设计一个连续和操作<sup&gt; 13</sup&gt; C和<sup&gt; 15</sup&gt;Ñ贴标商会统一或差分，代谢和结构，植物同位素标记

摘要

这个方法介绍了如何建立和运营一个连续¹³ C和^{15 N}同位素标记室统一或差分植物组织标签。从代谢和须芒草gerardii结构标记代表结果进行了讨论。

摘要

从植物材料通过生态系统追踪罕见的稳定同位素提供了有关生态系统过程中最敏感的信息，由CO ₂通量与土壤有机质形成小规模的稳定同位素生物标志物的探测。耦合多个稳定同位素，如¹³下用^{15 N，18} O ²或H有透露有关生物地球化学过程的复杂变换的化学计量关系更加信息的潜力。同位素标记的植物材料已用于凋落物分解及土壤有机质形成^1-4的各项研究。从这些和其他的研究，然而，它已经很明显，植物材料的结构部件不同的表现比在微生物利用与长期碳储存^5-7而言代谢成分（ 即 ，可浸出的低分子量化合物）。研究结构和代谢成分的能力分别提供了推进生态系统的生物地球化学研究的前沿一个强大的新工具。在这里，我们描述了用于生产¹³ C和^{15 N}标记的植物材料要么是统一整个工厂标记或不同标记的结构和代谢植物成分的方法。

在这里，我们提出了一个连续¹³ C和^{15 N}标记室，可以进行修改，以满足不同的研究需求的建设和运营。均匀标记的植物材料是由从幼苗到收获连续标记产生的，而差异化标记被从腔室周之前收获除去生长的植物获得。从生长须芒草代表性结果gerardii卡奥验证系统的能力，以有效地标记的植物材料在目标水平。通过这种方法，我们已经生产的植物材料用4.4原子^％，13℃和6.7％（原子^{）15 <}/ SUP> N均布厂的标签，或材料的差异达1.29原子^％，13℃和0.56％（原子）标记¹⁵ N在其代谢和结构部件（热水提取和热水残留成分，分别）。挑战在于保持适当的温度，湿度，CO ₂浓度，和光水平在一个密闭的¹³ C-CO ₂气氛中成功的植物的生产。该室的描述是一项有用的研究工具，以有效地产生均匀或差分多同位素标记的植物材料在生态系统生物地球化学循环实验。

引言

了解植物 - 土壤 - 大气过程的动力学是至关重要的准确预测全球碳（C）和氮（N）当前和未来的环境条件下循环功能如何。稳定同位素在植物 - 土壤 - 大气碳，氮循环的定量研究的强大工具。从植物材料通过生态系统追踪罕见的稳定同位素提供了在生物地球化学循环研究的敏感信息，由CO ₂通量与土壤有机质形成小规模的稳定同位素生物标志物的探测，例如 ^4,8,9。组合的^{13 C}标记与^{15 N}标记，或其它稳定同位素，如² H或植物组织中¹⁸ O提供了高的检测，可追溯的，但复杂基质中植物和土壤生物化学耦合研究使用。均匀或差分标签结构和代谢的植物材料广告的能力DS还能力，以解决关于C和N通过生态系统循环的复杂问题。利用同位素标记的植物材料中碳，氮会计定量研究的好处，但是，依赖于生产¹³ C和¹⁵ N标记物，要么是一致或不同标记的能力。

同位素标记已被用于研究解决植物碳，氮同化^10，分配¹¹和根际沉积^12。均匀¹³ C和^{15 N}标记的植物材料为凋落物分解^1,4研究一个复杂的标记底物，土壤有机质形成^2,6，土壤CO ₂排放量^4，土壤食物网研究^13，和土壤碳的研究停留时间^2,14。利用¹³ C标记的生物炭的标记植物材料的研究也开始揭示以前被忽视的新信息土炭池^15。而^{15 N，2} H和^{18 O}标记都比较容易实现，通过水肥处理，仍然面临挑战，通过¹³ C-CO ₂固定生产均匀¹³ C标记的植物材料。

在密封腔连续同位素标记从幼苗到成熟生产全厂统一的同位素标记。其它方法，如重复脉冲标记¹⁶和叶面施用或排汗^17,18不产生均匀同位素标记的植物材料，也不具体的C-的化合物的明确差异化标记（ 例如，代谢与结构^）19。在同位素标记的一个重要考虑是标记效率，由于在标签中使用稀有同位素富集的化合物的成本高。虽然连续的^{13 C}标记在过去^2-4,20被使用，也没有给我们的知识连续标签腔具有高效率标签和金额以及同位素标记的均匀性精确控制证据公布详细的技术说明。

对凋落物分解及土壤的最前沿有机质形成的研究是代谢的植物材料（ 即浸出的，不稳定的，低分子量化合物）和结构材料厂（ 即 ，木质素，纤维素，半纤维素）是不同的微生物方面处理的概念利用效率，土壤有机质的形成和长期土壤碳贮存^5-7。即差异标记在其结构和代谢成分的植物材料，因此，在推进凋落物分解及土壤有机质的形成研究的有用工具。具有双同位素差异化标记分别允许对结构和代谢成分的追踪通过生态系统使用多池同位素techniquE ^21。

与¹³ C等同位素在密封腔连续同位素标记需要认真注意植物的生理条件，最大限度地提高工厂的生产效率和同位素标记效率。白天温度尖峰必须加以控制，以防止植物损伤中的气密室生长时。湿度和温度的最佳范围须维持开放的植物气孔和CO ₂吸收^22。高水平的湿度原因雾化室壁，从而最大限度地减少光的可用性，并可能损坏腔室结构。仔细考虑消除自然丰度同位素从腔（ 例如，从与土壤有机质灌封未来），并防止暴露于外部空气的同位素标记效率与昂贵的重型同位素标记的化合物，工作时是很重要的。

在这里，我们提出了一个方法，用于构建和运行一个连续双¹³ C和^{15 N}同位素标记室为植物材料的生产要么是统一标示或标示有在不同的层次的结构和代谢成分。的¹³ C标记被控制在室内的水平，而受精和^{15 N}标记是在个人锅电平控制。代表性的结果示，说明这种方法来控制温度，湿度和CO ₂浓度在整个生长季节的能力。结果从生长须芒草gerardii，卡奥也证明了该方法的产生均匀的或不同标记植物材料的能力。所描述的特定腔室的设计和操作方案可以被修改，以生长不同的植物物种，以及容纳² H或^{18 O}标记。

研究方案

1。硐室施工

1. 构造的标签室中的温室，以允许最大的自然光潜力的植物生长。确保充足的电力供应是提供给所有的电源室部件。
2. 通过安装3.175毫米厚的透明亚克力墙（聚碳酸酯也将是合适的）和6.35毫米与白色烤漆钢板地面上以最大化太阳能反射率的铝框厚的透明亚克力吊顶构造标记室。室的尺寸可以定制，以满足个人的研究需要。
3. 安装在¾室中（19毫米）胶合板上的煤渣块。
4. 钻洞的亚克力玻璃，铝框和钢地板和使用螺钉固定所有组件连接在一起。
5. 轴封采用硅填缝所有接缝，以确保密封良好。
6. 通过安装在长螺丝的压克力面板中的一个部分，它可以用雷莫拧下来构建一个门vable蝶形螺母。
7. 封门挡风雨条，防止漏气。
8. 选择一个区域直接相邻的腔作为控制中心安装的所有温度，湿度， _二氧化碳控制和监测设备。
9. 小心钻小孔中相邻的控制中心的所有电线和气体配管腔壁。使用硅填缝密封周围所有电线和管道的孔洞，防止漏气。
10. 通过与高水平的CO _2（ 例如 800ppm的）填充它，并让它坐通宵测试室漏气。如果CO ₂浓度在腔室中被保持在其原有的水平，那么它是不透气的。如果浓度下降过夜，然后所有的接缝应检查并重新密封采用硅填缝，直到气密封的实现。
11. 对于一些植物适应高光条件下，添加一个连接到一个定时器到c的直接外部灯光汉伯以增加光线的穿透和植物生产力。

2。温度和湿度控制器

1. 通过安装一个商用的分体式空调器与位于所述腔室内部的冷却（蒸发器）的线圈和位于温室中的​​热量消散以外的压缩机和冷凝器盘管调节室温度。置的空气调节，以维持所需的温度。
2. 使用一个小房间除湿机来控制湿度的室内。
   1. 通过相邻的除湿腔室的地板上钻一个排水孔。
   2. 从除湿器除去冷凝物收集器，和从除湿通过在腔室底板上的排水孔连接引流管。
   3. 下室，将一个开放的罐子装满水的除湿机直接排入。这将创建一个密闭的密封，但也允许压力平衡。
3. 安装的控制器，如欧米茄i系列的控制器，在控制中心与所述腔室内部的湿度传感器。
   1. 控制器连接到除湿系统，固态继电器和设定湿度控制器具有高报警和摆动，以保持在最佳的室内生长条件。最佳的温度和湿度条件下会有所不同对于不同的植物物种。

3。 CO ₂的控制

1. 的¹³ C-CO ₂富集是使用两种纯的CO ₂气体储罐，10原子％1实现¹³ C-CO ₂或更高和1.1％（原子）的¹³ C-CO _2（天然丰度）1。
2. 由具有隔膜泵连续地通过一个红外气体分析仪（IRGA）吸取室空气中，然后泵送空气回到腔室中，从而保持一个封闭的系统（ 图1）监测CO ₂浓度。
3. 硒TA低报警和死区的IRGA软件到一个期望的范围内维持CO ₂浓度。在这里，我们用360 ppm的低限报警用40 ppm的死区，以保持_二氧化碳 360-400 ppm的浓度之间。
4. 计量阀连接到每个罐，仔细调整以达到目标的^{13 C}丰度水平。设置水箱的监管机构20磅。
5. 插入计量阀和各槽的调节器之间的电磁阀。加入两个计量阀的出口一起和管成腔室的中心。丝的固态继电器的IRGA输出来控制电磁阀（ 图1）。

4。基于Web的远程监控系统

1. 监测CO ₂浓度从IRGA软件将其记录到本地文件每隔30秒。
2. 创建一个自定义实用程序（ 如 Perl或其他编程语言）来接从本地的CO ₂日志文件条目起来，伴随着目前的笔记本电脑时间戳，并将其上传到后端的Web应用程序。
3. 设置Web应用程序来查询温湿度传感器的数据。
4. 使用监控系统，以检查室，每五分钟的温度状态，以防止潜在的温度峰值会破坏植物，如果空调系统出现故障。
5. 监视在任何标准web浏览器中的CO _2，温度和湿度的数据，以便任何意外温度尖峰或CO ₂滴可以立即参加到。

5。灌溉系统

1. 钻一个小孔中，每罐的丙烯酸玻璃腔室的壁。
2. 使用冲洗管，以创建每罐1的滴灌环，并通过该室壁喂冲洗管到外部。
3. 密封周围的冲洗管与硅酮填缝孔以防止空气泄漏。
4. 在腔室的外部，连接冲洗管的管，用于蠕动泵。
5. 使用小管夹，以关闭所有冲洗管道，以防止浇水之间的空气泄漏。

6。盆栽植物

1. 选择一个锅的大小适合正在生长的植物。这里，40个，15升罐的使用。
2. 通过混合砂，蛭石，和更新的多孔陶瓷建立一个土壤 - 自由盆栽混合土。
3. 测试盆栽组合称量填充锅干，用浸泡的水锅中，并允许它完全耗尽，并称重锅湿的保水能力。使用该最大持水能力，确保多余的标记肥水不从花盆浇水过程中泄漏。
4. 他们种植在花盆前发芽种子盆栽土壤。这确保了只有成功发芽的种子开始在标签室。
5. 接种吨他幼苗新鲜的土壤泥浆引入有益微生物。
6. 一旦种子已发芽，仔细移苗到所需的数字盆。
7. 盆栽后，将花盆放入腔和组装每罐与个人灌溉管。

7。密封室

1. 当第一密封的门，腔室中的大质量的外部空气充满腔室空间。擦洗此外部的CO ₂通过连接一个碱石灰洗涤器，以使空气泵填充所述腔室回升至400ppm的使用¹³ C-CO ₂罐混合物前擦洗CO ₂浓度降低到至少200-250 ppm的。
2. 尽量保持室内封闭过生长季节的持续时间，以减少天然丰度的_二氧化碳污染。
3. 监测植物生长可视化，并根据需求调整施肥和灌溉。

书名“> 8。施肥和灌溉

1. 用肥料的溶液，如修饰的Hoagland溶液^23，通过灌溉系统施肥的植物。
2. 用¹⁵ N-KNO ₃下解的有针对性的原子^％15 N级混合98原子^％15 N-KNO ₃与天然丰度¹⁵标记的肥料¹⁵ N，N-KNO _3（0.37原子^％15 N）。
3. 混淆够在每次受精事件的肥料溶液在整个腔室的基础上，盆栽混合土的持水能力的。将肥料适量的一锅在一个玻璃瓶，并准备尽可能多的坛子里有盆。
4. 松开灌溉软管，并把他们每个人在用肥液罐，然后将它们连接到蠕动泵。
5. 水厂通过通过个人点滴IRRI蠕动泵抽水gation软管定期为植物需要它。
6. 施肥与霍格兰的解决方案应该遵循植物的需求或实验设计，以增加营养需求为工厂提高生产率，以最大限度地提高生产力。
7. 首先，通过灌溉管泵的Hoagland溶液中，然后通过泵进行水漂洗，以尽量减少在管藻类和细菌的生长。
8. 施肥和灌溉，消除室内空气泄漏后夹紧固定所有的软管。

9。统一和差异化标记

1. 对于结构和代谢成分鉴别标签，从标签室取出的植物前1-3周的收获。植物是能够被均匀地标记可以连续保持在密封室中的标签，直到收获和灌溉用¹⁵ N-霍格兰溶液。
2. 保持在这段时间在温室中取出植物，使他们得到足够的光和CO ₂的天然丰度¹³ C。
3. 对于差分¹⁵ N标记，继续施肥和灌溉植物像往常一样，但在霍格兰的肥液使用天然丰度¹⁵ N-KNO _3。

10。收成

1. 停止浇水1周厂前收获这么植物开始衰老和盆栽介质变干。
2. 打开腔和移动花盆出来的地上生物量的直接裁剪和收获
3. 倒出盆栽组合和根过粗筛。
4. 使用屏幕的根源来自盆栽组合中分离出来，动摇自由组合盆栽的根部。
5. 将根部2毫米筛上的和漂洗它们与水以除去任何剩余的灌封材料。使用镊子去除可能附着在根部任何蛭石。
6. 让根部风干，准备未来的实验。

11。化学垃圾

1. 称取风干的植物材料，以确定标签腔生物量。
2. 磨子样本进行化学分析。
3. 将2.0克烘干（60℃）垃圾在125毫升酸洗烧瓶中，加入50毫升去离子水。
4. 将样品放置在预热（60℃）搅拌盘，并把搅拌棒的烧瓶中。设置搅拌200转，并允许样品加热30分钟。
5. 30分钟后，过滤通过20微米尼龙网丝上的真空过滤系统的垃圾溶液。
6. 提取物转移到预先称重的酸洗管和冻结。
7. 将固体残余物​​垫料转移到预先称重的铝盘中，干燥在60℃下干燥，以确定热水残留量后秤盘和垃圾。
8. 冷冻干燥的热水提取物并称重，以确定热水提取物的质量。
9. 分析烘干（60℃）垃圾，冻干热水提取和烘干热水中残留的元素分析仪 - 同位素比值质谱（EA-IRMS）。

结果

我们的标签腔为1.2米×2.4米×3.6米在大小，并持有40,15 L罐（ 图1）。计算机化IRGA控制系统维护的CO ₂本组360和400 ppm的值之间的浓度在一天中的光合有效期间内（ 图2a）。在IRGA的低CO ₂报警功能触发电磁阀，使_二氧化碳从的^{13 C}丰富和天然丰度的坦克进入室内，当浓度低于最小阈值（ 如 360 ppm的）。死区功能停止了流动，当浓度达到上设定值（ 如 400 ppm的）。在iSeries温度，并连接到整个生长季节设定的参数范围内举行的气候条件下，空调器和除湿机湿度监测系统（ 图2b）。我们使用了一吨重（3.5千瓦），空调机组，以柯EP室内凉爽。

远程监控系统所允许的记录数据被随时通过一个标准的Web浏览器中查看。在CO ₂浓度，温度和湿度值下采样的Web应用程序来显示图形在过去的24-240小时，在24小时的增量。这创造了一个快速的视觉来确认每天的波动都在预期范围。查看Web界面也显示当前箱内的状态，以及提供警示潜在的问题，如没有收到新的数据。在任何时候，完整的数据集也可以从Web界面下载。

我们测量光合有效辐射（PAR）在立即室内和室的外部的四个点有和没有在使用量子传感器的夏天和一天中的中间的灯。在腔室中的PAR比外部低31.5％时，该腔室灯瓦特埃雷关闭，比当灯是在外观上降低22％。因此，腔室灯帮助在腔室中通过9.5％（P <0.05），以增加显著PAR渗透。

我们连续标签制度能够产生2759克A的gerardii生物量，其中37％为地上生物量和其中63％为地下生物量。我们在统一的植物材料通过设置电磁阀上的两个_二氧化碳储罐相应的（ 图1，表1）实现了4.4％（原子）的^{13 C}全株标签。我们在统一的植物材料通过的修改霍格兰的解决方案²³ KNO ₃下解（ 表1）将98原子^％15 N-KNO ₃与0.37原子^％15 N-KNO ₃实现了6.7原子^％15 N全株标签。我们浇水A. gerardii每周用750ml总流体（水加霍格兰的解决方案）在整个生长海儿子。我们受精与200-500毫升^{15 N}取决于工厂的生产率标记霍格兰的每周解决方案。

我们利用热水提取法，以确定是否有统一和差异化标记的植物材料之间的同位素差异。对于差异化标记的植物，收获后，我们删除了完全死亡和另案处理这些，因为他们可能没有差异标记任何树叶。当看着¹³ C的含量，所有四个掺入天数分别为显著彼此不同的全草和热水提取物，但是对于热水残天14和22分别不显著彼此不同（ 表1）。当比较每一天内的植物组织的馏分中，热水提取物和残余物分别为显著彼此不同的所有四天，由第22天的整个植物，提取物，和残余物都显彼此ficantly不同（ 表1）。对于^{15 N}掺入植物成分，有注册及植物组织馏分天之间的差异。对于热水提取所有四个纳入天都是显著互不相同为¹⁵ N和全厂和热水秸秆还田的短天数分别比成立（ 表1）的长天显著不同。植物组织的馏分中的均匀植株不显著彼此不同的^15个 N，但对于差异化标记的垫料的热水提取物和残余物分别为显著彼此不同的¹⁵ N。

所有同位素值所使用的原子百分比（原子％）表示（ 等式1），这比％至高水平的重使用更精确的符号报道同位素富集^21。例如：

（1）

在这项研究中，我们跑了统计分析采用SAS 9.2版。我们使用配对t检验来检验腔室内部和外部的光水平之间的差异。我们测试了在^13℃，在PROC ANOVA采用单向方差分析（ANOVA）的热水提取物和热水残留^{15 N}标记的差异。我们使用Duncan的多范围检验进行多重比较分析。意义被接受为0.05的P的水平。我们使用Wilcoxon秩和检验，以测试数据满足分析的假设。

图1原理图从空中鸟瞰的40锅容量连续多同位素标记室的IC图。虚线表示的电线，而实线表示气体或水管道。 点击这里查看大图。

图2：A）平均CO ₂浓度（ppm）（+ / - SE）在二十四小时内为整个生长季节B）的平均温度（℃），空心圆，湿度（％），实心圆（+ / - SE）在二十四小时内为整个生长季节点此查看大IM年龄。

		制服（0）	差（7）	微分（14）	微分（22）
整个产仔	13碳原子％	4.46±0.02古物咨询委员会	3.93±0.05巴	3.64±0.03钙	3.35±0.06分贝
	15 N原子％	6.69±0.07机管局	6.72±0.01机管局	6.33±0.06巴	6.41±0.07巴
热水提取物	13碳原子％	4.59±0.04机管局	3.35±0.06降B	2.79±0.06 CB	2.37±0.03直流
15 N原子％	6.69±0.03机管局	6.43±0.01降B	5.89±0.07分贝	6.16±0.05 CB
热水残渣	13碳原子％	4.37±0.06抗体	4.1±0.03巴	3.79±0.10钙	3.66±0.05钙
	15 N原子％	6.57±0.04巴	6.71±0.02机管局	6.45±0.02钙	6.44±0.03钙

表1中。 同位素组成和化学垃圾的统一和差异标记垃圾。腔以外的差异化标记的天数是在括号中。注册成立日之间的比较是大写字母（跨行）与垃圾组分之间是小写字母（下栏）为每个变量。

讨论

这种设计为一个连续的同位素标记腔室被用来生产均匀且差异¹³ C和^{15 N}标记为A。 gerardii随后的现场和实验室试验。在三个生长操作的季节，室成功维持温度，湿度，和设定参数范围内CO ₂浓度（ 图2）。温度控制系统的可靠性时，高太阳辐射可以引起气密室过热夏季的高峰期是至关重要的。消除由蒸腾过量湿度从生长植物可确保植物气孔保持开启的光合作用吸收²²和冷凝水不抑制光渗透或损坏腔室的结构。

不久的连续监测CO ₂浓度由IRGA软件保持了持续植物的^{13 C}标记，当他们在室内越来越大。由于A的高光合活性gerardii在这个房间成长，CO ₂是在白天高峰生长期时，光合活性画了CO ₂浓度降至360 ppm时，约每15-20分钟频频注入到系统中。测光富集并通过统一的植物组织标识的生长季节允许受控4.4原子％的¹³ C大气自然丰度¹³ C-CO ₂罐¹³ C-CO ₂的产生也可以通过混合¹³ C-钠来实现碳酸氢盐或碳酸盐¹³ C-钠和盐酸，但这种类型的系统比较复杂，并且需要更多的监测和维护，因此，建议使用¹³ C-CO ₂气体。用于监测CO ₂ conce一个重要的考虑使用IRGA ntrations是红外分析仪失去三分之二的灵敏度测量¹³ C-CO ₂时。约2.9％PPM为^4.4％，13 C-CO ₂的混合物，这种低估是我们非常关注的不是，但是当在更高的¹³ C水平²⁷标记可能会成为一个更显著的问题。

A. gerardii是一个温暖的季节常年高草草原禾草种。该室的设计A.进行了优化gerardii生产（ 图1）。所述腔室的尺寸和高度被选择考虑了A的最大高度生产率gerardii领域，以及为所希望的植物的生物量产生对将来的实验。A. gerardii是已知的光限制在该领域^24,25。温室内的PAR可以通过30-47％，而外部电平²⁶被削弱。由于我们的工厂非常明显的生长在温室内的亚克力玻璃室，光合有效辐射的限制是一个问题。当打开时，荧光灯的PAR增加了室内的9.5％，这可能有助于提高生产力这个角度敏感的物种。当使用这个腔体设计，以种植其他种类的植物特有的生理需要，如大小，灯光，营养要求，对温度的敏感性和土壤水分应精心定制，以维持植物最佳生长条件。

当使用昂贵的同位素标记的化合物，如10％（原子）的¹³ C-CO ₂和98％（原子^）15 N-KNO _3，贴标签的工作效率是一个重要的考虑因素。这个腔体设计使所有的努力，以密封腔和空气泄漏减少进入和离开该室的优化的^{13 C}标记。如果该室在生长季节从未打开过，那么，没有的¹³ C标记的版的CO ₂从该腔室泄漏到大气中。在CO ₂夜间呼吸过程中建立不出现损坏植物生长，并迅速溶于日出（ 图2）之后。在差异化标记，该室被短暂打开，取出差异化标记盆但这并未冲淡连续标记植物（ 表1）目标4.4原子％的^{13 C}标记。的^{13 C}标记还通过优化洗涤出来的在密封初始大气被困在室内。在没有大气CO ₂的初始擦洗室初步测试，植物进行测定，以在第一叶比后叶生产产生了稀释¹³ C水平。大气中的CO ₂室后关闭的初始擦洗出现，允许连续的^{13 C}标记的消除这个问题幼苗到成熟。保持砂，蛭石，和粘土的土壤-自由灌封混合物也消除了天然丰度从土壤呼吸CO ₂的污染。土壤的消除来自系统确实需要小心受精和接种的考虑，这可能是唯一的，以不同的植物物种。通过在6.7％（原子^）15 N（ 表产生高度标记的植物材料中的靶向7原子^％15 N Hoegland的溶液¹⁵ N标记1）。从目标¹⁵ N标签轻微的稀释可能会被一些自然丰度N的盆栽组合或从乡土接种引起的。

在化合物的生物合成^，13℃（或¹⁵ N）的天然歧视的发生是由于动力分馏和合成的化合物非统计同位素分布的结果。因而，在C的情况下，次要产物（ 例如脂质，酚化合物）相比，初级产品（碳水化合物），一般在耗尽的^{13 C。}这个天然的¹³ C歧视似乎也坚持当植物生长中的富集的¹³ C的气氛，可以在热水提取物和均匀标记的植物（ 表1中的热水残基的原子％的¹³ C的细微差别可以看出）。相比富集这种自然动力分馏是非常小的，不妥协的标签的均匀性。

的结构和代谢植物组织中差异化标记是一种新的技术有潜力为凋落物分解，微生物生态学和土壤有机质的形成深造。在¹³ C和¹⁵ N的热水提取物和热水残留的差异表明一个显著稀释^13℃，在浸出¹⁵ N，低从结构材料厂（热水残基）分子量化合物（热水提取物）后，7，14，22天差异化标记（P <0.005）的。这个差的植物组织的标记可用于通过一个生态系统分别跟踪的结构和代谢成分的命运。 ¹³ C微分标签比^15无差异化标记更极端。从¹³ C-CO ₂标记的去除大气中的植物时，这可能是由于中的¹³ C稀释的即时性，同时在¹⁵ N标记仍停留在盆栽混合一段时间，并且发生¹⁵ N稀释更慢。对于^{15 N}更激烈的差异化标记，可以考虑在最后几周增长的腔外冲洗水之前，自然丰度受精盆。

这种连续¹³的设计和操作^<均匀或差分，代谢和结构，植物组织贴标/ SUP> C和^{15 N}标记系统提供了一种新的方法用于生产同位素标记的植物材料为先进的研究。该室的设计和操作细节已被选定为4.4原子^％，13℃和7％（原子）A的^{15 N}标记gerardii，但可以根据其他植物种类和同位素标记的水平。这里所描述的生长条件应该定制，以满足特定的植物物种的利益的大小，温度，湿度，光，水和营养需求。标签带¹⁸ O或^2小时，也可以通过标记在灌溉系统中使用的水来实现。这里所描述的系统解决了许多均匀的挑战和差分植物材料的^{13 C}标记。这个基本的腔室设计可用于其他研究小组，以产生高度标记的植物材料为副词anced生态系统生物地球化学研究。

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
40 in Remote Tower Fan	Living Accents	FS10-S3R-A
42 in Electric Tower Fan with remote control	LASKO	2559
Mr. Slim Split-type air conditioner	Mitsubishi Electric	R410A
Electronic 24 hr time switches	Intermatic	ET100C	Operates Fluorescent Light System
iSeries Humidity and Temp Controller	Omega	CHiTH-i8DV33-5-El
Solid State Relay	Omega	SSRL240
CKR Series Solid State Relay	Crydon
Solenoid Coils	Dayton	6X543
GasHound CO2 Analyzer	LI-COR	LI-800
Dehumidifier	Dayton	1DGX4
Specialty gas regulator	Airgas	CGA 580
T5 Hight Output Commercial Fluorescent Light System	Hydro Farm	FLT48
Air pump	Thermo Scientific	420-1901
Masterflex Cartridge Pump HeadSystem	Cole Parmer	7553-70
1900 Series Network Switch	Catalyst
Profile Porus Ceramic Top Dressing	Greens Grade
Industrial Quartz 40 mesh	Unimin	4095
Mycorrhizae Professional Growing Medium	ProMix
Vermiculite and Perlite	Thermo-Ran	C633
Potassium Nitrate- 15N 98 atom %	Sigma-Aldrich	335134
Carbon-13C Dioxide 10 atom %	Sigma-Aldrich	600180
Medical grade CO2	Airgas
Regulator	Airgas	CGA 350
4 in box fans	Grainger
Masterflex PharMed BPT Tubing	Cole Parmer	HV-06508-24