Characterization of the Lipofuscin-Like Granule Spectrum and Composition

首先，取含有脂褐素负载的RPE培养物的固定透孔。用PBS洗涤培养物五次后，在顶室中留下少量PBS。将透孔倒置置于解剖显微镜下。

使用剃须刀片，通过在膜和透孔的连接处施加切割力，从透孔中切割半孔膜。切割跨孔膜后，使用镊子将其放在显微镜载玻片上。用任务擦拭擦拭多余的PBS，同时避免触摸细胞。

加入安装介质，然后加入盖玻片。确保跟踪横孔的哪一侧是右侧朝上。接下来，使用荧光团检测感兴趣的抗原，峰值激发约为488纳米，发射检测为500至530纳米。

为自发荧光检测设置一个单独的通道，具有405纳米激发和585至635纳米发射。与5次喂养相比，OxOS诱导的自发荧光颗粒在20次喂养后显示出更多的积累。比率成像有助于破译用Alexa 488标记的LC3的UAM自发荧光。

红色通道仅包含难以消化的自发荧光物质，有助于将LC3信号与绿色通道分离。