首先,在工作台面积为 60 厘米 x 60 厘米的房间内准备手术平台设置,以便进行手术。用 70% 酒精清洁表面,并用一次性医用毛巾盖住。然后,用紫外线辐射对该区域进行消毒 30 分钟。
手术前一周,将 8 周龄的雌性 C57 黑色/6 小鼠适应住房设施。使用干净的棉签,将脱毛化妆水涂抹在麻醉小鼠的背部。三到五分钟后,用纱布和棉签去除毛发。
接下来,用70%乙醇清洁皮肤。使用橡胶条或棉绳将鼠标固定在手术平台上,背部朝上,并使用碘伏溶液清洁背部。对于卵巢切除术,使用一次性手术刀,从大腿根部向上纵向切开一厘米的背侧切口,确保只切开皮肤和皮下筋膜,避免切入后腹膜。
接下来,将切口向左拉,以可视化一个白色脂肪垫。使用微镊子和剪刀,沿着白色脂肪垫切0.5厘米,露出腹膜腔。切开腹膜后部,使用微镊子,缓慢而轻柔地从腹膜腔中取出白色脂肪垫。
取出后立即用0.9%无菌盐水浸泡的纱布润湿白色脂肪组织。在白色脂肪垫的下部,将粉红色颗粒状物质识别为卵巢,并确保它们与子宫相连。使用5O可吸收缝合线,结扎子宫的卵巢端。
然后,切除左侧卵巢,避免手术器械与卵巢直接接触,防止卵巢组织腹膜内着床。手术后,小心地将白色脂肪垫放回腹膜腔。然后,使用 5-0 可吸收缝合线,在后腹膜上进行间歇缝合。
用浸泡在0.9%无菌盐水中的纱布清洁任何出血区域。接下来,将皮肤切口向右拉,并使用相同的方法切除右侧卵巢。用 4-0 不可吸收缝合线进行间歇缝合,并用 0.9% 无菌盐水浸泡的纱布清洁任何出血。
完成两次缝合后,用碘伏溶液清洁伤口。24小时后,皮下注射美洛昔康以缓解疼痛。每天监测小鼠,以确认手术伤口愈合正常,没有任何并发症的迹象。
三天后,用新鲜制备的戊酸雌二醇喂食小鼠。对于FSH注射,通过将重组人FSH粉末溶解在0.9%无菌盐水中至每毫升100国际单位来制备FSH溶液。根据重组FSH的生物活性,通过腹腔注射给予溶剂或不同剂量的重组FSH两周。
巴氏染色细胞的涂片图像清楚地识别了发情周期的前发情期、发情期、发情期和发情期。相比之下,双侧卵巢切除术小鼠失去了发情周期。ELIZA方法显示,与假手术组小鼠相比,双侧卵巢切除术小鼠的血清雌二醇水平显着降低。
在性腺外组织中合成的内源性雌激素不影响FSH处理的小鼠模型中雌激素水平的稳定性。