Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina

将安乐死小鼠的眼睛进行核除，标记颞侧以进行定向。移除前房。然后取下晶状体和玻璃体，将眼罩放入多聚甲醛中 30 分钟。

用PBS清洗眼罩30分钟。更换溶液三次。然后，用 0.5% Triton X-100 洗涤 30 分钟。

在室温下将眼罩在封闭缓冲液中孵育两小时。免疫染色后，使用显微镜从眼罩中分离视网膜。将视网膜分成四片叶子，并将它们平放在视网膜神经节细胞层朝上的情况下。

确保颞侧的标记保持连接，以便定向。用封固剂覆盖视网膜。放置盖玻片。

并用指甲油密封载玻片。打开共聚焦显微镜，在定位模式下，使用目镜找到感兴趣的区域。切换到采集模式并设置覆盖整个视网膜的平铺，以及用于所有信息层的 Z-Stack 切片。

在整个视网膜上至少对 25 块瓷砖进行成像，以达到总体积。投影 Z-Stack 切片以生成二维面部共聚焦显微镜图像。将复合 vs-OCT 纤维图与用 TuJ1 免疫染色的平面视网膜的相应共聚焦图像进行比较，用于 RGC 轴突。

血管表现出可区分的分支结构，可以与共聚焦图像上的 ICAM-2 标记血管相匹配。离体共聚焦显微镜和体内 vs-OCT 之间的并排比较揭示了相同的 RGC 轴突束网络和周围的视网膜脉管系统。