheimer. Colesterolo di membrana &egrave; noto per modulare endocitosi (APP) proteina precursore dell&#39;amiloide e secrezione di beta-amiloide (Abeta). Qui vi mostriamo in un modello di linea cellulare umana di endocitosi (cellule HEK293) colesterolo esercita questi effetti in modo dose-dipendente e lineare, in un ampio intervallo di concentrazioni (-40% a + 40% variazioni della membrana plasmatica colesterolo indotto da metil-beta-ciclodestrina (Silk) e complesso Silk-colesterolo rispettivamente). Abbiamo trovato che l&#39;effetto graduale del colesterolo &egrave; inibito da piccola interferenza RNA-mediata downregulation di clatrina. Modulazione di clatrina-mediata endocytosis APP da colesterolo fu ulteriormente dimostrata usando mutanti di proteine coinvolte nella formazione dei primi endosomes (dynamin2, Eps15 e Rab5). Soprattutto ci mostra che le proteine di membrana diversi da APP non sono interessate dal colesterolo nella stessa misura. Endocitosi clatrina dipendente infatti dei recettori Transferrina e cannabinoid1 cos&igrave; come interiorizzazione delle proteine della superficie etichettati con un derivato di biotina (sulfo-NHS-biotina-SS) non erano sensibili alle variazioni di colesterolo di membrana del plasma da -40% a 40%. In conclusione endocitosi APP clatrina dipendente sembra essere molto sensibile ai livelli del colesterolo di membrana. Questi risultati suggeriscono che AD aumento del colesterolo potrebbe essere responsabile per la maggiore interiorizzazione di clatrina, dynamin2, endocitosi Eps15 e Rab5-dipendente di APP e la conseguente sovrapproduzione di Abeta.

Endocitosi APP clatrina-dipendente e la secrezione di Abeta sono altamente sensibili al livello di colesterolo di membrana del plasma.

&#x8A3C;&#x62E0;&#x306E;&#x6570;&#x884C;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C4;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x75C5;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x819C;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;APP&#xFF09;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;-&#x3B2;&#xFF08;&#x5B89;&#x90E8;&#x7530;&#xFF09;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x5E83;&#x3044;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x7BC4;&#x56F2;&#xFF08;-40&#xFF05;&#x301C;+40&#xFF05;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3001;&#x7528;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3068;&#x76F4;&#x7DDA;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#xFF08;HEK293&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;-&#x3B2;-&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;MBCD&#xFF09;&#x3068;MBCD-&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x5A92;&#x4ECB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;APP&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x65E9;&#x671F;&#x306B;&#xFF08;dynamin2&#x3001;Eps15&#x3068;Rab5&#x306E;&#xFF09;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;APP&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x540C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;cannabinoid1&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#xFF08;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;-NHS-SS-&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#xFF09;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x9762;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x306F;&#x3001;-40&#xFF05;&#x304B;&#x3089;40&#xFF05;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;APP&#x306F;&#x819C;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;AD&#x3067;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;dynamin2-&#x3001;Eps15&#x3068;APP&#x3068;&#x5B89;&#x90E8;&#x7530;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x306E;Rab5&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5185;&#x5728;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x3092;&#x8CA0;&#x3046;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;APP&#x3068;&#x5B89;&#x90E8;&#x7530;&#x5206;&#x6CCC;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x654F;&#x611F;

&#xC5EC;&#xB7EC; &#xC904; &#xC99D;&#xAC70;&#xC758; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xBC0F; &#xC54C; &#xCE20; &#xD558;&#xC774; &#xBA38; &#xBCD1; pathogenesis&#xC758; &#xAC15;&#xD55C; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC804; &#xAD6C;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (APP) endocytosis &#xBC0F; &#xC544; &#xBC00; &#xB85C;&#xC774;&#xB4DC;-&#xBCA0;&#xD0C0; (Abeta) &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xB113;&#xC740; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC758;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xC120;&#xD615; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xADF8; endocytosis (HEK293 &#xC138;&#xD3EC;)&#xC758; &#xC778;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC; &#xC120; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; (-40% + 40% &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC744; &#xAC01;&#xAC01; &#xBA54; &#xD2F8;-&#xBCA0;&#xD0C0;-cyclodextrin (MBCD)&#xC640; MBCD-&#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C;). &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC758; &#xC810;&#xC9C4;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC; clathrin&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xC911;&#xC7AC; downregulation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158; endocytosis clathrin &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870; &#xB354; &#xC774;&#xB978; endosomes (dynamin2, Eps15 &#xBC0F; Rab5)&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158; &#xAC19;&#xC740; &#xC815;&#xB3C4;&#xB85C; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Transferrin &#xBC0F; cannabinoid1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; clathrin &#xC885;&#xC18D; endocytosis &#xBB3C;&#xB860; biotin &#xD30C;&#xC0DD; (sulfo-&#xBCF4; &#xAC74;&#xAD6D;-SS-biotin)&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;-40&#xC5D0;&#xC11C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4; 40% %. &#xACB0;&#xB860;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; clathrin &#xC885;&#xC18D; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; endocytosis &#xB9C9; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xAC83; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xAD11;&#xACE0;&#xC5D0; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xC99D;&#xAC00; clathrin-, dynamin2, &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; Eps15 &#xBC0F; Rab5 &#xC885;&#xC18D; endocytosis &#xBC0F; Abeta&#xC758; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xACFC;&#xC789;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xC9C8; &#xC218; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Clathrin &#xC885;&#xC18D; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; endocytosis &#xBC0F; Abeta &#xBD84; &#xBE44; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Varias l&#xED;neas de evidencia apoyan una fuerte relaci&#xF3;n entre el colesterol y la patog&#xE9;nesis de la enfermedad de Alzheimer. Colesterol de la membrana se conoce por modular la prote&#xED;na precursora amiloide (APP) endocitosis y secreci&#xF3;n de beta-amiloide (Abeta). Aqu&#xED; nos muestran en un modelo de l&#xED;nea celular humana de la endocitosis (c&#xE9;lulas HEK293) que el colesterol ejerce estos efectos en una forma dosis-dependiente y lineal, en un amplio rango de concentraciones (-40% a +40% variaciones de colesterol de la membrana plasm&#xE1;tica inducido por metil-beta-ciclodextrina (MBCD) y complejo MBCD-colesterol, respectivamente). Se encontr&#xF3; que el efecto gradual de colesterol es inhibida por peque&#xF1;os ARN de interferencia mediada downregulation de clatrina. La modulaci&#xF3;n de la endocitosis mediada por clatrina APP por el colesterol se demostr&#xF3; de nuevo con los mutantes de las prote&#xED;nas implicadas en la formaci&#xF3;n de endosomas tempranos (dynamin2, Eps15 y Rab5). Es importante destacar que nos muestran que otras prote&#xED;nas de membrana que APP no se ven afectados por el colesterol en la misma medida. En efecto clathrin endocitosis dependiente de la transferrina y receptores cannabinoid1 as&#xED; como la internalizaci&#xF3;n de prote&#xED;nas de superficie marcadas con un derivado de biotina (sulfo-NHS-SS-biotina) no eran sensibles a las variaciones de colesterol membrana plasm&#xE1;tica de -40% a 40%. En conclusi&#xF3;n clathrin endocitosis dependiente APP parece ser muy sensibles a los niveles de colesterol de la membrana. Estos resultados sugieren que el aumento del colesterol en el a&#xF1;o podr&#xED;a ser responsable de la internalizaci&#xF3;n mejorada de clatrina, dynamin2, Eps15 y Rab5 dependiente de la endocitosis de la PAA y el exceso de producci&#xF3;n resultante de Abeta.

Clathrin endocitosis dependiente de APP y la secreci&#xF3;n de Abeta son muy sensibles a los niveles de colesterol membrana plasm&#xE1;tica

&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x80BD; (A&beta;) &#x662F;&#x7531;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; (APP) &#x8FDE;&#x7EED;&#x5288;&#x88C2;&#x751F;&#x6210; &beta;-secretase (Bace1) &#x548C; &gamma;-secretase&#x3002;A&beta; &#x751F;&#x4EA7;&#x540E;&#x52A0;&#x8F7D;&#x672A;&#x77E5;&#x673A;&#x5236;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A; APP Bace1 &#x63A5;&#x8FD1;&#x5982;&#x4F55;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FD9;&#x4E00;&#x73B0;&#x8C61;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; F&ouml;rster &#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x6E90;&#x8F6C;&#x8BA9; (&#x7279;&#x5730;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x6280;&#x672F;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x6216;&#x4EC5;&#x4F7F;&#x7528;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x76F8;&#x5173;&#x5149;&#x8C31;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A; APP &#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (YFP) &#x548C; Bace1 &#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x5206;&#x5B50;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x7B4F;&#x5206;&#x533A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x66B4;&#x9732;&#x540E;&#x4E0D;&#x5C11;&#x4E8E; 10 &#x5206;&#x949F;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x5728;&#x819C;&#x548C; APP Bace1-GFP/APP-mCherry &#x8FD1;&#x8DDD;&#x79BB;&#x95F4;&#x63A5;&#x589E;&#x52A0; relocalizes &#x4EE5;&#x7B4F;&#x677F;&#x524D;&#x9762;&#x5FEB;&#x901F;&#x541E;&#x7684;&#x57DF;&#x3002;&#x5728;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x66DD;&#x5149;&#xFF0C;APP &#x548C; Bace1 &#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x63A5;&#x8FD1;&#x819C;&#x5C42;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x52A0;&#x8F7D;&#x5E76;&#x4E0D;&#x589E;&#x52A0; A&beta; &#x751F;&#x4EA7;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9; Bace1 &#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x4EA7;&#x751F;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x800C;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x6539;&#x53D8; Bace1 &#x5411;&#x5176;&#x57FA;&#x677F;&#xFF0C;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x53EF;&#x8BBF;&#x95EE;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x53EF;&#x8BBF;&#x95EE;&#x6027;&#x88AB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x805A;&#x7C7B;&#x5728;&#x8102;&#x7B4F;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x5FEB;&#x901F;&#x541E;&#x3002;

&#x672C;&#x5730;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x589E;&#x52A0;&#x89E6;&#x53D1;&#x5668;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;-Bace1 &#x805A;&#x7C7B;&#x5728;&#x8102;&#x7B4F;&#x4E0E;&#x5FEB;&#x901F;&#x541E;&#x3002;

Amyloid peptide (AÎ²) is generated by sequential cleavage of the amyloid precursor protein (APP) by Î²-secretase (Bace1) and Î³-secretase. AÎ² production increases after plasma membrane cholesterol loading through unknown mechanisms. To determine how APP-Bace1 proximity affects this phenomenon, we developed a fluorescence lifetime imaging microscopy-FÃ¶rster resonance energy transfer (FLIM-FRET) technique for visualization of these molecules either by epifluorescence or at the plasma membrane only using total internal reflection fluorescence. Further, we used fluorescence correlation spectroscopy to determine the lipid rafts partition of APP-yellow fluorescent protein (YFP) and Bace1-green fluorescent protein (GFP) molecules at the plasma membrane of neurons. We show that less than 10 min after cholesterol exposure, Bace1-GFP/APP-mCherry proximity increases selectively at the membrane and APP relocalizes to raft domains, preceded by rapid endocytosis. After longer cholesterol exposures, APP and Bace1 are found in proximity intracellularly. We demonstrate that cholesterol loading does not increase AÎ² production by having a direct impact on Bace1 catalytic activity but rather by altering the accessibility of Bace1 to its substrate, APP. This change in accessibility is mediated by clustering in lipid rafts, followed by rapid endocytosis.

Local cholesterol increase triggers amyloid precursor protein-Bace1 clustering in lipid rafts and rapid endocytosis.

Peptide amylo&#xEF;de (A&#xDF;) est g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; par clivage s&#xE9;quentielle de la prot&#xE9;ine pr&#xE9;curseur amylo&#xEF;de (APP) par &#x3B2;-s&#xE9;cr&#xE9;tase (BACE1) et &#x3B3;-s&#xE9;cr&#xE9;tase. La production augmente A&#xDF; apr&#xE8;s le chargement du plasma cholest&#xE9;rol membranaire par des m&#xE9;canismes inconnus. Pour d&#xE9;terminer comment APP-BACE1 proximit&#xE9; affecte ce ph&#xE9;nom&#xE8;ne, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une imagerie de fluorescence dur&#xE9;e de vie microscopique F&#xF6;rster transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance (FLIM-FRET) technique pour la visualisation de ces mol&#xE9;cules, soit par &#xE9;pifluorescence ou &#xE0; la membrane plasmique que l&#x26;#39;aide totale fluorescence &#xE0; r&#xE9;flexion interne. En outre, nous avons utilis&#xE9; la spectroscopie de corr&#xE9;lation de fluorescence pour d&#xE9;terminer la partition des lipides des radeaux de l&#x26;#39;APP-prot&#xE9;ine fluorescente jaune (YFP) et BACE1-prot&#xE9;ine fluorescente verte (GFP) des mol&#xE9;cules &#xE0; la membrane plasmique des neurones. Nous montrons que moins de 10 min apr&#xE8;s l&#x26;#39;exposition le taux de cholest&#xE9;rol, de la proximit&#xE9; Bace1-GFP/APP-mCherry augmente s&#xE9;lectivement &#xE0; la membrane et l&#x26;#39;APP relocalise &#xE0; rafts, pr&#xE9;c&#xE9;d&#xE9;s par endocytose rapide. Apr&#xE8;s une exposition de cholest&#xE9;rol plus, l&#x26;#39;APP et BACE1 se trouvent &#xE0; proximit&#xE9; intracellulaire. Nous d&#xE9;montrons que le chargement du cholest&#xE9;rol n&#x26;#39;augmente pas la production de A&#xDF; en ayant un impact direct sur BACE1 activit&#xE9; catalytique mais plut&#xF4;t en modifiant l&#x26;#39;accessibilit&#xE9; de BACE1 &#xE0; son substrat, l&#x26;#39;APP. Ce changement dans l&#x26;#39;accessibilit&#xE9; est m&#xE9;di&#xE9;e par le regroupement dans des radeaux lipidiques, suivie par endocytose rapide.

Augmentation du cholest&#xE9;rol locale d&#xE9;clenche prot&#xE9;ine pr&#xE9;curseur amylo&#xEF;de-BACE1 clustering dans des radeaux lipidiques et l&#x26;#39;endocytose rapide

Amyloid-Peptid (A&beta;) wird durch fortlaufende Spaltung des Amyloid-Vorl&auml;ufer-Proteins (APP) von &beta;-Sekretase (Bace1) und &gamma;-Sekretase generiert. A&beta;-Produktion steigt nach Plasmamembran Cholesterin laden durch unbekannte Mechanismen. Um festzustellen, wie APP-Bace1 N&auml;he dieses Ph&auml;nomen beeinflusst, entwickelten wir ein Fluoreszenz Lebensdauer bildgebendes Mikroskopie-F&ouml;rster Resonanz Energie Transfer (FLIM-FRET) Verfahren zur Visualisierung dieser Molek&uuml;le durch Epifluoreszenz oder an der Plasmamembran, die nur mit Totalreflexion Fluoreszenz. Dar&uuml;ber hinaus bestimmt wir Fluoreszenz-Korrelations-Spektroskopie, die Lipid-Fl&ouml;&szlig;e-Partition APP-gelb fluoreszierende Protein (YFP) und Bace1-gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (GFP) Molek&uuml;le an die Plasmamembran von Neuronen. Wir zeigen, dass weniger als 10 min nach der Cholesterin-Exposition, Bace1-GFP/APP-mCherry N&auml;he erh&ouml;ht selektiv an der Membran und APP relocalizes um raft Dom&auml;nen, schnelle Endozytose vorangestellt. Nach l&auml;ngeren Cholesterin Forderungen APP und Bace1 in N&auml;he intrazellul&auml;r befinden. Wir zeigen, dass Cholesterin laden A&beta;-Produktion nicht durch, einen unmittelbaren Einfluss auf Bace1 katalytische Aktivit&auml;t, sondern durch &Auml;ndern der Zug&auml;nglichkeit von Bace1 auf seine Substrat, APP erh&ouml;ht. Diese &Auml;nderung im Bereich der Zug&auml;nglichkeit ist durch clustering in Lipid Rafts, gefolgt von schnellen Endozytose vermittelt.

Erh&ouml;hung der lokalen Cholesterin l&ouml;st Amyloid Precursor Protein-Bace1 Clusterbildung in Lipid Rafts und schnelle Endozytose.

Peptide amiloide (A&beta;) generato dalla scissione sequenziale della proteina precursore dell&#39;amiloide (APP) &beta;-secretasi (Bace1) e &gamma;-secretasi. Produzione di A&beta; aumenta dopo il colesterolo di membrana del plasma caricamento attraverso meccanismi sconosciuti. Per determinare come APP-Bace1 vicinanza influisce su questo fenomeno, abbiamo sviluppato una fluorescenza durata microscopia-F&ouml;rster risonanza energia trasferimento (FLIM-FRET) tecnica di imaging per la visualizzazione di queste molecole epifluorescenza o alla membrana del plasma solo mediante fluorescenza di riflessione interna totale. Ulteriormente, abbiamo utilizzato la spettroscopia di correlazione di fluorescenza per determinare la partizione di zattere lipidiche della proteina fluorescente giallo-APP (YFP) e molecole di Bace1-green fluorescent protein (GFP) presso la membrana plasmatica dei neuroni. Mostriamo che meno di 10 min dopo l&#39;esposizione di colesterolo, Bace1-GFP/APP-mCherry aumenti di prossimit&agrave; in modo selettivo a membrana e APP relocalizes per zattera domini, precedute dalla rapida endocitosi. Dopo le esposizioni pi&ugrave; lunghe colesterolo, APP e Bace1 si trovano in prossimit&agrave; intracellularly. Dimostriamo che carico di colesterolo non aumentare la produzione di A&beta; avendo un impatto diretto sull&#39;attivit&agrave; catalitica Bace1 ma piuttosto alterando l&#39;accessibilit&agrave; di Bace1 al suo substrato, APP. Questo cambiamento di accessibilit&agrave; &egrave; mediato da clustering in zattere lipidiche, seguite da rapida endocitosi.

Aumento del colesterolo locale innesca precursore dell&#39;amiloide proteina-Bace1 clustering in zattere lipidiche e rapida endocitosi.

&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;A&#x3B2;&#xFF09;&#x3B2;-&#x30BB;&#x30AF;&#x30EC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;BACE1&#xFF09;&#x3068;&#x3B3;-&#x30BB;&#x30AF;&#x30EC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;APP&#xFF09;&#x306E;&#x9806;&#x6B21;&#x958B;&#x88C2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; A&#x3B2;&#x7523;&#x751F;&#x306F;&#x3001;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x8CA0;&#x8377;&#x5F8C;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; APP-BACE1&#x8FD1;&#x63A5;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x73FE;&#x8C61;&#x3092;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xB7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FLIM-FRET&#xFF09;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x843D;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x307F;&#x5185;&#x90E8;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3067;&#x306E;APP-&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;YFP&#xFF09;&#x3068;BACE1&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x306E;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x76F8;&#x95A2;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;10&#x5206;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x3001;Bace1-GFP/APP-mCherry&#x306E;&#x8FD1;&#x63A5;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;APP&#x304C;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x7D9A;&#x304F;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;relocalizes&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x9577;&#x3044;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x66DD;&#x9732;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;APP&#x3068;BACE1&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x8FD1;&#x63A5;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x8CA0;&#x8377;&#x304C;BACE1&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;APP&#x3092;BACE1&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;A&#x3B2;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x3044;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;

&#x5730;&#x5143;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-BACE1&#x8102;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;

&#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; (A&beta;)&#xB294; &beta;-secretase (Bace1) &#xBC0F; &gamma;-secretase&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC804; &#xAD6C;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (&#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;)&#xC758; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. A&beta; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB85C;&#xB4DC; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158; Bace1 &#xADFC;&#xC811;&#xC774;&#xC774; &#xD604;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; F&ouml;rster &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; (FLIM-&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;) &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC774; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; epifluorescence &#xB610;&#xB294; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD615;&#xAD11;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD615;&#xAD11; &#xC0C1;&#xAD00; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158;-&#xD669;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (YFP) &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; Bace1 &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP) &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB5CF;&#xBAA9; &#xD30C;&#xD2F0;&#xC158;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xB178;&#xCD9C; &#xD6C4; 10 &#xBD84; &#xBBF8;&#xB9CC; Bace1 GFP/&#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158; mCherry &#xADFC;&#xC811; &#xC99D;&#xAC00; &#xB9C9;&#xACFC; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC55E;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; endocytosis &#xB5CF;&#xBAA9;&#xC744; relocalizes &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xC774;&#xC0C1; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xB178;&#xCD9C; &#xD6C4; &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158; &#xBC0F; bace1&#xB294; &#xCE68; &#xADFC;&#xC811;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;&#xB2E4;. Bace1 &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xACE0; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; bace1&#xC758; &#xAE30;&#xD310; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xAC8C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC635;&#xC158;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xC5EC; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xB85C;&#xB4DC; A&beta; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0B4;&#xAC8C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC635;&#xC158;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294;&#xC774; &#xBCC0;&#xD654; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xBE60;&#xB978; endocytosis &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB5CF;&#xBAA9;&#xC5D0; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1; &#xC911;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB85C;&#xCEEC; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xC99D;&#xAC00; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC804;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Bace1 &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; endocytosis &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

P&#xE9;ptido amiloide (Ap) se genera por escisi&#xF3;n secuencial de la prote&#xED;na precursora del amiloide (APP) por &#x3B2;-secretasa (BACE1) y &#x3B3;-secretasa. La producci&#xF3;n de Ap aumenta despu&#xE9;s de la carga de plasma colesterol de la membrana a trav&#xE9;s de mecanismos desconocidos. Para determinar la APP-BACE1 la proximidad afecta a este fen&#xF3;meno, se desarroll&#xF3; un curso de la vida de microscop&#xED;a de fluorescencia de imagen de resonancia-la transferencia de energ&#xED;a F&#xF6;rster (FRET Flim-) la t&#xE9;cnica para la visualizaci&#xF3;n de estas mol&#xE9;culas, ya sea por epifluorescencia o en la membrana plasm&#xE1;tica s&#xF3;lo mediante fluorescencia de reflexi&#xF3;n total interna. Adem&#xE1;s, se utiliz&#xF3; la espectroscopia de fluorescencia de correlaci&#xF3;n para determinar la partici&#xF3;n de l&#xED;pidos balsas de APP-prote&#xED;na fluorescente amarilla (YFP) y BACE1 verde mol&#xE9;culas de prote&#xED;na fluorescente (GFP) en la membrana plasm&#xE1;tica de las neuronas. Nos muestran que menos de 10 minutos despu&#xE9;s de la exposici&#xF3;n el colesterol, la proximidad Bace1-GFP/APP-mCherry aumenta de forma selectiva en la membrana y APP relocaliza a los dominios de la balsa, precedidos por endocitosis r&#xE1;pida. Despu&#xE9;s de las exposiciones m&#xE1;s largas de colesterol, APP y BACE1 se encuentran en la proximidad intracelularmente. Se demuestra que la carga de colesterol no aumenta la producci&#xF3;n de Ap por tener un impacto directo en BACE1 actividad catal&#xED;tica, sino m&#xE1;s bien mediante la alteraci&#xF3;n de la accesibilidad de BACE1 a su sustrato, APP. Este cambio en el acceso est&#xE1; mediado por la agrupaci&#xF3;n en las balsas de l&#xED;pidos, seguido por endocitosis r&#xE1;pida.

El aumento del colesterol Local Activa la prote&#xED;na precursora amiloide-BACE1 agrupaci&#xF3;n en balsas de l&#xED;pidos y endocitosis r&#xE1;pida

The snake toxin MT7 is a potent and specific allosteric modulator of the human M1 muscarinic receptor (hM1). We previously characterized by mutagenesis experiments the functional determinants of the MT7-hM1 receptor interaction (Fruchart-Gaillard, C., Mourier, G., Marquer, C., Stura, E., Birdsall, N. J., and Servent, D. (2008) Mol. Pharmacol. 74, 1554-1563) and more recently collected evidence indicating that MT7 may bind to a dimeric form of hM1 (Marquer, C., Fruchart-Gaillard, C., Mourier, G., Grandjean, O., Girard, E., le Maire, M., Brown, S., and Servent, D. (2010) Biol. Cell 102, 409-420). To structurally characterize the MT7-hM1 complex, we adopted a strategy combining double mutant cycle experiments and molecular modeling calculations. First, thirty-three ligand-receptor proximities were identified from the analysis of sixty-one double mutant binding affinities. Several toxin residues that are more than 25 â„« apart still contact the same residues on the receptor. As a consequence, attempts to satisfy all the restraints by docking the toxin onto a single receptor failed. The toxin was then positioned onto two receptors during five independent flexible docking simulations. The different possible ligand and receptor extracellular loop conformations were described by performing simulations in explicit solvent. All the docking calculations converged to the same conformation of the MT7-hM1 dimer complex, satisfying the experimental restraints and in which (i) the toxin interacts with the extracellular side of the receptor, (ii) the tips of MT7 loops II and III contact one hM1 protomer, whereas the tip of loop I binds to the other protomer, and (iii) the hM1 dimeric interface involves the transmembrane helices TM6 and TM7. These results structurally support the high affinity and selectivity of the MT7-hM1 interaction and highlight the atypical mode of interaction of this allosteric ligand on its G protein-coupled receptor target.

Structural model of ligand-G protein-coupled receptor (GPCR) complex based on experimental double mutant cycle data: MT7 snake toxin bound to dimeric hM1 muscarinic receptor.

&#x86C7;&#x6BD2;&#x7D20; MT7 &#x662F;&#x53D7;&#x4EBA;&#x7C7B; M1 &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x4F53; (hM1&#xFF09; &#x7684;&#x70C8;&#x6027;&#x548C;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x53D8;&#x6784;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x7279;&#x70B9;&#x7684;&#x8BF1;&#x53D8;&#x5B9E;&#x9A8C; MT7 hM1 &#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20; (C.&#xFF0C;Fruchart-&#x51EF;&#x7EB3; Mourier G.&#x3001; Marquer&#x3001; C.&#x3001; Stura&#x3001; E.&#x3001; &#x4F2F;&#x7D22;&#x5C14;&#x3001; N.J.&#x4EC6;&#x5219;&#xFF0C;) &#x548C;&#x66F4;&#x591A;&#x6700;&#x8FD1;&#x6536;&#x96C6;&#x5230;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E; MT7 &#x53EF;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7A97; hM1 &#x7684;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53; (C.&#xFF0C;Marquer&#xFF0C;Fruchart-&#x51EF;&#x7EB3; G.C.&#xFF0C;Mourier&#xFF0C;&#xFF0C;Grandjean&#xFF0C;O.&#xFF0C;&#x5409;&#x62C9;&#x5FB7;&#xFF0C;E.&#xFF0C;le &#x5357;&#x65B9; (D.2008) Mol.&#x836F;&#x6548;&#x5B66;&#x3002; 74&#xFF0C;1554&#x5E74; 1563&#x5E74;&middot;&#xFF0C;&#x68D5;&#x8272;&#xFF0C;&#x7F8E;&#x56FD;&#xFF0C;&#x548C; Servent&#xFF0C;D.(2010 &#x5E74;) Biol.&#x5355;&#x5143;&#x683C; 102&#x3001; 409-420&#xFF09;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x70B9; MT7-hM1 &#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x6218;&#x7565;&#x7ED3;&#x5408;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x5468;&#x671F;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x62DF;&#x8BA1;&#x7B97;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#xFF0C;&#x4ECE; 61 &#x4F4D;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E09;&#x5341;&#x4E09;&#x4E2A;&#x914D;&#x4F53;-&#x53D7;&#x4F53;&#x5D29;&#x3002;&#x51E0;&#x79CD;&#x6BD2;&#x7D20;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x662F;&#x76F8;&#x8DDD;&#x8D85;&#x8FC7; 25 &#x2460; &#x4ECD;&#x8054;&#x7CFB;&#x5BF9;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6EE1;&#x8DB3;&#x4E00;&#x5207;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x575E;&#x7AD9;&#x4E0A;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53D7;&#x4F53;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7684;&#x5C1D;&#x8BD5;&#x5931;&#x8D25;&#x3002;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7136;&#x540E;&#x671F;&#x95F4;&#x4E94;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7075;&#x6D3B;&#x5BF9;&#x63A5;&#x6A21;&#x62DF;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5230;&#x4E24;&#x4E2A;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x6A21;&#x62DF;&#x6267;&#x884C;&#x663E;&#x5F0F;&#x6EB6;&#x5242;&#x4E2D;&#x53D9;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4E0D;&#x540C;&#x53EF;&#x80FD;&#x914D;&#x4F53;&#x548C;&#x53D7;&#x4F53;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF;&#x8DEF;&#x6784;&#x8C61;&#x3002;&#x505C;&#x9760;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x8BA1;&#x7B97;&#x90FD;&#x6536;&#x655B;&#x5230;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6784;&#x8C61; MT7 hM1 &#x7684;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x590D;&#x6742;&#x3001; &#x6EE1;&#x8DB3;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x9650;&#x5236;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728; (i) &#x6BD2;&#x7D20;&#x4E0E;&#x53D7;&#x4F53;&#x3001; (ii) &#x7684;&#x63D0;&#x793A;&#x7684; MT7 &#x5FAA;&#x73AF;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x548C;&#x7B2C;&#x4E09;&#x63A5;&#x89E6;&#x4E00;&#x4E2A; hM1 protomer&#xFF0C;&#x80DE;&#x5916;&#x4FA7;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x800C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x63D0;&#x793A;&#x6211;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5176;&#x4ED6; protomer&#xFF0C;&#x548C; (iii) hM1 &#x4E8C;&#x805A;&#x63A5;&#x53E3;&#x6D89;&#x53CA; TM6 &#x548C; TM7 &#x8DE8;&#x819C;&#x87BA;&#x65CB;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x7ED3;&#x6784;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684; MT7 hM1 &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x6B64;&#x53D8;&#x6784;&#x914D;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x5178;&#x578B;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

&#x57FA;&#x4E8E;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5468;&#x671F;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x914D;&#x4F53; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53; (&#x6C14;&#x76F8;) &#x590D;&#x6742;&#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x578B;&#xFF1A; MT7 &#x86C7;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E8C;&#x805A; hM1 &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;

La toxine de serpent MT7 est un modulateur allost&eacute;rique puissant et sp&eacute;cifique de l&#39;humain r&eacute;cepteurs muscariniques M1 (hM1). Pr&eacute;c&eacute;demment, nous avons caract&eacute;ris&eacute; par des exp&eacute;riences de mutagen&egrave;se les d&eacute;terminants fonctionnels de l&#39;interaction de r&eacute;cepteur MT7-hM1 (Fruchart-Gaillard, C., Mourier, G., Marquer, C., de la Stura, E., N.. J., Birdsall et Servent, d. (2008) mol Pharmacol. 74, 1554-1563) et plus r&eacute;cemment rassembl&eacute; des preuves indiquant que MT7 peut lier &agrave; une forme de dim&egrave;re de hM1 (Marquer, C., Fruchart-Gaillard, C., Mourier, G., Grandjean, O., Girard, E., le MaireM., brun, S. et Servent, d. (2010) Biol Cell 102, 409-420). Afin de caract&eacute;riser structurellement la MT7-hM1 complexe, nous avons adopt&eacute; une strat&eacute;gie combinant double cycle mutant des exp&eacute;riences et des calculs de mod&eacute;lisation mol&eacute;culaire. Tout d&#39;abord, proximit&eacute;s de ligand-r&eacute;cepteur de trente-trois ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es par l&#39;analyse des affinit&eacute;s de liaison mutant double de soixante et un. Plusieurs r&eacute;sidus de toxines qui sont plus de 25 &Aring; apart quand m&ecirc;me communiquer avec les m&ecirc;mes r&eacute;sidus sur le r&eacute;cepteur. En cons&eacute;quence, les tentatives pour satisfaire toutes les contraintes de l&#39;accostage de la toxine sur un r&eacute;cepteur unique a &eacute;chou&eacute;. La toxine a &eacute;t&eacute; ensuite positionn&eacute;e sur deux r&eacute;cepteurs pendant cinq simulations de station d&#39;accueil flexibles ind&eacute;pendantes. Le ligand possible diff&eacute;rente et les conformations boucle extracellulaire du r&eacute;cepteur ont &eacute;t&eacute; d&eacute;crits en effectuant des simulations en dissolvant explicite. Tous les calculs d&#39;amarrage convergent vers la m&ecirc;me conformation du complexe dim&egrave;re MT7-hM1, satisfaisant les contraintes exp&eacute;rimentales et dans laquelle (i) la toxine interagit avec le c&ocirc;t&eacute; extracellulaire du r&eacute;cepteur, (ii) les extr&eacute;mit&eacute;s des boucles MT7 II et III contacter un protom&egrave;re hM1, tandis que l&#39;extr&eacute;mit&eacute; de la boucle, j&#39;ai lie aux autre le protom&egrave;re, et (iii) l&#39;interface de dim&egrave;re hM1 implique les h&eacute;lices transmembranaires TM6 et TM7. Structurellement, ces r&eacute;sultats appuient la haute affinit&eacute; et la s&eacute;lectivit&eacute; de l&#39;interaction MT7-hM1 et mettre en &eacute;vidence le mode atypique d&#39;interaction de ce ligand allost&eacute;rique sur sa cible de r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G.

Mod&egrave;le structural de ligand-G r&eacute;cepteur coupl&eacute; aux prot&eacute;ines (GPCR) complex bas&eacute; sur les donn&eacute;es exp&eacute;rimentales double cycle de mutant : toxine serpent MT7 li&eacute; au r&eacute;cepteur muscarinique hM1 dim&egrave;re.

Das Gift der Schlange MT7 ist ein potenter und spezifische allosterischer Modulator der menschlichen muskarinische M1-Rezeptor (hM1). Wir zuvor gepr&auml;gt Mutagenese Experimente die funktionalen Determinanten der MT7-hM1-Rezeptor-Interaktion (Fruchart-Gaillard, C., Mourier, G., Marquer, C., Stura, E., Birdsall, N. J. und Servent, D. (2008) mg Pharmacol. 74, 1554 &ndash; 1563) und mehr k&uuml;rzlich gesammelten Beweise darauf hinweist, dass MT7 einer dimeren Form der hM1 binden kann (Marquer, C., Fruchart-Gaillard, C., Mourier, G., Grandjean, O., Girard, E., le MaireM., Braun, S., und Servent, D. (2010) Biol. Handy-102, 409-420). Um die MT7-hM1 strukturell charakterisieren Komplex, haben wir eine Strategie, die die doppelte mutant Zyklus Experimente und Molekulare Modellierung Berechnungen. Erstens dreiunddrei&szlig;ig-Ligand-Rezeptor-n&auml;hen wurden aus der Analyse der Sixty-One Doppel mutant verbindliche Affinit&auml;ten identifiziert. Mehrere Toxin-R&uuml;ckst&auml;nde, die mehr als 25 &Aring; auseinander sind Kontakt noch dieselben R&uuml;ckst&auml;nde auf den Rezeptor. Infolgedessen fehlgeschlagene Versuche, die Fesseln zu befriedigen, indem das Toxin auf ein einzelnes Rezeptor andocken. Das Toxin wurde dann auf zwei Rezeptoren w&auml;hrend f&uuml;nf unabh&auml;ngige flexible docking-Simulationen positioniert. Die verschiedenen m&ouml;glichen Ligand und Rezeptor extrazellul&auml;re Schleife Konformationen wurden mithilfe von Simulationen in explizite L&ouml;sungsmittel beschrieben. Alle docking Berechnungen konvergiert zu den gleichen Konformation der MT7-hM1 Dimer Komplex, Befriedigung der experimentellen Fesseln und in denen der extrazellul&auml;ren Seite des Rezeptors, (Ii) die Spitzen der MT7 Schleifen II und III Kontakt ein hM1 Protomer, (i) das Toxin interagiert, w&auml;hrend der Spitze der Schleife ich die anderen Protomer gebunden wird, und (Iii) die Dimere hM1-Schnittstelle beinhaltet die Transmembran Helices TM6 und TM7. Diese Ergebnisse unterst&uuml;tzen die hohe Affinit&auml;t und Selektivit&auml;t der MT7-hM1 Interaktion strukturell und markieren den atypischen Modus der Wechselwirkung der diese allosterischer Ligand ihrer G-Protein-gekoppelter Rezeptor-Zielgruppe.

Strukturmodell der Ligand-G-Protein-gekoppelter Rezeptor (GPCR) komplexe basierend auf experimentellen Doppel mutant Zyklusdaten: MT7 Schlange Toxin an dimeren hM1 muskarinische Rezeptoren gebunden.

La tossina serpente MT7 &egrave; un modulatore allosterico potente e specifico dell&#39;umano recettore muscarinico M1 (hM1). Abbiamo precedentemente caratterizzata da esperimenti di mutagenesi i determinanti funzionali dell&#39;interazione recettore MT7-hM1 (Fruchart-Gaillard, C., Mourier, G., Marquer, C., Stura, E., Birdsall, N. J. e Servent, d. (2008) PM = Pharmacol. 74, 1554-1563) e pi&ugrave; recentemente raccolto prove che indicano che MT7 pu&ograve; legarsi a una forma dimerica di hM1 (Marquer, C., Fruchart-Gaillard, C., Mourier, G., Grandjean, O., Girard, E., le MaireM. marrone, S. e Servent, d. (2010) Biol Cell 102, 409-420). Per caratterizzare strutturalmente MT7-hM1 complessi, abbiamo adottato una strategia che unisce doppio ciclo mutante esperimenti e calcoli di modellistica molecolare. In primo luogo, vicinanze ligando-recettore di thirty-three sono stati identificati dall&#39;analisi dell&#39;affinit&agrave; di legame doppio mutante sessantuno. Parecchi residui di tossina che sono pi&ugrave; di 25 &Aring; apart contattare ancora i residui sul recettore stessi. Di conseguenza, per soddisfare tutti i fermi di ancoraggio la tossina su un singolo recettore fallito. La tossina &egrave; stato poi posizionata su due recettori durante cinque simulazioni di ancoraggio flessibile indipendente. Il ligando possibile differenti e conformazioni loop extracellulare del recettore sono stati descritti mediante l&#39;esecuzione di simulazioni in solvente esplicito. Tutti i calcoli docking convergevano per la conformazione stessa del complesso dimero MT7-hM1, soddisfacendo le restrizioni sperimentali e in quale (i) la tossina interagisce con il lato extracellulare del recettore, (ii) i suggerimenti di MT7 cicli II e III Contatta uno hM1 protomer, considerando che la punta del ciclo si lega all&#39;altre protomer, e (iii) l&#39;interfaccia dimerica hM1 coinvolge le eliche del transmembrane TM6 e TM7. Questi risultati strutturalmente supportano l&#39;elevata affinit&agrave; e selettivit&agrave; dell&#39;interazione MT7-hM1 ed evidenziano la modalit&agrave; atipica di interazione di questo ligando allosterico sul suo bersaglio dei recettori accoppiati a proteine G.

Modello strutturale del ligando-G protein-coupled receptor (GPCR) complesso basato su dati sperimentali doppio ciclo mutante: tossina serpente MT7 associata al recettore muscarinico hM1 dimerica.

&#x86C7;&#x6BD2;&#x7D20; MT7 &#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x5909;&#x8ABF;&#x5668;&#x4EBA;&#x9593; M1 &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;hM1&#xFF09; &#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x4EE5;&#x524D; MT7 hM1 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x5909;&#x7570;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B; (Fruchart &#x30E4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;c.&#x3001;Mourier&#x3001;g.&#x3001;Marquer&#x3001;C.&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A5;&#x30FC;&#x30E9;&#x3001;E. Birdsall&#x3001;N. j.&#x3001;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;D. (2008) &#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x85AC;&#x7406; 74, 1554-1563) &#x3068;&#x3082;&#x3063;&#x3068;&#x6700;&#x8FD1; MT7 hM1 &#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x53CE;&#x96C6; (Marquer&#x3001;c.&#x3001;Fruchart &#x30E4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;c.&#x3001;Mourier&#x3001;G. &#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x4FEE;&#x3001;&#x30B8;&#x30E9;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3001;&#x30EB; &#x30DE;&#x30A4;&#x30EC;&#x3002;&#x3001;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#x3001;&#x8336;&#x8272;&#x3001;&#x8061;&#x4E00;&#x90CE;, &#x3068;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;D. &#xFF08;2010&#xFF09; &#x751F;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE; 102, 409 420)&#x3002;MT7 hM1 &#x3092;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x8907;&#x96D1;&#x3067;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x5B9F;&#x9A13;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x8A08;&#x7B97;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x6226;&#x7565;&#x63A1;&#x7528;&#x3002;&#x307E;&#x305A;&#x3001;30 3 &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;-&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x8FD1;&#x63A5;&#x96FB;&#x6CE2; 65 1 &#x4E8C;&#x91CD;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x304B;&#x3089;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EE5;&#x4E0A; 25 &Aring; &#x96E2;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x540C;&#x3058;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x554F;&#x3044;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3092;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x5236;&#x7D04;&#x3092;&#x6E80;&#x305F;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3002;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;5 &#x3064;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E2D;&#x306B; 2 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x4E0A;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5225;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x660E;&#x793A;&#x7684;&#x306A;&#x6EB6;&#x5A92;&#x4E2D;&#x3067;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x79C1;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x5358;&#x91CF;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x8A08;&#x7B97;&#x3092;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x540C;&#x3058;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020; (i) &#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;(ii) &#x30D2;&#x30F3;&#x30C8; MT7 &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; II &#x3068; III &#x9023;&#x7D61;&#x5148; 1 &#x3064; hM1 &#x5358;&#x91CF;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x5074;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3067;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x62D8;&#x675F;&#x3092;&#x6E80;&#x305F;&#x3059; MT7 hM1 &#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x53CE;&#x675F;&#x3057;&#x3001;TM6 &#x3068; TM7 &#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; (iii) hM1 &#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x4F34;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073; MT7 hM1 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C8;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x4E0A;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x975E;&#x5B9A;&#x578B;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3002;

&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;GPCR&#xFF09; &#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;: MT7 &#x86C7;&#x6BD2;&#x7D20;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53; hM1 &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3002;

&#xBC40; &#xB3C5; &#xC18C; MT7 &#xC218;&#xC6A9; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; M1 muscarinic &#xCCB4; (hM1)&#xC758; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; allosteric &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; mutagenesis &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; MT7 hM1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xD2B9;&#xC9D5; (C., Fruchart&#xAC00; Mourier G., Marquer, C., Stura, E., Birdsall, N. J. &#xBC0F; Servent, &#xB514; (2008) Mol. Pharmacol. 74, 1554-1563) &#xB354; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC99D;&#xAC70; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; MT7 hM1 dimeric &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC218;&#xC9D1; &#xD558; &#xACE0; (Marquer, C., Fruchart-&#xAC00;, C., Mourier, G. O. Grandjean &#xC9C0; &#xB77C;, E., &#xB974; Maire&#xAC08;&#xC0C9;, &#xBBF8;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; Servent, &#xB514; &#xC5E0; (2010) Biol. &#xD734;&#xB300;&#xD3F0; 102, 409-420). MT7 Hm1&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCC44;&#xD0DD; &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xACC4;&#xC0B0;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xB7B5;. &#xCCAB;&#xC9F8;, 30-3 &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xADFC;&#xAC70;&#xB9AC; 60 &#xB300; 1 &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 25 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &Aring; &#xB5A8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB3C5; &#xC18C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC740; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xAC19;&#xC740; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBB38;&#xC758;. &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB3C5; &#xC18C;&#xB97C; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC18D;&#xBC15;&#xC744; &#xB9CC;&#xC871; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xB3C4; &#xC2E4;&#xD328; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3C5; &#xC18C;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; 5 &#xAC1C;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC911; &#xB450; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xBC30;&#xCE58; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; ligand&#xC640; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB8E8;&#xD504; conformations &#xBA85;&#xC2DC;&#xC801; &#xC6A9; &#xB9E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xC5EC; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74; &#xB8E8;&#xD504; &#xB05D; &#xB098; &#xB2E4;&#xB978; protomer&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xACC4;&#xC0B0; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC9C0;&#xC9C0;&#xB300; &#xB9CC;&#xC871; MT7 hM1 dimer &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC640; (i) &#xB3C5; &#xC18C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, (ii) MT7 &#xB8E8;&#xD504; II&#xC758; &#xD301; &#xBC0F; III protomer, hM1 &#xD55C; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCE21;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC218;&#xB834; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; hM1 dimeric &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; (iii)&#xB294; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xD3EC;&#xD568; TM6 &#xBC0F; tm7&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; MT7 hM1 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; allosteric&#xC774; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD754;&#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD;.

&#xC218;&#xC6A9; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xCCB4; (GPCR) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB378; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC8FC;&#xAE30;: MT7 &#xBC40; &#xB3C5; &#xC18C; dimeric hM1 muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C;.

La toxina de la serpiente MT7 es un modulador alost&eacute;rico potente y espec&iacute;fico del humano receptor muscar&iacute;nico M1 (hM1). Caracterizamos previamente por los experimentos de mutag&eacute;nesis los determinantes funcionales de la interacci&oacute;n del receptor MT7-hM1 (Fruchart-Gaillard, C., Mourier, G., Marquer, C., Stura, E., Birdsall, N. J. y Servent, D. (2008) PM Pharmacol. 74, 1554-1563) y m&aacute;s recientemente recogi&oacute; pruebas que indicaban que MT7 puede obligar a una forma dim&eacute;rica de hM1 (Marquer, C., Fruchart-Gaillard, C., Mourier, G., Grandjean, O., Girard, E., le MaireM., marr&oacute;n, S. y Servent, D. (2010) Biol celular 102, 409-420). Para caracterizar estructuralmente la MT7-hM1 complejo, adoptamos una estrategia que combina la doble ciclo mutante experimentos y c&aacute;lculos de modelado molecular. En primer lugar, proximidades de ligando-receptor de treinta y tres fueron identificados desde el an&aacute;lisis de afinidades de sesenta y un doble enlace mutante. Varios residuos de toxina que son m&aacute;s de 25 &Aring; aparte todav&iacute;a en contacto con los residuos mismos en el receptor. En consecuencia, no intenta satisfacer todas las restricciones de la toxina en un solo receptor de acoplamiento. La toxina fue colocada luego en dos receptores durante cinco simulaciones independientes de acoplamiento flexibles. El ligando posible diferente y conformaciones de lazo extracelular del receptor fueron descritos mediante la realizaci&oacute;n de simulaciones en solvente expl&iacute;cito. Todos los c&aacute;lculos de acoplamiento convergieron a la misma conformaci&oacute;n del MT7-hM1 d&iacute;mero complejo, satisfacer las restricciones experimentales y en que (i) la toxina interact&uacute;a con el lado extracelular del receptor, (ii) las puntas de MT7 bucles II y III contacto un prot&oacute;mero hM1, mientras que la punta del lazo se une a los otro prot&oacute;mero, y (iii) la interfaz dim&eacute;rico hM1 implica las h&eacute;lices transmembrana TM6 y TM7. Estos resultados estructuralmente apoyan la alta afinidad y selectividad de la interacci&oacute;n MT7-hM1 y resaltar el modo anormal de la interacci&oacute;n de este ligando alost&eacute;rico en su objetivo de receptor acoplado a prote&iacute;nas G.

Modelo estructural de ligando-prote&iacute;na-junt&oacute; receptor G (GPCR) complejo basado en datos experimentales ciclo mutante doble: toxina de serpiente MT7 obligado a hM1 dim&eacute;rico receptor muscar&iacute;nico.

&#x5206;&#x79BB;&#x7684; Dendroaspis &#x86C7;&#x6BD2;&#x6DB2;&#x7684;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x6BD2;&#x7D20;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x3001; &#x5927;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x548C;&#x5404;&#x79CD;&#x529F;&#x80FD;&#x5C5E;&#x6027;&#x4E0E;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x3001; &#x5206;&#x5B50;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x548C;&#x5404;&#x4E94;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x578B;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x518D;&#x52A0;&#x4E0A; G &#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x5904;&#x7406;&#x5206;&#x79BB;/&#x9274;&#x5B9A;&#x3001; &#x884C;&#x52A8;&#x3001; &#x7ED3;&#x6784;/&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x5265;&#x524A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x6700;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0A;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6700;&#x540E;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x5176;&#x836F;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x672A;&#x89E3;&#x51B3;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

&#x6BD2;&#x8548;&#x7684;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3002;

Muscarinic toxins isolated from the venom of Dendroaspis snakes may interact with a high affinity, large selectivity and various functional properties with muscarinic receptors. Therefore, these toxins are invaluable tools for studying the physiological role, molecular functioning and structural organization of the five subtypes of these G-Protein Coupled Receptors. We review the data on the most relevant results dealing with the isolation/identification, mode of action, structure/function and exploitation of these toxins and finally highlight the unresolved issues related to their pharmacological studies.

Muscarinic toxins.

Toxines muscariniques isol&eacute;s du venin des serpents Dendroaspis peuvent interagir avec une affinit&eacute; &eacute;lev&eacute;e, grande s&eacute;lectivit&eacute; et diverses propri&eacute;t&eacute;s fonctionnelles avec des r&eacute;cepteurs muscariniques. Par cons&eacute;quent, ces toxines sont des outils pr&eacute;cieuses pour &eacute;tudier le r&ocirc;le physiologique, le fonctionnement mol&eacute;culaire et la structure de l&#39;Organisation des cinq sous-types de ces G Protein Coupled Receptors. Nous examiner les donn&eacute;es sur les r&eacute;sultats les plus pertinents traitant de l&#39;isolement/identification, le mode d&#39;action, structure/fonction et l&#39;exploitation de ces toxines et enfin mettre en &eacute;vidence les questions en suspens li&eacute;es &agrave; leurs &eacute;tudes pharmacologiques.

Toxines muscariniques.

Muskarinische Gifte isoliert aus dem Gift der Dendroaspis Schlangen k&ouml;nnen mit eine hohe Affinit&auml;t, gro&szlig;e Selektivit&auml;t und verschiedenen funktionellen Eigenschaften mit muskarinische Rezeptoren interagieren. Diese Toxine sind daher wertvolle Werkzeuge f&uuml;r das Studium der physiologischen Rolle, molekulare funktionieren und strukturellen Organisation der f&uuml;nf Subtypen dieser G-Protein-gekoppelte Rezeptoren. Wir &uuml;berpr&uuml;fen Sie die Daten auf die relevantesten Ergebnisse Umgang mit Isolierung/Ermittlung, Wirkung, Struktur/Funktion und Ausbeutung dieser Toxine und schlie&szlig;lich die ungel&ouml;sten Fragen im Zusammenhang mit ihrer pharmakologischen Studien zu markieren.

Muskarinische Toxine.

Muscarinico tossine isolate dal veleno dei serpenti Dendroaspis possono interagire con un&#39;elevata affinit&agrave;, grande selettivit&agrave; e diverse propriet&agrave; funzionali con i recettori muscarinici. Pertanto, queste tossine sono strumenti preziosi per studiare il ruolo fisiologico, funzionamento molecolare e organizzazione strutturale dei cinque sottotipi di questi recettori accoppiati G-proteina. Noi esaminare i dati sui risultati pi&ugrave; pertinenti a che fare con l&#39;isolamento o identificazione, modalit&agrave; di azione, struttura/funzione e lo sfruttamento di queste tossine e infine evidenziare le questioni irrisolte relative ai loro studi farmacologici.

Muscarinico tossine.

Dendroaspis &#x30D8;&#x30D3;&#x306E;&#x6BD2;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306F;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x304F;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306F;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x7D44;&#x7E54;&#x3053;&#x308C;&#x3089; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E; 5 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x52C9;&#x5F37;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x6271;&#x3046;&#x5206;&#x96E2;/&#x8B58;&#x5225;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x30FB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x643E;&#x53D6;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3068;&#x6700;&#x3082;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x672A;&#x89E3;&#x6C7A;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3002;

Dendroaspis &#xBC40;&#xC758; &#xB3C5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; muscarinic &#xB3C5; &#xC18C;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;, &#xB300;&#xD615; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xBC0F; muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131; &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C5; &#xC18C;&#xB294; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560;, &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC870;&#xC9C1;&#xC774; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; 5 &#xAC1C; &#xD558;&#xC704;&#xC758; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xACA9;&#xB9AC;/&#xC2DD;&#xBCC4;, &#xD589;&#xB3D9;, &#xAD6C;&#xC870;/&#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC758; &#xCC29;&#xCDE8;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xB2E4;&#xB8E8;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAD00;&#xB828;&#xC131; &#xB192;&#xC740; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xAC15;&#xC870;.

Muscarinic &#xB3C5; &#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Muscar&iacute;nicos toxinas aisladas del veneno de serpientes Dendroaspis pueden interactuar con una alta afinidad, gran selectividad y varias propiedades funcionales con los receptores muscar&iacute;nicos. Por lo tanto, estas toxinas son herramientas muy valiosas para estudiar el papel fisiol&oacute;gico, el funcionamiento molecular y la organizaci&oacute;n estructural de los cinco subtipos de estos G-prote&iacute;na junt&oacute; los receptores. Repasamos los datos sobre los resultados m&aacute;s relevantes relacionados con el aislamiento/identificaci&oacute;n, modo de acci&oacute;n, estructura/funci&oacute;n y explotaci&oacute;n de estas toxinas y por &uacute;ltimo destacar las cuestiones pendientes relacionadas con sus estudios farmacol&oacute;gicos.

Catherine Marquer

Centre de Recherche de l’Institut du Cerveau et de la Moelle Épinière

Hôpital de la Pitié-Salpêtrière

Determination of Lipid Raft Partitioning of Fluorescently-tagged Probes in Living Cells by Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS)

Catherine Marquer

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Centre de Recherche de l’Institut du Cerveau et de la Moelle Épinière

Hôpital de la Pitié-Salpêtrière

Determination of Lipid Raft Partitioning of Fluorescently-tagged Probes in Living Cells by Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS)

Centre de Recherche de l’Institut du Cerveau et de la Moelle Épinière