Confirmation of Plasmid Uptake via Colony PCR

将5微升电穿孔过夜生长L旋转培养物从96孔板转移到PCR管中。旋转细胞并弃去上清液，然后将沉淀重悬于20微升20毫摩尔氢氧化钠中。将样品在 95 摄氏度下煮沸五分钟。

涡旋，重复煮沸一次，然后将样品放在冰上。旋转细胞，然后取一微升上清液，稀释到99微升冰冷的DNA和RNA游离双蒸水中。使用100倍稀释液作为标准PCR反应中的模板DNA，使用质粒特异性引物，并包括来自大肠杆菌迷你制备的质粒的阳性对照。

PCR后，将样品放在冰上，并加入一个X浓度的适当上样染料。在 TAE 缓冲液中的 110 伏特下在 1%Agorase 凝胶中运行样品 30 分钟。转化L旋转的菌落PCR改变制备温度导致不同的PCR成功率。

在冰上制备的样品显示出比在室温下制备或在室温下制备的样品更高的成功率，然后在PCR之前在37摄氏度下孵育30分钟。