PEGASOS制备透明组织和颅骨的方法

首先，用胶带固定麻醉小鼠的四肢。握住腹部皮肤向上，沿着胸部的圆周小心地切开，使其完全暴露。用眼科剪刀在右心房切一个小口，并立即在左心室的顶点插入灌注 22 号针头。

然后将 30 至 50 毫升心脏灌注液推入注射器。从右心房流出的液体完全透明后，输注等体积的 4%PFA 溶液。解剖组织和器官，并在4摄氏度下用4%PFA固定过夜。

诱导组织脱钙。将固定的心脏组织放入 10 毫升 EDTA 溶液中，放在 37 摄氏度的摇床上。孵育约两天，每天更换液体。

将固定的颅骨放入 20 毫升 25%Quadrol 溶液中进行组织脱色。在37摄氏度的摇床上孵育一天，并更换一次液体。接下来，将组织依次放入 30% 叔丁醇或 TB 溶液中。

然后是50%TB溶液，然后是70%TB溶液进行梯度脱脂。随后将样品和TB PEG溶液在37摄氏度的摇床上脱水6小时。最后，将完全脱水的组织置于BB PEG溶液中，放在37摄氏度的摇床上。

孵育两到四个小时后，组织将变成透明。PEGASOS组织清除法得到透明的组织。使用全贴片 EDU 染色的透明组织表明标记有效且保存完好。

在对照组中，几个EDU阳性细胞弥漫分布在整个缝合线中。缝合线扩张一天后，在缝合线的中间和边缘观察到增殖细胞。随着缝合线的扩大，增殖细胞的数量随着时间的推移而减少。

绿色标记的细胞是骨髓中的小圆形细胞，与EDU阳性缝合细胞不同。