首先准备直径为 3.5 毫米的活检打孔器。在冲头轴上标记一个距离边缘远端 5 毫米的点。固定冲头并使用双速旋转工具切断轴的标记远端部分。
在 3.5 毫米的深度切割轴，留下最后的 1.5 毫米，并将尖端弯曲至 90 度。接下来，在 900 毫升蒸馏水中制备 PBS，并将 pH 值调节至 7.4。然后通过加入蒸馏水使溶液达到一升的最终体积。
通过在化学罩下将 2 克对甲醛溶解在 45 毫升 PBS 中，制备 4% 对甲醛溶液，并将其加热至 65 摄氏度，同时将 pH 值调节至 7.4。一旦对位醛完全溶解，将溶液的最终体积调节至 50 毫升。称量鼠标以确定用于给药的注射麻醉剂混合物的正确体积。
麻醉后，将小鼠放在手术台上，遵循标准的啮齿动物手术原理。然后在啮齿动物的头部下方放置一个五毫米高的枕头，处于侧卧位。用手术眼矛彻底擦干眼表，并整齐地修剪睫毛。
调整手术显微镜以获得麻醉小鼠的最佳视图，并将计时器设置为 30 秒。然后使用手术显微镜检查角膜缘区域周长，同时使用拇指和食指保持鼠标的眼睑张开。现在小心地将灭菌的打孔环钻平行于眼轴，不要向下施加压力。
避免旋转仪器并保持冲头环钻的轴线与地球轴平行。要求手术助理将三滴氢氧化钠溶液放入打孔环钻孔中。30 秒后，使用 5 毫升 PBS 清洁角膜和穹窿。
然后使用通用的pH指示纸，确保受伤眼睛角膜表面的pH值在7到7.5之间。手术后，用70%乙醇清洗、干燥和消毒穿孔钻和手术台。在裂隙灯生物显微镜下检查麻醉小鼠的眼睛，并使用相机捕获图像。
然后涂抹 0.1% 荧光滴眼液，并用棉涂抹器浸泡多余的荧光液。使用钴蓝滤光片评估角膜上皮缺损的可能存在并拍照。之后，将三联抗生素眼药膏涂抹在受损的眼表上。
使眼睛成核，同时保留内侧痈和整个可触及的结膜。在手术显微镜下，细密地解剖痈和皮肤之间的连接处。使用牙钳，缩回痈，并帮助引导手术剪刀在可触及的结膜下方，朝向其与跗板的交界处。
沿着粘连线向外眦切开结膜。然后将手术剪刀转到结膜下平面的结膜和下跗板的交界处。现在用拇指和食指从鼻侧缩回上眼睑和下眼睑。
缩回时，将弯曲的尖端镊子的尖端引导到突出的泪腺后面，向视神经移动。牢牢抓住视神经，取出眼球。之后，用PBS冲洗球并将其转移到固定溶液中。
图中显示了小鼠模型中角膜和角膜缘碱损伤后小鼠眼睛的伤口愈合过程。角膜水肿在第 0 天和第 2 天明显，而纤维化在受伤后的第二周更为明显。上皮缺损在 12 至 14 天内通过结膜上皮细胞以向心方式迁移而愈合。
然而，50%的受伤眼睛在第二周结束时出现持续的上皮缺损。
