3D打印生物反应器中血管的灌注培养

使用 3D 打印生物反应器制备用于灌流培养的样品。在层流柜中，将分离的猪颈动脉样本置于冷运输介质中。使用手术刀刀片，去除多余的结缔组织并修剪组织的末端。

然后在冷运输介质中洗涤组织两次。接下来，将组织放入轨道振荡器上的运输介质中至少 30 分钟，以进行彻底的最终洗涤。之后，使用两个带刺的诱饵连接将洗涤动脉的非分支段连接到制造的生物反应器系统。

并使用由血管硅胶扎带制成的容器粘合将其固定。使用连接到第一个诱饵连接的小注射器，轻轻地将介质流过动脉以确保其通畅。将动脉固定到预制插入物后，用灌注介质填充反应空间。

接下来，小心地用介质填充管腔循环回路，去除系统中残留的空气。最后，将反应空间连接到组装好的灌注系统，完成循环。要进行灌注培养，请将灌注系统置于培养箱中。

将其连接到蠕动泵后，连接任何其他采集系统，例如压力传感器。让系统以每分钟 10 至 15 毫升的低介质流速在一夜之间保持平衡。第二天，逐渐增加流量，直到达到每分钟 35 毫升的最终流速。

每三天更换一次 50% 的培养基，将一个装有新鲜培养基的注射器连接到靠近泵的培养基交换端口，将一个空注射器连接到靠近储液器的输送口以收集用过的培养基。实验结束后，使用无菌手术剪刀，通过修剪连接到生物反应器的组织末端，从反应室中收获组织。使用内皮和平滑肌特异性标志物的共聚焦成像显示，从收获到清洁和加工，甚至在灌注培养后，动脉的正常结构在整个过程中都得到了很好的保存和维持。

然而，在处理过程中不正确的处理导致培养前内皮的损失，并且应用非生理性培养条件（如突然开始高流量）显示出管腔损伤。在收获时和灌注培养 7 天后，使用苏木精和伊红染色和免疫荧光染色对组织进行组织学评估，发现血管壁中细胞的形态和整体分布始终保持不变。