首先，将甘油原液中的罗伊氏利莫西乳杆菌DSM20016接种到6毫升的De Man，Rogosa，Sharpe或MRS肉汤中，装在50毫升的管中。在静态培养箱中以37摄氏度有氧孵育培养物过夜。第二天，将四毫升过夜培养物接种到200毫升MRS肉汤中。
让培养物在静态的37摄氏度培养箱中有氧生长，直到600纳米处的光密度达到0.5至0.85。接下来，将培养物倒入 50 毫升离心管中，并将它们放在冰上，同时平衡管。在预冷的离心机中离心培养物并丢弃上清液。
在将沉淀重悬于50毫升预冷的双蒸馏水中之前，重复离心两次。最后一次离心后，将沉淀重悬于25毫升双蒸水，0.5摩尔蔗糖和10%甘油中。离心细胞悬液，弃去上清液，并将沉淀重悬于两毫升双蒸水，0.5摩尔蔗糖和10%甘油冰上。
将悬浮液分装在预冷的微量离心管中，分装成50至100微升的部分，并将试管储存在零下80摄氏度以备后用。接下来，对于电穿孔，在冰上解冻等分试样的电感受态细胞。将5至10微升质粒混合到解冻的等分试样中，尽可能避免移液。
将混合物转移到冰冷的一毫升间隙电穿孔比色皿中，并以 1.25 千伏、400 欧姆和 25 微法拉电穿孔。电穿孔后，加入一毫升MRS肉汤，将比色皿倒置一两次混合。将比色皿放入静态 37 摄氏度的培养箱中 2.5 至 3 小时以进行恢复。
接下来，将整个悬架板固定在多个MRS螺旋钻板上，并进行适当的选择。将盘子放在密封容器中，在产生小袋的厌氧气氛中用小蜡烛点燃。在37摄氏度下生长两到三天或直到出现可见的菌落。
无论质粒甲基化条件如何，罗伊氏乳杆菌与产生pTRKH3质粒的组成型mCherry2电穿孔可提供每200微升板约5至8个菌落的转化效率。使用不携带外源组成型报告蛋白的pNZ123进行转化，每微克DNA的转化效率为10到4CFU的三倍。
