Germ-Free Wasp Embryo Collection and Rearing with Nasonia-Rearing Medium (NRM)

首先，将大约40只露西莉亚蛹寄生到新出现的成年雄性和雌性Nasonia蜂上，交配1.5天。在寄生后 12 至 24 小时内，使用无菌解剖针小心地打开蛹壳的一端。握住壳的另一端并找到黄蜂胚胎。

然后将胚胎转移到用PBS润湿的无菌细胞过滤器中。移植20至30个胚胎后，用1， 000微升10%次氯酸钠溶液洗涤它们，然后用无菌PBS和70%乙醇洗涤它们。最后，用无菌PBS清洗三次。

接下来，将用PBS预润湿的聚丙烯网片放入24孔板中。使用无菌的小刷子，轻轻地将黄蜂胚胎从细胞过滤器转移到聚丙烯网片上。对于黄蜂饲养，用一张纸向每个孔中加入 50 微升准备好的 NRM。

然后在每口井之间加入一毫升无菌水，以保持潮湿的生长环境。第二天，使用酒精消毒镊子将含有幼虫的聚丙烯网从一个孔转移到另一个孔中，并加入50微升平衡的NRM。进食9至11天后，超过80%的幼虫应发育成白色或黄色蛹。

然后将网格转移到干净的孔板中。本研究显示，与NRM版本3饲养无菌黄蜂相比，无菌黄蜂从幼虫到蛹的存活率显著提高。此外，无菌黄蜂和常规饲养的黄蜂在生成周期上没有差异。