Application of Continuous Flow to Endothelial Cells: Aorta-on-a-Chip

按照制造商的协议将灌注装置安装到设备中。在罩内，将一个空的流体芯片连接到其上，并添加补充细胞因子的 SFM-34 培养基，以在无菌条件下填充两个储液器。将流体单元转移到培养箱，将其连接到泵以去除气泡和校准。

小心地从培养箱中取出带有连接装置的流体单元，并将其与包含细胞的芯片一起转移到罩中。夹紧测试芯片两侧的管子。从测试芯片上取下夹紧的管子，并将包含细胞的芯片连接到管子上。

取下或打开夹具后，将系统转移到培养箱并将气泵连接到流体单元。从泵上拆体单元并将其移入引擎盖。夹紧芯片两侧的管路，然后从芯片上的储液槽中取出管路。

轻轻地从芯片中取出培养基后，用 Dulbecco 的磷酸盐缓冲盐水或 DPBS 洗涤细胞。加入 150 微升解离缓冲液，在 37 摄氏度下孵育 3 分钟。当细胞分离时，从一个储液器中收集解离缓冲液，并用DPBS洗涤通道一次。

用洗涤缓冲液洗涤储液槽，以收集芯片中剩余的细胞。最后，向收集的细胞中加入一毫升洗涤缓冲液，然后使用其中的10微升来计数细胞。在刺激之前，细胞显示出随机取向，但在刺激下，它们平行于流动方向重新定向。

在流动下培养 5 天的细胞的 CD34 表达谱和从流体通道中回收的 CD34 阳性细胞的百分比显示了该方案的有效性。