幸免神经损伤（SNI）模型引起的机械触感小鼠

摘要

幸免神经损伤的动物模型是描述以下的坐骨神经损毁的胫骨和腓总神经分支部分失神经支配的周围神经痛的小鼠模型，保持其余的腓肠神经不变。行为矫正机械触感量化冯弗雷细丝。

摘要

周围神经痛是一种严重的慢性疼痛的条件，这可能会导致周围神经系统的感觉神经创伤。幸免神经损伤（SNI）模型诱导机械触感即疼痛，如神经性疼痛的症状，由于触觉刺激，通常不会招来一个痛苦的反应[1]。

SNI小鼠模型涉及结扎坐骨神经（胫神经和腓总神经）的三个分支中的两个，而腓肠神经是原封不动[2]。在标明过敏的爪子，这是不遗余力的腓肠神经支配的侧面积病变的结果。可以使用鼠标的非手术侧作为对照。的SNI模型的优点是响应的鲁棒性，它不需要专家显微外科技能。

机械疼痛反应的阈值是通过测试与冯弗雷细丝增加弯曲力，这是对侧面积的爪子反复按下确定[3] [4]。突然爪子撤出被定义为一个积极的疼痛反应，退缩和/或爪子舔灯丝引起的。疼痛阈值被定义为一个在五局三的重复刺激的积极响应。

视频协议表明，C57BL / 6小鼠的经验，早一天手术后的深刻的触感，并维持了几个星期。

研究方案

1。冯弗雷基线测量手术前

冯弗雷测试程序，请参阅第5。

2。麻醉/准备

1. 麻醉动物（腹腔注射100mg/kg氯胺酮和15毫克/公斤甲苯噻嗪的混合物）。
2. 放置在一个安静的地方，直到完全麻醉（如用纸巾覆盖）的动物。
3. 检查反射捏的镊子尖的尾巴和爪子。可以肯定的，反应迟钝的动物，然后再继续。
4. 皮下注入（肩膀面积）0.5毫升等渗盐水，用抗生素如氨苄青霉素（以避免脱水，防止感染，虽然这是一个小的外科手术）。
5. 使用电器剃须刀，刮脸略低于膝盖面积臀部区域的手术视野（左后肢，右手人士建议）。
6. 眼药膏，以棉花，羊毛芽的眼睛。
7. 在其右侧的动物和地方上的一个小平台，以保持它高架的左后肢。用胶布固定腿。
8. 交替从手术部位出来的乙醇和优碘擦洗消毒的手术视野。

3。外科

1. 找到与你的左手拇指在膝盖和使用手术刀，使一个应用程序。 1 cm的切口近端到膝盖在纵向方向。
2. 打开用一双无菌剪刀尖钝清扫皮肤。
3. 钝性分离肌肉层清晰可见的血管旁边，接近大腿骨（股骨）。如果做得正确，肌肉层没有任何出血很容易分开，露出下面的肌肉，坐骨神经。
   如果出血发生损害血管靠近膝盖例如，使用无菌棉羊毛芽或凝视件，吸收血液。按，直到出血停止。
4. 鼠标和一个立体显微镜下仔细分离肌肉，用无菌镊子（nr. 2）对可视化的坐骨神经。拉钩也可应用。
5. 确定该地区的坐骨神经腓肠神经科。腓肠神经的三个分支中最小的，跳转到左腿的权利。
6. 应用缝合（6-0缝合）仍然运行在平行（胫骨和腓总神经），非常小心，不要触摸腓分公司周围的其他两个分支。腓肠神经已经完全不变的，这是关键的一步。
7. 使紧张的手术结。如果第一个结紧，肢体收缩待观察。
8. 抓住一个镊子（nr. 5）要低于缝合切断的神经和降低上方和下方的小剪刀镊子的神经。首先切割镊子以上，拉动的神经是可以避免的。
9. 一双微剪刀切断缝合两端，轻轻合上的肌肉层。添加利多卡因伤口缝合手术节的下降。

4。手术后

1. 检查眼膏依然充足。
2. 鼠标放置在一个干净的笼下在一个舒适的姿势的纸巾。如果房间是冷，热垫置于笼的一部分（仅在动物的笼子的一部分，应该能够逃脱到较冷的地区，如果首选）。
3. 确保方便的水和周。

5。冯弗雷测试（基线，从手术后的一天）

1. 放置在红色塑料气瓶放置在丝网表两天，前一天手术的老鼠。 Habituate为瓶装测试前15分钟。红色的气瓶，有助于小鼠快速放松，因为他们不能看到对方，在较暗的区域。
2. 验证小鼠冷静和应用冯弗雷细丝的爪子的外侧部分：0.02克长丝开始，首先使用武力的左前爪五次，总时间超过30秒（约2％的刺激秒）和衡量鼠标的每一个应用程序后的反应。重复使用相同的长丝和任何其他老鼠的左前爪，然后再次重新开始的第一个鼠标的右前爪，然后再移动到未来的灯丝，例如：
   
   • 鼠标1：左爪子长丝0.02克的5倍
   • 鼠标2：左爪子长丝0.02克等的5倍
   • 鼠标1：正确的爪子与长丝0.02克的5倍
   • 鼠标2：右前爪长丝0.02克等的5倍
   • 鼠标1：左爪子长丝0.04克的5倍
   • 鼠标2：左爪子长丝0.04克等的5倍
3. 三五个刺激的反应被视为积极的反应。长丝以上thresholD可应用于验证的阈值水平。
   响应=突然爪子撤出，突然退缩，突然爪子舔。

6。代表性的成果

图1。冯弗雷的C57BL / 6小鼠的年龄在8-10周龄测试前1天进行操作，并多次手术后。每个组4-8动物被列入。冯弗雷手术侧的测试是代表同侧和对侧代表的非手术控制端。手术后的第二天，动物开发经营爪子重大过敏，而对非经营是只有轻微的影响与假手术组小鼠。 （* <0.05，** <0.01，*** <0.001，患侧对侧相对）。

讨论

关键步骤

以研究完整的腓肠神经损伤后的病理改变，胫骨和腓总神经，腓肠神经的损害，应避免。腓肠神经的附带损害，可能会导致瘫痪，因而可以作为可视化的操作后肢拖。

只有侧方的爪子是幸免的腓肠神经支配，因此，只有这方面的开发神经病。测试其他地区，由横断神经支配，可以强烈的偏见，改变机械门槛的评价。

可能的修改

其他类型的结扎手术，可能会在研究周围神经损伤后的病理疼痛的条件，如慢性损伤，方面的补充[5]或局部神经结扎[6]。实验过程中的每个不同的表型的改变之前，应考虑手术后的测试结果。

此外，其他感官测试，如热痛觉过敏可应用[7]，但这种表型是以下SNI的那么强劲。

未来的应用

这种技术可以改变药物开发或维护的机械触感测试的使用[8]。分析坐骨神经，背根神经节（DRG）和/或腰脊髓允许为诱导表型的分子机制研究。

根据丹麦和欧洲法规的做法完全符合良好实验室进行动物实验。所有实验均根据司法部（许可数量2006/561-1206）由丹麦动物实验督察批准。

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
麻醉：氯胺酮和甲苯噻嗪	解剖刀
眼药膏	一对镊子NR。 2
电动剃须刀	一对镊子NR。 5
手套	剪刀钝性分离
70％（V / V）乙醇	微型剪刀
药棉芽/凝视	普理灵6.0非吸收缝合线
立体显微镜	2个持针
胶带	隔热垫
冯弗雷的细丝（0.02 - 2.0克对小鼠）（Stoelting）