Gold Nanoparticle Synthesis for Mammalian Cells Using Sapphire Discs

取预先准备好的含有稳定HeLa细胞的HPF和FSF处理的蓝宝石盘，用PBS-A缓冲液洗涤五分钟，然后重复此过程三次。在室温下将蓝宝石盘转移到含有一毫升PBS-A缓冲液的35毫米培养皿中。用一毫升还原溶液替换培养皿中的PBS-A缓冲液，并在室温下孵育一小时。

在一毫升还原溶液中制备金前体，并立即涡旋混合。在金前体溶液中加入80微升500毫摩尔D-青霉胺的双蒸水中。并立即涡旋。

用一毫升金前体溶液替换培养皿中的溶液，并在四摄氏度下孵育两小时。在金前驱体溶液中加入20至100微升新鲜配制的硼氢化钠溶液，立即振摇混合均匀，在室温下孵育5分钟。用两毫升PBS-A缓冲液代替溶液以停止反应。

然后按照制造商的说明制备环氧树脂混合物，将蓝宝石盘转移到平底包埋胶囊中，并在室温下用树脂浸润至少 30 分钟。将试样在60摄氏度的烤箱中聚合至少18小时。通过使用剃须刀仔细修剪试样块以暴露蓝宝石盘来制备聚合样品的超薄切片。

将带有蓝宝石圆盘的块尖端浸入液氮中几秒钟，然后解冻室温。重复冻融动作几次，将光盘从块上拆下。EGFP-MTn-KDEL蛋白表现为两到五纳米大小的金纳米颗粒，专门分布在外周ER腔和核包膜的核周空间中。

保存完好的超微结构能够对标记蛋白进行单分子鉴定，并促进细胞器相互作用的分析，例如ER线粒体相互作用。Ost4-EGFP-MTn蛋白的纳米颗粒描绘了核包膜外膜中的ER膜。同样，表达Mito-acGFP-MTn的细胞在线粒体基质中表现出特异性标记。