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  • 材料
  • 参考文献
  • 转载和许可

摘要

该协议旨在描述一种新的方法，测量内在心脏发射率使用微电极阵列记录整个中天节点组织，以确定小鼠的制动缺陷。药理制剂也可以在这种方法中引入，以研究它们对内在起搏的影响。

摘要

位于右中庭的中天节点（SAN）包含心脏的心脏起搏器细胞，该区域功能障碍可导致心动过速或心动过速。心脏起搏缺陷的可靠识别需要通过在很大程度上防止自主神经系统的影响来测量内在心率，而自主神经系统可以掩盖心率缺陷。分析内在心脏起搏器功能的传统方法包括药物诱导的自主封锁，以测量 体内 心率，分离心脏记录测量内在心率，以及中性心脏起搏器细胞的中性条带或单细胞贴片夹记录，以测量自发行动的潜在发射率。然而，这些更传统的技术在技术上可能具有挑战性，而且难以执行。在这里，我们提出了一种新的方法，通过执行微电极阵列（MEA）记录从小鼠的全安装中天节点制剂来测量内在心脏发射速率。MEA 由多个微电极组成，这些微电极以网格状模式排列，用于记录 体外 细胞外场电位。与以往记录内在心率的方法相比，此处描述的方法具有相对更快、更简单、更精确的综合优势，同时允许简单的药理学审讯。

引言

心脏是一个复杂的器官，由心脏内在和外在的影响，如那些起源于大脑的影响。中性节点（SAN）是心脏中一个定义区域，容纳心脏起搏器细胞（也称为中腹细胞，或SA细胞），负责启动和延续哺乳动物心跳1，2。内在心率是由心脏起搏器细胞驱动的，不受其他心脏或神经幽默的影响，但传统的心率测量在人类和活的动物，如心电图，反映了心脏起搏器和神经对心脏的影响。对SA细胞最显著的神经影响来自自主神经系统，它不断调节发射模式，以满足身体的生理要求3。支持这个想法，同情和寄生虫预测可以在SAN4附近找到。内在心脏神经系统（ICNS）是另一个重要的神经影响，其中结石丛，特别是在右侧，内侧和调节SAN5，6的活动。

了解制步缺陷在临床上很重要，因为功能障碍可能是许多心脏疾病的基础，并导致其他并发症的风险。病窦综合征（SSS）是一类疾病，其特征是鼻节点功能障碍，妨碍了适当的步调7，8。SSS可以呈现鼻窦心动过速，鼻窦暂停，鼻窦逮捕，鼻窦退出块，交替的胸膜和心动过速9，并可能导致并发症，包括增加脑卒中和突然死亡的风险8，10。那些患有布鲁加达综合征，一种以心室颤动为特征的心脏疾病，心脏骤死的风险增加，如果他们也有合并性SA功能障碍11，12，则患心律失常事件的风险更大。心房功能障碍也可能有超出心脏的生理后果。例如，由于脑溢血13，SSS被观察到会引发患者的癫痫发作。

为了识别中性起搏缺陷，需要通过测量 SAN 的活动来确定内在心率，而不受自主神经系统或幽默因素的影响。临床上，这可以通过药理自主封锁14来近似，但同样的技术也可以应用于哺乳动物模型研究内在心脏功能15，16。虽然这种方法可以阻断大部分促成的神经影响，并允许进行体内心脏检查，但它并不能完全消除对心脏的所有外在影响。另一种用于研究动物模型内在心脏功能的研究技术是使用Langendorff香灌心脏的孤立心脏记录，这通常涉及使用电图、起搏或史诗多电极阵列17、18、19、20进行测量。虽然这项技术更具体于心脏功能，因为它涉及从身体去除心脏，测量可能仍然受机械-电力自动调节机制的影响，可能会影响内在心率测量21。孤立的心脏记录也可能仍然受到自主调节的影响，通过ICNS5，6，22，23。此外，在孤立的心脏接近20时，维持与生理相关的心脏温度（对心脏功能测量至关重要）可能很困难。研究 SAN 功能的更直接的方法是专门分离 SAN 组织并测量其活性。这可以通过SAN条（孤立的SAN组织）或孤立的SAN心脏起搏器细胞24，25完成。两者都需要高度的技术培训，因为 SAN 是一个非常小且定义高度明确的区域，并且细胞隔离构成更大的挑战，因为分离如果执行不当，可能会损害细胞的整体健康。此外，这些技术需要专家的电生理技能，以便使用单个记录微电极从组织或细胞成功记录。

在此协议中，我们描述了一种使用微电极阵列 （MEA） 进行体外记录 SAN 的技术，以获得内在心率测量。这种方法的优点是使缺乏密集电生理技能的研究人员能够获得高度特定的电生理记录。MEA以前曾用于研究心肌细胞主要培养物中心肌细胞功能26、27、28、29、30、31、32、心表33、34、35、36、37、38、39和组织整体坐骑40， 41，42，43，44，45，46，47。先前的工作也已完成，以检查现场潜力在SAN组织41，42。在这里，我们提供了一种方法，使用MEA记录和分析穆林内在SAN发射率。我们还描述了如何利用这项技术来测试药物对SAN内在燃烧率的药理学影响，提供一个样本实验，显示4-氨基苯丙胺（4-AP）的效果，一种电压门K+通道阻滞剂。使用定义的解剖地标，我们可以准确地记录 SAN，而无需执行其他方法所需的广泛组织解剖或细胞隔离。虽然 MEA 的成本高得令人望而却步，但录音提供了非常具体和可靠的制进度度，可用于大量的临床和生理研究应用。

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研究方案

这里描述的所有实验程序都是根据国家卫生研究院（NIH）的指导方针进行的，该指南是经南方卫理公会大学机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准的。

1. 涂层多电极阵列 （MEA） 用于录制

  1. 制作 25 mM 护套缓冲器。
    1. 溶解 0.953 g Na2B4O7+10 H2O 在 80 mL 蒸馏水中。
    2. 将 pH 值调整到 8.4 与 HCl，然后添加蒸馏水到最终体积 100 mL。
  2. 制作聚乙烯 （PEI） 0.1% 的库存溶液。
    1. 将 100 μL 的 50% （w/v） PEI 添加到 4.9 mL 的蒸馏水中，以制作 1% 的 PEI 解决方案。
    2. 将 1% PEI 溶液稀释到 25 mM 缓冲器的 9 mL 中，将 1% PEI 溶液中的 1 mL 添加到 1% PEI 溶液中，以将 0.1% 的玻酸盐缓冲区稀释。
  3. 派佩特 +1 mL 的 0.1% PEI 溶液进入微电极阵列 （MEA） 盘，使电极完全覆盖 （图 1A 和 1B）。
    注:MEA 的微电极通常由铂黑色或碳纳米管组成，并绝缘聚酰胺（或丙烯酸）:这两种材料都是疏水的。通过将 MEA 涂上像 PEI 这样的酸性聚合物，疏水性 MEA 表面变得更亲水，使组织样本能够更好地与 MEA 表面接触（图 1A1）。
  4. 用热塑胶膜盖住MEA盘，以减少蒸发，并在室温下过夜（图1C）。
  5. 使用移液器从 MEA 盘中吸出 PEI 溶液，小心不要触摸可能损坏电极的电极网格，然后用蒸馏水冲洗≥4 次（图 1D）。
  6. 将PEI涂层的MEA储存在1-2兆瓦的超纯水下，并在4°C下用热塑胶膜密封，直到需要为止。或者，将涂层的 MEA 浸入装满超纯水的烧嘴中（图 1E）。
    注:PEI 涂层过程在 MEA 首次使用之前只需执行一次，每次录制会话后，MEA 应存储在超纯水中。

2. 准备完整的泰罗德组织解剖解决方案

  1. 制作 1，000 mL 的完整 Tyrode 解剖解决方案;首先，加入8.1816克NaCl至800ml超纯水。
  2. 在溶液中添加以下化学品量:0.4025 克 KCl:0.1633 克 KH2PO4:1.1915 克 HEPES;0.9999 克葡萄糖:0.0952 克 MgCl2:0.2646 g CaCl2+2H2O.
  3. 调整pH值到7.4与NAOH，然后添加超纯水，直到总容量为1，000ml。
    注:完整 Tyrode 解决方案的最终组成如下（以 mM 形式）:140 纳克、5.4 KCl、1.2 KH2PO4、5HEPES、5.55 葡萄糖、1 MgCl 2、1.8 CaCl2。

3. 准备含氧泰罗德的录音解决方案

  1. 使 500 mL 的 Tyrode 解决方案;加入4.003克NaCl至400ml超纯水。
  2. 在溶液中添加以下化学物质量:0.651 克 NaHCO3:0.042 克 NaH2PO4:0.132 克 CaCl2+2H2O;0.149 克 KCl;0.0476 克 MgCl2:0.999 克葡萄糖。
  3. 调整pH值到7.4与HCl，然后添加超纯水，直到总容量为500ml。
  4. 在开始录制之前，在室温下用卡博根将溶液氧化至少 30 分钟。
    注:Tyrode 解决方案的最终组成如下（以 mM 形式）:137 纳克、15.5 NaHCO 3、0.7 NaH2PO4、1.8CaCl2、4KCl、1 MgCl2、11.1葡萄糖。此 Tyrode 的解决方案与用于解剖的完整 Tyrode 解决方案的成分略有不同。

4. 准备4-氨基苯丙胺（4-AP）溶液进行药理调制

  1. 制作 4-AP 的 1 mM 工作解决方案;从第 3 步开始，将 18.82 毫克 4-AP 添加到 200 mL 的 Tyrode 解决方案。
  2. 在实验前至少30分钟给4-AP溶液氧化。

5. 准备培养皿解剖

  1. 将硅胶弹性体组件与固化剂的碱基成 10:1 的比例（按重量）混合。
  2. 将 15 mL 的硅胶弹性体混合物倒入直径为 60 mm 的培养皿中。
  3. 使用前，让弹性体在室温下治愈48小时。
    注:硅化的培养皿可以重复用于未来的解剖。

6. 剖析中性节点（SAN）

  1. 准备肝化完全泰罗德的解决方案为SAN解剖。
    1. 加入 400 μL 肝素 （1，000 USP/mL） 到 40 mL 的完整 Tyrode 溶液，并在 37 °C 的水浴中加热。
  2. 在腹中注射200-300微升肝素（1000 USP/mL），让动物坐10分钟。
  3. 安乐死肝素化小鼠由异黄素过量。
    1. 将鼠标放在一个小玻璃室中，该玻璃室中含有通过在穿孔塑料管内的滤纸中添加 200-300 μL 液体异黄素产生的异氟化蒸汽。
      注:由于异黄素可引起皮肤刺激，也可以通过皮肤吸收，液体不应直接与小鼠接触。因此，异黄素浸泡的湿巾被放置在穿孔管中进行管理。
    2. 通过停止运动和呼吸以及没有脚趾捏反射来验证死亡。死亡通常需要大约1-2分钟后，放置到房间。
      注:死亡通常伴随着排尿。
  4. 将鼠标放在解剖板上的超前位置，爪子伸出来，用1英寸长、23口径的注射器针将爪子固定在板上。然后用手术剪刀切除肋骨笼底部附近的毛皮，并在根部切割毛皮。
    注:对于解剖板，可以使用聚苯乙烯冷却盖。
  5. 在用血态器握住皮肤时，使用手术剪刀在肋骨笼底部的皮肤上进行横切切，从左拱门到右拱门（图3A）。
  6. 用手术剪刀切开腹膜，小心地将肝脏与隔膜分离，小心不要划伤肝脏，这会导致出血过多（图3B）。沿胸腔将隔膜切除，以暴露胸腔（图3C-D）。
  7. 使用手术剪刀，将肋骨笼的横壁从拱门边缘切至锁骨，以暴露心脏，小心避免损害心脏（图3D）。然后用23口径的注射器针将肋骨笼固定在肩部，固定到位，脱离手术场。
  8. 使用转移移液器将肝素化完全 Tyrode 溶液滴入心脏以保持其湿润。
    注意:不要让心脏干涸。
  9. 用额外的细格雷夫钳子抓住肺，用手术剪刀切开气管，取出肺（图3E）。
  10. 用额外的细格雷夫钳子保持心脏的顶点，并通过用手术剪刀切割主动脉和静脉腔将其切除。将心脏转移到含有腌制硅胶弹性体（图4A）的培养皿中，并使用转移移液器用2-3 mL的温暖（37°C）肝素化完全Tyrode溶液给心脏洗澡。
    注意:小心不要损坏右腹膜的精致后壁，其中包含 SAN 和连接的右心房静脉。用完全 Tyrode 的溶液沐浴心脏可防止心脏干燥，但不会完全淹没心脏的溶液中，因为它会在解剖过程中降低可见度。
  11. 将心脏定向在实验者右侧的右中庭，将实验者左中庭向左侧。
    注意:应快速解剖 SAN 组织，以防止缺血相关损伤。
  12. 用解剖针将心脏的顶点连接到盘子上。然后，当拿着低劣的静脉卡瓦与杜蒙#2层切除钳，插入一个22G注射针通过低等和优越的静脉卡瓦定位其位置在右中庭，这也确定了SA的近似位置（位于下级和高级静脉腔之间的组织补丁（图4B）。
  13. 使用小解剖针，将左右心房附属物固定在盘子上。
    1. 当与杜蒙一起拿着左心房附属物时，#2切除钳，在左心房附属物中放置一个解剖针，使其固定到位。
    2. 当与杜蒙#55钳子一起持有正确的心房附属物时，通过正确的审定附属物放置一个解剖销，使其固定到位。
      注:如果需要，同类型的钳子可用于容纳左右的腹房附属物。
  14. 取出横跨静脉腔的注射针。
  15. 要从心脏中释放血液，请使用 Castroviejo 剪刀通过在心室进行横切（图 4C）去除心脏的顶点（即下半部分）。然后，通过添加温暖 （37 °C） 肝素化完整的 Tyrode 解决方案与转移移液器洗净心脏。
  16. 使用卡斯特罗维耶霍剪刀沿着腹腔隔膜切割，使切口比心室更接近心室。继续沿着腹腔隔膜切割，直到腹腔与心室分离。
  17. 沿着中庭隔膜切开，以去除左中庭。
  18. 将解剖销放在右中庭的外围，使其平放（图4D）。使用卡斯特罗维耶霍剪刀从中庭取出剩余的脂肪、血管或组织。
  19. 将 SAN 定位在右中庭，在这个方向中，它大致与上等的静脉卡瓦（顶部）、劣质静脉卡瓦（底部）和克里斯泰末梢（左侧）相邻（图 4D）。
    注:在右心房附属物和SAN之间，阴唇末梢以暗肌肉脊出现。通常，SAN动脉也可以看到通过SAN（图4D）的冲刷。

7. 准备 MEA 系统进行录制

  1. 将 Tyrode 的溶液（从第 3 步）添加到输入溶液瓶 （图 5C），并通过打开卡博根气体 （图 5A）流向系统来使其氧化。
    注:用于录制的 Tyrode 解决方案在构图上与用于解剖的完整 Tyrode 解决方案略有不同。
  2. 通过观察锥形烧瓶中的气泡来验证卡博根的流动，这些气泡用于加湿气体（图 5B）和输入溶液瓶 （图5C）。
  3. 将渗透泵流入管 （图 5D）插入 Tyrode 的录制解决方案 （图5C）中。然后，将渗透泵流出管插入收集瓶（图5I）。
  4. 将渗透泵设置为 25 rpm，该泵的流量为 2 mL/min，并启动泵。检查系统是否有缓冲泄漏或溢出。
  5. 将温度控制器设置为 37 °C，小鼠的生理温度（图 5E）。

8. 将心脏组织放在 MEA 网格上

  1. 在油漆刷的帮助下将解剖的SAN组织（图6A）从解剖的Petri盘转移到MEA网格上（图1A1）。
    1. 在倒置显微镜下观察时，用柔软的油漆刷轻轻放置组织，使 SAN 区域覆盖电极网格。
    2. 根据需要重新定位组织，以确保其平放在电极网格上，与电极保持良好接触。
      注意:移动组织需要软漆刷，以避免损坏电极网格。
  2. 一旦组织正确定位，使用骨钳（或任何弯曲的钳子）将网格置于组织上（图6A）。然后使用骨钳将竖琴锚（图6A）放在网格上，把所有东西都固定到位（图6B）。
  3. 拍摄组织在 MEA 上的定位图，以便在录制过程中单个电极的活动与其解剖位置相关联。这可以通过将智能手机保持在倒置显微镜目标上或使用附加的显微镜摄像头来实现。
    注:如果拍摄照片后 MEA 的方向未更改，则左上电极将在录制过程中作为第一通道 （Ch1） 出现。
  4. 将 MEA 盘放在连接器板（图 5F 和 6C）上，小心地将灌注盖 （图 6C）放在 MEA 盘上，而不会干扰竖琴切片锚。灌注帽可以使用一块实验室胶带（图6C）进一步固定。
    注:除了具有可调节的溶液流入和流出管道外，盖上还有一个输送气体的端口（图6C）。此外，参考电极环贯穿盖（图6C）。
  5. 让组织从处理中恢复，并在录制前适应腔室 15-20 分钟。

9. 设置数据采集协议进行记录

注:以下步骤描述打开自发节拍录制的软件协议并定义录制条件。这些步骤的具体细节可能因所使用的特定软件而异，但总体轮廓应保持不变。

  1. 打开放大器（图5G），并在计算机上的软件中设置一个记录工作流程（图5H）。
    1. 打开软件并单击 工作流程。
    2. 选择打开 的新文件夹。
    3. 打开 "从模板"文件夹 。
    4. 选择 64MD1-1920X1080（ 取决于桌面的分辨率）。
    5. 打开 QT 文件夹。
    6. 打开 自发录音 文件夹。
    7. 选择Beat_recording.moflo模板并打开它（图7A）。
  2. 根据所需的记录条件（图 7B）设置记录参数，以指定痕迹数量、跟踪持续时间、跟踪间隔、输入电压、采样速率等。
    注:对于节拍频率和间派克数据采集，通常使用 2.9 mV 的输入范围电压、1-Hz 高通滤器、1000-Hz 低通滤器和 20 kHz 的采样速率。
  3. 要标记实验的不同阶段或条件，例如药物管理前后，请单击注释选项卡添加所需的记号（图 7C）。
  4. 要指定要收集数据的文件目的地，请选择 启用存储 框，并在 文件名称修饰框 中输入所需的文件名称。

10. 执行记录和收集数据

  1. 单击收购软件最上面的菜单栏上的 "记录和播放 "按钮即可开始录制。获取 10 个 1 分钟持续时间的痕迹数据，在痕迹之间间隔 2 分钟。
  2. 从这些初始痕迹中，通过确认大多数记录通道显示信号振幅为≥ 0.5 mV 和相同的间穗间隔（图 8），验证记录的波形是否与健康和高质量的组织制备一致。
    注:可以通过引用在MEA上定位组织后获得的图片，对与其解剖位置对应的单个微电子的活性和波形进行初步评估。
  3. 要测量药物对组织的影响，请单击最上面的菜单栏上的暂停按钮，在获取初始基线数据后暂停录制。
    注:通过单击 注释 选项卡并添加上述所述所需的符号（图 7C），可以在记录中注明实验的药物响应阶段。
  4. 暂停泵并切换泵流入管从正常的记录解决方案到Tyrode的解决方案，其中包含所需的药物的选择。
    注:在示例实验中，Tyrode 的解决方案与 1 mM 4 氨基苯丙胺 （4-AP） 一起使用。
  5. 重新启动泵并取消录制以再次开始收集数据。
  6. 一旦药物注入的Tyrode的溶液到达组织，记录10个痕迹的方式与之前的基线记录相同。
    注:当药物注入录音室时，这些痕迹需要一些时间才能稳定下来。药物的行动机制也可能影响记录的稳定性。对于具有可逆作用机制的药物，还应记录洗涤期，以确认活性恢复到基线水平，这是健康组织的指标。
  7. 单击 "停止" 以结束录制。
  8. 在显微镜下拍摄组织在 MEA 上的定位的最后照片，以防组织在初始记录设置程序后发生转移。

11. 录音后清洁设置

  1. 清洁 MEA。
    1. 完成录制后，使用 1 mL 微管从 MEA 盘中轻轻取出录制溶液。
      注意:小心不要接触可能损坏它们的 MEA 电极。
    2. 用骨钳（或任何弯曲的钳子）取出网状和竖琴锚。然后使用油漆刷将组织从 MEA 表面移开，始终小心不要触摸单个微电极。
    3. 使用洗涤瓶，用超纯水轻轻冲洗MEA盘约3至4次。
    4. 将浸入超纯水中的清洁 MEA 存放在 4 °C 下。
  2. 使用永久泵上的最高速度设置，通过超纯水将系统管子冲洗至少 5 分钟。
    注意:为防止真菌生长，清洁后不应在管内留下任何水或缓冲液。

12. 分析 MEA 录音以测量 SAN 节拍频率

  1. 打开分析软件"Beat_frequency_analysis"模板中保存的记录数据文件（图9）。
  2. 单击 Play 按钮，让整个录制运行以可视化数据集并分配适当的分析参数。
    1. 选择垃圾箱窗口，以获得所需的数据显示格式，无论它是按每条痕迹的平均值显示还是按每次平均显示（图 10A）。
    2. 选择要包含在分析中的通道，并设置自动波形峰值识别所需的振幅最大值或振幅最小阈值（图 10B）。
      注:在此步骤中可以选择一个单独的通道、一个频道组合或所有 64 个通道进行分析（图 9）。如果所选阈值过于接近波形的最大值和最小值，则分析软件可能无法识别某些波形峰值。
    3. 设置要包含在分析中的峰值前和峰值后时间的量。
      注:设置为 50 ms 预尖峰和 100 ms 后尖峰通常工作良好（图 10B）。
  3. 设置分析条件后，再次单击 Play 按钮以重新运行数据集并确认分析参数适合峰值提取。
  4. 为了进行分析，确定在实验基线期间和药物暴露期（图10A）期间，在大多数通道中每个痕迹表现出稳定跳动率的三个最稳定的连续痕迹。
  5. 指定分析的始末轨迹，并输入要分析的每个跟踪的持续时间（图9）。
  6. 在开始分析之前，选择启用框，用于每分钟保存节拍和保存中间间隔（图10B）。
  7. 在文件名称修饰框（图 10B）中输入所需的文件名称。节拍频率和间派克间隔的分析数据将以 ASCII（文本）格式保存。
    注:要分析不同的条件（如基线和药物响应），分析必须针对每个条件单独运行。
  8. 单击顶部选项卡栏上的 播放和录制 按钮以开始分析。
  9. 要导出其他应用程序的数据，请选择 每分钟保存节拍 的框并 保存中间间隔 （图 10B）。在 文件名修饰 框（图 10B）中输入所需的文件名，然后单击 "保存" 以在选定文件夹中保存 ASCII 文本格式中的分析数据。

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结果

在让组织在盘子中适应15分钟后，记录了10个一分钟的痕迹。我们当前的协议记录了一个多小时的活动，但我们在未在此处未显示的未发布数据中记录了 ≥4 h 的稳定发射模式。如果实验准备对数据收集有好处，则每个录制通道应显示给定通道均匀形状的一致且均匀间隔的重复波形（即尖峰）（图 11D）。这些波形对应于反映内在心脏起搏活动的单个心跳。每个通道的间歇间隔...

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讨论

练习和掌握 SAN 解剖过程势在必行，因为组织是脆弱的，健康组织是成功记录的必要条件。在 SAN 解剖过程中，正确的方向对于获得适当的组织区域至关重要。然而，心脏的原始方向很容易在解剖过程中丢失，这使这一努力复杂化。因此，为了确保正确的左右方向，应对阿丽亚进行目视检查。通常，右中庭往往更透明，而左中庭通常更暗，颜色更红25，48。

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披露声明

作者没有什么可透露的。

致谢

这项工作由国家卫生研究院资助，赠款编号为R01NS100954和R01NS099188。

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材料

NameCompanyCatalog NumberComments
4-AminopyridineSigmaA78403-25G
22 gauge syringe needleFisher Scientific14-826-5AUsed for dissection
23 gauge syringe needleFisher Scientific14-826-6CUsed for dissection
60mm Petri DishesGenesee Scientific32-105G
500mL Pyrex BottleFisher Scientific06-414-1CUsed to store solutions
1000 mL Pyrex BottleFisher Scientific06-414-1DUsed to store solutions
Bone ForcepsFine Science Tools16060-11
Calcium chloride dihydrate (CaCl2·2H2O)Sigma-AldrichC5080-500G
Carbogen (95% O2, 5% CO2)
Castroviejo Scissors, 4"Fine Science Tools15024-10
D-(+)-GlucoseSigma-AldrichG7021-1KG
Data Acquisition PCCPU: Intel Xeon or Intel Core i7, Memory: 8GB, HDD: 1TB, Graphic Card: NVIDIA or On-board, Screen: 1920x1080
Dissection MicroscopeJenco
Dissecting PinsFine Science Tools26002-20
Dumont #2 Laminectomy ForcepsFine Science Tools11223-20
Dumont #55 ForcepsFine Science Tools11295-51
 Extra Fine Graefe ForcepsFine Science Tools11152-10
Glass ChamberGrainger49WF30Used for mouse euthanization
Harp Anchor KitWarner Instruments SHD-22CL/15 WI 64-0247
HClFisher ChemicalsSA48-4Used for pH balancing
HemostatFine Science Tools13013-14
HeparinAurobindo Pharma Limited IDA, PashamylaramNDC 63739-953-25
HEPESSigma-AldrichH3375-250G
Inverted MicroscopeMoticAE2000
IsofluranePatterson Veterinary07-893-1389
Lab TapeFisher Scientific15-950
Light for Dissection MicroscopeDolan-JennerMI150DG 660000391014
Magesium chloride (MgCl2)Sigma-Aldrich208337-100G
MED64 Head AmplifierMED64MED-A64HE1S
MED64 Main AmplifierMED64MED-A64MD1A
MED64 Perfusion CapMED64MED-KCAP01
MED64 Perfusion Pipe Holder KitMED64MED-KPK02
MED64 ThermoConnectorMED64MED-CP04
Mesh Warner Instruments640246
Microelectrode array (MEA)Alpha Med ScientificMED-R515A
Mobius SoftwareWitWerx Inc.Specific software for the MED64
NaOHFisher ChemicalsS320-500Used for pH balancing
Normal SalineUltigieneNDC 50989-885-17
Paint BrushFisher ScientificNC1751733
ParafilmGenesee ScientificPM-996
Peristaltic PumpGilsonF155009
Peristaltic Pump TubingFisher Scientific14-171-2981/8'' Interior Diameter
PolyethyleneimineSigmaP3143
Potassium chloride (KCl)Sigma-AldrichP9333-500G
Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)Sigma-AldrichP5655-500G
Sodium BicarbonateSigmaS6297
Sodium chloride (NaCl)Fisher ScientificS671-3
Sylgruard Elastomer KitDow Corning184 SIL ELAST KIT 0.5KG
Sodium Phosphate MonobasicSigmaS6566
Sodium tetraborateSigmaS9640
Surgical ScissorsFine Science Tools14074-09
Transfer Pipets (3mL graduated)Samco Scientific225

参考文献

  1. Marionneau, C., et al. Specific pattern of ionic channel gene expression associated with pacemaker activity in the mouse heart. Journal of Physiology. 562 (1), 223-234 (2005).
  2. Josea, A. D., Collison, D. The normal range and determinants of the intrinsic heart rate in man. Cardiovascular Research. (4), 160-167 (1970).
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