Dorsal Root Ganglion (DRG) Sample Preparation for Cryosectioning

首先在室温下将麻醉小鼠脊髓中解剖的DRG组织在4%甲醛中固定3小时。然后，将组织在 30% 蔗糖的 PBS 中，在 4 摄氏度下孵育过夜。接下来，通过添加 OCT 化合物并覆盖铝块的顶面来准备基础 OCT。

将覆盖的铝块在零下 20 摄氏度下冷冻 5 到 10 分钟。使用低温恒温器切掉 30 微米厚的 OCT 顶部，直到其表面与底座 OCT 一样平坦。 在将铝块从低温恒温器上取下之前，在 6：00 位置标记底座 OCT 的底部。

要进行DRG的OCT包埋，请将DRG组织放在干燥的培养皿上，然后用干燥的镊子将其从一个位置移动到另一个位置两到三次，从而干燥DRG组织。然后，使用干镊子将干燥的 DRG 放在 12：00 位置的 OCT 底座上。确保 DRG 的上边缘和基础 OCT 的上边缘之间至少保持 5 毫米的距离，背部在 12：00 位置，腹侧在 6：00 位置。

接下来，将 OCT 添加为圆形或椭圆形，以嵌入整个 DRG 组织，并将 DRG 置于中心。将覆盖的OCT和DRG样品在零下20摄氏度下冷冻5分钟。完成后，切掉 30 微米厚的盖子 OCT 顶部，直到 DRG 可见。