Affinity Chromatography Mediated Fibrinolytic Enzymes Purification from Crude Protein Extracts

通过0.22微米的过滤膜过滤从Sipunculus nudus肠中提取的粗蛋白。将此样品储存在四摄氏度下以备后用。通过将精氨酸琼脂糖基质培养基装入5毫升空色谱柱中，将精氨酸琼脂糖基质亲和色谱柱装入精氨酸琼脂糖基质亲和色谱柱。

类似地，通过将赖氨酸琼脂糖基质介质加载到空色谱柱中来加载赖氨酸琼脂糖基质亲和色谱柱。用双蒸水平衡亲和色谱柱，然后用盐酸三缓冲液平衡。将过滤后的蛋白质样品加载到预平衡柱上。

用五体积的0.02摩尔三盐酸盐缓冲液洗涤色谱柱，然后依次用0.15-0.25-0.35-0.45-0.55-和0.65摩尔氯化钠溶液洗脱。一旦洗脱峰出现在0.15摩尔氯化钠洗脱液中，将馏分收集在5毫升管中。使用三千道尔顿超离心过滤器浓缩洗脱样品，并将该样品储存在零下80摄氏度以备后用。

当将蛋白质溶液加载到精氨酸琼脂糖基质亲和柱上时，流通峰出现在大约40至66分钟。在梯度洗脱阶段，用0.15摩尔氯化钠洗脱的峰值约为94至110分钟。当将蛋白质溶液加载到赖氨酸琼脂糖基质亲和柱上样时，流出峰出现在约38至60分钟。

在梯度洗脱阶段，用0.15摩尔氯化钠洗脱的峰值为80至86分钟。