电子 von Frey 与小鼠鬼脸量表相关联，以评估 埃文西锥虫感染小鼠的异常性疼痛和疼痛

摘要

在这里，我们提出了一种方案，用于评估感染 埃文西锥虫的小鼠的伤害感受，使用电子von Frey装置作为工具，测量后爪和内脏的机械阈值。

摘要

传染病的发病机制仍然是一个需要研究的复杂领域。在家畜中可以观察到几种临床症状的病程，例如异常性疼痛和疼痛。然而，对其途径的了解和正确的治疗需要对照实验，其中许多实验使用实验动物。测量后爪和内脏机械阈值的变化是观察啮齿动物疼痛感知变化的有用技术。戒断反应可以首先在基线测试中测量，从而更好地控制实验组。后续测试可以在诱导感染并将药物添加到方案中后进行。使用与使用面部量表相关的电子 von Frey 设备来观察疼痛样变化，可以进行简单、精确和一致的评估，以评估小鼠的异常性疼痛和疼痛。因此，使用本方法治疗 埃文西锥 虫感染的实验代表了评估实验室感染动物异常性疼痛和疼痛的有用方法，可应用于家畜动物的常规治疗。

引言

埃文西锥虫是该疾病的病原体，在南美洲称为“surra”或“mal-das-cadeiras”^1,2。它通常影响马和牛，但也影响野生动物，通过噬血蝙蝠、塔巴尼德和口蝇叮咬传播 ^1,3。Surra 是家畜的一种主要疾病，如果没有正确的治疗，它可能会致命，表现出非特异性临床症状，如贫血、食欲不振和体重减轻、肌肉无力和流产，这些症状可能因宿主和地理区域而异 2,4,5,6。

在疾病过程中，受感染动物的异常性疼痛和疼痛的表达仍然是一个新话题^2,7。了解这些体征背后的发病机制的冲动是通过在经典的锥虫杀虫方案中添加有效的镇痛药物来改进和完善目前使用的治疗方法的重要一步 ^5,6

研究方案

所有实验均使用10周龄的成年雌性瑞士小鼠（35-55g）进行。将动物饲养在聚砜笼（每个笼3-5只动物）中，房间温度受控（21±1°C），12小时光照/ 12小时黑暗循环，标准实验室食物和 水随意饮水。在每次测试中，每组分配10只动物，以证明药物治疗的一致效果。实验设计由圣卡塔琳娜州立大学（CEUA）伦理委员会提交并批准（协议编号：6019201123）。所有动物实验均符合ARRIVE指南（动物研究： 体内 实验报告），并按照国家研究委员会《实验动物护理和使用指南》进行。

1. 埃文西锥虫 的制备和接种

注意：处理受感染的血液样本、试剂和其他化合物时，请穿一次性实验室外套、手套、口罩和护目镜。

1. 打开水浴设备，在37°C的恒温下进行调节。
2. 从超冷冻室（-80°C）中取出含有保存血液样本的微量离心管。将其放入水浴中，直到血液解冻。
   注意：应使用相同的分离物感染每组不同实验中的所有小鼠，以保持相同数量的血液通道。
3. 使用含有60%D-（+）-葡萄糖（pH 7.4）的磷酸盐缓冲盐水（PBS，0.1M）进行连续稀释（10：1v v），直至每0.1mL达到1×10⁴ 个锥虫。在带有100x物镜^2....

讨论

在涉及受感染动物的实验中，一个关键步骤是控制寄生虫血症水平。不同菌株的 T. evansi 在小鼠中可能以不同的方式表现，导致从急性感染到慢性感染 ^2,4,5,6。此外，感染剂量的变化可能会减少或延长小鼠的存活时间。因此，建议在实验前获得生存曲线，以确定实验的正确周期，并防止因意外的.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
26 G 1/2" needle coupled to insulin syringe	TKL	80288090100	Used to infund solutions on laboratory animals
Accessories for von Frey analgesimeter	INSIGHT	EFF 303	Containment box with support for digital analgesimeter assessment
D-(+)-Glucose	SIGMA-ALDRICH	G7021	A monosaccharide which is the main source of energy in the form of ATP for living organisms
Digital analgesimeter	INSIGHT	von Frey Wi-Fi	The von Frey Wi-Fi is a portable device used to assess tissue sensitivity to mechanical stimuli
Gilson type 10 µL polypropylene tip	CRALPLAST	18261	Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for hind paw allodynia assessment
Laboratory water bath	BEING INSTRUMENT	BW-22P	Used to heat liquid and semi-solid substances contained in appropriate recipients to specific temperature
Phosphate buffered saline	SIGMA-ALDRICH	806552	A balanced salt solution buffer used for a variety of cell culture applications
Swiss mice (Mus musculus) from both gender	UFSC	Swiss Webster	Laboratory animals used for controlled experiments
Trypanosoma evansi cryiopreserved sample	UDESC	-	Sample used to infect all mice, ceded by the Hemoparasites and Vectors Biochemistry Laboratory
Universal type 10 µL polypropylene tip	CRALPLAST	18171	Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for visceral allodynia assessment