Surgery for Stimulating Electrode Placement and Burr Hole Creation in Mouse

首先将麻醉的动物转移到立体定位框架中，然后将头部固定在鼻锥和耳杆中。放置用于测量动物脉搏、脉搏血氧饱和度、血压和体温的探头。涂抹眼药膏。

用脱毛膏去除头发，并用三道碘和酒精无菌清洁头皮。对于终末研究，使用手术剪刀去除头皮，并将颅骨暴露在距羊羔形缝合线尾部约 3 毫米处，正面距前 3 毫米处。切除头皮，露出两侧颞肌的内侧。

然后，去除任何残留的皮下结缔组织，使颅骨清洁干燥，以应用刺激电极。接下来，将导电凝胶涂在与颅骨接触的电极一侧。将电极放在这块颞肌上，并用手术强力胶将其固定在间歇性点的边缘周围。

然后，将利多卡因糊剂涂抹在两侧的颞肌和头皮上，而不干扰电极。测试颅外刺激电极的阻抗。然后，将鼠标放在没有颅内记录电极的激光散斑成像装置下。

要在两个颅骨 tACS 电极之间施加刺激，请使用提供恒定电流的商用人体兼容刺激装置。在刺激之前，获得明确的基线。在颅骨两侧以不同的振幅进行短暂的开/关刺激。

确保刺激后有明确的基线。将颅外刺激电极向颅骨两侧横向放置4毫米后，在中线两侧各2毫米处标记毛刺孔的位置，彼此相距4毫米，并与矢状缝合线正交。然后，为玻璃电极钻两个毛刺孔。

用无菌矿物油填充这些毛刺孔，以防止电流从颅外电极进入颅骨。然后，用0.2摩尔氯化钠填充合并的玻璃微电极，并使用微操纵器将它们放入横向放置在矢状缝合线的两个毛刺孔中。将玻璃微电极放入毛刺孔中。

接下来，测试毛刺孔放置后颅外刺激电极的阻抗，以验证这些电极不会干扰流入大脑的电流。为了测量颅外刺激引起的脑血流量，将鼠标置于带有颅内记录电极的激光散斑成像装置下。一旦插入大脑，在各种对称深度进行深度剖析，以确保这些玻璃微电极在大脑皮层内大约一毫米。

使用数字化系统在足够稳定的基线持续时间内记录来自多普勒探头和微电极的连续数据。然后，应用开/关刺激并测试额外的颅脑刺激。为了进行诱发扩散性凹陷的实验，在颅骨右侧增加第三个毛刺孔，在冠状缝合线上增加 1.5 毫米，在额后缝合线外侧增加 1 毫米。

用 KCL 填充这个毛刺孔以备后用。针对低强度 tACS，获得了颅内直接直流电记录和脑血流的双侧激光多普勒记录的数据。在 0.75 毫安的刺激下观察到较小的响应，而在 1 毫安的刺激下观察到较大的响应。

对于电血流和脑血流轨迹，颅骨右侧和左侧之间的反应是不对称的。发作期间脑血流的激光斑点颅骨成像显示，血流量在刺激下增加，刺激均匀地扩散到整个皮层。刺激后，血流恢复到基线。