首先，用70%乙醇彻底喷洒处死的10周龄C57黑色6J雄性小鼠。使用镊子从后肢上去除皮肤，并解剖股骨、胫骨和腓骨周围的所有肢体肌肉。将收获的肢体肌肉放入含有一毫升肌肉隔离缓冲液的两毫升管中。
并用剪刀将收获的肌肉切碎。将切碎的肌肉悬液转移到含有 18 毫升肌肉隔离缓冲液的 50 毫升管中。将试管盖紧，用实验室薄膜密封，水平置于摇动的水浴中。
30 分钟后，加入 5 毫克 I 型胶原酶，并再保持试管 30 分钟。将肌肉悬液上下移液10次后，离心并弃去上清液，在试管中留下5毫升培养基。将悬浮液移液到连续的细胞过滤器上，并将流出物收集到 50 毫升管中。
离心悬浮液并弃去上清液，直到管中仅剩下 100 至 200 微升。将沉淀重悬于两毫升红细胞裂解缓冲液中，并在冰上孵育三分钟。再次离心并使用20至200微升移液管从管中取出上清液。
将沉淀重悬于100微升冷FACS缓冲液中，并将试管置于冰上。除去阴性对照的 10 微升细胞悬液后，离心剩余的 90 微升并弃去上清液，然后将细胞与在室温下在无血清 DMEM 中稀释的 400 微升可固定活力染色剂孵育 15 分钟。离心后，加入100微升FACS缓冲液，轻轻倒置试管三次。
再次离心，将 100 微升一抗混合物加入试管中。在黑暗中孵育30分钟后，离心并弃去上清液。然后加入 500 微升 PBS 洗涤细胞。
再次离心并除去上清液，然后将沉淀重悬于500μL的FACS缓冲液中。将悬浮液转移到五毫升管中。在流式细胞仪上处理细胞悬液之前，短暂涡旋细胞悬液。
将选定的细胞收集在含有FACS缓冲液的5毫升包被管中。根据其大小和粒度鉴定的单核细胞中，75%的可固定活力染色标志物呈阴性，平均为34.3%的活细胞。约 3% 的单个活细胞的单核细胞、内皮细胞、白细胞和红细胞特异性标志物呈阴性。
然后根据CD34和ITGA7标志物的表达选择这些阴性细胞。对CXCR4进行最终设门以选择假定的卫星单元。在CD34阳性的ITGA7阳性细胞中，发现80%的CXCR4阳性。
