首先用无绒乙醇浸泡的湿巾轻轻清洁受精白腿角鸡蛋的蛋壳。将卵孵化到所需的阶段,通常为 HH20 至 21。在开始手术之前,通过将松散的反手结系在 1.5 厘米长的 10-0 缝合线中来准备所需的结数。
确保结不紧,并且足够大以适合心房。用镊子的反面轻轻敲开蛋壳,牢固地支撑鸡蛋以防止不必要的裂缝。从鸡蛋的钝端打开一扇窗户,取下外膜和内膜。
使用微型剪刀仅去除必要的卵黄膜。一旦胚胎脱离卵黄膜,将闭合的尖端镊子放在胚胎背段下方,轻轻翻转以露出左侧。首先去除粗膜,然后使用更细的镊子去除细膜,立即去除心房芽周围的所有膜。
将预先准备好的结放在靠近胚胎的位置。将打开的结正确定向在左心房芽上,以执行结收紧。使用微型剪刀,将多余的缝合线末端尽可能靠近芽剪开,然后用镊子去除多余的缝合线片。
最后,使用闭合的镊子,将胚胎放回原来的位置。完成显微手术后,用双层param覆盖鸡蛋并将其放回培养箱中。左心房结扎或LAL模型显示,与正常发育相比,实现了更紧凑的心肌结构,并发生了显着的形态变化。
在心脏间质周围观察到细胞外基质沉积,类似于心肌纤维化。形态学孔隙度测量显示,LAL模型的左心室腔较小,小梁压实。在LAL模型的HH 25处,观察到右心室腔扩大,小梁结构改变和心肌容积。
鲎试剂模型的光学相干断层扫描成像显示,与对照组相比,左心室大小和直径显着减小。与对照组相比,鲎试剂组在HH 25时也表现出壁厚增加。