在啮齿类动物的存活立体定向手术

摘要

自由移动的动物不同的大脑区域外的神经递质水平的监测神经递质的释放和行为之间的联系提供了见解。在体内微透析技术结合电化学检测提供了极好的解剖和化学的决议;和基底神经传递是如何由药理或生理操作改变的信息。

摘要

能够测量大脑清醒动物神经递质外基础水平可确定不同的体制性挑战（药理或生理）中枢神经系统的影响。例如，一个可以直接测量动物的中脑多巴胺预测如何应对像D -苯丙胺或自然的刺激，如食品药物多巴胺的释放。在这段视频中，我们告诉你如何引导套管针对大鼠大脑中的特定的网站植入，如何插入和植入微透析探针，以及如何使用高效液相色谱电化学检测法（HPLC - EC）来衡量外水平可氧化神经递质及代谢产物。通过微透析探针局部药物精确的介绍，让现场特异性的提炼工作，在一个化合物的S作用机制。这种技术具有优良的解剖和化学决议，但只有温和微透析样品的时间分辨率通常处理，每次20-30分钟，以确保检测的神经递质水平。可以帮助补充体内的工具（例如，切片和细胞培养电）监测实时的神经递质。

研究方案

摘要

两个月的平均年龄C57BL/6J小鼠或同等或3个月岁，平均年龄SD大鼠或同等学历麻醉与氯胺酮（60毫克/公斤大鼠的IP; 100毫克/公斤对小鼠的IP）和甲苯噻嗪（10毫克/公斤，对于任何一个物种的IP）。镇静是监测使用一个温柔的脚趾捏撤回反射证明Walantus等 。（朱庇特，6，2007年） 和Szot等（朱庇特，9日，2007） 。体温可提供通过thermostatregulated加热垫（ALA仪器公司）和通过直肠温度计监视。是剃光头的皮毛和碘与切口前清洗。切皮后（大鼠，小鼠长1厘米2厘米长的）和头骨表面清除所有的软组织，指导导管的位置是确定有关前囟。 6毫米的孔是通过颅骨钻灭鼠手术设计了一个电池供电钻（精细的科学工具，公司）。护理是使钻头不穿透脑膜膜或血管​​。颅骨植入双边5毫米21压力表不锈钢指南领先后的伏隔核，背侧纹状体或前额叶皮质轴。脑立体定位坐标每富兰克林和Paxinos，1997年成立（在鼠脑立体定位坐标，学术出版社）或Paxinos和Watson，2006年（在大鼠脑立体定位坐标，科学出版社）。植入物是安全的牙科水泥。乳酸林格的0.9％生理盐水静脉推注是在手术结束时（5mls资深大律师在大鼠和小鼠的1毫升SC后的液体加热到体温正常），以防止脱水。丁丙诺啡（0.1-0.5mg/kg SC）管理，每日两次，然后，根据需要，如果动物出现在痛苦中。局部抗生素治疗（杆菌肽软膏）和全身性抗生素治疗（青霉素10万IU /公斤，每12小时即时的第一个48小时后运）的管理如果发生术后感染。

手术后，动物被单独安置与食物和水可用的广告随意。允许至少一个星期之前，微透析和安乐死的复苏。从手术中恢复之后，动物们转移到一个微透析笼和微透析探针插入，并在手术过程中已安装在引导轴凝成。探针插入不会引起疼痛或不适，因为探头是通过引导轴绕过皮肤，肌肉和脑膜组织。因此，探针插入无需麻醉和神经化学或行为上的任何麻醉诱导效应是可以避免的。我们让探头稳定12小时，然后我们开始根据实验另一个8-12小时，每30分钟取样。我们监控的运动动物的行为，通过光电池或手动录像实验者运动。 Microdialysate样品被注入到一个高性能液相色谱电化学检测法（HPLC - EC）神经化学物质的检测和分析仪器。我们期待为基底神经化学和运动行为的影响。在实验结束后动物安乐死过量全身氯胺酮（200毫克/公斤的IP）和甲苯噻嗪（20毫克/公斤，IP）。心脏灌注4％多聚甲醛的0.9％生理盐水。大脑被删除，冻结和削减沿微透析探针道，以验证准确的探头安置。

程序

1. 成立脑立体定位仪和所需的所有材料。确保面积和工具清洗和消毒。
   
   
2. 电动剃须刀剃去毛皮。从耳朵转到刚刚在两眼之间，在不同的方向移动的剃须刀，有效地清理面积的皮草。 povidine /碘剃光区，但保护它的眼睛。
   
   
3. 装载动物的立体定位仪上，放入耳道，耳棒和收紧到位。首先装载在耳道的耳栏，然后举行到位，并在另一只耳朵栏幻灯片。你知道你在正确的位置时，头部可以不再移动一边到另一边。立体前安装安全口，确保头部是用尺子水平。在脑立体定位仪平台的垂直位置的标尺，并为90 °角之间的统治者和动物的头皮，中间检查）。通过脑立体定位仪确认，如果提供这种能力。
   
   
4. 前/后切口在头皮上的lambda只是在动物之间的眼睛，用无菌手术刀。使用消毒止血，捏皮肤和保持切口开放。使用几个无菌棉签，干燥暴露颅骨表面。
   
   
5. 摆上其装载的引导导管，发现在头骨的前囟门和位置引导导管在这个位置的权利。写下的前/后和横向坐标。从囟门，探头安置立体图集援助需要找到正确的坐标。引导导管正确的坐标位置通过添加或减去从囟。把你的引导导管，直到它触及颅骨，然后记录这个腹侧协调。在头骨上的这个位置的无菌铅笔铅笔标记，这是在那里你会被钻。
   
   
6. 取出引导的套管和消毒钻头。小心地钻一个孔铅笔标记，直到你通过颅骨的宽度。指导导管检查，看看它是否会明确双方接触孔。保持钻井和检查，直到套管可以在一条直线路径明确。一旦孔，使用消毒针头，轻轻一拳脑膜，以便通畅的导管插入。
   
   
7. 接下来，使用手电钻，使颅骨螺钉：两个导管孔，两个外侧的导管孔，和两个后向两侧的前六洞。消毒六颗螺丝，并放置到他们的头骨，直到它们被紧紧地固定在。
   
   
8. 用乙醇和生理盐水，装入清洁的引导导管，慢慢降低到正确的腹协调。确保双方没有接触，这是完全垂直。
   
   
9. 将固定螺丝内侧和后面的后颅骨螺钉和它举行的地方用镊子。混合成薄薄的液体牙科水泥批次和覆盖引导套管，螺丝，和头骨的其余部分用无菌压舌板。另一批，较厚的这段时间，完全覆盖面积和足够的套管和固定螺丝，以确保它。
   
   
10. 由于水泥较厚，凝固前，单独从水泥杯皮肤和模具用锅铲水泥杯，以确保水泥盖周围是光滑的，不刺激皮肤后。
    
    
11. 允许牙科水泥完全干透后再从设备中取出的动物。取出的止血。申请杆菌肽周围的水泥盖的方式。
    
    
12. 一旦关闭动物脑立体定位仪，注射0.25毫升1毫升生理盐水SC（皮下注射）青霉素IM（肌肉内）。
    
    
13. 放置在自己的笼子里的动物和监视它，直到它变成自觉，然后返回到它的房间恢复。
    
    
14. 监控动物，直到他们从麻醉中恢复的手术和日常运算后的一天，直到实验结束后，感染和疼痛/窘迫的评价迹象。这包括周末和节假日。低自发运动，遇险后处理发声，弯腰驼背的姿势，腹泻，肿胀和排放的headmount区，缺乏喂养/饮用水所有的痛苦和苦恼的迹象。丁丙诺啡（0.1-0.5mg/kg SC）的管理，每天两次，然后，根据需要，如果动物出现在痛苦中。局部抗生素治疗（杆菌肽软膏）和全身性抗生素治疗（青霉素10万IU /公斤，每12小时即时的第一个48小时后运）的管理如果发生术后感染。如果任何这些症状坚持以下丁丙诺啡管理，补充液，并在12个小时的手术内的抗生素治疗，动物安乐死。

讨论

在体内微透析技术的首选工具，衡量一个活生生的动物不同脑网站的多个神经递质及代谢产物。但是，它只监视外的神经化学物质的水平，并没有提供时间分辨率实时监控胞外分泌的神经递质。通过所谓的“净流量”的技术版本，可以在一个给定网站的实际的神经递质浓度计算，这反过来又可以通过质膜转运给神经递质的再摄取率的准确测量。

微透析是在说明在动物之间的不同群体（即不同基因型）和破?...

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