要开始样品制备，请使用锋利的剃须刀片从药理处理的拟南芥转基因样品中解剖真正的叶子。将真叶子放在一滴水中的载玻片上，远轴面朝上。用没有气泡的盖玻片慢慢覆盖真叶。
对于成像，通过选择黄色荧光蛋白或YFP激发的514纳米激光器来设置光束路径。使用高激光功率获得高图像质量。打开PMT或HYD，并根据YFP荧光团的光谱定义发射带上限和下限阈值。
设置530至570纳米的检测窗口以收集YFP信号。对于第二种颜色的连续图像，请单击“搜索”按钮并添加新通道。在求道二中，为红色荧光蛋白或RFP激发选择555纳米激光器，并设置570至630纳米的检测窗口以收集RFP信号。
在系统上选择一个 63X、1.2W 核心透镜，用于对气孔前体细胞内的亚细胞膜交通活动进行成像。以 1024 x 1024 像素的图像大小开始格式，然后根据缩放系数和物镜设置对其进行优化以获得良好的分辨率。接下来，设置扫描头的速度，从400赫兹的速度开始，并根据样品的具体情况进行优化。
要在不更改物镜的情况下放大感兴趣区域，请输入变焦系数 1，并根据实验的特定需求对其进行优化。线平均值是指扫描每条X线以获得平均结果的次数。从 2X 线平均值开始 用于膜运输事件的成像，并根据需要进行优化。
在采集模式下选择 XYT 扫描模式以启用时间序列实用程序。接下来，选择时间间隔下的时间点之间的等待期。通过选择帧来定义要收集的帧数。
使用具有最大强度投影的Z-stack扫描模式来收集有关整个细胞内膜运输事件的三维信息。然后在采集模式下选择XYZ扫描模式，然后Z-stack实用程序将变得可访问。选择 Z 宽选项。
在扫描模式下，使用开始和结束按钮定义 Z 堆栈的顶部和底部图像。接下来，通过单击 Z 步长来定义 Z 台阶的厚度。要处理图像，请单击共聚焦软件中的主处理选项卡。
在最左侧的“打开的项目”选项卡下，选择感兴趣的 Z 堆栈文件。然后，在名为“流程工具”的中间选项卡中，选择投影函数。在方法的下拉面板中选择最大值，然后单击应用按钮。
Z 堆栈投影图像将在打开的项目选项卡下生成。要从时间序列图像生成视频，请单击斐济软件中的文件选项卡并打开功能以正确的顺序逐个打开所有时间序列图像。或者，将图像拖到图像J上，以正确的顺序打开数据。
然后在图像选项卡中找到堆栈功能，选择要堆叠的图像以生成视频。完成后，以所需的帧速率将文件保存为 avi 格式。在携带ERL1启动子ERL1 YFP的7天龄转基因植物的真实叶片中，分散的细胞被YFP信号突出显示，其中ERL1 YFP标记质膜。
还观察到多个点状信号，表明ERL1也定位于内体。RFP Ara7突出显示了几乎所有细胞中的多个点状信号，表明这些细胞中的多泡体或MVB。当RFP Ara7与ERL1 YFP信号合并时，大多数点状物重叠，这表明一些ERL1 YFP分子被转运到MVB。
携带ERL1 YFP和MVB标记蛋白RFP Ara7的真叶时间序列显示，YFP标记的内体与RFP Ara7在气孔谱系细胞内一起移动。它证实ERL1 YFP定位于多泡体。
