首先，取解冻的液滴数字或ddPCR预混液，并在室温下向其添加探针，正向引物和反向引物。按照屏幕上显示的建议成分为每个扩增靶标准备预混液，并根据需要调整引物和探针的浓度。彻底涡旋混合物，并在小型离心机中短暂离心。
加入限制性内切酶并倒置混合。接下来，向PCR板的每个孔中加入16.5微升准备好的预混液，并用透明胶膜密封板。使用样品稀释缓冲液作为稀释剂，制备质量控制或QC稀释液，如下表所述，该表代表验证准确性和精密度运行的推荐浓度。
在0.2毫升PCR管中用样品稀释缓冲液以1：10的比例稀释泪液样品并密封管。在热循环仪中以95摄氏度加热样品10分钟，然后在4摄氏度下加热至少5分钟。从含有预混液的ddPCR板中取出粘合膜，并向96孔板的适当孔中加入5.5微升QC稀释液，如板图所示。
然后将5.5微升样品加入孔中。向无模板对照或NTC孔中加入5.5微升样品稀释缓冲液。使用无核酸酶水以 1：2 的比例稀释 2x ddPCR 缓冲液对照，并向柱的任何空孔中加入 22 μL 缓冲液。
在板上添加可刺穿的铝箔密封件，然后将板放入板封口机中。将板在 5 摄氏度下密封 180 秒钟。以最大速度涡旋板至少30秒，然后在平板旋转器中短暂离心。
在自动液滴发生器的触摸屏上，选择包含样品的板图上的列。仪器的甲板将亮起，以指示需要哪些耗材。从后到前加载液滴发生器。
黄灯将从黄色变为绿色，表示耗材充足。放置冷块和液滴板支架。确保块是完全蓝色的，并且没有可见的粉红色。
将新的 96 焊 ddPCR 板放入冷块中。将准备好的PCR板放入样品板架中。合上机器盖，然后按开始以产生液滴。
在 30 分钟内，从冷块中取出含有液滴的板。在板上添加可刺穿的铝箔密封件，然后将板放入板封口机中。在180摄氏度下密封五秒钟。
然后将板放入兼容的热循环仪中，并输入屏幕上显示的循环条件。将板装入液滴读取器，确保有足够的读数器油残留，并且废物容器有足够的空间。最后，按下软件上的读取按钮开始读取液滴。
计算每次测定中每种浓度的测定内平均值，并用于评估测定的精密度和准确性。在所有QC水平中，平均测定间精密度为7.7%，平均绝对检测间准确度为4.2%。还使用每批中每个QC水平的测定间平均值计算测定间准确度和精密度。
发现测定间精密度范围为4%至8.5%，测定间绝对准确度范围为1至3.2%。同样，对于泪液样品，在高加标水平下的平均测定间精度为3.7%，在低加标水平下为12.2%，在高水平下观察到平均测定间绝对准确度为11.3%，在低水平下为8.1%。在测定间计算的情况下，发现高水平精度为5.5%，低水平精度为7.1%，高水平绝对准确度为11.3%，低水平绝对精度为8.1%。
