自由移动仔猪的无创脑电图记录

摘要

在这里, 我们提出了一个协议, 记录遥测脑电图 (脑电图) 从自由移动仔猪直接在猪圈没有使用镇静剂, 使其能够记录典型的脑电图模式在非 REM 睡眠, 如纺锤爆发。

摘要

该方法允许在猪圈中直接从自由移动的仔猪中记录高质量的脑电图 (脑电图)。采用单通道遥测脑电图系统与标准自粘水凝胶电极结合使用。小猪在没有镇静剂的情况下平静下来。在释放到猪圈后, 小猪的行为正常--他们在同兄弟姐妹一样的循环中喝酒睡觉。他们的睡眠阶段用于脑电图录音。

引言

仔猪是神经科学¹的新兴模型系统。为了加强翻译研究, 我们发明了一种从无节制仔猪² (图 1和图 2) 中记录无侵袭性、临床脑电图的方法。对脑电图记录的翻译使用的两个先决条件, 关于与皮质成熟有关的脑电图模式, 是一种非侵入性的方法, 可与临床设置相媲美, 也可以节制镇静剂或麻醉。单通道遥测系统³与自粘电极结合, 可固定在5分钟左右. 此后, 仔猪将迅速从处理过程中恢复, 并将其喂养和睡眠行为与其他小猪和母猪。

虽然已经有尝试使用非侵入性脑电图记录从镇静动物⁴, 多数脑电图研究从动物是以侵入的方法进行。这些方法对植入电极^5、6周围的炎症过程有副作用, 在大多数情况下, 由于植入脑电图系统的外部成分, 它们需要动物的社会分离。因此, 将这些数据翻译到临床背景是困难的。对翻译方法的需要越来越清楚, 因为它仍然不知道如何在早期皮质发育期间的 "正常" 大脑成熟是由临床, 非侵入性脑电图⁷表示。这一知识缺口是由⁸早产儿脑电图记录所带来的技术挑战引起的。在动物模型系统中, 早期皮质发育的模式更容易获得, 因为大多数动物与人类皮质发育相比, 出生时有 "早产儿"⁹。除了²种动物皮质发育的保守模式外, 最近还发现早产儿的脑电图记录也可以预测^10、11以后的个体临床结局。这里描述的方法对于发展神经科学的转化方面特别有用。

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研究方案

所有程序均经当地道德委员会批准 (#23177 07/G10-1-010/G 15-15-011), 并遵循欧洲和德国国家条例 (欧洲共同体理事会指令, 86/609/ECC;Tierschutzgesetz)。

所有动物程序都是按照古腾堡的医疗中心-大学美因法动物保育委员会的规定进行的。

1. 设置

1. 在实验之前, 检查任何线路噪音, 并找到一个适当的位置, 设置和天线。线噪声是可见的60或50赫兹正弦波。
   注意: 天线的位置, 特别是发射机和接收器之间的距离取决于系统的传输强度。这里使用的系统是可调整的。它被调整了到一个相对地低力量, 与大约 3 m 传输范围。此外, 猪圈中的金属栅栏可以抑制信号并引起干扰。在这种情况下, 有必要将天线放在金属笼内。
2. 使用电缆鼓提供线路电源设置。将笔记本电脑、接收器单元和模拟数字转换器 (如有必要) 连接到正在使用的特定遥测系统。
   注: 这里使用的遥测系统向接收器发送数字数据。这可能与其他系统不同。
3. 将电极、粘合剂、Q 尖和湿巾以及混合块放在一个单独的桌子上。
4. 用短电缆准备电极。要做到这一点, 切电极和焊料, 其长度尽可能短, 取决于动物的大小。电缆必须足够长的时间将所需的记录位置与遥测脑电图单元连接, 传输数据。太长的电缆必须退缩和覆盖与皮肤胶粘剂硅胶弹性体。更长的电缆必须退缩, 使硅胶补丁更大, 更重。

2. 小猪

1. 抓一只小猪, 抓住它的腿或胸部。保持它, 并注意任何大便或排尿。
2. 如有必要, 用数字标记小猪。
3. 把小猪裹在毛巾里。小猪会冷静下来的。注意使小猪过热。
4. 用一只手握住小猪的身体或前臂。用另一只手握住鼻子。注意使小猪过热, 并确保它是自由呼吸正常。

3. 电极

1. 有第二个人连接电极。
2. 用水或乙醇清洁皮肤。如有必要, 剃掉头。
3. 用磨料脑电图凝胶和 Q 尖清除任何死皮细胞。以后去掉磨料凝胶。或者, 使用砂纸。
4. 固定在所需位置的自粘电极。将接地电极置于小脑 (耳朵之间) 和鼻子上的参考电极之上。将录音电极放在所需位置。
   注: 在这种情况下, 执行单极录音, 因为参考被放置在一个中性位置 (鼻子)。目前尚无标准的仔猪可供使用。在这里, 在右脑半球使用了一个顶叶记录位置 (眼睛和耳朵之间)。
5. 将电缆连接到遥测设备。打开设备。根据所使用的遥测系统, 这可能是一个磁开关或射频唤醒信号。
6. 覆盖遥测装置和所有电缆以及所有电极与双组分皮肤胶粘剂硅橡胶 (参见材料表)。通过混合相同数量的两个组分, 固化时间将在1分钟的范围内, 眼睛和睫毛不应该覆盖橡胶。
7. 等到硅橡胶完全固化。
8. 把小猪放回猪圈。
9. 观察小猪, 看看它是否在较长的时间内显示出不适的迹象 (几分钟)。

4. 测量

1. 等待, 直到小猪恢复, 并开始同步其行为与它的同胞 (喂养, 玩耍, 睡眠), 通常在三十年代后 (图 1)。
2. 如果需要, 等待睡眠阶段。记录时间取决于具体的科学问题。这里使用了10分钟的录音会话。
3. 如果遥测单元的覆盖范围超过2其他仔猪, 信号可能过低, 接收器。如果他们睡在上面, 轻轻地把小猪推开。注意母猪;它可能会有积极的反应。
4. 用数据采集软件开始录音 (见材料表)。

5. 完成

1. 录音之后 (通常几个小时), 再次捕捉小猪, 正如在步骤2中所描述的那样。注意母猪;它可能会有积极的反应。
2. 轻轻地举起硅橡胶在一边。然后, 除去含有电极和遥测装置的硅橡胶的整个补丁。小心小猪的眼睛。
3. 把小猪放回猪圈。

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结果

我们能够记录与非 REM 睡眠相关的典型脑电图模式, 如主轴爆裂或三角洲刷子, 从自由移动的仔猪 (图 1和图 2)。我们主要对非 REM 睡眠期间的代表性模式感兴趣, 但也记录了一个非常低振幅的 REM 睡眠¹²的阶段 (图 3)。¹³种动物的生理和 REM 睡眠量各不相同。短 REM 阶段在几?...

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讨论

该协议的一个关键步骤是适当的皮肤接触与电极, 特别是接地电极, 以实现稳定的录音, 低噪音。此外, 由于仔猪非常敏捷, 所以必须用硅橡胶覆盖整个系统, 以保护电极和遥测装置。此外, 如果实验是在一个稳定的板条地板, 小心与小设备或连接器。

如果不充分掌握自粘性水凝胶电极, 尽量去除磨料奶油尽可能。另一种去除外层死皮层的方法是使用砂纸。酒精的预处理不是强制?...

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材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Disposable adhesive surface silver/silver chloride electrodes	Spes Medica S.r.l., Genova, Italy		Self adhesive hydrogel electrode
Abralyt HiCl	Easycap GmbH		Abrasive cream
Body Double fast	Smooth On Inc.		Skin adhesive silicone
Telemetry system			Internal development
Picolog 1216	Pico Technology		AD converter
Laptop	Panasonic		Rugged laptop
Receiver			Internal development