Magnetic Separation and Positive Selection of Murine Neuronal Cultures

首先将小鼠纯神经元细胞悬液以300G离心8分钟。轻轻吸出上清液并将沉淀重悬于80微升HBSS中，并用0.5BSA溶液。加入特异性抗体后，将试管在 4 摄氏度下孵育 10 分钟。

用HBSS-BSA溶液洗涤多余的抗体并离心。向沉淀中加入20微升抗生素素微珠，重悬于HBSS-BSA中。将试管在 4 摄氏度下孵育 10 分钟。

然后，每10个细胞向七个细胞中加入0.5毫升HBSS和0.5%BSA溶液。用0.5%BSA溶液的0.5毫升HBSS冲洗色谱柱。滴注停止后，将15毫升管放在柱下方，并将0.5毫升细胞悬液通过它。

收集含有非特异性神经元细胞的洗脱液，然后用0.5%BSA的0.5毫升HBSS的三次洗涤液清洁色谱柱。现在从磁铁上取下色谱柱并将其放入新的 15 毫升管中。加入一毫升含有0.5%BSA的HBSS，并使用柱塞冲洗掉目标细胞。

离心和上清液抽吸后，将沉淀重悬于0.5毫升电镀介质中。在明场显微镜下对Neubauer计数室中的细胞进行计数。在制备的24孔板中将靶细胞作为阳性对照，将非特异性细胞作为阴性对照。

在 37 摄氏度下孵育 12 小时。LepR阳性神经元在48小时后开始形成神经突。在DIV4，轴突延伸显示出进展，而树突突过程开始出现。

在DIV6，神经元充分发育。免疫荧光研究表明，没有观察到神经胶质细胞或其他非神经元细胞。细胞的神经元性质通过微管相关蛋白2染色得到证实。

在DIV10时，30%的LepR阳性细胞表达POMC。在含有异质性下丘脑神经元群的一般培养物中观察到突触连接和功能。