首先准备一个临时维护的培养皿,底部有切除的十字花科叶子和渗水的滤纸。接下来将五只蚜虫放在准备好的培养皿上。当蚜虫数量增加时,将原本切除的叶子切成四到六块小块。
将每个带有蚜虫的小叶片转移到含有新鲜叶子和湿滤纸的单独培养皿中。为了收集蚜虫基因组DNA,首先使用沉淀杵使蚜虫匀浆。接下来,按照制造商的指南,使用 Gene-Spin 基因组 DNA 分离试剂盒提取 DNA。
通过用 50 微升预热的无核酸酶水洗脱基因组 DNA 来完成提取过程。通过将 DNA 样品添加到具有引物对的 PCR 预混液中来进行 PCR 扩增和 DNA 测序。使用1%琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物,以确认芥菜蚜虫的身份。
使用分子标记(包括PCR扩增子大小和Lipaphis eryasimi CO1测序)将现场收集的蚜虫确认为芥菜蚜虫。