纯培养和条纹电镀:从混合样品中分离单一细菌菌落

1. 所有微生物都应被视为危险。始终穿着实验室外套和手套，系回长发，并确保任何伤口都特别有保护。
2. 使用 70% 乙醇对工作空间进行消毒，为工作空间做好准备。
3. 确保琼脂板、样品溶液和一盒预消毒塑料接种回路或金属环加 Bunsen 火焰在手。一次性塑料回路通常经过预消毒。金属环应浸入70%乙醇中，然后保持在Bunsen火焰的蓝色区域附近，加热至热热。通过抬起板盖（仅防止污染）并敲击钢丝与凝固介质，让导线冷却。
4. 完成每个步骤，反复消毒工作空间，彻底清洗/消毒手和手腕。

2. 议定书

1. 媒体的准备
   1. 识别和制备固体介质（通常含有1.5%（w/v）琼脂），以维持被利用的细菌物种/菌株。将介质混合在瓶中，可保持最终体积的两倍，以避免高压灭菌时溢出。
   2. 将瓶盖半紧，置于设定为 121°C 的高压灭菌器中，20 分钟，对介质进行消毒。
   3. 一旦从高压灭菌器中取出瓶子，立即正确关闭瓶盖。如果即将使用介质，将瓶子置于 45°C 的水浴中，以保持其液态。否则，琼脂将在低于 32-40°C 的温度下凝固，以后可重新加热（通常使用微波）至 85°C 的熔点。
2. 文化板块的准备
   1. 将无菌培养皿（通常为 100 x 15 mm）的底座（通常为 100 x 15 mm）标记在侧面或底部，并标记实验者的姓名、日期和媒体类型。
   2. 将 45°C 琼脂培养基的 20-25 mL（以前准备）倒入每个标记板中。如果泡沫沿边缘出现，应使用常规移液器和无菌尖端快速清除。
   3. 立即将所有盖子放回盘子上，以防污染。
   4. 让琼脂在室温下凝固约2小时，或在4°C下过夜。一旦设置，细菌培养板随后应倒置在4°C，以尽量减少在介质表面的冷凝。
3. 条纹电镀
   1. 将无菌回路浸入所需的接种中，并立即使用锯齿形运动将收集的样品分散到板的第一象限上（图1，I）。
   2. 关闭盖子并重新消毒接种回路或收集新的无菌一次性循环。
   3. 使 3-4 笔画从第一象限（包含相对密集的细菌群）向板的第二象限辐射（图 1，II）。
   4. 关闭盖子，重新消毒接种回路或丢弃一次性循环，并收集一个新的无菌循环。
   5. 重复从第二个象限到第三象限的3-4个冲程，然后从第三个象限到第四象限，每次使用无菌循环（图1，III-IV）。
   6. 使用无菌循环，从第四象限到板的中间以锯齿形模式进行最后一次冲程（图 1，V）。该地区的细菌患病率将较低，理想情况下允许从单个、可行的母细胞建立单个菌落。
   7. 用副膜合上盖子和（如果细菌物种需要）密封，以防止气流。
   8. 根据细菌种类/菌株的不同，将培养板向上一侧置于适当的环境中，孵育，直到细菌菌落可见（分离的菌落可以出现在板的任意一个区域，因为初始浓度可能有所不同）。
   9. 要产生克隆细菌群，将另一个板划出，将镀在原板上的接种液交换从原始板的单个菌群中分离出来的细胞。